IL—6诱导人骨髓瘤细胞表达CD45

目的：研究髓瘤细胞系Sko-007中IL－6信号途径活化与CD45诱导表达之间的关系。方法：首先采用凝胶阻滞电泳（electrophoretic mobility shift assay,EMSA)方法检测参与IL－6信号转导功能的转录因子STAT3和NF－IL－6在Sko-007细胞中的诱导活化情况并确定该细胞中IL－6信号转导途径;进而采用RT－PCR和FACS方法检测CD45mRNA和蛋白在IL－6刺激作用下的诱导表达情况;最后采用以上两种方法观察CD45诱导表达与I－6信号途径活化之间的关系。结果：①两种主要的IL－6信号转导途径JAK／STAT和Ras/NF-IL-6都能够在Sko-007细胞中诱导激活;②CD45mRNA和蛋白的表达量在IL－6刺激作用下明显增加;③STAT3反义表达质粒导入Sko-007细胞后JAK／STAT途径活化信号减弱,同时CD45mRNA诱导表达量下降。结论：Sko－007细胞中JAK／STAT途径的诱导激活介导了CD45的诱导表达。     

IL—6在人骨髓瘤细胞U266中的信号转导途径与细胞增殖促进效应之间的关系

目的：研究人骨髓瘤细胞U266中IL－6信号转导途径激活与细胞增殖促进效应之间的关系。方法：首先分别采用MTT、凝胶阻滞电泳（electrwophoretic mobility shift assay, EMSA）和免疫沉淀（immunoprecipitation,IP）方法观察IL－6对U266细胞生长的影响及两条IL－6信号转导途径在U266细胞中的诱导激活状态;然后采用化学试剂处理或转基因方法观察信号途径活化状态变化与IL－6效应变化之间的关系。结果：IL－6可明显促进U266细胞增殖,并在不同剂量下诱导JAK／STAT和Ras/NF-IL-6途径活化;Ras途径活化被特异性上调和下调时,IL－6对U266细胞的生长促进效应分别得以增强和减弱;而JAK／STAT途径活化受抑时,IL－6的促细胞生长效应反而加强。结论：Ras途径的诱导激活介导了IL－6对U266细胞的增殖促进效应;而JAK／STAT途径活化介导了与IL－6促细胞增殖相反的生物学效应。     

两条IL-6信号转导途径在人骨髓瘤细胞系U266中的相互拮抗作用

目的 研究人骨髓瘤细胞系U266中白细胞介素6（IL－6）信号转导途径及彼此之间的相互调控方式。方法 首先采用凝胶阻滞电泳（electrophoretic mobility shift assay,EMSA)方法观察分别参与两条IL－6信号转导途径的转录因子STAT3和NF－IL－6在U266细胞中的诱导激活状态并确定该细胞中的IL－6信号转导通路;继而采用转基因或化学试剂处理方法,特异性上调或下调其中一条IL－6信号途径的化,并同时观察另外一信号途径的激活状态。结果 1、以上两种转录因子分别参与的IL－6信号转导途径－－JAK／STAT和Ras/NF-IL-6,它们都能够在U266细胞中诱导激活;2、在高剂量IL－6（1－100ng/ml）刺激范围之内,一条IL－6信号途径活化水平的升高可同时导致另一条信号途径活化水平的下降。结论 在一定IL－6刺激剂量范围内,U266细胞中两条IL－6信号途径的诱导激活存在着相互拮抗作用。     

Ras/NF-IL-6信号转导途径介导人骨髓瘤细胞KM-3中的IL-6生物学效应

目的　研究人骨髓瘤细胞KM 3中的IL 6信号转导途径与生物学效应之间的关系。方法　分别采用MTT、凝胶阻滞电泳 (electrophoreticmobilityshiftassay ,EMSA)、免疫沉淀方法检测IL 6对KM 3细胞生长状态的影响、参与IL 6信号传递功能的转录因子以及蛋白激酶在KM 3细胞中的诱导激活状态。结果　IL 6可明显促进KM 3细胞增殖 ,并可引发Ras/NF IL 6信号转导途径活化 ,但Jak/STAT信号途径没有激活。结论　Ras/NF IL 6信号转导途径介导了IL 6对KM 3细胞的生长促进作用     

