苏拉明对体外培养的人视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的 观察苏拉明(suramin)对体外培养的人视网膜色素上皮细胞(retinalpigment epithelial cells)生长、增殖的影响。方法 以300mg·L~(-1)苏拉明作用于培养的视网膜色素上皮细胞,于不同的时间点行细胞计数,绘制生长曲线,台盼蓝染色判定细胞的活性;将不同浓度的苏拉明(0、100、200、300、400mg·L~(-1))加入RPE细胞培养液,72h后用四甲基唑盐(MTT)比色法测吸光值A,并计算不同浓度条件下的细胞增殖抑制率;流式细胞技术检测细胞周期变化。结果 苏拉明在所设浓度内均抑制RPE细胞增殖,并存在时间-效应及剂量-效应关系,最大增殖抑制率约78％,72h时IC_(50)为272mg·L~(-1)。FCM示suramin使G_2/M期细胞增加了14.2％。结论 苏拉明能抑制体外培养的人视网膜色素上皮细胞增殖,可作为防治增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的候选药物作进一步研究。     

人玻璃体液对培养的人视网膜色素上皮细胞和血管内皮细胞增生的影响

目的 探讨人玻璃体液对培养的人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium, RPE）细胞和血管内皮细胞增生的影响。 方法 将人RPE细胞和血管内皮细胞株（vascular endothelial cell lines 304, VEC304）分别培养在1∶8、1∶ 4、1∶2（玻璃体液在总培养液中的体积比）的人玻璃体条件培养液（vitreous-conditioned medium, VCM）中，其中VCM分为有无血清2组，在不同作用时间（2～6 d），采用四唑盐(tetrazolium, MTT)比色法检测VCM对人RPE细胞和VEC304增生的影响。 结果 在有血清时，1∶4、1∶2的VCM在培养的各时间段对RPE细胞的促增生作用与对照组比较，差异有非常显著性意义（P＜0.01），对VEC304的抑增生作用与对照组比较，差异有显著性意义（P＜0.05）；在无血清时，1∶2的VCM在培养2 d时对RPE细胞的促增生作用与对照组比较，差异有显著性意义（P＜0.05），在培养4、6 d时的差异有非常显著性意义(P＜0.01）。 结论 一定体积分数的人VCM促进人RPE细胞的增生，抑制VEC304的增生，提示玻璃体液在增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy, PVR) 和眼内血管增生性疾病中可能发挥不同的调控作用。 (中华眼底病杂志, 2002, 18: 140-142)     

金丝桃素对体外培养的人视网膜色素上皮细胞蛋白激酶C活性的影响

目的 研究金丝桃素(hypericin)对体外培养的人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium，RPE）细胞的蛋白激酶C（protein kinase C, PKC）活性的影响。 方法 用含0.5～5.0 μmol/L金丝桃素的10％血清培养液培养人RPE细胞,在有或没有PKC激活剂佛波醇-12-豆蔻酰-13乙酸 （phorbol 12-myristate 13-acetate，PM A）预处理RPE细胞的情况下，用PKC检测试剂盒测定金丝桃素对细胞液PKC（cytosolic PKC，c-PKC）和细胞膜PKC（membranous PKC，m-PKC）活性变化的影响。 结果 未经PMA处理的人RPE细胞的c-PKC和m-PKC的原始活性分别为(35.34±4.1) pmol·min^-1·mg^-1和(62.52±8.8) pmol·min^-1 ·mg^-1。PMA处理细胞后，c-PKC在5 min内就迅速下降，20 min后下降缓慢，60 min降至处理前的18％，以后一直处于很低的水平。m-PKC在5 min后逐渐升高，至40 min达到高峰以后下降，60 min后恢复至对照水平，10 h后降至对照组的30％以下。用PMA处理RPE细胞48 h后，c-PKC和m-PKC都降低至不能测出。但若将金丝桃素与PMA同时加入后，能抵消大部分PMA对PKC的下降调节。 结论 金丝桃素能阻止RPE细胞的PKC转位，使PKC的活性发生变化，有可能促进RPE细胞的凋亡，防止增生性玻璃体视网膜病变的发生。 （中华眼底病杂志，2003，19：55-58）     

