B细胞淋巴瘤IgH基因重排的检测及临床应用

目的建立克隆性免疫球蛋白重链(IgH)基因重排检测技术,探讨B淋巴细胞IgH基因重排在恶性淋巴瘤诊断的临床价值。方法选取62例B细胞性非霍奇金淋巴瘤(B-NHL),其中,弥漫大B淋巴瘤(DL-BCL)42例、滤泡性B细胞淋巴瘤(FL)15例、套细胞淋巴瘤(MCL)5例;15例未定性的淋巴组织增生性病变;20例良性淋巴组织反应性增生病例。从组织蜡块切片提取基因组DNA,经PCR扩增,聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染显示基因重排结果。结果62例B-NHL中53例IgH基因重排(85.5%),其中DLBCL37例、FL13例、MC14例,阳性率分别为88.1%、86.7%、80.0%,各组间阳性率差异无统计学意义(P>0.05);15例未确诊的疑难病例中10例IgH基因重排,其中7例经随访或会诊确认为B-NHL;20例良性淋巴组织反应性增生病例IgH基因重排均为阴性,IgH基因重排检出率在淋巴瘤组与良性组之间差异有统计学意义(P<0.001)。结论PCR法检测B淋巴细胞IgH基因重排可作为淋巴细胞来源的良、恶性病变的一种辅助诊断手段,适用于石蜡标本,进行回顾性研究。     

恶性淋巴瘤诊断中荧光原位杂交分析基因状态的研究

目的 探讨恶性淋巴瘤中基因重排的特点.方法 回顾性分析87例恶性淋巴瘤组织样本,利用荧光原位杂交技术,分别检测弥漫大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、黏膜相关淋巴组织淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、Burkitt淋巴瘤和间变性大细胞淋巴瘤中BCL-6、BCL-2、MALT1、CCND1、C-MYC和ALK基因重排.结果 弥漫大B细胞性淋巴瘤中BCL-6基因重排的阳性率为29.03％(9/31),滤泡性淋巴瘤中BCL-2基因重排的阳性率为61.11％(11/18),黏膜相关淋巴组织淋巴瘤中MALT1基因重排的阳性率为47.37％(9/19),套细胞淋巴瘤中CCND1基因重排的阳性率为88.88％(8/9),Burkitt淋巴瘤中C-MYC基因重排的阳性率为100％(2/2)和间变性大细胞淋巴瘤中ALK基因重排的阳性率为75.00％(6/8).结论 基因重排对恶性淋巴瘤的诊断具有重要的实际价值.     

非霍奇金淋巴瘤基因重排的检测及其临床意义

目的 探讨免疫球蛋白重链（IgH）及T细胞受体γ（TCRγ）基因重排在非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin＇s lymphoma,NHL）临床诊断中的应用.方法 用聚合酶链反应（PCR）技术对58例B细胞淋巴瘤（B-NHL）、15例T细胞淋巴瘤（T-NHL）、不能确诊为NHL的标本5例及10例良性淋巴组织增生标本进行IgH及TCRγ基因重排的检测.结果 58例B细胞淋巴瘤标本中有IgH基因重排为47例,有3例TCRγ基因重排.15例T细胞淋巴瘤中TCRγ基因重排为11例,未见有IgH基因重排.5例未确诊的疑难病例均为IgH基因重排.10例良性淋巴组织反应性增生病例中,IgH及TCRγ基因重排均为阴性.IgH及TCRγ基因重排检出率在淋巴瘤组与良性组之间,差异有显著意义（P＜0.05）.结论 用PCR方法检测IgH及TCRγ基因重排对NHL及其疑难病例有重要的诊断价值.     

B细胞非霍奇金淋巴瘤患者IgH基因重排检测分析及意义

目的探讨外周血和骨髓免疫球蛋白重链(Immunoglobulin heavy chain,IgH)基因重排检测方法及其在监测B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)患者微小残留病(Minimal residual disease,MRD)中的临床意义。方法应用PCR-SSP方法对B-NHL患者进行IgH基因重排检测,回顾性分析39例B-NHL患者IgH基因重排动态检测结果来了解其与临床MRD的关系。结果 39例B-NHL初诊未经治疗患者IgH基因重排检测34例阳性,阳性率87.1%(34/39)。34例初诊阳性患者,治疗后19例达到临床完全缓解的患者中16例IgH基因重排转阴,3例持续阳性;15例临床部分缓解者,IgH基因重排持续阳性。分析发现13例患者骨髓和外周血标本IgH基因重排均呈阳性。结论 IgH基因重排检测可以作为B-NHL的辅助诊断及其微小残留病的监测。     