Bcl-2家族不同分子分别介导地塞米松在不同类型人骨髓瘤细胞系上的凋亡效应

目的：研究3种Bcl-2家族抗凋亡蛋白（Bcl-2,Bcl-xl,Bcl-1)在地塞米松（dexamethasone,DEX)诱导的不同类型人骨髓瘤细胞系凋亡过程中的作用。方法：采用MTT方法观察DEX对骨髓瘤细胞生长的影响。采用碘化丙胺（propidium iodide,PI)染色和流式细胞术分析骨髓瘤细胞经DEX处理后的凋亡情况，采用免疫印迹方法检测Bcl-2家族3种抗凋亡蛋白在骨髓瘤细胞凋亡过程中的表达改变情况。结果：DEX能够诱导IL－6依赖型骨髓瘤细胞系XG－7和IL－6非依赖型骨髓瘤细胞系Sko-007发生典型的细胞亡反应。同时XG－7细胞中Bcl-XL和Mcl-1的表达在DEX处理后明显下调，而同样条件下Sko-007细胞中则出现了Bcl-2的降解。结论：Bcl-2家族不同抗凋亡蛋白可分别介导DEX在不同骨髓瘤细胞系上的凋亡效应。     

未知酪氨酸激酶对骨髓瘤细胞中IL—6诱导Ras／MAPK／NF—IL—6途径活化的调节作用

目的 研究两条主要的IL-6信号转导途径-JAK/STAT和Ras/MAPK/NFG-IL-6在人骨髓瘤细胞系KM-3中的诱导活化情况和调控机制。方法 首先分别采用凝胶阻滞电泳（EMSA）和免疫沉淀（IP）方法检测参与 IL-6信号转导功能的转录因子（STAT3、NF-IL-6）和蛋白激酶（JAK1、MAPK）在KM-3细胞中的诱导活化情况。然后采用特异性酢氨酸蛋白激酶 抑制剂Genistein作用于KM-3细胞,观察酢氨酸磷酸化作用对KM-3细胞中IL-6信号转导功能的影响。结果 IL-6刺激后,KM-3细胞中只出现了Ras/MAPK/NF-IL-6信号转导途径的诱导激活,而JAK/STAT途径则不参与IL-6在KM-3细胞中的信号转导功能。Gwenistein的作用可明显抑制Ras/MAPK/NF-IL-6途径的活化。结论 一种目前尚无法确定的非JAK1酪氨酸蛋白激酶可参与并调节Ras/MAPK/NF-IL-6信号转导途径在KM-3细胞中的诱导活化。     

STAT3反义表达载体的构建、稳定表达及对M1白血病细胞表型的影响

目的 探讨JAK／STATs通路在IL－6信号转导中的功能。方法 将含起始密码子在内的约1．2kbSTAT3cDNA反向插入到真核细胞表达载体pcDNA3中,采用电穿孔法重组质粒导入到M1小鼠急性髓系白血病细胞中,进行G418筛选。结果 G418筛选出抗性克隆后,基因组DNAPCR扩增表明STAT3反义基因片段已导入M1细胞中并在基因组中整合。STAT3反义RNA不影响M1细胞的生长动力学特征,但可显著拮抗IL－6诱导的STAT3激活,并拮抗IL－6对M1细胞的生长抑制效应。结论 STAT3反义RNA能够在M1细胞中稳定表达,成为进一步研究JAK／STATs途径功能的新模型。     

MRL/lpr小鼠肾组织JAK/STAT信号转导途径的表达和雷帕霉素对其表达的影响

目的 探讨JAK／STAT1信号转导途径在MRL／lpr小鼠狼疮肾炎中所起的作用以及雷帕霉素对JAK／STAT1信号转导途径活化的影响。方法采用MRL／lpr转基因鼠，给予雷帕霉素干预治疗后，采用免疫组化方法研究肾脏磷酸化STAT1的组织分布情况，采用Westernblot方法研究磷酸化STAT1蛋白的表达，采用SYBRgreen嵌合荧光法real-time定量PCR研究SOCS-1mRNA的表达，从而研究STAT1的活化水平。结果MRL/lpr狼疮鼠肾脏的磷酸化STAT1蛋白明显活化，SOCS-1基因的表达升高，给予雷帕霉素治疗后肾脏的磷酸化STAT1蛋白表达降低，SOCS-1基因的表达降低。结论JAI（／STAT1信号转导途径的活化与狼疮肾炎的发病相关，雷帕霉素可以降低JAK／STAT1信号转导途径的表达．这可能是雷帕霉素治疗系统性红斑狼疮的机理之一。     

白血病细胞JAK／STAT途径异常激活

JAK/STAT信号通路主要包括JAK和STAT两大家族.JAK家族是细胞内一组蛋白酪氨酸激酶,主要参与造血因子受体超家族导导的信号转导.STAT家族是一组极为重要的转录因子.JAK/STAT途径的异常活化可引起细胞的表型改变和恶性转化,针对JAK/STAT途径的治疗策略可能成为白血病治疗的新选择.     