凝血酶对体外培养的视网膜色素上皮细胞生长的影响

目的 探讨凝血酶对视网膜色素上皮细胞的影响。方法 利用体外培养的视网膜色素上皮细胞，观察不同浓度的凝血酶对视网膜色素上皮细胞的影响。结果 各浓度的凝血酶对体外培养的视网膜色素上皮细胞具有促进增殖的作用。且40U/ml尤为明显。结论 凝血酶对体外培养的视网膜色素上皮细胞具有促进增殖的作用。这为探讨增生性玻璃体视网膜病变的提供了实验依据。     

金丝桃素抑制兔外伤性增生性玻璃体视网膜病变

目的:研究蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)特异性抑制剂—金丝桃素对外伤性增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的防治作用机制。方法:用自体富含血小板血浆玻璃体内注射制备免外伤性PVR模型,并同时将生理盐水、1μM、10μM和100μM金丝桃素0.1ml注入兔眼玻璃体内,在不同时间点观察金丝桃素对PVR形成的防治作用。结果:在对照组第10d就出现视网膜脱离,PVR随着时间延长发展至更严重等级。在金丝桃素组,PVR也发生,但其严重程度在每个时间点均低于对照组。在10μM和100μM金丝桃素组给药5d后,PVR的临床分级显著低于对照组(P<0.05)。组织学检查金丝桃素组未发现明显视网膜形态改变,视网膜电图检查也未观察到显著功能变化。结论:金丝桃素玻璃体腔内注射是安全的,并能有效抑制兔外伤性PVR的发生发展,为将来临床应用提供可靠的理论依据。眼科学报 2002;18:240-246.     

西洋参茎叶总皂甙对培养人胚视网膜色素上皮细胞增生的影响

目的 研究西洋参茎叶总皂甙(PQS)对人视网膜色素上皮细胞(RPE)增生的抑制作用。方法 通过活细胞计数法与MTT比色法分别检测不同质量浓度(10μg／ml～500μg／ml)PQS和PQS(200μg／ml)在不同作用时间(6～120h)对RPE增生及代谢的影响。结果 PQS组细胞增殖受抑制，细胞生存率下降，400μg／ml抑制作用最强；其抑制效应在6h出现，72h达高峰。结论 PQS可能通过阻滞钙通道、干扰RPE代谢对RPE增殖具有剂量和时间依赖方式的抑制作用。     

透明质酸刺激活性物对人视网膜色素上皮细胞的抑制

目的观察透明质酸(hyaluronic acid,HA)刺激活性物(HA-stimulating activity,HASA)对培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞的作用。方法将不同质量浓度的HASA加入RPE细胞培养液, 采用活细胞计数、四甲基偶氮唑盐(tetrazolium,MTT)比色法及氚标胸腺嘧啶核苷(³ H-th ymidine,^3 H-TdR)掺入法检测细胞活力,用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)分析RPE细胞周期。结果HASA在12.5～200．0 μg/ml范围及48小时内对人RPE细胞的抑制存在剂量-效应及时间-效应关系。最大细胞抑制率约48.0%。FCM显示 HASA作用后G₁期细胞数较对照组增加7.2%,S期减少9.7%。结论HASA在一定时间和剂量范围内对人RPE细胞有抑制作用。(中华眼底病杂志,1999,15:72-74)     

曲尼司特对体外培养人视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的:观察曲尼司特对体外培养人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增殖的影响。方法:用不同浓度的曲尼司特0(对照组),12.5,25,50,100mg/L作用于体外培养的3~5代人RPE细胞(RPE-19细胞株),在倒置显微镜下、结合HE染色观察细胞形态,并采用细胞角蛋白CK18对细胞进行鉴定。分别在作用12,24,48h后采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞抑制率,蛋白质印迹法(Western-Blot)和免疫组织化学法观察不同浓度的曲尼司特作用24h后细胞表达转化生成因子-β1(TGF-β1)、血小板衍化生长因子受体A(PDGFR-A)蛋白的情况。结果:相同时间点不同浓度曲尼司特对细胞抑制率随浓度增加而增大,差异有统计学意义(P<0.05)。TGF-β1蛋白表达定位于细胞浆,PDGFR-A蛋白定位于胞膜和胞浆,它们的表达量都随曲尼司特浓度的增加而下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:曲尼司特可以抑制人RPE细胞的增殖,并有剂量依赖性,其机制可能与下调TGF-β1和PDGFR-A蛋白表达有关。     

