激光共聚焦扫描显微镜动态观察体外培养大鼠皮层神经元受氯化亚铁作用时过氧化物水平及膜电位的变化

目的：建立外伤性癫痫的铁离子诱导细胞模型，观察N-乙酰半胱氨酸及德巴金预处理对受氯化亚铁作用的皮层神经元过氧化物及膜电位的影响。 方法：实验于2004-10／2005-06在南方医科大学珠江医院神经外科实验室完成。①培养的新生SD大鼠神经元细胞，随机分为5组：对照组，模型组（1mmol／L），N-乙酰半胱氨酸预处理组（终浓度0．08g／L）；丙戊酸钠（德巴金）预处理组（终浓度0．1g／L）；N-乙酰半胱氨酸＋德巴金预处理组（终浓度分别为0．08g／L及0．1g／L）。②采用荧光探剂DiBAC4（3）和乙酰乙酸盐2’，7’二氯氢化荧光素分别标记，激光共聚焦扫描显微镜（LCSM）断层光切扫描动态观察体外培养的大鼠脑皮层神经元受氯化亚铁作用时的细胞膜电位和过氧化物水平变化。③免疫组织化学检测核因子-κB的表达情况。 结果：①大鼠脑皮层神经元过氧化物水平：与对照组比较，模型组过氧化物的相对荧光强度值著性增高（3．39&;#177;1．21，18．95&;#177;16．26，P=0.038〈0．05）；N-乙酰半胱氨酸预处理组及N-乙酰半胱氨酸＋德巴金预处理组相对荧光强度变化呈负值（-19．66&;#177;10．40，-14．84&;#177;5．08），与模型组比较差异有显著性（P〈0．01）；德巴金预处理组（22．89&;#177;0．91）相对荧光强度变化与模型组比较，差异无显著性意义（P〉0．05）。②各组细胞膜电位测定结果：德巴金预处理组及N-乙酰半胱氨酸＋德巴金预处理组相对荧光强度值明显低于模型组（-11．18&;#177;3．12，4．45&;#177;1．69，25．15&;#177;8．84，P〈0．01）；而N-乙酰半胱氨酸预处理组相对荧光强度变化（23．13&;#177;18．92）与模型组差异无显著性意义（P〉0．05）。③模型组较对照组核因子KB染色强度明显增加；N-乙酰半胱氨酸预处理组与N-乙酰半胱氨酸＋德巴金预处理组较模型组染色强度明显降低。 结论：氯化亚铁对皮层神经元的作用可导致过氧化物的生成，导致膜电位的改变，N-乙酰半胱氨酸预保护可减少其过氧化物等自由基的生成，德巴金可起到稳定皮层神经元膜电位的作用，两者共同预处理可显著减轻皮层神经元受氯化亚铁作用的损伤。抗氧化剂联合抗癫痫药可能有助于防治与铁剂诱发有关的癫痫发作。     

N-乙酰半胱氨酸拮抗6-羟基多巴胺对骨髓基质细胞的毒性作用

背景：内源性6-羟基多巴胺能参与氧化应激,N-乙酰半胱氨酸能有效抗氧化和清除自由基。目的：探讨6-羟基多巴胺对骨髓基质细胞的毒性作用及N-乙酰半胱氨酸对其的拮抗作用。方法：在体外培养SD大鼠骨髓基质细胞,取第3代骨髓基质细胞分别加入终浓度为0,0.05,0.1g/L的6-羟基多巴胺和终浓度为0,0.075,0.3,1.2,4.8g/L的N-乙酰半胱氨酸。结果与结论：MTT检测发现0.05和0.1g/L6-羟基多巴胺可以明显降低骨髓基质细胞的细胞活性,而加入6-羟基多巴胺的同时加入0.3g/LN-乙酰半胱氨酸可以显著抑制6-羟基多巴胺的毒性作用。提示抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸可以影响6-羟基多巴胺的作用。     

