N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V在恶性肿瘤中的作用

细胞膜表面的糖链在细胞识别中具有介导作用,糖链参与了细胞间相互识别、粘着、信息交换的过程。细胞的恶性转化常伴有细胞膜N-糖链的改变,其中主要包括唾液酸和B1,6分支结构含量的增多,众多研究已经证实N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V（N—acetylglucosaminyltransferase V,GnT—V）活性增加引起β1,6分支结构增多与肿瘤细胞发生发展有密切关系。     

糖链加工酶抑制剂地衣霉素和Swainsonine对运铁蛋白受体再循环的影响

作者应用两种糖链加工酶抑制剂,即抑制糖蛋白N-糖链合成的地衣霉素及使糖蛋白N-糖链变为高甘露糖型和杂合型的Swainsonine,来研究SMMC-7721人肝癌细胞表面运铁蛋白受体(TR)N-糖链结构的改变对受体再循环过程的影响。实验结果表明,1μg/ml的地衣霉素处理细胞后,细胞生长、蛋白质合成、DNA合成及细胞膜糖蛋白N-糖链的合成均受到不同程度的抑制,但对TR的再循环并无明显影响。2μg/ml的Swainsonine处理细胞后,对细胞生长、蛋白质合成、DNA合成均无明显影响,它使细胞膜糖蛋白N-糖链中甘露糖的掺入增加,并可加快TR再循环过程。     

细胞膜表面糖识别芯片的制备及其初步应用

目的制备可以对细胞膜表面糖链进行识别的凝集素芯片并进行初步应用。方法在芯片上制备 22 种凝集素点阵,提取组织和体液细胞进行荧光标记,利用凝集素与细胞膜表面糖链特异亲和性对细胞进行自动捕获,激光扫描仪和光镜检测。结果根据芯片上各个凝集素位点捕获细胞情况和该点凝集素的特异性获得细胞膜表面糖谱,并在光镜下对细胞数量形态进行观察。芯片的重复性和稳定性较好。结论该凝集素芯片可以对细胞进行自动捕获,对细胞膜表面糖链进行总体、即时的观察,对细胞膜糖链特征有一个总体的认识,建立各种细胞膜表面糖谱,为细胞膜表面糖链特征检测提供一个新的分析方法。     

应用凝集素芯片检测兔组织细胞膜表面糖谱

目的 应用凝集素芯片检测兔不同组织细胞膜表面糖链类型.方法 分别用不同胶原酶消化兔的脾、肾和肝组织,对消化后得到的细胞进行荧光标记,利用凝集素对糖链的特异亲和性捕获细胞,激光扫描仪检测细胞膜表面糖谱.结果 兔不同组织细胞表面糖链类型不同:肝细胞特异亲和的凝集素为LTL,脾细胞为SNA和WGA,3种组织细胞共有DSL、MAL、AAL、STL.结论 肝细胞膜表面特有糖链为L-岩藻糖,脾细胞特有糖链为唾液酸,使用凝集素芯片检测细胞膜表面的糖链特异性为建立各种细胞膜表面糖谱提供依据.     

6A8α-甘露糖苷酶的基因克隆、表达与功能研究

糖蛋白中的糖链在细胞-细胞、细胞-基质及细胞-分子间信息交通起重要作用.糖链可以N-连接方式(连接于蛋白质中由天冬酰氨酸、除脯氨酸外的任意氨基酸、丝氨酸/苏氨酸组成的序列子中的天冬酰胺)或O-连接方式(连接于蛋白质中的丝氨酸或苏氨酸)与蛋白质相连.N-连接与O-连接均需要一系列酶的催化.这些酶的识别与特性研究有助于对蛋白质糖基化机制与糖链功能的了解.     