舒拉明对碱性成纤维细胞生长因子促进人视网膜色素上皮细胞增殖作用拮抗效应的研究

目的探讨舒拉明抗增生性玻璃体视网膜病变(PVR)的作用及机制。方法采用体外培养的人眼视网膜色素上皮(RPE)细胞,总共10组。其中5个对照组的培养基中分别加入终浓度为1、10、100、500ng/ml的bFGF和3125μg/ml的舒拉明。实验组4组,培养基中除加入3125μg/ml的舒拉明外,还分别加入终浓度为1、10、100和500ng/ml的bFGF。另设1组空白组。培养48h后,采用MTT法,酶联免疫检测仪测定各孔吸光度(A)值,计算细胞的增殖率。采用析因分析比较bFGF和舒拉明的交互效应和单独效应。结果各组细胞生长无明显的形态学差异。舒拉明与bFGF存在拮抗性交互效应(F=673,P<001)。对照组比较空白组,全部bFGF组A值都增加,最大A值为bFGF的10ng/ml浓度组;舒拉明组则降低;实验组中,各组A值较bFGF对照组都下降,最大A值左移对应bFGF的100ng/ml浓度组。结论舒拉明能够拮抗bFGF促RPE细胞增殖的作用,其抑制RPE细胞增殖并进一步防治PVR的机制至少包括拮抗了生长因子的生物学效应。     

金雀异黄素对培养人视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用

目的观察金雀异黄素对培养人视网膜色素上皮(hRPE)细胞增生的影响.方法通过MTT比色法和核仁嗜银蛋白染色分析,观察金雀异黄素对hRPE增生的影响.结果不同浓度的金雀异黄素可以抑制hRPE增生,在25～100mg·L-1的范围内呈剂量效应关系,抑制率为12.0%～64.6%(P＜0.05);并随时间的延长,抑制效应增强.嗜银蛋白染色结果50mg·L-1金雀异黄素作用12h即有胞核内AgNORs的减少,平均数为2.7(P=0.034),25mg·L-1金雀异黄素作用24h后,其胞核内AgNORs的数量平均为3.9(P=0.023).并随剂量的增加和时间的延长,胞核内AgNORs的数量减少.结论不同浓度的金雀异黄素作用于培养hRPE细胞,抑制hRPE细胞的增生,有剂量和时间效应关系,随剂量增加和时间延长,抑制作用越明显.提示金雀异黄素可以为增生性玻璃体视网膜病变的机理和防治研究提供新的思路.     

视网膜下液对培养的人眼视网膜色素上皮细胞和成纤维细胞增殖作用的影响

目的：了解不同程度增生性玻璃体视网膜病变（PVR）的视网膜下液（SRF）对视网膜色素上皮细胞（RPE）、成纤维细胞（FB）增殖的影响。方法：用溴标法和MTT法测定不同程度PVR的SRF对RPE和FB增殖的促进作用。结果：几乎所有的SRF都具有促进细胞增殖的作用,用1：10比例稀释,PVR程度为PVR＜C1,PVRC1,PVR＞C13组。SRF作用24h后RPE的增殖率分别为对照组的128.5％,139.8％,156.8％,FB的增殖率分别为对照组的126.3％,143.1％及172.3％。结论：SRF液促进细胞增殖的作用随着PVR程度的加重而增强。     

视网膜色素上皮细胞在增生性玻璃体视网膜病变中的作用

增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)是在炎症和免疫功能细胞及多种活化因子对眼内细胞修复反应的调控过程中,由于过度促进细胞增殖、移行以及由细胞介导的胶原收缩而形成的。参与PVR的细胞目前已知的有5种,其中视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞是最主要的,本文将影响RPE细胞功能的各种影响因素及PVR的治疗进展作一综述。     