核因子κB在局部脑缺血及再灌注中的表达和N-乙酰半胱氨酸的影响

背景:核因子κB是一种重要的转录因子,激活后能促进许多靶基因转录。目的:研究核因子κB在局部脑缺血及再灌注中的表达及N-乙酰半胱氨酸预处理的影响。设计:随机分组设计、动物实验。单位:哈尔滨医科大学第二临床学院神经内科。材料:实验于2004-01/05在哈尔滨医科大学动物实验中心及病理实验室完成。选择健康雄性Wister大鼠99只,随机分3组,假手术组11只,生理盐水对照组44只,N-乙酰半胱氨酸组44只。方法:3组大鼠采用Longa等改良线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型。将头端加热成0.26mm直径的光滑圆球的尼龙线经颈总动脉近分叉处切口插入,扎紧颈总动脉备线,打开颈内动脉上的微动脉夹,尼龙线进入颈内动脉,N-乙酰半胱氨酸组和生理盐水对照组插入长度由颈内动脉和颈外动脉分叉部计约(18.5±0.5)mm,阻断大脑中动脉血供,假手术组插入深度<15mm,大脑中动脉血供正常。N-乙酰半胱氨酸组于缺血前30min腹腔注射N-乙酰半胱氨酸(150mg/kg),生理盐水对照组于缺血前30min注射等体积生理盐水。生理盐水对照组和N-乙酰半胱氨酸组于缺血6,24h,缺血6,24h再灌注1h时间点将大鼠断颈处死,每次11只。应用免疫组织化学法观察脑组织核因子κB的表达情况,红四氯氮唑染色测定各组大鼠脑梗死体积百分比,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测脑组织细胞凋亡。主要观察指标:各组大鼠脑梗死体积百分比,核因子κBp65结合活性,凋亡细胞。结果:纳入动物99只,均进入结果分析。①缺血6h及24h再灌注1hN-乙酰半胱氨酸组梗死体积百分比分别为(8.39±2.54)%,(24.54±6.02)%,相应生理盐水对照组为(15.50±4.18)%,(32.22±3.99)%。缺血24h各组较缺血6h各组梗死灶增大,使用N-乙酰半胱氨酸组较生理盐水对照组梗死体积明显缩小(P<0.01)。②缺血及再灌注后核因子κBp65明显从胞质转移到胞核。缺血6h及24h再灌注N-乙酰半胱氨酸组p65阳性细胞率分别为(0.462±0.022)%,(0.452±0.015)%,与相应生理盐水对照组[(0.563±0.028)%,(0.554±0.013)%]比较表达减少(P<0.01)。③N-乙酰半胱氨酸预处理较生理盐水预处理凋亡细胞减少。结论:局灶脑缺血及再灌注能使核因子κBp65活化,参与脑缺血及再灌注损伤。N-乙酰半胱氨酸可抑制p65表达,减轻神经损伤,具有脑保护作用。     

探究士的宁对小鼠皮层神经元兴奋性的影响

目的 探究士的宁对小鼠皮层神经元兴奋性的影响。方法 选取2019年6—10月大连理工大学提供的小鼠皮层神经元细胞30个,采用全细胞膜片钳记录模式,研究5个浓度(0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L)的士的宁对动作电位(AP)阈值的影响,选取终浓度为1μmol/L士的宁来研究其对小鼠皮层神经元AP和电压依赖性K⁺电流的影响。结果 1μmol/L士的宁能使AP阈值由(-41.43±1.31)mV明显降到(-44.3±1.99)mV,下降支时程从(4.56±0.38)ms延长至(6.02±0.71)ms,电位峰值由(30.23±3.76)mV降为(22.12±2.13)mV,差异有统计学意义(t=2.951、4.441、4.597,P<0.05)。与对照组相比,1μmol/L士的宁能降低AP重复放电频率,差异有统计学意义(P<0.05)。膜电位≥-10 mV时,与对照组相比,1μmol/L士的宁能够抑制电压依赖性K⁺电流,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 1μmol/L士的宁对小鼠皮层神经元具有兴奋性作用,其机...     