应用凝集素芯片检测非小细胞肺癌细胞膜表面糖链表达

目的 应用凝集素芯片检测非小细胞肺癌细胞系A549和H460细胞膜表面糖链表达类型.方法 用胶原酶Ⅱ消化非小细胞肺癌细胞系,对提取的细胞进行荧光标记,利用凝集素对糖链的特异亲和性捕获细胞,激光扫描仪检测细胞膜表面糖链表达.结果 腺癌A549和大细胞肺癌H460除LTL和DBA这两个凝集素位点没有捕获到细胞外,其余各点均捕获到细胞.结论 根据凝集素的亲和特异性表明,非小细胞肺癌细胞膜表面糖链类型主要有:唾液酸、乙酰葡萄糖、乙酰半乳糖、甘露糖和半乳糖糖链,为建立癌症细胞膜表面糖链表达谱和寻找肺癌分子靶向治疗的药物作用位点提供理论依据.     

肝癌细胞ConA相关糖蛋白质对NK和LAK细胞的影响

肝癌细胞ＣｏｎＡ相关糖蛋白质对ＮＫ和ＬＡＫ细胞的影响目前认为细胞间的识别，信息的传递及细胞恶变等都与细胞膜表面的糖蛋白质有关。近来的实验表明，细胞膜糖蛋白质在细胞恶变过程中普遍呈糖基化改变，其变化与肿瘤基因的活化相关，与肿瘤的转移和侵袭有关。糖链的改...     

6A8α-甘露糖甘酶的基因克隆、表达与功能研究

糖蛋白中的糖链在细胞-细胞、细胞-基质及细胞-分子间信息交通起重要作用。糖链可以N-连接方式(连接于蛋白质中由天冬酰氨酸、除脯氨酸外的任意氨基酸、丝氨酸/苏氨酸组成的序列子中的天冬酰胺)或O-连接方式(连接于蛋白质中的丝氨酸或苏氨酸)与蛋白质相连。N-连接与O-连接均需要一系列酶的催化。这些酶的识别与特性研究有助     

肝细胞生长因子(HGF)诱导肝癌Huh7细胞发生上皮间质转化(EMT)后细胞膜表面糖蛋白糖谱的变化

 目的  应用凝集素芯片技术寻找肝癌细胞表面转移相关的特征性糖谱。方法  应用肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)诱导建立肝癌上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)细胞模型。通过凝集素芯片比较诱导前后细胞膜的糖谱改变,采用凝集素印迹和荧光细胞凝集素免疫组化方法验证芯片结果。结果  诱导后细胞对凝集素ACL、BPL、JAC、MPL、PHA E、SBA和SNA的亲和作用减弱,而对凝集素AAL、ConA、DBA、GSL Ⅱ、ECL、HAL、LCA、LTL、NML、NPL、PHA L、PTL Ⅱ和WFL的亲和作用增强。提示诱导后肝癌细胞表面出现了黏蛋白T/Tn抗原、平分型N-乙酰葡萄糖胺、α 2,6唾液酸和末端α或β连接的N-乙酰半乳糖胺结构减少;而末端和核心岩藻糖、高甘露糖、N-乙酰葡萄糖胺β 1,6分支和复杂型寡糖分支结构增多。结论  肝癌细胞发生EMT过程中细胞膜表面糖链结构改变,提示糖链结构与肝癌的转移密切相关,为有效控制肝癌转移、改善预后提供了新思路。     

小鼠肝腹水细胞膜表面糖表达谱

目的 探讨肝癌腹水细胞膜表面糖链表达谱.方法 用H22细胞制备肝腹水模型鼠,36只小鼠随机分为正常组(6只)和肝腹水组(20只),注射10 d后抽取腹水提取癌细胞用吖啶橙荧光标记,应用凝集素芯片检测细胞膜表面糖表达谱.结果 肝癌腹水细胞膜表面有大量唾液酸、乙酰葡萄糖、乙酰半乳糖、甘露糖和半乳糖糖链表达,正常小鼠肝组织中只有多聚乳糖胺类型糖链表达.结论 肝癌发生过程中伴随着细胞膜糖链类型和数量增加,唾液酸、乙酰葡萄糖、乙酰半乳糖、甘露糖和半乳糖糖链表达增加与肝癌变发生发展紧密相关.     

