转录因子T-bet和GATA-3对再生障碍性贫血免疫失衡的作用

目的探讨外周血中T-bet和GATA-3基因的表达在再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)中发病机制及意义。方法选择23例AA患者为再障组,其中重型再障(severe aplastic anemia,SAA)13例,轻型再障(mediate aplastic anemia,mAA)10例,再选择22例健康体检为对照组,对纳入对象采用流式细胞术检测其外周血Th1和Th2,同时运用RT-PCR技术检测外周血单个核细胞(PBMCs)中转录因子T-bet和GATA-3 mRNA基因表达。结果与对照组相比,再障组的lg(T-bet/β-actin)和Th1(%)升高,差异有统计学意义(P<0.05、P<0.01),lg(GATA-3/β-actin)和Th2(%)降低,差异有统计学意义(P<0.05、P<0.05);其中SAA组的lg(T-bet/β-actin)、lg(GATA-3/β-actin)和Th1(%)、mAA组的lg(T-bet/β-actin)、Th1(%)相比对照组明显升高(P<0.05、P<0.01、P<0.01、P<0.05、P<0.05);SAA组的Th2(%)、mAA组的lg(...     

转录因子T-bet/GATA-3对再生障碍性贫血免疫失衡的作用分析

目的 探讨外周血中 T-bet和GATA-3基因的表达在再生障碍性贫血（AA）的发病机制的意义。方法 采用流式细胞术检测23例AA患者和22例健康体检者外周血Th1和Th2,同时运用RT-PCR技术检测外周血单个核细胞（PBMCs）中转录因子T-bet和GATA-3 mRNA基因表达。结果 与对照组相比,再障组的lg(T-bet/ -actin)和Th1(%)显著升高（P<0.05,P<0.01）,lg(GATA-3/ -actin)和Th2(%)显著降低（P<0.05,P<0.05）;SAA组的lg(T-bet/ -actin)、lg(GATA-3/ -actin)和Th1(%)、mAA组的lg(T-bet/ -actin)、Th1(%)明显升高（P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.05,P<0.05）;SAA组的Th2(%)、mAA组的lg(GATA-3/ -actin)和Th2(%)显著降低（P<0.05,P<0.01,P<0.05）。结论 T-bet和GATA-3表达异常在AA发生、发展过程中发挥重要作用,可能机制为增强Th1细胞功能,抑制Th2细胞功能,导致患者免疫功能异常,最终引起再障发生。     

生血合剂影响慢性再障患者外周血单个核细胞T-bet/GATA-3及相关信号分子、细胞因子表达的体外研究

目的:转录因子T-bet、GATA-3及相关信号通路在Th1、Th2分化平衡及免疫反应调节中发挥重要的作用,本研究拟从体外研究健脾补肾活血中药复方生血合剂对慢性再生障碍性贫血(CAA)患者外周血单个核细胞(PBMNC)T-bet、GATA-3及相关信号分子、细胞因子表达的影响。方法:纳入CAA患者10例,男5例,女5例,年龄42～73岁,采集外周血前3天内未服用中药及环孢素。生血合剂制成无菌针剂(每毫升含2 g生药),环孢菌素A(CsA)用无菌RPMI1640配制成浓度为1 mg/mL的溶液。分离培养患者外周血单个核细胞(PBMNC),加或不加药物培养72 h,分为空白对照组、大剂量生血合剂组(200 mg/mL)、小剂量生血合剂组(100 mg/mL)和环孢素组(400ng/mL),采用实时荧光定量PCR(Realtime FQ-PCR)检测培养后PBMNC转录因子T-bet、GATA-3及信号分子STAT4、STAT6 mRNA表达情况,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测PBMNC培养上清IFN-γ、IL-12、IL-4水平。结果:CAA患者PBMNC体外培养后,空白对照组T-bet、STAT4、IFN-γ、IL-12表达均明显高于小剂量生血合剂组、大剂量生血合剂组和环孢素组(P<0.05),小剂量生血合剂组T-bet、STAT4、IFN-γ、IL-12显著高于大剂量生血合剂组、环孢素组(P<0.05),大剂量生血合剂组T-bet、STAT4、IFN-γ、IL-12与环孢素组之间没有显著性差异(P>0.05);各组GATA-3、STAT6、IL-4之间比较无明显差异(P>0.05)。结论:生血合剂能在体外下调CAA患者PBMNC T-bet、STAT4、IFN-γ、IL-12表达,并且呈现一定的剂量依赖性。     