盐酸氟桂嗪对同型半胱氨酸诱导的正常人脐静脉内皮细胞株胞内钙离子和细胞活性的影响

目的:观察盐酸氟桂嗪对同型半胱氨酸诱导的正常人脐静脉内皮细胞株(ECV-304)胞质内钙离子浓度和细胞活性的影响。方法:实验于2005-02/08在西京医院神经内科实验室完成。①分组:将ECV-304分为3组,正常对照组仅予空白RPMI-1640培养基培养;同型半胱氨酸组分别加入终浓度为100,200,500,1000μmol/L的同型半胱氨酸培养;盐酸氟桂嗪组加入终浓度为10μmol/L盐酸氟桂嗪及终浓度分别为100,200,500,1000μmol/L的同型半胱氨酸共培养。②细胞活性检测:用四唑盐法检测,各组细胞加入不同浓度药物培养24h后,测定各孔吸光度值A。③细胞质中[Ca2 ]i的测定:各组细胞加入不同浓度药物培养20min后,利用Ca2 指示剂Flu-3AM作为细胞内钙离子的荧光探针负载培养的细胞,共聚焦技术检测细胞内荧光强度的变化。结果:①同型半胱氨酸浓度为200,500,1000μmol/L时各组的反映细胞活性A值低于对照组(0.156±0.009,0.148±0.010,0.134±0.007,0.177±0.011,P<0.01),也低于含同浓度同型半胱氨酸的盐酸氟桂嗪组(0.168±0.011,0.160±0.009,0.148±0.007,P<0.05,0.01)。且随着同型半胱氨酸浓度的增加,A值逐渐降低。②在同型半胱氨酸组中,随同型半胱氨酸浓度增加反映细胞质中[Ca2 ]I的平均荧光强度也逐渐增强。同型半胱氨酸各浓度组平均荧光强度均高于对照组(P<0.01);也高于含相同浓度同型半胱氨酸的盐酸氟桂嗪组(P<0.01)。结论:①同型半胱氨酸对血管内皮细胞有损伤作用,其作用与胞内钙离子浓度升高密切相关。②盐酸氟桂嗪能减轻同型半胱氨酸所诱导的细胞损伤,可能与其直接抑制由同型半胱氨酸所诱导的Ca2 的内流,减轻细胞质钙超载有关。     

N-乙酰半胱氨酸预防兔实验性动脉粥样硬化的作用途径

目的：探讨N-乙酰半胱氨酸对兔实验性动脉粥样硬化预防作用的途径。 方法：实验于2004-08／12在锦州医学院科学实验中心实验室完成。选择健康日本大耳白兔24只，给予普通颗粒饲料喂养1周后，随机分为4组，正常对照组、模型组、N-乙酰半胱氨酸50mg／(kg·d)，150mg／(kg·d) 组各6只。①正常对照组：喂饲普通颗粒饲料。②模型组：用高脂饲料喂养，即在普通饲料中加入1g胆固醇和8g猪油。③N-乙酰半胱氨酸50mg／(kg·d)组：每只兔给予N-乙酰半胱氨酸50mg／(kg·d)，混合于与模型组同条件的高脂饲料中喂饲。④N-乙酰半胱氨酸150mg(kg·d)组：每兔给予N-乙酰半胱氨酸150mg／(kg·d)，其余同③。造模及预防性用药共10周，实验共11周。实验结束后分别检测各组兔的血清总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、一氧化氮和内皮素，低密度脂蛋白胆固醇(mmol／L)=总胆固醇-高密度脂蛋白胆固醇-三酰甘油／2．2。实验结束后，麻醉处死动物，解剖后取主动脉行病理形态学观察并定量分析病变程度。 结果：纳入24只白兔全部进入结果分析，无脱失。①各组兔的血清血脂水平及一氧化氮、内皮素含量比较：喂饲高脂饲料后，模型组、N-乙酰半胱氨酸50mg／(kg·d)，150mg／(kg·d)组兔的血清中总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇水平均显著高于正常对照组(P<0．01)，高密度脂蛋白胆固醇显著低于正常对照组(P<0．01)。但两用药组与模型组比较，差异无显著性意义(P>0．05)。N-乙酰半胱氨酸150mg／(kg·d)组兔的一氧化氮含量显著高于模型组和N-乙酰半胱氨酸50mg／(kg·d)组(P<0．01)，而N-乙酰半胱氨酸150mg(kg·d)组兔的内皮素含量显著低于模型组和N-乙酰半胱氨酸50mg／(kg·d)组(P<0．01)。②各组兔主动脉的病理形态学观察结果比较：模型组主动脉内膜表面不光滑，动脉管壁弹性下降，染色后橘红色斑块明显向管腔凸出，N-乙酰半胱氨酸50mg／(kg·d)组兔的主动脉管壁弹性较好，斑块凸出不明显。N-乙酰半胱氨酸150mg／(kg·d)组主动脉内膜仅有少量脂质斑点形成，大部分内膜光滑，弹性好。 结论：N-乙酰半胱氨酸可以有效抑制动脉粥样硬化的进一步发展，其可能作用途径为N-乙酰半胱氨酸能够降低血清内皮素水平，增加一氧化氮生成，从而减少血管内皮的氧化损伤，但此作用与血脂水平无关。     