衣霉素逆转CD147介导的结肠癌细胞株SW620/5-FU耐药性的实验研究

目的:探讨衣霉素对结肠癌5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药细胞株(SW620/5-FU)耐药性的逆转作用及机制。方法:采用药物浓度梯度递增法诱导建立结肠癌耐药细胞株SW620/5-FU;MTT法检测细胞药物敏感性变化;流式细胞术和Lection blot检测N-糖链结构差异;Western blot检测糖蛋白CD147 N-糖基化水平。进一步采用衣霉素作用于SW620/5-FU,观察细胞耐药性状的改变。结果:成功建立结肠癌耐药细胞株SW620/5-FU,其细胞表面N-糖链合成增加,高糖基化CD147表达上升;衣霉素可阻断SW620/5-FU细胞中CD147 N-糖链合成,实现其5-FU耐药性的逆转。结论:衣霉素通过抑制N-糖链合成从而逆转CD147介导的结肠癌细胞株SW620/5-FU的耐药性。     

肿瘤标志的基础与临床应用(六)

6.2糖链抗原在肿瘤诊断,治疗中的应用:目前由单抗所识别,并应用于临床的糖链抗原除CEA和AFP外,还有CA(Cancer Antigen)类抗原CA19-9、CA153、CA27-29、CA125、CA72-4、CA195、CA50、CA549、CA242、Spn-1以及DU-PAN-2等十多种抗原可用于肿瘤的诊断和治疗。 (1)肿瘤诊断:在肿瘤细胞癌变时,由于细胞膜上的蛋白酶和唾液酸酶活性增高,细胞骨架破坏,导致细胞表面糖链抗原凋落。这     

应用凝集素芯片检测胃正常黏膜上皮细胞与胃癌细胞膜表面糖链表达

目的 应用凝集素芯片检测胃正常黏膜上皮细胞系GES-1和胃癌细胞系SGC7901、MKN45细胞膜表面糖链表达,并对芯片上捕获的细胞进行初步的免疫荧光研究.方法 用胶原酶Ⅱ消化细胞系,利用芯片上的凝集素位点对糖链的亲和特异性捕获荧光标记的细胞,激光共聚焦扫描仪扫描检测细胞膜表面糖链表达.结果 在大多数凝集素位点上,这几种细胞均显示出荧光信号;在凝集素位点WBA、EEL、MAH-Ⅱ上均未显示荧光信号;其中,与GES-1相比,胃癌细胞系SGC7901和MKN45在LTL、HHL位点上基本没有荧光信号.结论 根据凝集素的亲和特异性说明,这几种细胞系膜表面共同表达的糖链包括:唾液酸、乙酰葡萄糖/葡萄糖、乙酰半乳糖/半乳糖、甘露糖等糖链.其中,胃癌细胞系SGC7901和MKN45可能较少表达岩藻糖.     

应用凝集素芯片检测胃癌细胞膜表面糖链表达

目的:应用凝集素芯片检测胃癌细胞株AGS和SGC-7901细胞膜表面糖链表达,并分析差异糖链与胃癌侵袭转移的相关性。方法:用胰酶消化收集细胞,加入荧光标记试剂对细胞进行荧光标记,利用凝集素芯片上的凝集素位点对糖链的亲和特异性捕获荧光标记的细胞,激光共聚焦扫描仪检测,凝集素流式细胞术验证,进而通过Transwell和划痕修复实验比较细胞侵袭转移能力。结果:在大多数凝集素位点上,AGS和SGC-7901这两种细胞荧光信号未出现明显差异。与SGC-7901细胞相比,AGS细胞显示出较强的LEL和MALⅡ信号。甘露糖、唾液酸、乙酰葡萄糖/葡萄糖、乙酰半乳糖/半乳糖在两种细胞中均有表达。AGS细胞含有较多的多聚乳糖胺和α2-3唾液酸,且AGS细胞侵袭转移能力要强于SGC-7901细胞。结论:高侵袭转移潜能的胃癌细胞表达特征性的多聚乳糖胺和α2-3唾液酸。基于凝集素芯片进行细胞膜糖图谱检测,将有助于筛选出肿瘤相关的糖链标志物和肿瘤诊断治疗。     

神经节苷脂GM1临床应用研究

神经节苷脂是由鞘氨醇、脂肪酸及含唾液酸的糖链三部分组成的酸性鞘糖脂,是大多数哺乳动物细胞膜双脂层的组成成分,在神经系统特别是大脑皮层中尤为丰富.神经节苷脂种类繁多,其中单唾液酸四己糖神经节苷脂GM1,是神经节苷脂类物质中最为重要的一种,对细胞-细胞的识别、跨膜信息传导和黏附有影响,而且通过调控由多肽生长因子调控增殖和促成熟过程而调节细胞生长[1].     

