MiR-17-3P对多发性骨髓瘤细胞增殖的影响

目的:探究miR-17-3P对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖的影响。方法:通过实时荧光定量聚合酶链反应测定miR-17-3P在MM细胞系RPMI 8226、U266和KM3及正常人骨髓细胞中的表达情况。合成miR-17-3P模拟物和抑制物,分别转染U266细胞,采用MTT法测细胞活力,PI染色流式细胞仪测细胞周期,观察U266细胞增殖情况。结果:MM细胞株RPMI8226、U266、KM3中miR-17-3P相对表达量均明显高于正常人骨髓细胞;利用模拟物上调miR-17-3P后,U266的细胞活力较对照组明显提高,48h时作用效果最为显著;相反,下调miR-17-3P后,U266的细胞活力降低;上调miR-17-3P后,G1期细胞比例较对照组有所减少,S期细胞比例明显增多;相反,下调miR-17-3P后,细胞多被阻滞在G1期。结论:Mi R-17-3P可能促进多发性骨髓瘤细胞增殖。     

卵巢癌细胞系Smac基因的表达及意义

目的 探讨Smac基因在卵巢癌细胞系A2780、COC1及其顺铂(DDP)耐药株A2780/DDP、COC1/DDP中的表达及其意义.方法 半定量逆转录-聚合酶链反应和免疫印迹法检测卵巢癌细胞A2780、COC1及其顺铂耐药株A2780/DDP、COC1/DDP中Smac mRNA和蛋白的表达.结果 卵巢癌细胞A2780、COC1及其顺铂耐药株A2780/DDP、COC1/DDP四种细胞系中均有Smac mRNA和蛋白的表达;Smac在A2780、COC1中的表达高于其顺铂耐药株.结论 低表达Smac抑制凋亡,低表达Smac可能与耐药有关.     

烷化溶血磷脂体外净化多发性骨髓瘤的实验研究

目的　选用 ET- 18- OCH3作为多发性骨髓瘤 (MM)体外净化的药物 ,处理 U2 6 6细胞和 MM骨髓细胞 ,研究 AL P对骨髓瘤细胞的杀伤作用和骨髓净化效果 ,为 AL P用于 MM的体外净化提供实验依据。研究包括 2个部分 :(1) ET- 18- OCH3对 U2 6 6细胞的抗肿瘤效应　方法　不同浓度 ET- 18- OCH3与 U2 6 6细胞作用一定时间 ,收集细胞 ,进行计数和集落形成实验 (CFU- U2 6 6 )观察 ET- 18- OCH3对 U 2 6 6细胞的杀伤作用 ;通过形态学观察、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞技术观察ET- 18- OCH3诱导细胞凋亡现象 ;利用 RT- PCR、流式细胞技术检测 U2 6 6细胞 bcl- 2 ,c- myc m RNA水平及蛋白表达率 ,探讨 ET- 18- OCH3杀伤 U2 6 6细胞的作用机制。　结果　 ET-18- OCH3对 U2 6 6细胞具有明显的细胞毒作用 ,并可抑制U2 6 6细胞集落的形成 ,这些作用呈剂量和时间的依赖性 ;形态学特征及梯状 DNA降解片段表明 ET- 18- OCH3;还可诱导U2 6 6细胞发生凋亡 ,并具有时效关系 ;流式细胞技术检测实验组细胞凋亡率为 17.5 3% ,而对照组细胞未出现凋亡现象 ;RT- PCR显示经 ET- 18- OCH3处理后 U 2 6 6细胞的 bcl- 2 ,c-myc RNA表达明显减少 ,分别减少了原来的 86 %和 72 % ;流式细胞技术检测 U 2 6 6细胞的 Bcl- 2、C- myc蛋白水平明     

多发性骨髓瘤细胞中C-IAP2表达及其相关研究

目的探讨细胞凋亡抑制蛋白-2（cellular inhibitor of apoptosis protein-2,C—IAP2）在多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）发病机制中的作用,为MM治疗提供新的思路和理论依据。方法应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测c—IAP2 mRNA在MM患者中的表达,分析c—IAP2 mRNA与半胱氨酸-天门东氨酸酶-3（cysteine—aspartic proteases-3,caspase-3）蛋白、核因子-κBp65（NF—κBp65）mRNA的相互关系。结果初诊MM患者的c—IAP2 mRNA表达水平高于对照组（P〈0．05）,c—IAP2 mRNA与NF—κBp65 mRNA表达水平呈正相关（r=0．681）,与caspase-3蛋白表达水平呈负相关（r=-0．547）。结论c—IAP2 mRNA在多发性骨髓瘤中高表达,与对照组相比差异有统计学意义,经分析表明c—IAP2基因在多发性骨髓瘤发病中可能具有促进作用.     