HSP70的表达在不同预处理下星形孢菌素诱导的大鼠神经细胞毒性应激损伤模型中的意义

目的评估不同预处理对抑制星形孢菌素(STS)诱导的神经细胞毒性应激损伤的作用。方法选取SD大鼠乳鼠120只,分为对照组(n=20)、STS模型组(n=20)、姜黄素组(n=20)、槲皮素+STS模型组(n=20)、姜黄素+STS预处理组(n=20)、姜黄素+槲皮素+STS处理组(n=20)6个组。取乳鼠海马神经细胞,利用STS诱导建立神经细胞毒性应激损伤模型。对照组研究期间不作任何特殊处理,STS模型组、槲皮素+STS模型组、姜黄素+STS预处理组、姜黄素+槲皮素+STS处理组、姜黄素组分别加入终浓度为20μmol/L的STS、终浓度为10μmol/L槲皮素+20μmol/L STS、终浓度为20μmol/L的姜黄素和槲皮素、终浓度为10μmol/L的槲皮素+20μmol/L的姜黄素和槲皮素、终浓度为20μmol/L的姜黄素。利用噻唑蓝(MTT)法、乳酸脱氢酶(LDH)释放率和Western Blot法分别测定各组细胞存活率、细胞毒性损伤程度和HSP70表达量。结果姜黄素+STS预处理组、姜黄素组细胞存活率明显高于STS模型组,差异具有统计学意义(P0.01);姜黄素+STS预处理组和姜黄素组神经细胞毒性率明显低于STS模型组,差异有统计学意义(P0.01);姜黄素+STS预处理组HSP70表达量高于STS模型组和姜黄素组,差异有统计学意义(P0.01);姜黄素+STS模型组神经元存活率高于槲皮素+STS预处理组、姜黄素+槲皮素+STS预处理组和STS模型组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论姜黄素能增强HSP70的表达并抑制STS诱导的SD乳鼠神经元细胞毒性损伤,而槲皮素通过阻断HSP70表达使姜黄素的抑制作用被抵消。     

N-乙酰半胱氨酸对大鼠局部脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察预先应用抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸对局部脑缺血再灌注损伤的保护作用,以及在此过程中核转录因子κB表达的变化。方法:实验于2003-08/2004-04在哈尔滨医科大学动物实验中心及病理实验室完成。①取63只雄性Wistar大鼠随机分为3组:假手术组(n=7),模型组(n=28)和N-乙酰半胱氨酸组(n=28),后两组又分为缺血6,24h两个亚组,每亚组14只。②N-乙酰半胱氨酸组于缺血前30min腹腔注射N-乙酰半胱氨酸(150mg/kg),其余大鼠注射等体积生理盐水。模型组和N-乙酰半胱氨酸组大鼠采用线栓法制作大鼠局灶脑缺血再灌注模型,于缺血6或24h后给予再灌注,1h后断头处死;假手术组不栓塞大脑中动脉,于术后1h断头处死。③应用红四氯氮唑染色测定大鼠脑梗死体积,苏木精-伊红染色分析病理形态学变化,免疫组化法观测核转录因子κB的表达情况。结果:经补充后63只大鼠进入结果分析。①N-乙酰半胱氨酸组较模型组脑组织损伤轻,炎性细胞浸润少。②缺血6,24hN-乙酰半胱氨酸组梗死体积百分比低于相应模型组[(8.57±2.34)%,(15.56±3.46)%;(23.66±6.34)%,(31.91±3.30)%;P<0.01]。③假手术组核转录因子κBp65主要存在于胞质,模型组明显从胞质移位于胞核,N-乙酰半胱氨酸组较模型组p65阳性细胞减少(P<0.01)。结论:①缺血再灌注后核转录因子κBp65活化,从胞质转移到胞核。②应用N-乙酰半胱氨酸能抑制核转录因子κB活化,减少炎症反应和脑组织损伤,缩小梗死体积,在6,24h的长时间脑缺血中仍能起到脑保护作用。     

