淫羊藿多糖对大鼠胚胎毒性及致畸的实验研究

本文报道了淫羊藿多糖(EPS)对大鼠胚胎毒性及致畸的试验结果．实验大鼠为4组，3个剂量组和1个空白对照组，于受孕D1—D16随体重变化给药．结果如下：①对妊娠大鼠体重的增长没有影响．②对大鼠的黄体形成与胚胎着床无明显影响．③对活胎总数、平均数、胎仔重．性比例及死胎率均无明显影响．     

淫羊藿水提取物的食用安全性研究

背景与目的:淫羊藿是一种传统的中药材,但是其安全性毒理学的资料相对缺乏,故我们对其安全性进行评价,以便为淫洋霍的综合利用提供依据。材料与方法:运用急性毒性试验、细胞毒性试验、遗传毒性试验(包括小鼠骨髓微核实验、Ames实验和TK基因突变实验)对淫羊藿进行了较系统的安全性评价。结果:淫羊藿的半数致死剂量(LD50)大于80g/kg,对中国仓鼠卵巢细胞CHO和中国仓鼠肺细胞CHL的半数致死浓度(IC50)分别为55.4mg/ml和19.53mg/ml,并且小鼠骨髓微核实验、Ames实验、TK基因突变实验的结果均为阴性。结论:淫羊藿属无毒物质,在较高剂量下对CHO和CHL均表现出一定的细胞毒性,本试验条件下无致基因突变和染色体畸变作用。     

淫羊藿甙诱导肿瘤细胞凋亡及其机制的研究

目的:采用淫羊藿苷icarrin(ICA,从朝鲜淫羊藿中提取的中药单体),作用于人急性早幼粒白血病细胞HL-60,较系统地对ICA诱导肿瘤细胞凋亡进行了观察,为ICA的开发应用提供实验依据.方法:采用电镜、流式细胞术、DNA片段化检测、RT-PCR等技术进行研究.结果:ICA在体外诱导HL-60细胞凋亡,呈典型的细胞凋亡形态学和生化特征,并具有时间剂量依赖性.ICA诱导肿瘤细胞凋亡的同时,下调相关基因bcl-2和c-myc基因mRNA和蛋白表达水平.结论:ICA体外诱导HL-60细胞凋亡,其机理可能与下调bcl-2和c-myc基因mRNA和蛋白表达水平密切相关.     

北豆根多糖的致突变性与抗突变性研究

目的 应用Ames试验和小鼠微核试验,研究北豆根多糖在不同剂量下的致突变作用和抗突变作用.方法 Ames试验采用预培养法,微核试验采用连续ip给药11天的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核计数法.结果 北豆根多糖在＜2 000 μg/皿和＜40 mg/kg剂量下,未诱发Ames试验各菌株回变菌落数的增高和微核试验骨髓嗜多染红细胞微核率的增高.Ames试验在北豆根多糖500 μg-1 000 μg/皿浓度范围,可使阳性剂环磷酰胺和丝裂霉素C所诱发的高回变菌落数出现明显降低;微核试验在北豆根多糖20 mg-40 mg/kg剂量范围,可使阳性剂40 mg/kg环磷酰胺或2 mg/kg丝裂霉素C所诱发的高微核率出现明显降低.结论 北豆根多糖不存在基因突变和染色体畸变作用,具有对抗和减轻致突变剂环磷酰胺和丝裂霉素C的抗突变作用.     

淫羊藿苷抗肿瘤作用的研究进展

淫羊藿苷是淫羊藿的主要单体成分,具有调节内分泌、改善心血管功能、增加免疫活性及抗肿瘤等多种作用.以往有大量相关文献研究其在上述方面的作用,并证实了强大的药理作用.淫羊藿苷抗肿瘤作用主要集中于抑制肿瘤细胞增殖、诱导分化、促进凋亡及增加机体免疫力两个方面.     