再生障碍性贫血患者外周血单个核细胞T-bet表达及其意义

目的:探讨外周血单个核细胞T-bet表达与再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)发病之间的关系。方法:半定量RT-PCR法检测17例初诊AA患者和20名健康者外周血单个核细胞(PBMC)T-bet的表达,ELISA法检测血浆干扰素-γ(IFN-γ)水平。结果:初诊AA患者PBMC中T-bet表达和血浆IFN-γ水平均显著高于正常对照组(P<0.01),两者呈正相关关系(P<0.05)。结论:T-bet和IFN-γ表达的增高在AA的免疫病理学中可能起着重要作用。     

大鼠变应性鼻炎模型中T-bet/GATA-3基因表达的研究

目的探讨大鼠变应性鼻炎模型中血液单核细胞中T-bet/GATA-3基因表达及在变应性鼻炎发生发展中的作用.方法 20只SD大鼠,雌雄各半,随机分为实验组和对照组,每组各10只.实验组用卵蛋白致敏,以氢氧化铝溶胶和灭活的百日咳杆菌为佐剂,卵蛋白滴鼻建立大鼠变应性鼻炎模型,对照组以氢氧化铝溶胶和灭活的百日咳杆菌生理盐水皮下注射生理盐水滴鼻.在末次激发10 h,心脏采血,分离血浆和单核细胞.用ELISA法检测血浆中IL-4和INF-γ的水平,用RT-PCR法测定单核细胞中T-bet/GATA-3 mRNA的表达,对结果进行统计学分析.结果实验组血浆中IL-4和INF-γ（x±s）的水平分别是（14.241±1.963）和（12.364±2.524）Pg/mL;T-bet mRNA和GATA-3 mRNA（x±s）相对表达量分别为（0.433±0.514）和（1.029±0.690）.对照组血浆中IL-4和INF-γ（x±s）的水平分别是（4.916±0.600）和（16.303±5.335）Pg/mL;T-bet mRNA和GATA-3 mRNA（x±s）相对表达量分别为（0.495±0.103）和（0.550±0.119）.实验组血浆中IFN-γ的量减少并低于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）,而IL-4的含量明显高于对照组,差异具有显著性（P〈0.001）;实验组中T-bet mRNA的相对表达量与对照组相比无明显变化,无统计学意义（P〉0.05）,而实验组中GATA-3 mRNA相对表达量明显高于对照组,二者比较有统计学意义（P〈0.05）.结论大鼠变应性鼻炎模型中,GATA-3的过表达导致GATA-3和T-bet表达比例失衡,进而导致Th1/Th2细胞的免疫紊乱,GATA-3和T-bet表达比例失衡可能是变应性鼻炎发生的基因基础.     

再生障碍性贫血患儿骨髓T-bet、GATA3蛋白和外周血细胞因子表达及意义

目的 检测调节Th1/Th2细胞分化的T-bet,GATA3蛋白在不同程度获得性再生障碍性贫血患儿骨髓中的表达,同时比较其治疗前外周血IL-2、IL-4、IFN-γ细胞因子水平,探讨获得性再生障碍性贫血的免疫病理机制.方法 将49例获得性再生障碍性贫血患儿根据临床表现分为非重型组和重型与极重型组.利用免疫组织化学方法检...     

变应性鼻炎小鼠模型鼻黏膜组织重塑和转录因子T-bet/GATA-3的表达

【目的】 建立变应性鼻炎小鼠模型,了解鼻黏膜组织重塑情况,探讨核因子T-bet/GATA-3 比值在变应性鼻炎免疫失衡中的意义?【方法】 建立卵清蛋白(OVA)诱导的变应性鼻炎小鼠模型;20只BALB/c 小鼠随机分为正常组和实验组?HE染色观察呼吸道黏膜炎症变化;ELISA法(酶联免疫吸附法)检测血浆中白细胞介素4(IL-4)和干扰素?酌(IFN-γ)的水平;Western blot法检测T-bet?GATA-3蛋白在鼻黏膜组织的表达?【结果】变应性鼻炎小鼠鼻和支气管黏膜均存在组织重塑?与正常组相比,实验组鼻黏膜出现上皮脱落,杯状细胞增生,鳞状上皮组织转化,上皮坏死,固有层和黏膜下层腺体增生,血管扩张,组织水肿,并见特征性的嗜酸性粒细胞浸润?实验组血浆中IL-4和IFN-γ的水平分别是(16.5 ± 4.1)pg/mL和(6.5 ± 1.1)pg/mL,而对照组分别是(7.3 ± 1.7)pg/mL,和(11.4 ± 3.3)pg/mL;实验组血浆中IL-4的含量明显高于对照组,差异具有显著性(P < 0.05),而IFN-γ的量低于对照组,差异有统计学意义(P < 0.05)?对照组鼻黏膜T-bet/GATA-3蛋白表达量的比值(0.62 ± 0.17), 明显高于实验组(0.12 ± 0.03;P<0.05)?【结论】 变应性鼻炎小鼠模型鼻黏膜存在组织重塑,可能与转录因子T-bet/GATA-3表达失衡导致下游Th1/Th2细胞免疫失衡和细胞因子IL-4/IFN-γ分泌失调有关?     