恶性淋巴瘤诊断中Ig/TCR基因重排的分子病理检测分析

目的 探讨B细胞性淋巴瘤中Ig基因重排和T细胞性淋巴瘤中TCR基因重排的特点.方法 回顾性分析213例恶性淋巴瘤和24例淋巴反应性增生组织样本,利用3730毛细血管电泳对提取的DNA进行PCR扩增,检测B细胞性淋巴瘤中Ig基因重排和T细胞性淋巴瘤中TCR基因重排.结果 B细胞性淋巴瘤中IgHA的总阳性率为43.21％,IgHB的总阳性率为29.63％,IgHC的总阳性率为30.25％,IgHD的总阳性率为16.67％,IgHE的总阳性率为3.09％,IgLκA的总阳性率为42.59％,IgLκB的总阳性率为23.46％,IgLλA的总阳性率为25.93％,IgH (A+ B+ C+ D+ E)+ IgLκ(A+ B)+ IgLλA的总阳性率为88.27％;T细胞性淋巴瘤中TCRB-A的总阳性率为31.37％,TCRB-B的总阳性率为58.82％,TCRB-C的总阳性率为23.53％,TCRG-A的总阳性率为60.78％,TCRG-B的总阳性率为21.57％,TCRD的总阳性率为29.41％,TCRβ+ TCRγ+ TCRδ的总阳性率为78.43％.结论 Ig基因重排和TCR基因重排分别对B细胞性和T细胞性淋巴瘤的诊断具有重要价值.     

儿童急性淋巴细胞白血病免疫球蛋白重链和T细胞受体δ基因分析

目的　研究儿童急性淋巴细胞白血病 (ALL)中免疫球蛋白重链 (IgH)基因、T细胞受体δ(TCRδ)基因重排的发生率及其临床特征。方法　 88例儿童ALL采用套式聚合酶链反应 (PCR)技术检测IgH、TCRδ 重排 ,结合流式细胞仪 (FCM )检测免疫表型和细胞形态学FAB分型。结果　IgH基因重排 2 8例 ,阳性率 31 81% ;TCRδ 基因重排 31例 ,阳性率 35 2 3%。两者均表达者 10例 ,阳性率 11 36 %。在 73例B系ALL中IgH基因重排 2 8例 ,阳性率 38 36 % ,TCRδ 表达 2 5例 ,阳性率 34 2 5 % ,两者均表达者 10例 ,阳性率 5 6 8%。在 15例T系ALL中未检出IgH基因重排 ,仅 5例为单纯表达TCRδ 基因重排 ,阳性率 33 33%。在B系ALL中IgH表达高水平与T系ALL中IgH未表达相比 ,( χ2 =13 74 ,P <0 0 0 5 ) ,有显著性差异。 88例儿童ALL中的 85例获完全缓解 (CR) ,缓解率 96 6 % ,对其中 5例患儿IgH基因重排PCR动态观察 ,结果分别在完全缓解 (CR) 15个月、18个月、2 0个月、2 4个月时转阴。结论　 ( 1)TCRδ 基因重排在儿童ALL中为高表达 ,在B系与T系ALL中表达相比 ,( χ2 =1 0 7,P >0 0 5 ) ,无显著性差异。 ( 2 )IgH、TCRδ 基因重排是儿童急性淋巴细胞白血病的特异性基因重排 ,该项检测有助于ALL克隆性诊断和基因分型。 ( 3)监     

弥漫性大B细胞淋巴瘤中bcl-2蛋白表达及其与基因异常的相关性

目的探讨弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中bcl-2蛋白表达情况及其与bcl-2基因易位和扩增的相关性。方法应用免疫组织化学SP法检测59例DLBCL中bcl-2蛋白表达情况,并应用IgH/bcl-2双色双融合探针荧光原位杂交(FISH)检测bcl-2基因的易位和扩增。结果 59例DLBCL中bcl-2蛋白的表达率为67.8%(40/59),bcl-2基因易位和扩增的发生率分别为1.7%(1/59)和22.0%(13/59),bcl-2基因异常(易位或扩增)的总检出率为23.7%(14/59),bcl-2蛋白表达与基因异常之间无相关性(P=1.000)。结论 bcl-2基因可能在DLBCL的发病机制中起重要作用,bcl-2蛋白表达的调控机制有待进一步阐明。     

