吡哆醇对脑淋巴引流阻滞所致SAH后神经细胞凋亡加重的影响

目的探讨脑淋巴引流阻滞(CLB)对蛛网膜下腔出血(SAH)后神经细胞凋亡的影响和吡哆醇的缓解作用及相关机制。方法健康成年Wistar大鼠,随机分为正常对照组、SAH组、SAH+CLB组、SAH+CLB+吡哆醇组、SAH+CLB+生理盐水组。采用枕大池2次注血法建立SAH模型。于第2次注血3 d后检测相关指标。SAH+CLB+吡哆醇组于CLB术前30 min按50 mg.kg-1腹腔注射吡哆醇生理盐水溶液,每天以上述半量重复注射2次。采用TUNEL荧光标记法检测原位凋亡情况;免疫组织化学激光共聚焦检测大鼠皮层神经细胞Caspase-3和Bcl-2的蛋白表达。结果①与正常对照组比较,其余各组大鼠TUNEL阳性细胞表达均明显升高,而SAH+CLB组和SAH+CLB+生理盐水组又明显高于SAH组(P<0.01),SAH+CLB+吡哆醇组与SAH+CLB组比较表达有所减弱(P<0.01)。②与正常对照组比较,其余各组大鼠皮层神经细胞Caspase-3蛋白表达均明显升高,而SAH+CLB组和SAH+CLB+生理盐水组最高,与SAH组比较差异具有显著性(P<0.01),SAH+CLB+吡哆醇组与SAH+CLB组比较表达有所减弱(P<0.01)。③与正常对照组比较,其余各组大鼠皮层神经细胞Bcl-2蛋白表达均明显升高,而SAH+CLB组和SAH+CLB+生理盐水组明显低于SAH组(P<0.01),SAH+CLB+吡哆醇组较SAH+CLB组表达增强。结论脑淋巴引流阻滞可以通过Caspase-3高表达和Bcl-2低表达加重SAH后大鼠皮层神经细胞的凋亡,而吡哆醇具有一定的缓解作用。     

如意珍宝丸新制剂及各提取部位对 PC12细胞化学损伤模型的保护作用研究

目的：研究如意珍宝丸新制剂及各提取部位对谷氨酸导致 PC12细胞（大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤）损伤的修复作用并筛选有效活性制剂或部位。方法培养 PC12细胞,MTT 法测定细胞活性。加入30 mmol·L －1谷氨酸造成 PC12细胞损伤,用酶标仪测定细胞存活率,测定细胞培养上清液中一氧化氮的含量、乳酸脱氢酶漏出量及超氧化物歧化酶活性,观察如意珍宝丸新制剂及提取样品对谷氨酸导致的 PC12细胞损伤的修复作用。结果与结论如意珍宝丸的一些新剂型及某些提取部位可以修复由谷氨酸造成的细胞损伤,提高细胞存活率,降低一氧化氨含量,减少乳酸脱氢酶漏出率,增加超氧化物歧化酶的活性。     

如意珍宝丸新制剂及各提取部位对PC12细胞化学损伤模型的保护作用研究

目的研究如意珍宝丸新制剂及各提取部位对谷氨酸导致PC12细胞(大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤)损伤的修复作用并筛选有效活性制剂或部位。方法培养PC12细胞,MTT法测定细胞活性。加入30 mmol·L~(-1)谷氨酸造成PC12细胞损伤,用酶标仪测定细胞存活率,测定细胞培养上清液中一氧化氮的含量、乳酸脱氢酶漏出量及超氧化物歧化酶活性,观察如意珍宝丸新制剂及提取样品对谷氨酸导致的PC12细胞损伤的修复作用。结果与结论如意珍宝丸的一些新剂型及某些提取部位可以修复由谷氨酸造成的细胞损伤,提高细胞存活率,降低一氧化氨含量,减少乳酸脱氢酶漏出率,增加超氧化物歧化酶的活性。     

乙酰唑胺对PC12细胞缺氧损伤的保护作用及其机制研究

目的研究乙酰唑胺对缺氧PC12细胞的保护作用及其机制。方法用三气培养箱建立缺氧模型培养PC12细胞,筛选乙酰唑胺作用于缺氧PC12细胞的最佳浓度,观察细胞形态,测定细胞活力、LDH的含量、细胞周期,实时荧光定量PCR法检测HIF-1α及Caspase-3 mRNA的表达。结果与缺氧模型组相比,乙酰唑胺可明显提高缺氧PC12细胞存活率、降低培养基中LDH的含量,降低G1期、提高S期细胞百分比、提高HIF-1αmRNA的表达、降低Caspase-3 mRNA的表达水平。结论乙酰唑胺具有保护PC12细胞缺氧损伤的作用。     