淫羊藿苷体内抑瘤作用及其机制

目的：探讨淫羊藿苷（icariin，ICA）对肝癌细胞H22荷瘤小鼠体内抑瘤作用及其机制。方法：肝癌细胞株H22右腋皮下接种C57BIM6小鼠，建立小鼠体内荷移植瘤模型。接种H22细胞后24h，用高、中、低不同剂量（9、4．5、2．25mg／ml）的ICA和环磷酰胺（cyclophosphamide，Cy）（30mg／kg）进行局部注射治疗，待荷瘤对照组肿瘤长至1g左右，各组小鼠称重，处死。留自凝血，取血清检测TNF—α；依次取脾脏及肿瘤组织称重；取1／2脾脏和肿瘤组织制成单细胞悬液，剩余的用10％中性甲醛溶液固定，做病理切片和H—E染色以及TUNEL实验；脾单细胞悬液用流式细胞术（FACS）检测CD3、CD4、CD8、DX5等抗原分子的表达；肿瘤单细胞悬液用AnnexinV／PI双染检测肿瘤细胞的早期与晚期凋亡情况，同时取适量的瘤细胞用70％乙醇固定以FACS检测肿瘤细胞周期各时相的分布情况。结果：Cy治疗组抑瘤率为67．16％，ICA高、中、低剂量治疗组抑瘤率分别为24．63％、32．84％、5．22％。AnnexinV／PI双染结果表明，Cy治疗组与ICA治疗组早期凋亡细胞率均高于荷瘤对照组[Cy组为（9．11±1．584）％，ICA组为（7．14±1．376）％，荷瘤对照组为（3．6±2．38）％]。TUNEL结果显示，ICA治疗组凋亡指数为（5．35±0．73）％，显著高于荷瘤对照组中的凋亡指数[（1．03±1．17）％]（P〈0．01）。正常小鼠血清中未检测到TNF—α的存在，而ICA治疗组及Cy治疗组中检测到微量TNF-α。病理检测表明，ICA中、高剂量组肿瘤组织中出现较多的灶状及小片状坏死，包膜处及肿瘤边缘可见瘤细胞坏死，包膜及肿瘤组织中可见少量的炎细胞（淋巴细胞与单核细胞）浸润。结论：ICA有显著的抑瘤作用，可能通过促进实体瘤细胞早期凋亡引起肿瘤组织坏死而起作用。     

淫羊藿甙对HL-60细胞诱导分化作用的研究

淫羊藿又名仙灵脾，为历代常用的补益中药。为小蘖科多年生草本植物。采用的淫羊藿甙是从朝鲜淫羊藿中提取的单体成份，为寻找新的肿瘤细胞诱导分化剂，研究了淫羊藿甙对人急性早幼粒白血病细胞(HL-60)的诱导分化作用。结果如下：     

淫羊藿苷促进脐血来源树突状细胞的分化与成熟

目的：研究淫羊藿苷（icariin,ICA）体外对脐血单个核细胞来源树突状细胞的分化、成熟及免疫活性的影响。方法：无菌条件下采集脐血,密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,用GMCSF、IL4诱导树突状细胞（dendritic cells, DCs）,第5天后将DCs分为3组（ICA组、TNFα组和阴性对照组）并作相应处理。倒置显微镜和透射电镜下观察DCs形态,流式细胞术检测DCs表面分子CD1a、CD80、CD83和CD86的表达情况,ELISA法检测DCs培养上清中IL12和IFNγ的水平,MTT法检测DCs刺激T细胞增殖的能力。结果：ICA刺激后,脐血单个核细胞来源DCs呈现典型的成熟DCs形态学特征。ICA组DCs表面CD1a、CD80、CD83和CD86表达水平较对照组均明显上调（P<0.05）,且CD86的表达水平显著高于TNFα组（P<0.05）。ICA组DCs上清中IL12、IFNγ的水平及诱导T细胞增殖的能力较对照组DCs明显增高（P<0.05）,但与TNFα组DCs无显著差异。结论：ICA可刺激脐血单个核细胞来源DCs的分化和成熟,增强DCs的免疫学活性。     

淫羊藿苷促进白血病K562细胞凋亡的研究

目的：探讨淫羊藿苷对人慢性粒细胞白血病K562细胞的作用及其机制。方法将对数生长期K562细胞分成对照组和淫羊藿苷处理组。对照组细胞常规培养,淫羊藿苷处理组加入8μmol／L淫羊藿苷培养。应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测K562细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞p85、Akt mRNA的表达,Western blot检测p85、Akt、p-p85、p-Akt、cleavage-caspase-3、caspase-3蛋白表达的变化。结果与对照组比较,淫羊藿苷处理组K562细胞增殖率明显下降（P＜0.05）,K562细胞凋亡率和p85、Akt、cleavage-caspase-3蛋白表达均明显升高（均P＜0.05）, p85 mRNA、Akt mRNA、caspase-3蛋白表达水平差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论淫羊藿苷能抑制K562细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能是通过激活PI3K-Akt信号转导通路实现的。     