基础研究弥漫性大B细胞淋巴瘤免疫球蛋白基因重排特点及规律研究

目的 探讨弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)生发中心B细胞型(GCB)及非生发中心B细胞型(non-GCB)中Ig基因重排的特点及规律.方法 采用免疫组化法检测46例DLBCL中CD10、BCL-6、MUM1表达,采用Hans免疫分型方法将DLBCL分为GCB和non-GCB;同时提取所有样本基因组DNA,利用BIOMED-2克隆分析系统进行PCR扩增Ig基因,核酸分子异源双链凝胶电泳分析基因重排情况,并以15例反应性增生病变作为阴性对照.结果 46例DLBCL样本中GCB 12例、non-GCB 34例,其中45例样本扩增出Ig基因的克隆性重排条带,检测敏感性为97.8%,15例反应性增生病变均未检测到重排条带,检测特异性为100.0%.GCB和non-GCB重链IGH重排差异无统计学意义(P>0.05),但轻链IGκ-A、IGκ-B和IGλ重排差异有统计学意义(P<0.05).结论 GCB和non-GCB的Ig基因轻链重排条带分布具有显著的特点和规律,可为病理诊断和临床应用提供更为准确的依据.     

探讨恶性淋巴瘤诊断中Ig/TCR基因重排的分子病理检测

目的总结恶性淋巴瘤诊断中Ig/TCR基因重排的分子病理特点,为该病的基因检测提供依据。方法研究时间在2016年1月至2018年6月,研究对象为180例恶性淋巴瘤患者以及30例淋巴反应性增生患者,提取不同样本的DNA,借助于PCR扩增方法分析Ig基因重排和TCR基因重排情况。结果 B细胞淋巴瘤对应的IgHA、IgHB、IgHC、IgHD、IgHE、IgLA、IgLB、IgLA、IgH(A+B+C+D+E)+IgL(A+B)+IgLA阳性率分别为47.69%、33.07%、35.38%、19.23%、6.92%、45.38%、22.30%、30.00%、96.15%。TCR基因重排中TCRB-A、TCRB-B、TCRB-C、TCRG-A、TCRG-B、TCRTCRD、TCRβ+TCR+TCRδ对应的阳性率分别为32.00%、56.00%、22.00%、60.00%、22.00%、34.00%、78.00%。结论恶性淋巴瘤诊断中Ig/TCR基因重排的分子病理特点可作为B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤诊断的重要参考。     

IgH/TCR基因重排与EB病毒原位杂交联合分析在淋巴瘤诊断中的应用

目的：探讨免疫球蛋白重链/T细胞受体（IgH/TCR）基因重排检测联合EB病毒（EBV）原位杂交在淋巴瘤诊断中的应用,分析EBV＋-B细胞淋巴瘤的细胞学及基因组学特征、鉴别诊断要点,以缩短诊断时间,减少误诊。方法采用IgH/TCR基因重排与EB原位杂交联合分析诊断EBV＋-B细胞淋巴瘤1例,分析其免疫组化特征、EBV原位杂交、基因重排结果。结果 EBV＋-B细胞淋巴瘤临床上主要表现为淋巴结增大,常伴骨髓和外周血浸润。淋巴结活检显示其结构破坏,淋巴滤泡减少,淋巴结高度增生性病变,可见轻至中度异型淋巴细胞,淋巴窦扩张,组织细胞增生。免疫组化证实EBV感染的细胞毒性B细胞构成病变主体;EBV原位杂交显示部分淋巴细胞核阳性;基因重排提示IgH、免疫球蛋白轻链（Igκ）基因发生克隆性重排,TCRγ无克隆性重排。结论 EBV＋-B细胞淋巴瘤从形态学上难以与伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病等淋巴瘤区分,早期诊断困难。联合应用IgH/TCR基因重排与EBV原位杂交技术对EBV＋-B细胞淋巴瘤的诊断有较高准确性。     

PTEN和LIVIN在弥漫大B细胞淋巴瘤组织中的表达及临床意义

目的:探讨PTEN和LIVIN蛋白在弥漫大B细胞淋巴瘤组织中的表达及其临床意义。方法:选取本院2008年7月至2011年5月初治的弥漫大B细胞淋巴瘤组织标本41例,反应性淋巴结增生21例作为对照组,采用免疫组化S-P法检测PTEN和LIVIN的表达,并探讨PTEN和LIVIN的表达与弥漫大B细胞淋巴瘤的分期及预后的关系。结果:PTEN在弥漫大B细胞淋巴瘤组织中表达率为39.00%,对照组表达率为80.95%(P<0.05);LIVIN在弥漫大B细胞淋巴瘤组织中表达率为65.90%,对照组表达率为23.81%(P<0.05)。弥漫大B细胞淋巴瘤组织切片PTEN与LIVIN表达存在显著的负相关。PTEN与患者性别、年龄、行为评分、Ann Arbor-Colswolds分期、结外受累、乳酸脱氢酶(LDH)高低、临床B组症状、IPI及病理类型无关。LIVIN表达与患者性别、年龄、Ann Arbor-Colswolds分期及是否有结外受累无关;与行为评分分组、LDH高低、临床是否伴有B组症状、IPI及病理类型有关。结论:PTEN在弥漫大B细胞淋巴瘤中低表达,与弥漫大B细胞淋巴瘤预后无相关性。LIVIN在弥漫大B细胞淋巴瘤中高表达,与患者行为评分分组、LDH高低、临床是否伴有B组症状、IPI及病理类型有关。LIVIN可作为判断弥漫大B细胞淋巴瘤预后的生物学指标。     