缺氧环境对PC12细胞损伤及HIF-1 mRNA表达水平的影响

目的探讨缺氧环境对PC12细胞的损伤作用及其初步机制。方法建立PC12细胞缺氧模型;倒置相差显微镜观察细胞形态;MTT法检测正常及缺氧环境对PC12细胞的增殖;PC12细胞缺氧培养0,2,4,8,12,24和48 h后测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH);用Real-time RT-PCR检测HIF-1 mRNA的表达水平。结果缺氧培养24 h,48 h后PC12细胞增殖受到抑制(P<0.05,P<0.01);PC12细胞缺氧培养2、4、8 h后培养液中的LDH活性从2～8 h逐渐增高,8 h达到最高值(P<0.01),8 h后逐渐下降;PC12缺氧培养0～4 h HIF-1 mRNA的表达水平逐渐增高,4 h达到最高,4～48 h逐渐降低。结论缺氧环境可引起PC12细胞损伤,缺氧8 h损伤最严重。缺氧导致HIF-1基因表达水平提高,4 h时达到峰值。     

醒脑启智胶囊药物血清对PC12细胞谷氨酸损伤的保护作用

目的：探讨醒脑启智胶囊药物血清对PC12细胞谷氨酸(GLU)损伤的影响。方法：采用血清药理学方法，体外培养PC12细胞，用GLU形成损伤，观察PC12细胞形态学、MTT法细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化。结果：醒脑启智胶囊药物血清对PC12细胞的形态改变具有明显的保护作用，可增强细胞活力，降低LDH活性。结论：醒脑启智胶囊药物血清能明显减轻PC12细胞的GLU损伤，并呈现一定的剂量依赖关系。     

胡黄连苷-Ⅱ在体外对PC12神经细胞损伤的保护作用

目的 :考察胡黄连苷 Ⅱ对PC12神经细胞损伤的保护作用。方法 :采用细胞培养的方法 ,建立PC12神经细胞双氧水 (H2 O2 )损伤模型。通过观察细胞形态 ,测定细胞存活率 (MTT法 ) ,乳酸脱氢酶(LDH)漏出率 ,细胞内氧化活性物质 (ROS)水平 ,检测胡黄连苷 Ⅱ对PC12细胞损伤的保护作用。结果 :同造模组比较 ,胡黄连苷 Ⅱ 0 .5、5 .0mmol·L-1能减轻H2 O2 引起的对PC12神经细胞的损伤 ,明显提高细胞的存活率 ,减少LDH的释放量 ,降低细胞内ROS水平。结论 :胡黄连苷 Ⅱ对PC12神经细胞损伤具有明显的保护作用。     

醋酸锰对PC12细胞损伤作用的研究

目的研究醋酸锰对PC12细胞的损伤作用机制。方法不同浓度醋酸锰处理PC12细胞24h后,MTT法检测细胞存活率,Hoechst 33258和DNA凝胶电泳的方法检测细胞凋亡,利用高效液相色谱—电化学方法(HPLC-ECD)检测细胞内儿茶酚异喹啉物质的生成,同时测定细胞内丙二醛(MDA)和羟自由基的生成量。结果不同水平的醋酸锰处理使PC12细胞存活率下降且呈浓度依赖性(P<0.05)。Hoechst 33258和DNA凝胶电泳结果表明细胞发生了凋亡。MDA和羟自由基的含量与对照相比明显升高(P<0.05),多巴胺(DA)的含量呈下降趋势(P<0.05)。Sal(6,7-二羟基-1,2,3,4-四氢异喹啉,Sal)和NMSal(N-甲基-6,7-二羟基-1,2,3,4-四氢异喹啉,NMSal)的含量则随锰浓度的增加而增加(P<0.05)。结论过量的醋酸锰导致PC12细胞产生高氧化应激水平,从而生成了一系列儿茶酚异喹啉物质,对细胞产生损伤作用,这可能是三价锰发挥损伤作用的途径之一。     

MCI-186对PC12细胞缺血性损伤的保护作用

目的:研究MCI-186对PC12细胞缺血损伤的保护作用.方法:以氰化钠(NaCN)合并培养基质缺糖以及连二亚硫酸钠(Na2S2O4)合并培养基质缺糖造成PC12细胞缺血性损伤模型,观察活体细胞的形态,并采用MTT比色法测定PC12细胞存活率.结果:10-5mol·L-1MCI-186可改善缺血引起的PC12细胞形态学变化,提高细胞存活率,对2种模型造成的缺血性损伤的抑制率分别为29 5%及14.3%.结论:MCI-186对NaCN及Na2S2O4造成的PC12细胞缺血性损伤有一定的保护作用.     