不同肝癌细胞系中P53/P21/MDM2表达初步观察

选用P53状态不同的Hep3B、PLC／PRF／5、HCC—9204、HepG2、HepG2215细胞，通过Western印迹分析观察各细胞P53蛋白以及P53下游基因p21、mdm2蛋白表达情况；将报告基因PG13-CAT转染细胞，通过观察CAT酶表达水平反映各细胞中P53的反式活化功能；P21—LUC质粒细胞内转染，比较不同细胞中P53对P21启动子的活化情况。结果显示，PLC／PRF／5细胞中P53蛋白高表达、低功能，但P21蛋白以及报告基因P21—LUC转染细胞后荧光素酶均具有较高水平表达；Hep3B细胞中P53蛋白无表达、无功能，P21蛋白低表达，MDM2蛋白表达相对较高；HCC—9204细胞具有较高MDM2表达，P53蛋白表达及功能均较低，P21亦呈低表达；HepG2215较HepG2细胞具有较高的P53、P21蛋白表达，P53活化报告基因的活性也较强。结果提示，肝癌细胞中P53活性与其表达水平、存在状态有关；某些细胞中P21的活化表达存在不依赖于P53的途径；MDM2与P53的表达具有负性相关倾向。     

Krev—1基因在白血病中表达的研究

Ｋｒｅｖ－１基因在白血病中表达的研究孟庆祥王立郝玉书王建祥卞寿庚薛艳萍晁恒军李克Ｋｒｅｖ－１ｃＤＮＡ是在恢复为贴壁生长的ｖ－Ｋ－ｒａｓ转化的ＮＩＨ３Ｔ３细胞中发现的，它可能是通过其产物ＳｍｇＰ２１拮抗ｒａｓ癌基因产物ｒａｓ－Ｐ２１的作用而发挥抑癌效应...     

△Np63α过表达乳腺癌细胞系的建立

目的建立稳定过表达△Np63α的乳腺癌细胞系,为研究△Np63α的功能奠定基础。方法利用MCF-7细胞系作为模型,通过表达△Np63α的PCDNA3.1质粒转染MCF-7细胞,利用质粒的抗药性筛选MCF-7细胞,从而获得稳定过表达△Np63α的MCF-7细胞,用Real-time PCR和Western blot方法检测验证目的基因表达。结果通过瞬时转染和药物筛选获得了稳定过表达△Np63α的MCF-7细胞。结论成功构建了过表达△Np63α的MCF-7细胞系和转染空质粒的MCF-7对照细胞系,为下一步研究NP63α的功能奠定了基础。     

16例妇科肿瘤中P16基因缺失的研究

目的;研究Ｐ１６基因缺失与妇科肿瘤发生与恶性变的关系：方法：采用聚合酶链式反应技术（ＰＣＲ）,扩增１６例妇科肿瘤组织中的Ｐ１６基因。结果：１６例妇科肿组织中,有１２例为恶性肿瘤。其中有４例出现Ｐ１６基因缺失,缺失率为３３．３％;有４例为良性肿瘤。未见Ｐ１６基因缺失,结论：Ｐ１６基因缺失可能与妇科肿瘤的发生及恶性变有关。     

应用RT-PCR分析食管癌组织中lrig1基因的表达

目的：观察lrigl基因在食管鳞癌中的表达及意义．方法：采用RT．PCR检测36例食管鳞状细胞癌癌组织、相应的癌旁组织和远癌组织中lriglmRNA的表达情况．PCR产物经凝胶电泳，比较3种组织中ragl与GAPDH条带的灰度值之比，半定量分析IriglmRNA的表达水平．结果：36例食管癌组织中有15例（42％）lriglmRNA检测到阳性表达，21例（58％）lriglmRNA表达缺失，其阳性表达率低于相应的癌旁组织（92％）和远癌组织（100．0％，P〈0．05）；癌组织中lriglmRNA表达水平（0．76±0．22）低于相应的癌旁组织（0．89±0．33）和远癌组织（1．13±0．40）；随着肿瘤分化程度的升高，lriglmRNA在癌组织中的阳性表达率也增加（P〈0．05），但lriglmRNA表达缺失与食管癌临床分期（TNM），淋巴结有无转移和病理类型均无统计学差异（P〉0．05）．结论：lriglmRNA在食管癌组织中存在表达缺失和低表达，提示Irigl基因在食管癌的发生发展中可能具有抑癌基因的作用．     