弥漫大B细胞淋巴瘤骨髓侵犯形态学及免疫表型特点分析

目的 探讨弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）骨髓侵犯形态学及免疫表型特点,为临床DLBCL侵犯骨髓的准确诊断提供一定的科学依据。方法 收集2014年6月—2019年6月我院收治的59例DLBCL患者的骨髓组织和外周血,分析DLBCL患者的骨髓细胞形态学、骨髓病理学、流式细胞学、荧光原位免疫杂交及其他相关检测的结果与临床特征。结果 59例发生骨髓侵犯的DLBCL患者多数表现为白细胞增高、贫血、血小板减少,有43例（72.88%）外周血中可见数量不等的瘤细胞。59例患者骨髓涂片中瘤细胞占有核细胞比例≥10％的有31例（52.54%）。瘤细胞侵犯骨髓方式以弥漫性增生为主,造血组织明显减少或缺乏。免疫组化染色及流式细胞学检查示,淋巴瘤细胞 CD20、CD19、CD79b及 cCD79a均呈阳性表达,部分患者表达 HLA-DR、CD22、sIgM、CD43、CD10、FMC7及 CD123,均不表达CD38、TdT、CD103、CD25、CD3、CD2、MPO、CD33、CD13、CD7及CD56。12例患者进行FISH检测均未见C-myc基因重排。结论 骨髓形态学、病理学并结合免疫表型检测是DLBCL患者准确诊断的重要依据。     

弥漫大B 细胞淋巴瘤研究进展

弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)是成人最常见的非霍奇金B细胞淋巴瘤,在第四版WHO造血与淋巴组织肿瘤分类中,根据形态学及临床特征,将DLBCL分为非特殊类型、特殊亚型和独立疾病。DLBCL在形态学、免疫表型、遗传学特征及临床表现上具有显著的异质性。根据基因表达谱,DLBCL可分为预后较好的生发中心B细胞型(GCB型)DLBCL和活化B细胞型(ABC型)DLBCL。根据免疫组化分型,也可将DLBCL分为GCB型和非GCB型(或ABC型)。GCB型和非GCB型(或ABC型)的预后因素通过不同的通路而发挥其生物学作用,表现在蛋白的异常表达或基因的断裂重排、扩增及易位。但这些蛋效应是否影响着应用利妥昔单抗治疗的DLBCL患者的预后,目前还不是很确定。本文通过对DLBCL的分类、免疫分型等研究进展的总结,增强对该疾病的认识。     

Ki-67在GCB及non-GCB弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及意义

目的探讨Ki-67在GCB及non-GCB型弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及意义。方法收集60例DLBCL及19例淋巴结反应性增生组织,并制作其组织芯片,采用免疫组化观测CD1O、bcl-6、MUM1蛋白的表达对DLBCL进行生发中心样B细胞（germinal center B cell-like,GCB）和非生发中心样B细胞（non-GCB）免疫表型分类,同时检测Ki-67蛋白的表达。结果 （1）60例DLBCL中CD1O、bcl-6、MUM1蛋白的阳性表达率分别为33.3%、45%、63.3%,GCB类型29例（48.3%）,non-GCB类型31例（51.7%）。（2）Ki-67蛋白在淋巴结反应性增生（不包括生发中心）阳性率明显低于DLBCL（P〈0.05）。（3）Ki-67蛋白的表达在DLBCL中GCB及non-GCB亚型中有显著性差异（P〈0.05）。结论 Ki-67的表达可能与DLBCL免疫学分型有关,在non-GCB中,Ki-67高表达。     

程序性细胞死亡受体1配体在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及临床意义

目的 检测程序性细胞死亡受体1配体(PD-L1)蛋白在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者肿瘤组织中的表达,分析其与患者临床特征和疗效的关系.方法 收集安徽医科大学第一附属医院2012年2月至2015年6月期间80例DLBCL患者的肿瘤石蜡组织及其对应的临床病例资料,免疫组织化学染色法检测组织中PD-L1表达,分析其与患者临床特征及疗效的关系.结果 PD-L1阳性表达的患者31例(39％),PD-L1的阳性表达与患者non-GCB亚型(P=0.035),低缓解率有关(P=0.001),与患者的分期,B组症状,ECOG评分等无关.logistic多因素分析提示PD-L1阳性表达是影响DCBCL患者疗效不佳的危险因素(P=0.006).结论 PD-L1在病理组织中高表达是DLBCL患者疗效不佳的危险因素,其可能为DCBCL患者提供潜在治疗方案的思路.     