淫羊藿甙逆转转化生长因子β ２免疫抑制作用的抗肿瘤研究 *

研究淫羊藿甙(ICA)对PG细胞分泌转化生长因子β ２(transforming growth factor β ２,TGFβ ２)的影响、ICA逆转TGFβ2介导的免疫抑制作用及其机制。方法: MTT法检测细胞增殖、杀伤活性,RT-PCR检测TGFβ 2、穿孔素,流式细胞术检测TGFβ ２、IL-２Ｒα水平。结果: ICA可抑制PG细胞中TGFβ 2的蛋白和mRNA表达,能够逆转受TGFβ 2抑制的LAK和CD3AK细胞的杀伤活性,并能部分恢复受TGFβ ２抑制的LAK细胞表面IL-2Rα表达和CD3AK细胞内穿孔素mRNA水平,以及CD3AK细胞的增殖活性。结论: 淫羊藿甙通过抑制肿瘤细胞免疫抑制因子TGFβ 2的产生,增强免疫效应细胞的杀伤活性等机制而发挥抗肿瘤作用。     

淫羊藿甙促进活性氧表达诱导甲状腺癌B-CPAP细胞凋亡的研究

背景与目的：淫羊藿甙(icariin,ICA),是从檗科淫羊藿属植物中提取的重要黄酮类活性化合物。研究表明,ICA对肺癌和胃癌等肿瘤有很好的抑制作用,有望开发为疗效较好的抗肿瘤药,但其作为有前景抗肿瘤药物在甲状腺癌中的研究较少,其作用机制罕见报道。该研究拟探究不同浓度ICA对甲状腺癌B-CPAP细胞系增殖凋亡、细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)及抗氧化酶系统的影响,探究ICA对甲状腺癌活性影响机制是否具有浓度-时间依赖性。方法：采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测不同浓度ICA对B-CPAP细胞系增殖的影响,采用流式细胞仪技术检测ICA对细胞凋亡及细胞内ROS的影响,采用超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)试剂盒检测ICA对细胞内SOD表达影响,采用丙二醛(malondialdehyd,MDA)检测试剂盒检测ICA对细胞内MDA表达的影响,采用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测Bcl-2及γ-HA2X蛋白的表达。结果：ICA处理48 h后B-CPAP细胞活性降低,细胞凋亡率上升,呈剂量-时效依赖性(P＜0.01)。ICA 50和200 mg/L处理组ROS生成量依次是对照组(Control组)的(2.12±0.14)倍和(2.41±0.12)倍。ICA促进细胞膜脂质化产物MDA的累积,降低抗氧化酶SOD活性,活性比Control组下降(9.35±1.45)%和(21.5±1.52)%。ICA 200 mg/L处理组抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低(13.64±1.71)%。结论：ICA具有良好的抑制甲状腺癌B-CPAP细胞活性的作用,并呈现剂量依赖性,其主要作用途径可能是促进细胞内ROS高表达,抑制SOD表达,抗凋亡蛋白Bcl-2低表达,导致细胞不可逆损伤,从而诱导细胞凋亡。     

淫羊藿甙逆转转化生长因子β_2免疫抑制作用的抗肿瘤研究

目的：研究淫羊藿甙（ＩＣＡ）对ＰＧ细胞分泌转化生长因子β２（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒβ２,ＴＧＦβ２）的影响、ＩＣＡ逆转ＴＧＦβ２介导的免疫抑制作用及其机制。方法：ＭＴＦ法检测细胞增殖、杀伤活性,ＲＴ－ＰＣＲ检测ＴＧＦβ２、穿孔素,流式细胞术检测ＴＧＦβ２、ＩＬ－２Ｒα水平。结果：ＩＣＡ可抑制ＰＧ细胞中ＴＧＦβ２的蛋白和ｍＲＮＡ表达,能够逆转受ＴＧＦβ２抑制的ＬＡＫ和ＣＤ３ＡＫ细胞的杀伤活性,并能部分恢复受ＴＧＦβ２抑制的ＬＡＫ细胞表面ＩＬ－２Ｒα表达和ＣＤ３ＡＫ细胞内穿孔素ｍＲＮＡ水平,以及ＣＤ３ＡＫ细胞的增殖活性。结论：淫羊藿甙通过抑制肿瘤细胞免疫抑制因子ＴＧＦβ２的产生,增强免疫效应细胞的杀伤活性等机制而发挥抗肿瘤作用。     