N-乙酰半胱氨酸对急性胰腺炎模型大鼠的保护作用

背景：急性胰腺炎是由胰腺腺泡细胞损伤介导的常见炎性疾病,白细胞浸润是其主要的发病特征。近来发现N-乙酰半胱氨酸能够控制白细胞游走并在一些严重的炎症疾病中发挥调节炎症反应的作用。
　　目的：观察N-乙酰半胱氨酸在体内对牛黄胆酸盐诱导的急性胰腺炎大鼠模型的保护作用。
　　方法：90只SD大鼠随机等分为正常对照组、急性胰腺炎组和N-乙酰半胱氨酸组,后2组以十二指肠大乳头逆行注射牛黄胆酸盐制备急性大鼠胰腺炎模型。N-乙酰半胱氨酸组大鼠由尾静脉给予N-乙酰半胱氨酸治疗。结果与结论：急性胰腺炎模型诱导后大鼠血浆淀粉酶活性较正常对照组大鼠显著升高(P<0.05)。急性胰腺炎组白细胞介素1β,6,10和肿瘤坏死因子α表达水平明显高于正常对照组(P<0.05)。免疫荧光化学显示N-乙酰半胱氨酸主要表达在胰岛细胞上,急性胰腺炎组织 N-乙酰半胱氨酸的表达从 mRNA 水平到蛋白水平都明显低于正常组织。N-乙酰半胱氨酸治疗显著降低了大鼠血清淀粉酶水平,髓过氧化物酶活性以及促炎性细胞因子产物生产和胰腺及肺组织损伤,但N-乙酰半胱氨酸治疗并没有明显抑制胰腺组织核因子κB的激活。提示N-乙酰半胱氨酸能改善急性胰腺炎大鼠胰腺和肺脏的组织损伤,并发挥抗炎症的作用。     

药物防护电磁脉冲所致海马神经元损伤的可能性

背景:电磁脉冲照射可引起实验大鼠学习记忆能力下降,并可造成离体海马神经元的胞内钙超载,进而发生坏死和凋亡,物理屏蔽可减轻电磁辐射对实验动物的损伤,但缺乏在细胞模型上进行的药物防护研究。目的:观察药物防护电磁脉冲致离体海马神经元损伤的可能性。设计:随机对照动物实验。单位:承德医学院基础部。材料:实验于2004-01/2005-01分别在军事医学科学院和承德医学院完成。实验动物选用Wistar乳鼠若干只。方法:断头取脑分离海马组织,进行海马神经元原代培养与鉴定,原代培养的海马神经元经MK801(N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂)和尼非地平(L型钙离子通道阻断剂)预处理后进行电磁脉冲照射。电磁脉冲照射条件为6×104V/m,脉冲上升时间20ns,脉宽30μs,频率2.5脉冲/min,作用2min。将培养在特殊培养皿的细胞分为正常对照组、电磁脉冲照射组、MK80120μmol/L组和MK80120μmol/L 尼非地平1μmol/L组。采用MTT法对细胞活力进行测定;FACS法检测细胞凋亡率;Fluo-3-AM荧光探针负载、激光共聚焦显微镜扫描测定神经元胞内游离钙离子浓度[Ca2 ]i。主要观察指标:各组细胞内钙超载、细胞活力、细胞调亡的情况比较。结果:①电磁脉冲组在照射后即刻的[Ca2 ]i荧光强度显著高于正常对照组,差异有显著性意义([107.34±26.14),(54.93±16.08),P<0.05];MK80120μmol/L组比电磁脉冲照射组的[Ca2 ]i荧光强度有所下降(81.29±19.96,P<0.05),而MK80120μmol/L 尼非地平1μmol/L组的[Ca2 ]i荧光强度呈进一步下降趋势(69.82±25.54,P<0.05)。但两个给药组的[Ca2 ]i荧光强度仍高于正常对照(P<0.05)。②MK80120μmol/L组和MK80120μmol/L 尼非地平1μmol/L组反映细胞增殖活力的吸光度值分别为0.25±0.06和0.27±0.07,明显高于电磁脉冲照射组(0.17±0.08,P<0.05),但仍低于正常对照组(0.33±0.08,P<0.05)。③电磁脉冲照射组在照后即刻的细胞凋亡率显著高于正常对照组,差异有显著性意义([68.63±9.04)%,(20.14±4.34)%,P<0.01];MK80120μmol/L组比电磁脉冲照射组的细胞凋亡率有所下降(62.12±11.08)%,MK80120μmol/L 尼非地平1μmol/L组的细胞凋亡率呈进一步下降趋势([53.69±13.60)%,P<0.05)],但两个给药组的细胞凋亡率仍高于正常对照组(P<0.01)。结论:MK801和尼非地平预处理可部分阻断电磁脉冲所致的海马神经元损伤;细胞内钙超载在电磁脉冲损伤机制中发挥重要作用。     