CpGODN对尘螨哮喘小鼠T-bet/GATA-3表达的影响

目的探讨CpG寡脱氧核苷酸(CpGODN)对尘螨哮喘小鼠Th1/Th2型细胞因子的影响及其机制。方法用雌性C57BL/6J小鼠建立尘螨哮喘小鼠模型,在抗原致敏阶段加入CpGODN进行干预,并设立GpCODN治疗对照组及布地奈德治疗对照组,观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(EOS)数量的变化;用酶联免疫吸附(ELISA)法检测BALF中IL-4、IL-5、IFN-γ的含量变化;用免疫印迹(Western blotting)法检测肺组织T-bet和GATA-3蛋白的表达水平。结果与哮喘模型组及GpCODN治疗对照组比较,CpGODN治疗组的BALF中炎症细胞明显减少,IL-4、IL-5的浓度降低,IFN-γ浓度升高,肺组织中GATA-3蛋白表达降低,T-bet表达增高;与布地奈德治疗组比较,CpGODN治疗组的BALF中IFN-γ浓度升高。相关分析显示肺组织中T-bet/GATA-3比值与BALF中IFN-γ/IL-4比值呈正相关。结论 CpGODN可通过诱导T-bet表达、抑制GATA-3表达以恢复Th1/Th2平衡,从而减轻尘螨过敏性哮喘小鼠的气道炎症。     

参芪扶正注射液对再生障碍性贫血小鼠脾脏T-bet表达的影响

目的观察参芪扶正注射液对再生障碍性贫血(以下简称再障)小鼠的疗效及其对Th1细胞转录因子T-bet的影响,探讨参芪扶正注射液在再障治疗中的免疫调节作用。方法将小鼠随机分成正常组、模型组及用药组,用药组给予参芪扶正注射液腹腔注射治疗,正常组及模型组给予生理盐水对照治疗,治疗第11天观察外周血、骨髓象及T-bet蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组小鼠外周血象计数、骨髓造血细胞明显降低,T-bet蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,用药组小鼠外周血象计数、骨髓造血细胞明显升高,T-bet表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论参芪扶正注射液能改善贫血症状,降低再障小鼠脾脏组织中转录因子T-bet的表达水平,逆转Th1型反应,调节免疫异常。     

转录因子T-bet/GATA-3在支气管哮喘小鼠中的表达及地塞米松的干预作用

目的:探讨核因子T-bet/GATA-3在支气管哮喘小鼠发病机制中的作用,观察地塞米松干预后T-bet、GATA-3 mRNA的变化.方法:建立卵清蛋白(OVA)诱导的哮喘小鼠模型;24只BALB/c小鼠随机分为正常组、哮喘组及地塞米松治疗组.地塞米松腹腔注射(2 mg/kg)给药.HE染色观察气道炎症变化;采用RT-PCR方法检测T-bet、GATA-3 mRNA的表达:流式细胞技术检测小鼠脾脏CD4T细胞IFN-γ、IL4水平.结果:与正常组相比,哮喘组小鼠GATA-3 mRNA表达显著增Dn(P<0.05).T-bet mRNA水平明显降低(P<0.05),IFN-γ水平明显降低(P<0.01),IL-4水平明显升高(P<0.05);经地塞米松干预后,肺组织GATA-3、T-bet mRNA均有所降低,以GATA-3 mRNA降低更为明显,IL-4表达明显降低(P<0.05),而IFN-γ水平有减少倾向.结论:支气管哮喘小鼠T-bet/GATA-3表达失衡与气道炎症密切相关,地塞米松通过抑制GATA-3和T-bet的表达,调节IL-4/IFN-γ比率并纠正Th1/Th2平衡失调,可能是其治疗哮喘的机制之一.     