淫羊藿苷对急性早幼粒白血病细胞体内外效应的研究

目的：探讨淫羊藿苷（ICA）对急性早幼粒白血病细胞的诱导分化作用。方法：采用ICA与全反式维甲酸（ATRA）对比试验,观察ICA在体外及小鼠体内对白血病细胞增殖分化的影响。结果：ICA在体内外对白血病细胞均有较明显的诱导分化和抑制增殖作用。且与ATRA合用可产生明显的协同效应。结论：ICA具有明显的抗白血病细胞作用。     

脱水淫羊藿素对肝癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的:研究异戊烯基类黄酮化合物脱水淫羊藿素（AHI）对人肝癌细胞株MHCC-97H的增殖、迁移和凋亡的影响。方法:体外培养人肝癌细胞株MHCC-97H及人正常肝细胞株L02,分别用0、20、40、80、120、160、200 μg/ml浓度的AHI处理MHCC-97H细胞,用0、25、50、100、150、200、400、500 μg/ml浓度的AHI处理L02细胞。采用CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖情况;划痕实验检测细胞迁移情况;Hoechst33342实验和流式细胞术检测细胞凋亡情况;蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白表达情况。结果:经0、20、40、80、120、160、200 μg/ml AHI处理24 h后,MHCC-97H细胞的存活率分别为（100.00±0.00）%、（97.41±2.10）%、（96.58±3.23）%、（87.72±4.85）%、（78.33±3.76）%、（56.97±2.61）%、（15.25±2.51）%,差异有统计学意义（ F=429.20, P<0.001）;80、120、160、200 μg/ml AHI与0 μg/ml AHI相比,差异均有统计学意义（均 P<0.001）。经0、25、50、100、150、200、400、500 μg/ml AHI处理24 h后,L02细胞存活率分别为（100.00±0.00）%、（96.82±3.79）%、（95.36±3.43）%、（90.79±5.75）%、（77.67±5.66）%、（63.98±5.22）%、（34.22±4.01）%、（33.84±4.41）%,差异有统计学意义（ F=233.20, P<0.001）;100、150、200、400、500 μg/ml AHI与0 μg/ml AHI相比,差异均有统计学意义（均 P<0.05）。AHI处理L02细胞24 h半抑制浓度（IC 50）为（300.20±17.10） μg/ml,明显大于MHCC-97H细胞IC 50（158.60±5.50） μg/ml,差异有统计学意义（ t=13.65, P<0.001）。经0、120、160、200 μg/ml AHI处理24 h后,MHCC-97H细胞克隆数分别为1 993.00±46.29、1 355.00±54.84、998.33±21.03、218.33±35.95,差异有统计学意义（ F=954.80, P<0.001）;120、160、200 μg/ml AHI与0 μg/ml AHI相比,差异均有统计学意义（均 P<0.001）。经0、120、160、200 μg/ml AHI处理24 h后,MHCC-97H细胞愈合率分别为（51.68±1.93）%、（16.04±0.73）%、（8.88±0.31）%、（-6.94±0.46）%,差异有统计学意义（ F=1 616.00, P<0.001）;120、160、200 μg/ml AHI与0 μg/ml AHI相比,差异均有统计学意义（均 P<0.001）。Hoechst33342实验显示,经0 μg/ml AHI处理的MHCC-97H细胞于倒置显微镜下显示出均匀的暗蓝色,并呈现出完整的细胞核状态;相较于0 μg/ml,120、160、200 μg/ml AHI处理的细胞出现皱缩、破碎的现象,细胞核形态异常,部分细胞核被染为亮蓝色,且该情况随着浓度的增加愈为明显。经0、120、160、200 μg/ml AHI处理24 h后,MHCC-97H细胞凋亡率分别为（10.51±0.56）%、（42.23±0.87）%、（61.92±0.52）%、（72.05±0.74）%,差异有统计学意义（ F=4 677.00, P<0.001）;120、160、200 μg/ml AHI与0 μg/ml AHI相比,差异均有统计学意义（均 P<0.001）。经0、120、160、200 μg/ml AHI处理的MHCC-97H细胞Bax、Cleaved Caspase-3/Caspase-3、Cleaved Caspase-9/Caspase-9、Bcl-2蛋白相对表达量差异均有统计学意义（ F=30.43, P<0.001;F=212.80, P<0.001;F=475.30, P<0.001;F=10.75, P=0.004）;160、200 μg/ml AHI Bax蛋白表达与0 μg/ml AHI相比,均显著升高（均 P<0.001）;120、160、200 μg/ml AHI Cleaved Caspase-3/Caspase-3、Cleaved Caspase-9/Caspase-9蛋白表达与0 μg/ml AHI相比,均显著升高（均 P<0.001）;120、160、200 μg/ml AHI Bcl-2蛋白表达与0 μg/ml AHI相比,均显著降低（均 P<0.05）。 结论:AHI可抑制人肝癌细胞株MHCC-97H的增殖、迁移,并促进其凋亡。     