PC12细胞中氧化还原因子-1对过氧化氢和谷氨酸损伤的不同反应

目的通过研究PC12细胞抗氧化应激的氧化还原因子-1(apurinic/apyrimidimic endonuclase/redox factor1,APE/Ref-1)分子在过氧化氢和谷氨酸损伤过程中表达水平的变化,探讨谷氨酸对神经细胞损伤的分子机制。方法以PC12细胞作为神经细胞模型,以200和400μmol/L浓度的过氧化氢或以10和20mmol/L谷氨酸钠处理PC12细胞,用噻唑蓝法(MTT法)检测细胞的损伤程度,以Western blot方法测定APE/Ref-1表达水平。结果过氧化氢对PC12细胞的APE/Ref-1蛋白表达具有诱导作用。谷氨酸对PC12细胞的APE/Ref-1蛋白表达无影响。结论谷氨酸对PC12细胞的损伤过程中,所产生的氧化应激作用的水平很低,远不足以引起抗氧化应激的APE/ref-1蛋白的代偿反应。     

蜕皮甾酮对实验性蛛网膜下腔出血后血管内皮细胞损害的作用研究

目的 :观察血性脑脊液 (BCSF)对培养的微血管内皮细胞 (brainmicrovesselendothelialcells ,Bm vECs)损害作用和蜕皮甾酮 (ecdysterone ,EDS)的干预效应。方法 :将培养的BmvECs分为对照组、BCSF组和EDS组 ,通过病理形态学改变、细胞计数、MTT比色法和流式细胞仪细胞周期分析评估其损害和增殖状况。结果 :与对照组比较 ,BCSF组内皮细胞出现明显的病理形态学改变 ,贴壁细胞数量减少 ,MTT吸光度下降 ,G0 ～G1期细胞比例减少。EDS对BCSF所致上述内皮细胞改变有一定的改善作用。结论 :EDS对BCSF所致的内皮形态和增殖损害具有保护作用 ,可能在慢性脑血管痉挛治疗中具有一定作用。     

早期腰大池脑脊液持续外引流治疗外伤性蛛网膜下腔出血的疗效观察

目的评价早期腰大池脑脊液持续外引流对外伤性蛛网膜下腔出血患者的疗效。方法将64例患者随机按照治疗方法分为持续外引流组和传统组，每组各为32例。分别采用早期行腰大池持续外引流与每天行腰椎穿刺术放脑脊液。对两组的疗效及各项观察指标进行比较作统计学处理。结果持续外引流组与传统治疗组在颅内压下降时间、意识障碍恢复时间、血性脑脊液转清时间、减少并发症等方向有显著差异。结论早期腰大池持续外引流较传统治疗方法疗效好。     

实验性蛛网膜下腔出血对血管内皮细胞细胞间粘附分子-1表达的影响和蜕皮甾酮的干预作用

目的：采用体外孵育的血性脑脊液（BCSF）模拟蛛网膜下腔出血（SAH）刺激因素，观察SAH对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）ICAM—1表达的影响及活血化瘀中药牛膝的有效成分蜕皮甾酮（EDS）的干预效应。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞，通过免疫细胞化学染色和RT-PCR检测对照组、BCSF处理组和EDS治疗组HUVECs的ICAM—1表达改变。结果：与对照组相比，BCSF组HUVECs的ICAM—1免疫细胞化学染色增强，ICAM—1 mRNA表达增强（P〈0．01），EDS组弱于BCSF组。结论：BCSF刺激可引起HUVECs ICAM—1的表达上调，EDS对其具有抑制作用，可能对慢性脑血管痉挛（CVS）具治疗作用。     