β-1,4-半乳糖基转移酶的研究进展

β -1,4-半乳糖基转移酶在高尔基体上通过合成 β -1,4糖苷键进行重要的蛋白质糖链修饰作用。同时 β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ在细胞膜上 ,参与多种细胞的增殖、迁移、粘附等信号识别。随着许多编码蛋白具有 β -1,4-GalT活性的新基因被克隆出来 ,有关它们的结构、底物、功能等成为研究热点     

N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V的调控研究

本项目属于糖生物学的研究范畴。糖生物学是继蛋白质和核酸研究的另一新兴领域,正是由于蛋白质和核酸化学的成熟才带动了在分子水平上研究生命现象时代的出现,糖生物学的成熟必将带动分子生物学的另一场突破。糖链作为信息分子,参与糖蛋白的分拣、投送、分子识别和细胞识别;糖复合物的糖链能控制细胞的分裂和分化,调节细胞的生长和衰老,在免疫性疾病治疗上也有极其广泛的     

N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶V表达下调可通过GLUT1的糖基化改变和活性下降引起人肝癌SMMC-7721细胞内质网应激

目的初步探讨N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶V（GnT-V）表达下调的人肝癌细胞SMMC-7721中引起内质网应激的机制。方法利用RT-PCR检测SMMC-7721（以下简称7721）细胞中葡萄糖转运蛋白（GLUT）的表达情况,利用Westernblot、免疫沉淀及凝集素印迹分析检测转染了反义GnT-V的SMMC-7721细胞（以下简称As／7721）以及转染空质粒pcDNA3的SMMC-7721细胞（以下简称Mock／7721）中GLUTl的N-糖链变化,利用葡萄糖摄取率分析来检测以上3种细胞中GLUT1葡萄糖转运活性的变化。结果在As／7721细胞中GLUTl的N-糖链糖基化水平较Mock／7721明显下降,而且其GLUT1的葡萄糖转运活性也较Mock／7721细胞明显下降。结论葡萄糖转运蛋白GLUT1N-糖基化的改变和转运活性的下降可能是GnT-V表达下调的SMMC-7721细胞中引起内质网应激的机制之一。     

唾液酸与癌症

唾液酸是指当神经氨酸的氨基被乙醛基或羟乙酰基取代后所产生的衍生物。唾液酸位于糖蛋白或糖脂的末端,本身带负电荷,它对细胞的转运功能、细胞间的排斥反应和细胞膜上糖蛋白的合成有一定作用。在肿瘤细胞的细胞膜上其糖链唾液酸化增强,使肿瘤细胞的细胞膜上糖链混乱,并促进肿瘤细胞的转移、浸润,降低宿主对肿瘤细胞的免疫杀伤作用。唾液酸作为一种高灵敏的肿瘤标志物有大量文献报道,尽管它的特异性不高(如在炎症中其水平也增高),但唾液酸对于癌症的诊断、鉴别诊断、病情监测仍有较大临床应用价值、在血清或血浆中,有多种方法可有效测量唾液酸含量。     

胃癌组织N-糖苷键型糖蛋白的纯化及其在血清诊断中的意义

N-糖苷键连接的糖链是通过GlcNACβ_1-4GlcNAC和肽链上大冬酰胺残基的酰胺氮连接成糖苷链。在人体内很多属于糖蛋白的激素、酶和肿瘤标志物属这类N-糖苷型糖蛋白。近年来发现许多肿瘤的异常改变与其糖蛋白糖链的变异有关,肿瘤组织中糖链的检测可用于临床诊断,因而肿瘤细胞糖蛋白的研究已引起人们的重视。作者应用可