抗人Fas单克隆抗体的制备及鉴定

Ｆａｓ／Ａｐｏ１／ＣＤ９５抗原的发现,始于对两株单克隆抗体（ｍＡｂ）的功能观察,即抗Ａｐｏ１ｍＡｂ和抗ＦａｓｍＡｂ〔１,２〕。由于二者都能识别细胞膜上ＣＤ９５蛋白抗原,且能诱导敏感细胞凋亡,才导致今天对Ｆａｓ抗原的生物医学研究。制备抗ＦａｓｍＡｂ对于Ｆａｓ抗原的深入研究,尤其是对Ｆａｓ抗原信号传导机制的阐明,以及生物医学应用都有重要的意义。本文利用Ｆａｓ＋的细胞作为免疫原,制备了１株鼠抗人ＦａｓｍＡｂ２Ａ１。１材料和方法１．１材料１．１．１细胞系Ｓｐ２／０小鼠骨髓瘤细胞、Ｊｕｒｋａｔ人Ｔ淋巴…     

MCP-1 mcAb和Losartan拮抗Ang Ⅱ介导的VSMCs的增殖与迁移效应的实验研究

目的探讨单核细胞趋化蛋白－１单克隆抗体（ＭＣＰ－１－ｍｅＡｂ）或Ｌｏｓａｒｔａｎ 拮抗血管紧张素Ⅱ（ＡｕｇⅡ）介导的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）增殖与迁移效应的可能性，为防治动脉硬化提供一定的理论依据。方法采用改良的Ｂｏｙｄｅｎ小室法检测 ＶＳＭＣｓ的迁移效应；以 ＭＴＴ法、~３Ｈ－ＴａＲ掺入法、~３Ｈ－脯氨酸标记法和ＶＳＭＣｓ计数评价ＶＳＭＣｓ的增殖效应。将培养ＶＳＭＣｓ分为 ５组； ２％胎牛血清（ ２％ＦＣＳ）组、 ＡｕｇⅡ组（其浓度为 １０－１０～１０－６ｍｏｌ／Ｌ）、Ｌｏｓａｒｔａｎ组（其浓度为 １０－７～１０－５ｍｏｌ／Ｌ）、ＭＣＰ－ｌｍｃＡｂ组（终浓度为 １０μｇ／ｍｌ）和阳性对照组（含５％的酵母多糖活化血清）。结果（１） ＡｕｇⅡ具有剂量依赖性的促进 ＶＳＭＣｓ的增殖与迁移效应；（２） ＭＣＰ－１ｍｃＡｂ或 Ｌｏｓａｒ－ｔａｎ能有效地拮抗ＡｕｇⅡ介导的ＶＳＭＣｓ增殖与迁移效应。结论 ＭＣＰ－１ｍｃＡｂ或Ｌｏｓａｒｔａｎ对动脉硬化性疾病可能具有较大的应用前景。     

肾综合征出血热病毒大鼠单克隆抗体亲和力及抗原结合位点测定

应用非竞争ＥＬＩＳＡ和ＥＬＩＳＡ相加试验对８株抗肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）大鼠单克隆抗体（ＭｃＡｂ）进行了抗体亲和力和抗原结合位点的测定。结果提示这些ＭｃＡｂ至少可识别ＨＦＲＳＶ核壳蛋白（ＮＰ）上６种不同抗原决定簇，并且表明ＮＰ上可能存在ＨＦＲＳＶ组、亚组、型或亚型抗原决定簇。ＭｃＡｂ亲和常数测定的高低排序结果为ＫＦ１２＞ＤＥ１１＞Ｘ１０＞ＣＨ１０＞ＩＧ４。     

流行性出血热病毒核蛋白的血凝位点研究

流行性出血热病毒（ＥＨＦＶ）Ａ９株鼠脑抗原，经Ａ３５ＭｃＡｂ偶联于Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ制备的免疫吸附柱进行亲和层析纯化，并用高压液相色谱（ＨＰＬＣ）进一步纯化，获得了高纯度的病毒核衣壳蛋白（ＮＰ），其分子量为５００００，经不同特性的ＭｃＡｂ和ＥＨＦ患者血清通过间接ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ鉴定，证实为ＥＨＦ病毒特异性的ＮＰ，且具有血凝活性。将ＨＰＬＣ纯化的ＮＰ免疫小鼠后，可诱导产生特异性血凝抑制抗体，但无中和抗体产生，由此证实ＥＨＦ病毒（Ａ９株）ＮＰ具有构型依赖性血凝活性结合位点。     