SOCS和IFN对JAK/STAT活化的影响和意义

信号抑制因子(SOCS)是在细胞因子诱导下依赖JAK/STAT通路的信号传导而产生的,继而抑制细胞因子的信号传导,因此SOCS蛋白质被认为可以形成局部经典负反馈回路.IFN是由辅助性T细胞Ⅰ类亚群和自然杀伤细胞等分泌的一种细胞因子,具有多种免疫调节功能.在炎症反应中IFN首先激活JAK,然后再活化与之相结合的STATI和STAT3,从而引起iNOS诱生型一氧化氮表达增强而诱发炎症反应,而IFN在诱导细胞的抗病毒和抗生长反应中也起关键作用.IFN可正向调节SOCS的表达,但是SOCS的过度表达又可以抑制IFN受体的磷酸化及STAT1、STAT3的活化.     

IL-6 up-regulates mcl-1 in human myeloma cells through JAK / STAT rather than ras / MAP kinase pathway

Mcl-1 is an anti-apoptotic member of the Bcl-2 family which is tightly regulated during myeloid and B cell differentiation. We have recently reported that Mcl-1 is expressed in human myeloma cells and that Mcl-1 and Bcl-x(L) expression are correlated. In the current study, we demonstrate that IL-6, a survival factor for the human myeloma cell line MDN, rapidly up-regulates Mcl-1 whereas it has no effect on Bcl-2 protein level. In MDN cells, IL-6 induces both extracellular signal-regulated protein kinase (ERK)1,2 and STAT3 activation whereas STAT1 and STAT5 activation remains undetectable. Furthermore, while investigating the IL-6 signaling pathway leading to Mcl-1 up-regulation, we show that a janus kinase (JAK)-2 inhibitor is able to inhibit both STAT3 activation and Mcl-1 up-regulation whereas an MAP/ERK kinase (MEK) inhibitor has no effect. In conclusion, our data suggest the involvement of the JAK / STAT pathway but not of the Ras / mitogen-activated protein (MAP) kinase pathway in IL-6-induced Mcl-1 up-regulation.     

白血病形成中JAK/STAT信号通路的持续激活

JAK/STAT通路是细胞因子、生长因子、激素等广泛应用的信号转导通路,白血病形成中普遍存在JAK/STAT通路的持续激活。白血病融合蛋白的表达、酪氨酸激酶过度表达或激活突变及某些病毒感染可导致JAK/STAT通路的持续激活和调节异常,并引起细胞的转化和白血病形成。了解白血病形成中JAK/STAT通路的异常调节有助于开发靶向JAK/STAT通路的治疗策略。     

HIV-1 NL4-3, but not IIIB, inhibits JAK3/STAT5 activation in CD4(+) T cells

HIV-1 infection leads to T cell dysfunction and apoptosis in vivo and in vitro. The shared common gamma chain of IL-2R and its associated Janus kinase, JAK3, are indispensable for normal T cell function and survival. We have reported that CD4 ligation with HIV gp120 inhibits T cell receptor-induced activation and expression of JAK3. We have also shown that while some strains of HIV-1, such as NL4-3, induce apoptosis of infected CD4(+) T cells, other strains, such as HIV-1 IIIB, do not. Interestingly, we show here that infection of CD4(+) T cells with HIV-1 NL4-3, but not IIIB, inhibited activation and expression of JAK3. NL4-3-infected T cells were unable to upregulate JAK3 expression following stimulation through TCR/CD3. In addition, NL4-3, but not IIIB, inhibited tyrosine phosphorylation and expression of STAT5, a downstream target of JAK3. These data suggest a correlation between apoptosis of HIV-1-infected T cells and inhibition of the JAK3/STAT5 activation pathway.     

cAMP对人骨髓瘤细胞的IL-6信号转导功能及细胞增殖的抑制作用

目的 研究ＰＫＡ途径激活（或胞内ｃＡＭＰ水平升高）后对人骨髓瘤细胞的ＩＬ－６信号转导功能及细胞生长的影响。方法 采用ＰＫＡ途径激动剂Ｆｏｓｋｏｌｉｎ（ＦＫ）和ｃＡＭＰ类似物８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ刺激人骨髓瘤细胞骨－Ｓｋｏ－００７,分别通过ＭＴＴ方法和凝胶阻滞电泳（ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ ｍｏｂｉｌｉｔｙ ｓｈｉｆｔ ａｓｓａｙ,ＥＭＳＡ）方法检测ＦＫ和８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对Ｓｋｏ细胞的生长及其Ｉ