米诺环素调控小胶质细胞激活对PC12细胞生长的影响

目的探讨米诺环素抑制小胶质细胞激活对PC12生长和凋亡的影响。方法 BV2细胞分为对照组、LPS组、LPS加米诺环素组;以LPS刺激激活小胶质细胞系BV2细胞,用米诺环素干预BV2细胞的激活;将各组BV2细胞与PC12细胞进行共培养24h;酶联免疫吸附法检测共培养体系细胞上清液TNF-α、IL-1β的含量,MTT法检测PC12细胞生存率。结果 BV2细胞与PC12细胞共培养24h后,LPS组上清液炎症因子TNF-α、IL-1β表达明显升高,PC12细胞存活率下降,米诺环素能抑制以上趋势。结论 MG激活对PC12细胞存在明显损伤效应,米诺环素可保护MG介导的PC12细胞损伤,可能与通过下调炎症表达有关。     

米诺环素对动脉瘤性蛛网膜下腔出血后神经保护作用的研究进展

米诺环素是四环素类广谱抗菌药,临床上用于治疗常见敏感病原菌引起的感染。近期研究发现米诺环素对动脉瘤性蛛网膜下腔出血后损伤体现出神经保护作用。米诺环素主要通过抗炎、抗凋亡、抑制基质金属蛋白酶-9等抗菌外作用减轻动脉瘤性蛛网膜下腔出血引发的早期脑损伤和迟发性脑血,且由于其良好的安全性和耐受性,对动脉瘤性蛛网膜下腔出血的辅助治疗具有一定潜力。本文就米诺环素对动脉瘤性蛛网膜下腔出血的神经保护作用及其可能机制进行综述,为后续深入研究及设计开展临床试验奠定基础。     

Mechanisms,treatment and prevention of cellular injury and death from delayed events after aneurysmal subarachnoid hemorrhage

Introduction: Subarachnoid hemorrhage (SAH) patients often develop brain injury as a result of a number of delayed complications, resulting in significant morbidity and mortality. Many of these complications arise due to delayed cerebral ischemia, which occurs secondary to the hemorrhage.

Areas covered: The mechanisms of the delayed injury are reviewed, including angiographic vasospasm, cortical spreading ischemia, small arteriolar constriction, microthromboemboli, free radical injury and inflammation. Some current and prospective therapies for SAH are discussed, in the context of these complications. Statins have been particularly promising in experimental studies.

Expert opinion: Multiple mechanisms are involved in the pathogenesis of the delayed insult after SAH. New drugs may need to target multiple pathways to injury. Trials aiming to treat complications after SAH could benefit from taking into account the multifactorial pathogenesis of delayed insults.     

脑脊液置换及鞘内注射地塞米松治疗蛛网膜下腔出血的疗效分析

目的观察脑脊液(CSF)置换法及鞘内注射地塞米松治疗蛛网膜下腔出血(SAH)的疗效.方法在常规治疗的基础上,行腰椎穿刺,缓慢放出血性脑脊液4～6 ml,再缓慢注入等量生理盐水,如此反复置换后加地塞米松5 mg鞘内注射.结果除2例分别因再出血致脑疝死亡及上消化道大出血死亡外,29例置换后头痛等临床症状能迅速缓解,平均5.3 d.较对照组11.2d明显缩短,死亡率也明显降低.结论脑脊液置换法配合鞘内注射地塞米松的应用可缓解头痛,减轻脑水肿、防止蛛网膜粘连、脑积水和脑血管痉挛,减少并发症,缩短病程,提高治愈率.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对鱼藤酮诱导的嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法将培养的大鼠PC12细胞分别加入EGCG1,5和10μmol.L-1预处理30 min后加入鱼藤酮250 nmol.L-1继续作用24 h。MTT比色法检测细胞存活率,Hoechst33258染色观察细胞核形态的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,JC-1染色检测线粒体膜电位变化。结果与鱼藤酮模型组存活率(77.0±1.3)%相比,EGCG1,5和10μmol.L-1组细胞存活率显著增加(P<0.05),分别为(79.8±2.3)%,(82.4±2.2)%和(88.3±2.0)%。Hoechst33258染色发现,EGCG组细胞核形态明显改善。与正常对照组比较,模型组细胞凋亡率增加8.2倍;与鱼藤酮模型组比较,EGCG组细胞凋亡率分别下降46%,25%和63%,差异具有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪检测鱼藤酮组凋亡率为33.8%,EGCG 1,5和10μmo.lL-1组的凋亡率下降至30.6%,14%和15.7%。与模型组相比,EGCG1,5和10μmol.L-1组线粒体膜分别增高了2.48,3.96和4.04倍,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 EGCG具有抑制鱼藤酮诱导的细胞凋亡作用,其机制可能与其稳定线粒体膜电位有关。