鼻咽癌抗独特型单克隆抗体的制备和鉴定

用针对鼻咽癌癌细胞相关抗原的单克隆抗体Ｆｃ１（Ａｂ１）作免疫原，采用常规免疫和杂交瘤制备方法，获得了一株抗Ｆｃ１Ｖ区独特型的杂交瘤：２Ａ９。双夹心ＥＬＩＳＡ显示２Ａ９所分泌的抗体（Ａｂ２）对Ｆｃ１有效强的亲和力。ＥＬＩＳＡ结合抑制试验结果显示，Ａｂ２能抑制Ｆｃ１对鼻咽癌细胞ＣＮＥ１的反应。这就证明Ａｂ２作用于Ｆｃ１抗体的Ｖ区。用Ａｂ２与钥孔戚血蓝素（ＫＬＨ）交联物免疫小鼠产生的抗－抗独特型抗体（Ａｂ３）的血清，能与Ｆｃ１竞争ＣＮＥ１细胞株上的原始靶抗原。免疫组化证实，Ａｂ３与Ｆｃ１对鼻咽癌细胞有相同的反应，均为细胞膜染色。可以看出Ａｂ３与Ａｂ１（Ｆｃ１）具有相同的配位。以上结果表明：２Ａ９杂交瘤细胞所分泌的抗独特型抗体Ａｂ２是带有鼻咽癌相关抗原内影像的单克隆抗体。     

高糖、肿瘤坏死因子促进血管内皮细胞表面整合素（α_vβ_3）表达

本文采用ＥＬＩＳＡ方法检测培养的人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）表面玻璃连接蛋白受体（ＶｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒＶｎＲ即整合素家庭的α＿ｖβ＿３）的表达改变；用（５１）Ｃｒ－标记血小板（（５１）Ｃｒ－ｐｌａｔｅｌｅｔｅ，（５１）Ｃｒ－ｐＬ）检测ＨＵｖＥｃ的粘附功能；Ｆｕｒａ－２／Ａｍ负载ＥＣ，测定ＨＵＶＥＣ胞内游离钙离子浓度（［Ｃａ（２＋）］），观察了高糖、肿瘤坏死因子－α（Ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ－α，ＴＮＦ－α）对ＥＣ粘附功能的影响。结果表明：①高糖（３０ｍｍｏｌ／Ｌ）可明显促进ＥＣ与ＰＬ的粘附（ＣＰＭ值：３６１±２ｌ．９３ＶＳ２ｌ９．６７±１６．２６，ｎ＝６Ｐ＜０．０１），抗β３亚单位单抗（β３ＭｃＡｂ）可部分阻断ＥＣ与ＰＬ粘附。ＴＮＦ－α（１０００μ／ｍ１）也有相同作用（ＣＰＭ值：４ｌ０．７±１７．６ＶＳ２１９．６７±１６．２６１ｎ＝６Ｐ＜０．０１），β３ＭｃＡｂ也部分阻断ＴＮＦ－α诱导的ＥＣ－ＰＬ间的粘附。②不同浓度高糖和ＴＮＦ－α不同时间可影响ＥＣ表面的α＿ｖβ＿３表达，并且在一定范围内有浓度和时间依赖性。③高糖和ＴＮＦ－α可明显增加ＥＣ的［Ｃａ（２＋）］ｉ，上述资料提示?     

CD226在猴睾丸分布的免疫组织化学研究

１９８５年, Ｂｕｒｎｓ等［１］以活化的 Ｔ细胞为免疫原,制备了抗活化Ｔ细胞表面抗原的单克隆抗体（ｍＡｂ）,并将其中 １株ｍＡｂ Ｌｅｏ－Ａ１识别的抗原命名为人Ｔ细胞谱系特异性活化抗原 １（Ｔ ｌｉｎ－ｅａｇｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｔｉｇｅｎ１, ＴＬｉＳＡ１）。 ｍＡｂＬｅｏ－Ａ１在混合淋巴细胞反应中,可抑制细胞毒Ｔ细胞（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ, ＣＴＬ）分化。随后Ｓｃｏｔｔ等［２］发现, ＴＬｉＳＡ１也高表达于血小板表面,可刺激血小板的活化和凝集,遂将此抗原…     