HSP90抑制剂对人多发性骨髓瘤细胞增殖及HSP90蛋白表达的影响

目的 探讨HSP90抑制剂17-AAG对人多发性骨髓瘤细胞增殖及HSP90蛋白表达的影响. 方法 采用MTT法检测HSP90抑制剂对人多发性骨髓瘤U266细胞增殖能力的影响;采用Western blot检测不同浓度的HSP90抑制剂17-AAG(0.001,0.01,0.1,1.0,10.0 μmol/L)对人多发性骨髓瘤细胞中HSP90蛋白表达水平的影响. 结果 HSP90抑制剂17-AAG对人多发性骨髓瘤细胞株U266细胞有剂量依赖性的增殖抑制作用(P＜0.05),无时间依赖性的增殖抑制作用(P＞0.05).随着药物浓度的增加,HSP90蛋白水平的表达也逐渐下降. 结论 HSP90抑制剂能剂量依赖性抑制人多发性骨髓瘤细胞增殖能力,同时下调人多发性骨髓瘤细胞株U266细胞中HSP90蛋白水平的表达.     

3种结肠癌细胞株中DLC-1基因的表达及其启动子区的甲基化状态研究

目的:研究候选抑癌基因DLC-1在结肠癌细胞株中的表达及其启动子区的甲基化状态,初步探讨结肠癌细胞株DLC-1基因表达水平与其启动子区甲基化的相关性.方法:采用RT-PCR技术分别检测DLC-1基因在人结肠癌细胞株CaCo-2、HT-29和LoVo中的表达水平;应用甲基化特异性PCR(MSP)方法和亚硫酸氢盐修饰DNA测序检测启动子区域甲基化状态;分别用0、5、10 μmol·L-1浓度的去甲基化药物5氮杂胞苷处理DLC-1基因启动子区域高甲基化状态细胞后,再检测DLC-1基因mRNA表达水平.结果:人结肠癌细胞株CaCo-2和LoVo中DLC-1 mRNA呈阳性表达,HT-29中的表达呈阴性表达;CaCo-2和LoVo细胞DLC-1基因启动子区域未发生甲基化,而HT-29出现启动子区高甲基化状态;经5氮杂胞苷药物干预后,HT-29结肠癌细胞的DLC-1基因表达明显增强.结论:结肠癌细胞株HT-29中DLC-1基因表达沉默与启动子区高甲基化状态有关.     

丁酸钠与5-氮杂-2''''-脱氧胞苷协同诱导U266细胞p16基因重新表达

目的探讨脱乙酰化酶抑制剂丁酸钠(SB)与去甲基化制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)联合处理经骨髓瘤细胞系U266诱导高甲基化失活的p16基因重新表达的可能性及其对细胞生长的影响。方法用不同浓度药物处理U266细胞后测定细胞生长曲线;流式细胞术分析细胞周期;RT-PCR和Westernblotting检测p16基因mRNA及其蛋白的表达水平。结果单用5-Aza-CdR或SB均抑制细胞生长,联合用药对细胞的抑制作用明显增强;单用5-Aza-CdR或SB对细胞G1期无影响,SB与5-Aza-CdR联合作用发生显著的G1期阻滞;单用0.1μmol/L5-Aza-CdR即可诱导U266细胞p16基因重新表达,随着5-Aza-CdR浓度的增高,p16表达增加,单用SB只能诱导p16基因的弱表达,联合用药明显增强p16基因表达。结论脱乙酰化酶抑制剂SB与去甲基化制剂5-Aza-CdR协同可显著诱导人骨髓瘤细胞U266因高甲基化失活的p16基因重新表达,细胞生长受抑,并使细胞阻滞在G期。     

重组ANGPT2及抗体对白血病荷瘤小鼠ANGPT1/2表达的影响

目的 应用重组的ANGPT2及ANGPT2单克隆抗体注射急性髓系白血病荷瘤小鼠,了解荷瘤小鼠肿瘤组织中ANGPT1/2表达的变化.方法 应用HL-60细胞构建急性髓系白血病模型,同时给予小鼠注射重组的ANGPT2和Anti-ANGPT2,应用Western blot检测急性髓系白血病小鼠肿瘤组织中的ANGPT1/2蛋白的表达.结果 应用重组的ANGPT2,对照组与实验组中的ANGPT1和ANGPT2蛋白的表达差异无统计学意义;应用An-ti-ANGPT2,对照组与实验组中的ANGPT2蛋白的表达差异无统计学意义,ANGPT1蛋白的表达明显低于对照组.结论 进行ANGPT2单克隆抗体实验时,需要阻断VEGF以达到理想的结果。     