表皮生长因子对人视网膜色素上皮细胞增生及移行的影响

目的　观察表皮生长因子 (epidermalgrowthfactor,EGF)及血清对体外培养的人视网膜色素上皮 (retinalpigmentepithelium ,RPE)细胞增生及移行的影响。 方法　对培养的人 3～ 6代RPE细胞采用MTT比色法观察不同浓度的EGF(0 .1、1、10、5 0、10 0 μg·L-1)及血清对人RPE细胞增生的影响 ;应用RPE细胞损伤模型 ,计数进入缺损区的细胞 ,定量观察EGF及血清对RPE细胞移行的影响。结果　在细胞增生的实验中 :无血清组 ,10～ 10 0 μg·L-1EGF达到最佳刺激浓度 ,其增生率为 81.8% ;5 0mL·L-1血清组 ,1～10 μg·L-1EGF的刺激作用最强达到 12 2 .7% ;无血清组与 5 0mL·L-1血清组间有显著性差异 (P <0 .0 0 1) ,且 5 0mL·L-1血清可明显促进人RPE细胞的增生 (P <0 .0 0 1)。在细胞的移行实验中 :无血清组 ,1～ 10 0 μg·L-1EGF可促进RPE细胞移行 ,但作用较弱 ;10 0mL·L-1血清组中 1～ 10 μg·L-1EGF促移行作用最强达 4 38.9% ;1～ 10 0 μg·L-1EGF的促进基础RPE细胞移行能力 (最强为 36 % )低于 10 0mL·L-1血清诱导的RPE细胞的移行能力 (强度为 14 7% ) ;无血清组与 10 0mL·L-1血清组间有显著性差异 (P <0 .0 0 1)。结论　EGF对体外培养的人RPE细胞具有浓度依赖性促增生和移行的作用 ;血清自身也具有此作用     

褪黑素对体外培养的人视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的观察褪黑素对体外培养的人视网膜色素上皮细胞生长、增殖的影响,寻找药物以防治增殖性玻璃体视网膜病变。方法分别将不同浓度的褪黑素(0,125ng·L-1,250ng·L-1,500ng·L-1)加入体外培养的视网膜色素上皮细胞培养液,72h后用四甲基唑盐(MTT)比色法在自动酶标测定仪测540nm处的吸光值A,并计算出不同浓度条件下的细胞增殖抑制率。结果褪黑素在不同浓度下抑制视网膜色素上皮细胞增殖,并存在剂量-效应关系,实验组125ng·L-1和500ng·L-1组与对照组比较有显著性差异(P<0.001),但实验组250ng·L-1组与对照组之间的差异无显著性。结论褪黑素能抑制体外培养的人视网膜色素上皮细胞增殖,可作为防治增生性玻璃体视网膜疾病的侯选药物作进一步研究。     

二甲基亚砜对培养人视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的　探讨细胞分化诱导剂及端粒酶抑制剂二甲基亚砜 (dimethylsulfoxide ,DMSO)对人视网膜色素上皮细胞增殖的抑制作用。方法　本研究分实验组和对照组 ,对照组弃原培养液 ,加无血清培养液继续培养 ,实验组用不同浓度的DMSO 5、10、2 0、4 0mL·L-1分别作用于人RPE细胞 2 4、4 8、72、96h ,用MTT法检测DMSO对hRPE细胞生长的影响 ,流式细胞仪检测DMSO对hRPE细胞周期的影响。结果　 10mL·L-1DMSO处理的hRPE细胞从作用 4 8h开始 ,OD值 ( 0 .5 37± 0 .0 10 )小于对照组 ( 0 .6 4 7± 0 .0 2 2 ) ,有显著性差异 (P <0 .0 0 1) ,细胞生长受到抑制 ,且随浓度增加及作用时间延长 ,抑制越显著。流式细胞仪检测 2 0mL·L-1DMSO作用 72h细胞周期发生明显变化 ,G1期细胞由4 1 31%增加至 5 9.6 5 % ,S期由 32 .0 9%减至 2 1.2 1% ,G2 期由 2 6 .6 5 %减至 19 14 % ,细胞生长被阻滞在G1期 ,生长受到抑制。结论　DMSO能阻滞hRPE细胞于G1期 ,抑制hRPE细胞增殖且呈剂量依赖性。     