脓毒症大鼠小肠功能变化的研究

目的　探讨脓毒症大鼠小肠屏障、吸收、通透及其蠕动功能的变化。方法　以 Wistar大鼠缺血再灌注复合内毒素血症制备动物模型。将动物随机分为正常对照 ( N)、肠系膜上动脉夹闭 1h后再灌注 1h( I/ R1)、2 h( I/ R2 )和 4 h( I/ R4 )以及再灌注 2 h后复合内毒素 2 h( I/ RL)共 5个组。分别测定各组动物血或小肠组织二胺氧化酶 ( DAO)、D 乳酸、D 木糖水平及肠蠕动 ,同时进行小肠普通光镜检查。结果　 I/ R1、I/ R4和 I/ RL组血浆 DAO活性均显著升高 ( P均 <0 .0 5 ) ,小肠组织 DAO在 I/ R2和 I/ RL 组均显著降低( P均 <0 .0 5 ) ,从 N、I/ R1、I/ R2、I/ R4到 I/ RL,各组血浆 DAO和小肠 DAO的相关分析可见呈高度负相关( r= 0 .90 9,P<0 .0 0 1) ;I/ R 1、I/ R 2和 I/ RL组血浆 D乳酸均显著升高 ( P均 <0 .0 5 ) ;与 N组比较各组肠传输速度显著加快 ( P均 <0 .0 5 ) ;I/ R 1和 I/ RL组血中 D木糖浓度较 N组高 ,3h后仍高于 N组 ;血 DAO浓度与血 D乳酸浓度变化相关 ( r=0 .5 5 9,P<0 .0 5 )。结论　缺血再灌注后小肠的屏障、吸收、通透和蠕动功能均有不同程度的改变 ;缺血再灌注复合内毒素血症时再次加速或加重了小肠屏障、吸收、通透和传输功能的变化     

浙江省岱山县居民死因分析

目的 为掌握浙江省岱山县海岛地区居民健康状况和主要疾病死亡原因,评价居民健康水平,为政府和相关部门制定疾病预防控制策略提供参考依据.方法 对岱山县1986 -1988年和2009-2010年两个时期居民死亡资料进行比较分析,采用国际疾病分类法进行编码,以2000年全国标准人口构成比进行死亡率标化.结果 岱山县两个...     

论护理工作中的“慎独”与“慎众”

"慎独"一词出自《礼记·中庸》中"莫见乎隐,莫显乎微,故君子慎其独也"。即当君子独处,无人监督的时候,总是小心谨慎地不做任何不道德的事情。"慎众"则是指在许多人违反原则时,君子却不随波逐流,不盲目     

Achievements in hip joint surgery in adults in Poland

The treatment of diseases and injuries of the hip joint in both children and adults has been a major area of interest for surgeons treating injuries and non-traumatic conditions of the organs of locomotion. The work of prominent Polish surgeons and orthopaedists has contributed to progress in this branch of medicine over the last century.