淫羊藿甙对急性早幼粒白血病细胞端粒酶活性的影响

目的：探讨淫羊藿甙（ICA）对急性早幼粒白血病细胞端粒酶活性的影响。方法：采用ICA与全反式维甲酸（AT-RA）对比试验。观察ICA对白血病细胞端粒酶活性及增殖分化的影响。结果：ICA可明显抑制端粒酶活性，对白血病细胞均有较明显的诱导分化和抑制增殖作用。且与ATRA合用可产生明显的协同效应。结论：ICA具有抑制急性早幼粒白血病细胞端粒酶活性的作用。     

淫羊藿苷对小鼠放射性损伤后造血调控的影响

目的：探讨淫羊藿苷(ICA)对辐照小鼠造血调控的影响。方法：小鼠接受^60Co照射后给予ICA，检测外周血白细胞总数及分类、骨髓和脾脏粒细胞／巨噬细胞克隆形成单位(CFU-GM)计数变化。结果：应用ICA可促进小鼠外周血白细胞总数增加，明显促进骨髓和脾脏CFU-GM集落形成。结论：ICA具有明显的促进造血功能恢复的作用。     

淫羊藿甙协同诱生细胞因子及增强抗癌效应细胞活性的研究

淫羊藿为小蘖科多年生草本植物，为历代常用的补益中药。采用的淫羊藿甙是从朝鲜淫羊藿中提取的单体成份．我们为寻找新的生物反应调节剂，研究了淫羊藿甙协同诱生白细胞介素-2、3、6和增强抗癌效应细胞(NK、LAK)活性的作用。结果如下：     

莫合烟对小鼠胚胎细胞致突变的研究

本文用微核试验的方法检测了新疆产莫合烟（1种粗制烟草）对小鼠胚胎细胞的遗传毒作用，并与新疆卷烟厂生产的天地牌香烟加以比较。给妊娠13-15d的瑞士小鼠腹腔注射烟雾凝聚物，共2次，间隔24h，第2次染毒后16h杀死动物，取胎鼠的肝脏及母鼠的骨髓，制片，计数多染红细胞（PCE）的微核率。     

淫羊藿苷对急性早幼粒白血病细胞体内外效应的研究

目的 :探讨淫羊藿苷 (ICA)对急性早幼粒白血病细胞的诱导分化作用。方法 :采用ICA与全反式维甲酸 (ATRA)对比试验 ,观察ICA在体外及小鼠体内对白血病细胞增殖分化的影响。结果 :ICA在体内外对白血病细胞均有较明显的诱导分化和抑制增殖作用 ,且与ATRA合用可产生明显的协同效应。结论 :ICA具有明显的抗白血病细胞作用     

淫羊藿苷对小鼠放射性损伤后造血调控的影响

目的探讨淫羊藿苷(ICA)对辐照小鼠造血调控的影响.方法小鼠接受 60 Co照射后给予ICA,检测外周血白细胞总数及分类、骨髓和脾脏粒细胞/巨噬细胞克隆形成单位(CFU-GM)计数变化.结果应用ICA可促进小鼠外周血白细胞总数增加,明显促进骨髓和脾脏CFU-GM集落形成.结论ICA具有明显的促进造血功能恢复的作用.