变应性鼻炎和变应性哮喘大鼠淋巴细胞T-bet和GATA-3 mRNA的表达

目的:探讨T-bet和GATA-3的失衡表达在变应性鼻炎和变应性哮喘中的作用.方法:将30只大鼠随机分成变应性鼻炎组、变应性哮喘组及正常对照组(n=10),相应建立模型.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测3组大鼠淋巴细胞T-bet和GATA-3 mRNA的表达.结果:变应性鼻炎组和变应性哮喘组大鼠T-bet mRNA的相对表达量分别为(0.12±0.07)及(0.09±0.02),较正常组的(0.60±0.09)减少(P均<0.05);GATA-3 mRNA的相对表达量分别为(1.38±0.15)及(1.41±0.21),较正常组的(0.92±0.21)增多(P均<0.05);而变应性鼻炎组和变应性哮喘组间2个指标比较,差异均无统计学意义(P均>0.05).结论:T-bet和GATA-3的失衡表达可能是上下呼吸道变应性炎症发生的一个共同因素.纠正其平衡很可能为治疗变应性鼻炎和变应性哮喘提供一条新思路.     

再生障碍性贫血小鼠T-bet表达及骨髓巨噬细胞对其表达的影响

目的 探讨再生障碍性贫血(简称再障)小鼠外周血单个核细胞Th1细胞转录因子T-bet的表达及骨髓巨噬细胞对正常小鼠外周血单个核细胞T-bet的影响. 方法 ①免疫介导(γ射线照射和淋巴细胞输入)的方法 建立再障小鼠模型.②RT-PCR方法 检测再障小鼠外周血单个核细胞上T-bet mRNA的表达.③正常小鼠外周血单个核细胞分别经再障小鼠骨髓基质细胞培养上清和小鼠骨髓型正常巨噬细胞株Ana-1培养上清刺激后,用RT-PCR方法 检测T-bet mRNA的表达. 结果 ①再障小鼠外周血单个核细胞T-bet mRNA的表达(1.49±0.18)较正常对照组(1.03±0.06)增高(P<0.05);②正常小鼠外周血单个核细胞分别经再障小鼠骨髓基质细胞培养上清和Ana-1细胞株培养上清刺激后,T-bet mRNA的表达分别为1.29±0.03和1.54±0.03,均较正常对照组(1.03±0.06)增高(均P<0.05). 结论 结果 提示巨噬细胞可能通过增加T-bet的表达参与再生障碍性贫血的免疫发病机制.     

IL-11对ITP患者Th1、Th2细胞及T-bet、GATA-3 mRNA的影响

目的：研究白细胞介素-11 （IL-11）对免疫性血小板减少症（ITP）患者Th1、Th2细胞亚群及其调控因子T-bet mRNA和GATA-3 mRNA表达的影响.方法：从10例ITP患者静脉中抽取外周血提取单个核细胞,加入不同浓度IL-11（0、25、50、100、200 ng/mL）培养4d后,应用流式细胞术和实时荧光定量反转录-多聚酶链反应法检测Th1、Th2细胞亚群比例及T-bet mRNA、GATA-3 mRNA表达水平.结果：当IL-11浓度为100 ng/mL时,与浓度为0的对照组差异最明显,表现为Th1比例及Th1/Th2比值下降,Th2比例升高,差异有统计学意义（P＜0.01）,同时T-bet mRNA表达下降,GATA-3 mRNA表达增加,T-bet/GATA-3比值显著下降,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论：一定浓度的IL-11在体外培养中能促使ITP患者Th1细胞向Th2细胞转化,同时GATA-3 mRNA表达增加、T-bet mRNA表达下降.     

地塞米松对哮喘大鼠T-bet?GATA-3及气道炎症的作用机制

目的:观察地塞米松对哮喘大鼠气道炎症的作用以及对转录因子T-bet、GATA-3表达的影响。方法:36只SPF级SD大鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)和地塞米松组(C组),每组12只。以卵蛋白(OVA)腹腔注射并雾化吸入制备大鼠哮喘模型,观察3组大鼠气道病理改变;采用ELISA法测定肺泡灌洗液(BALF)中IL-2、IL-4、IL-5和IFN-γ含量;采用RT-PCR和Westem blotting检测T-bet和GATA-3 mRNA和蛋白的表达。结果:①予OVA腹腔注射和雾化,哮喘大鼠模型制备成功:②地塞米松减少Th2型细胞因子(IL-4、IL-5)的表达(P<0.01),对Th1型细胞因子(IL-2,IFN-γ)表达量无明显影响;③地塞米松抑制GATA-3表达(P<0.01),对T-bet表达无明显影响;④相关分析显示B组T-bet蛋白表达量与EOS、L、WA/Pi和ASM/Pi呈负相关(P<0.01);B组GATA-3蛋白表达量与EOS、L、WA/Pi和ASM/Pi呈正相关(P<0.01);B组大鼠T-bet蛋白表达量与GATA-3蛋白表达量呈负相关(P<0.01)。结论:支气管哮喘大鼠存在T-bet低表达,GATA-3高表达,并且与气道炎症关系密切:地塞米松抑制气道炎症,可抑制GATA-3表达,但对T-bet表达无明显影响。