HSP90抑制剂对人多发性骨髓瘤细胞增殖及HSP90蛋白表达的影响

目的：探讨HSP90抑制剂17-AAG对人多发性骨髓瘤细胞增殖及HSP90蛋白表达的影响。方法采用MTT法检测HSP90抑制剂对人多发性骨髓瘤U266细胞增殖能力的影响;采用 Western blot检测不同浓度的 HSP90抑制剂17-AAG (0.001,0.01,0.1,1.0,10.0μmol/L)对人多发性骨髓瘤细胞中HSP90蛋白表达水平的影响。结果 HSP90抑制剂17-AAG对人多发性骨髓瘤细胞株U266细胞有剂量依赖性的增殖抑制作用(P<0.05),无时间依赖性的增殖抑制作用(P>0.05)。随着药物浓度的增加,HSP90蛋白水平的表达也逐渐下降。结论 HSP90抑制剂能剂量依赖性抑制人多发性骨髓瘤细胞增殖能力,同时下调人多发性骨髓瘤细胞株U266细胞中HSP90蛋白水平的表达。     

ANGPT1、ANGPT2、VEGF在急性髓系白血病小鼠模型中的表达研究

目的：通过构建急性髓系白血病（AML）小鼠模型,从mRNA水平研究促血管生成素（ANGPT ）1、ANGPT2、血管内皮生长因子（VEGF）的表达水平与急性髓系白血病的关系。方法 NOD／SCID小鼠腹腔接种HL‐60细胞,建立AML小鼠模型,称模型组,未经处理的NOD／SCID小鼠作对照组。用病理组织学及流式细胞学方法鉴定小鼠模型是否成功。实时荧光定量PCR （RQ‐PCR）技术检测ANGPT2、ANGPT1及VEGF mRNA在AML小鼠肿瘤组织中的表达水平。应用Spearman相关分析法分析ANGPT2 mRNA表达水平与小鼠生存期的关系。结果成功构建 AML 小鼠模型。RQ‐PCR结果显示模型组肿瘤组织的ANGPT2、VEGF mRNA的表达水平较正常对照组显著增高,差异有统计学意义（P＜0．05）,而 ANGPT1 mRNA的表达水平两组差异无统计学意义（P＞0．05）。ANGPT2 mRNA表达水平与AML小鼠生存期呈负相关。结论 ANGPT2 mRNA在AML小鼠中高表达且与AML小鼠生存期呈负相关,ANGPT2表达与AML病情进展及预后相关。     

C-myc癌基因在正常人外周血淋巴细胞及肿瘤细胞株上的表达

目的探讨癌基因C-myc在正常人外周血淋巴细胞及肿瘤细胞株上的表达情况。方法分离正常人外周血淋巴细胞,采用异硫氰酸胍一步法提取正常人外周血淋巴细胞及肿瘤细胞株RNA,利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,比较正常人与肿瘤细胞株C-myc mRNA表达程度。结果 HL-60细胞系C-myc RNA表达最强,GBC胃癌细胞株较正常人为高。结论 C-myc参与了正常、异常细胞生长的调节。     

Gankyrin在肝癌细胞系中的表达

目的检测肝癌细胞系中癌基因Gankyrin的表达。为在肝癌细胞中对Gankyrin基因进行RNA干涉研究的体外实验筛选靶细胞。方法对肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、HHCC进行逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）及Western blotting检测。结果Gankyrin基因在3种肝癌细胞系中均有表达。结论多种肝癌细胞系中均有Gankyrin基因的表达，HepG2、SMMC-7721、HHCC均可作为阳性靶细胞，进行Gankyrin基因的RNA干涉研究。     

白凤菜总黄酮对多发性骨髓瘤U266细胞增殖和凋亡影响

目的 观察白凤菜总黄酮(TFG)对多发性骨髓瘤U266细胞的增殖和凋亡的影响。方法 MTT实验检测U266细胞增殖;倒置显微镜及荧光显微镜分别观察U266细胞经TFG处理24 h后细胞形态及凋亡的变化;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期的变化。结果 TFG明显抑制U266细胞的增殖,P<0.05,且呈浓度和时间依赖性;100 μg /mLTFG作用组的U266细胞凋亡明显增加;TFG使U266细胞周期阻滞于S期。结论 TFG可抑制U266细胞增殖,可能同细胞周期的捕获和细胞凋亡的诱导相关。