应用HiTrap Sepharose SP阳离子交换色谱纯化小鼠F6单克隆抗体

单克隆抗体（ｍＡｂ）是一类均一性很好的蛋白质，但由于不同ｍＡｂ的理化特性有差异，纯化方法和条件也有所不同。本文通过反复实验，摸索出利用阳离子色谱介质可较好地纯化小鼠抗重组人ＴＮＦ－αｍＡｂＦ６（ＩｇＧ１）的实验条件。１　材料和方法１－１　主要试剂　小鼠抗重组人ＴＮＦαｍＡｂＦ６为本室研制，其Ｉｇ亚类为ＩｇＧ１，腹水ＥＬＩＳＡ效价＞１０－６［１］。重组人ＴＮＦα由本校生物化学教研室提供；酶标记兔抗鼠抗体为Ｇｉｂｃｏ公司产品。１－２　阳离子交换色谱　ＡＫＴＡＦＰＬＣ色谱仪和ＨｉＴｒａｐＳｅｐｈａ…     

抗bFGF单克隆抗体的鉴定及其意义

用重组牛ｂＦＧＦ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，通过细胞融合，以反向间接血凝和间接ＥＬＩＳＡ筛选，以及有限稀释法克隆化，建立了９株稳定分泌抗ｂＦＧＦ单克隆抗体（ｍＡｂ）杂交瘤细胞。对其中３株用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和生物活性抗体中和实验进行了鉴定。结果显示，ｍＡｂ可结合重组牛或人ｂＦＧＦ，并能抑制ｂＦＧＦ刺激Ｂａｌｂ／ｃ３Ｔ３细胞的生长；腹水的ＥＬＩＳＡ滴度为１∶３０００；用其中２株ｍＡｂ建立的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法灵敏度可达５０ｐｇ／孔。本文还讨论了抗ｂＦＧＦｍＡｂ的应用价值。     

人巨细胞病毒单克隆抗体的研制检定和应用

采用人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＡＤ１６９株作为免疫原，制备出１３株鼠－鼠杂交瘤细胞系。对其中的６株进行了检定．免疫印迹试验结果表明：单克隆抗体（ＭｃＡｂ）７Ｂ４、７Ｄ７、７Ｅ１１、８Ｅ８和８Ｄ６相对应的ＨＣＭＶ多肽分子量分别为４６、１５０、３８、５１７２和６５ｋＤ．ＨＣＭＶ感染人胚肺二倍体细胞（２ＢＳ）后不同时间制成抗原片，与ＭｃＡｂ作间接免疫荧光试验。结果表明：ＭｃＡｂ８Ｂ８相应的病毒多肽为即刻早期抗原，其它５株ＭｃＡｂ相应的病毒多肽均为晚期抗原，６株ＭｃＡｂ等量混合后，标上辣根过氧化物酶，用于ＩｇＭ抗体捕获法ＥＬＩＳＡ（ＭａｃＥＬＩＳＡ）中，并与间接ＥＬＩＳＡ（ＩＥＬＩＳＡ）同时检测ＨＣＭＶ－ＩｇＭ．在未经选择的１００份脐带血中，两法均为阳性的３份，两法均为阴性的９４份；ＭａｃＥＬＩＳＡ阳性而ＩＥＬＩＳＡ阴性的２份血清的特异性试验证明，ＨＣＭＶ－ＩｇＭ确为阳性．ＩＥＬＩＳＡ阳性而ＭａｃＥＬＩＳＡ阴性的１份血清的特异性试验证明，它是由ＲＦ引起的假阳性。     

检测肾综合征出血热病毒抗体的自身血凝试验的建立

目的 建立一种快速检测肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）虱血液中病毒抗体的自身血凝试验方法。方法 采用木瓜酶消化法制备红细胞糖蛋白单克隆抗体（ｍｃＡｂ）的Ｆ（ａｂ）２片段，用硫酸鱼精蛋白提取ＨＦＲＳ病毒抗原，并用戊二醛法将两种蛋白偶联关双价试剂，以ＨＦＲＳ虱阳性血清与人“Ｏ”型血红细胞模拟全血标本。进行红细胞凝集试验。结果 抗红细胞ｍｃＡｂＦ（ａｂ）２片段与ＨＦＲＳ病毒抗原蛋白发生有效偶联，可使ＨＦＲＳ     

鼻咽癌抗独特型抗体诱导的体液和细胞免疫应答

目的 探讨抗独特抗体２Ｈ４和５Ｄ３模拟抗原诱导免疫应答的能力。方法 用Ａｂ２免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠获得抗血清,以ＥＬＩＳＡ检测其Ａｂ３,Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ分析其识别抗原的分子质量。用迟发型超敏反应（ＤＴＨ）和淋巴细胞增殖试验,检测Ａｂ２诱发细胞免疫反应的能力。结果 ２Ｈ４,５Ｄ３免疫同系动物产生的含有抗抗蚀特型抗体（Ａｂ３）的抗血清,可特异性地与靶细胞结合。ＦＣ２（Ａｂｌ）和经２Ｈ４免疫的Ａｂ     