电场对人视网膜色素上皮细胞增生的影响

目的观察一定条件下电场对人视网膜色素上皮(human retinal pigment epitheli-um,hRPE)细胞增生的影响及相关机制。方法hRPE细胞置于电场强度为6V.cm-1的电场中连续作用12h。观察未受电场作用的正常对照组及电场作用12h的实验组细胞,显微摄像系统记录不同时间点细胞图像并计数细胞数,检测细胞密度和细胞的生长速度,观测指标包括:细胞密度,以每平方厘米细胞数表示;细胞生长速度,计算公式为:(Ni-N0)/N0×100%(Ni为12h细胞数;N0为0h细胞数);采用流式细胞仪测定细胞周期,计算细胞增生指数:(NS+NG2/M)/N(NS为S期细胞数;NG2/M为G2/M期细胞数;N为细胞总数);Western blotting检测细胞cyclinE蛋白的表达。结果对照组hRPE细胞在12h的观察期间内细胞密度缓慢上升,到12h时细胞密度由95×103cm-2增至130×103cm-2;而实验组在6V.cm-1电场作用下hRPE细胞数量逐渐上升,12h后细胞密度上升至150×103cm-2。实验组hRPE细胞生长速度为50.02%,较对照组(36.84%)明显升高(P<0.05);...     

结缔组织生长因子在人视网膜色素上皮细胞的增生、迁移和上皮细胞-间充质细胞转变中的作用

目的　研究结缔组织生长因子（ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅｔｉｓｓｕｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＣＴＧＦ）在人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ,ＲＰＥ）细胞的增生、迁移和上皮细胞-间充质细胞转变（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ,ＥＭＴ）中的作用。方法　采用ＣＣＫ-８细胞计数试剂盒测定４００ｎｇ?ｍＬ－１ＣＴＧＦ处理后的ＡＲＰＥ-１９细胞以及稳定表达ＣＴＧＦｓｉＲＮＡ或对照ｓｉＲＮＡ的ＡＲＰＥ-１９细胞的增生情况。采用细胞划痕实验评估ＣＴＧＦＲＮＡｉ对ＡＲＰＥ-１９细胞迁移的影响,同时测定稳定表达ＣＴＧＦｓｉＲＮＡ或对照ｓｉＲＮＡ的ＡＲＰＥ-１９细胞中ＣＴＧＦ、ＦＮ、ＭＭＰ-２和α-ＳＭＡ的表达水平以评估ＣＴＧＦ对于ＴＧＦβ１诱导的ＥＭＴ作用。结果　４００ｎｇ?ｍＬ－１ＣＴＧＦ处理组ＡＰＲＥ-１９细胞与未接受ＣＴＧＦ处理组细胞之间以及ＣＴＧＦｓｉＲＮＡ处理组与阴性对照ｓｉＲＮＡ组之间的细胞倍增时间均存在显著差异（均为Ｐ＜０．０５）。正常培养ＡＲＰＥ-１９细胞组修复划痕的时间（≤４８ｈ）显著少于ＣＴＧＦＲＮＡｉ靶向干扰处理组（≥７２ｈ）。以ＴＧＦ-β１诱导ＥＭＴ,ＣＴＧＦｓｉＲＮＡ处理组与阴性对照组比较,ＣＴＧＦ、α-ＳＭＡ、ＦＮ和ＭＭＰ-２表达均显著下调。此外,外源性ＣＴＧＦ可单独诱导ＡＲＰＥ-１９细胞α-ＳＭＡ表达增加。结论　ＣＴＧＦ能够促进ＡＲＰＥ-１９细胞增生,而ＣＴＧＦＲＮＡｉ不但能够显著抑制其增生还可显著抑制由划痕实验引发的ＡＲＰＥ-１９细胞的迁移。此外,ＣＴＧＦ可通过上调α-ＳＭＡ表达水平而增强ＡＲＰＥ-１９细胞对于ＴＧＦ-β１的反应,ＣＴＧＦＲＮＡｉ可使ＴＧＦ-β１诱导的ＥＭＴ减弱。