Detection of TT virus in lymph node biopsies of B-cell lymphoma and Hodgkin's disease,and its association with EBV infection

Human TT virus (TTV) recently isolated from the serum of a patient with post-transfusion hepatitis does seem to have only hepatopathic effect. The virus can also infect the serum, peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and bone marrow cells (BMC ). Additional evidence has indicated that TTV is also present in the serum of people with hematopoietic malignancies. A significant increase in the incidence of lymphoma has recently been observed worldwide. We have investigated the presence of TTV DNA in lymph node biopsies of Italian patients affected with the most common lymphoma types in Western Countries: follicular lymphoma (FL), diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) and nodular sclerosis Hodgkin's disease (NS-HD). The possible role of a co-infection with Epstein-Barr virus (EBV) has also been investigated. DNA was extracted from 73 paraffin-embedded and 38 snap-frozen tissue specimens. From these, only 67 samples (29 paraffin-embedded and 38 snap-frozen tissues) from a total of 56 patients, were suitable for PCR analysis. TTV and EBV were detected by PCR using primers from two different conserved region in TTV and EBV genomes respectively. TTV DNA was detected in 30.0-50.0% of FL, 30.8% of DLBCL and 30.0-50.0% of NS-HD cases, depending on the primers used. All cases of non-specific reactive lymphoid hyperplasia (RLH), used as a putative control, were negative. The two major TTV genotypes circulating in Italy (G1 and G2) were detected in the analysed lymphoid neoplasms. EBV DNA was detected in 40.0% of FL, in 72.7%of DLBCL, in 80.0% of SN-HD and in 40.0% of RLH cases. EBV co-infection was found in 90% of TTV positive cases. The in situ hybridization assay was performed in TTV positive frozen samples. The significant prevalence of TTV DNA in lymphocytes circulating in the lymph nodes of both B-cell lymphomas and HD reported herewith suggests an implication of TTV infection in the development of these lymphoproliferative disorders.     

弥漫性大B细胞淋巴瘤中Survivin和bcl-2蛋白表达及相互关系

目的探讨Survivin和bcl-2在弥漫性大B细胞淋巴瘤（diffuse large B cell lymphoma,DLBCL）免疫类型中的表达及相互关系。方法采用免疫组化MaxVision法检测凋亡抑制基因Survivin和bcl-2在DLBCL免疫类型中和反应性增生的淋巴结中的表达。结果免疫分型60例弥漫性大B细胞淋巴痛中免疫类型GCB（germinal center-B-cell like）25例,non—GCB（non germinal center-B-cell like）35例：免疫类型GCB中survivin的阳性率为72．0％,non-GCB中survivin的阳性率为42．9％,两者之间P〈0．05;GCB中bcl-2的阳性率为76．0％,non—CCB中bcl-2的阳性率为31．4％。两者之间P〈0．01;survivin阳性弥漫性大B细胞淋巴瘤中bcl-2阳性率为69．7％．Burvivin阴性弥漫性大B细胞淋巴瘤中bcl-2阳性率为25．9％。在DLBCL中,Survivin的表达与bel-2蛋白表达密切相关。结论survivin、bcl-2的表达与弥漫性大B细胞淋巴瘤的免疫学类型相关,C-CB类型中高表达,non—GCB类型中低表达。在DLBCL中Survivin与bcl-2蛋白表达密切相关,两者协同发挥抗凋亡效应。     

石蜡切片荧光原位杂交检测弥漫性大B细胞淋巴瘤BCL6基因异常

目的 建立石蜡包埋的淋巴瘤组织切片荧光原位杂交(FISH)技术平台,探讨其在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)诊断中的价值.方法 应用家用高压锅和水浴变性法在淋巴瘤石蜡切片上行FISH分析,BCL6双色断裂点分离探针FISH检测58例石蜡包埋DLBCL病例中BCL6基因易位和扩增.结果 通过优化实验条件,成功地建立了淋...