血管内皮细胞生长因子受体KKR胞外配基结合区单？…

目的 研制能封闭血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）受体ＫＤＲ的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）?探讨其抑制ＶＥＧＦ诱导的体内外活性。方法 以原核表达的ＫＤＲⅠ￣Ⅳ区融合蛋白免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，用杂交瘤技术制备抗ＫＤＲⅠ￣Ⅳ的ＭｃＡｂ，并用免疫双扩、ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹鉴定其亚类和抗原结合特异性，用ＶＥＧＦ刺激内皮细胞增殖及鸡胚血管形成实验检测该抗 的中和活性。结果 通过筛选和鉴定获得了２株ＫＤＲⅠ     

抗病毒蛋白MxA的诱导和检测方法的实验研究

目的 研究抗病毒蛋白ＭｘＡ的表达及其活性。方法用ＩＦＮα２ｂ或３型腺病毒（Ａ＿３）分别对ＷＩ－３８细胞或人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）作用 １２或２４ ｈ，并用Ｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔ法或ＦＡＣＳ法，分别对Ｍ蛋白的表达进行定性和定量检测。采用微量细胞病变抑制法，对重组的ＭｘＡ和ＩＦＮα２ｂ进行抗病毒效应实验。结果 （１）低浓度的 ＩＦＮα２ｂ（＞ １×1０～＃ＩＵ／Ｌ）和Ａｄ＿３（＞２００ ＴＣＩＤ＿５０），均可诱导相应细胞表达 ＭｘＡ；（２）１０μｇ／Ｌ ＭｘＡ可抵抗２０个 ＴＣＩＤ＿（５０）的 ＨＳＶ－Ｉ、Ｐｏｌｉｏ． Ｖ感染 Ｖｅｒｏ细胞、Ａｄ＿３感染ＨｅＬａ细胞，抵抗２００个ＴＣＩＤ＿（５０）的ＶＳＶ感染Ｗｉｓｈ细胞。结论ＭｘＡ只能由干扰素（ＩＮＦα2ｂ）或病毒诱导产生，其具有广谱的抗病毒活性。     

HCV核心抗原C33肽单克隆抗体的研制与初步鉴定

用ＨＣＶ核心抗原（３３肽）与鼠血清白蛋白交联后免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，用杂交瘤技术获得有实用价值的２株ＭｃＡｂ。此两株ＭｃＡｂ除与免疫抗原有较强的抗原－抗体反应外，与ＨＣＶ核心抗原ＣＰ１０也有很好的反应；但与ＨＣＶＮＳ３、ＮＳ５及核心区ＣＰ９抗原无反应性。在竞争ＥＬＩＳＡ中，对抗ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性血清有较好的抑制作用。将此两株ＭｃＡｂ用于慢性丙型肝炎病人肝活检免疫组化研究，获得较为满意的结果。     

抗内毒素单链抗体基因的构建、序列分析及表达

目的：构建抗内毒素（ＬＰＳ） 单链抗体基因, 并尝试其在Ｅ．ｃｏｌｉ 中的表达。方法： 采用ｌｉｎｋｅｒ Ｐｒｉｍ ｅｒ Ｍｉｘ ,按ＶＨｌｉｎｋｅｒＶＬ 的结构将鼠抗ＬＰＳ ｍ Ａｂ Ｃ３Ａ２ 的ＶＨ ,ＶＬ 基因拼接成单链抗体（ＳｃＦｖ） 基因;用ＰＥ３７３Ａ 型全自动ＤＮＡ序列分析仪测定其核苷酸序列。ＰＣＲ 扩增抗ＬＰＳ ＳｃＦｖ 基因并更换两端接头序列后,插入谷胱甘肽巯基转移酶（ＧＳＴ）融合表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ１ ;转染Ｅ．ｃｏｌｉ ＪＭ１０９ ,以ＩＰＴＧ 诱导表达,ＳＤＳＰＡＧＥ 分析表达产物。结果：扩增出的ＳｃＦｖ基因长７３５ｂｐ , 序列分析表明,该序列完整、正确;ＳＤＳＰＡＧＥ 显示,转染入重组质粒ｐ４ＴＣ３Ａ２Ｆｖ 的ＪＭ１０９ 菌经诱导后,有相对分子质量（ Ｍｒ） 约为５２ ０００ 的外源蛋白表达。结论：成功地构建了鼠抗ＬＰＳ ＳｃＦｖ 基因,并在Ｅ．ｃｏｌｉ ＪＭ１０９中表达了ＧＳＴＳｃＦｖ 融合蛋白。     

血清和卵泡液中抗精子抗体对体外受精——胚胎移植的影响

目的 评价女性抗精子抗体对体外受精－－胚胎移植（ＩＶＦ－ＥＴ）的影响。方法 采用ＥＬＩＳＡ法测定施行ＩＶＦ－ＥＴ的妇女的血清和卵泡液中抗精子抗体（ＡｓＡｂ）。Ａ组：血清ＡｓＡｂ阳性１３例;Ｂ组：血清及卵泡液ＡｓＡｂ均阳性２９例;Ｃ组：ＡｓＡｂ阴性１５８例。分析３组受精率、卵裂率、胚胎发育情况及临床妊娠率和流产率的关系。结果：Ａ、Ｂ组受精率、卵裂率明显低于Ｃ组（Ｐ〈０．０１）。移植日,Ａ、Ｂ组Ⅰ－Ⅱ级胚胎率较Ｃ组低,Ⅳ级胚胎及２原核受精细胞增加（Ｐ〈０．０５）。各组妊娠率及流产率无显著差异（Ｐ〉０．０５）。结论 ＡｓＡｂ对ＩＶＦ和早期胚胎发育有损害,体外培养不能完全清除ＡｓＡｂ对ＩＶＦ－ＥＴ的影响。     

一株与正常人细胞成分反应的巨细胞病毒单克隆抗体的鉴定

用ＨＣＭＶ－ＡＤ１６９株抗原建立了一株分泌ＨＣＭＶＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株Ｎ４Ｅ６。经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析发现ＭｃＡｂ与ＨＣＭＶ抗原和正常人成纤维细胞（ＨＥＦ）抗原均有多条免疫沉淀带出现：与ＨＣＭＶ－ＡＤ１６９株抗原反应的沉淀带为８９Ｋ，８７Ｋ，７３Ｋ和４２Ｋ；与Ｄａｖｉｓ株抗原反应的为８９Ｋ，８７Ｋ，４４Ｋ；与８１６地方株抗原反应的为８９Ｋ，８７Ｋ，７３Ｋ，４４Ｋ；与ＨＥＦ抗原反应的为８９Ｋ，８７Ｋ，４４Ｋ。表明Ｎ４Ｅ６除能识别ＨＣＭＶ－ＡＤ１６９株和８１６地方株特异成分７３Ｋ，外，尚能识别ＨＣＭＶ和ＨＥＦ共同成分８９Ｋ，８７Ｋ和４４Ｋ。     

抗人滋养细胞单克隆抗体的制备及其免疫生物学特性鉴定

研制抗人滋养细胞单克隆抗体并分析其免疫生物学特性。方法采用滋养细胞免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠;用细胞ＥＬＩＳＡ法鉴定ｍＡｂ的特异性;用补体依赖的溶细胞作用测定ｍＡｂ的细胞毒性。结论利用细胞免疫法所获该组ｍＡｂ所针对的抗原表位,可能是诱发免疫性流产的滋养细胞膜特异性抗原。     

抗CEA单链抗体与人hTNF-α融合基因的构建、表达和纯化

采用基因重组技术将已获得的抗癌胚抗原（ＣＥＡ） 单链抗体基因（ＳｃＦｖ） 与人肿瘤坏死因子α（ｈＴＮＦ α） 基因拼接成抗ＣＥＡＳｃＦｖ ｈＴＮＦ α（免疫毒素） 融合基因, 并克隆进大肠杆菌分泌性表达载体ｐＥＴ ２２ｂ （ ＋ ） 中, 在大肠杆菌中表达了６ ×Ｈｉｓ免疫毒素融合蛋白, 其６ ×Ｈｉｓ 位于ＳｃＦｖ 的Ｎ 端, 在胞内以可溶性存在, 其表达量占菌体总蛋白的６％ , ＳＤＳ ＰＡＧＥ 和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 显示表达产物分子量为４３ｋＤ, 与其基因编码蛋白的理论推算值相符。经Ｎｉ２＋ ＩＤＡＳｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ亲和柱一步纯化的６×Ｈｉｓ 免疫毒素纯度可达９０％ 以上, 得率为０－２ｍｇ／１００ｍｌ。表达产物除了具有与ＣＥＡ 结合的活性, 也具有对Ｌ９２９细胞杀伤的功能。