Genistein对人卵巢癌细胞系3AO抑制增殖的作用及机制的探讨

目的:研究植物雌激素染料木黄酮对人卵巢癌细胞系3AO细胞增殖的抑制作用和凋亡的诱导作用,探讨其抗癌作用的机制. 方法:应用MTT法检测不同浓度染料木黄酮对3AO细胞的生长抑制作用,电镜观察药物作用后细胞的超微结构改变,TUNEL法确定凋亡,流式细胞仪检测细胞周期、定量分析凋亡,免疫细胞化学技术检测雌激素β受体的表达. 结果: 3AO细胞经不同浓度染料木黄酮处理后,细胞生长明显受到抑制,且这种抑制作用随时间延长及浓度增高而增强,10 mg/L和20 mg/L染料木黄酮作用72 h后,抑制率分别达到54.24%和65.99%. 染料木黄酮阻断3AO细胞生长于G2/M期,在G0/G1前出现典型亚二倍体凋亡峰,且凋亡呈时间依赖性. 电镜观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征. TUNEL法观察到大量阳性凋亡细胞. 免疫细胞化学法检测到用药后,ERβ表达明显加强. 结论:染料木黄酮对3AO细胞的生长有明显的呈时间及浓度依赖性的抑制作用,并诱导其发生凋亡. 染料木黄酮可能通过雌激素β受体途径发挥药理作用,诱导卵巢癌细胞发生凋亡.     

Genistein对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的　观察PTK抑制剂Genistein对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法　对 3 0例裸鼠建立人卵巢癌皮下移植瘤模型 ,共分为 5组 :对照组 (含 0 0 4%DMSO的生理盐水 ) 0 2mg kg ,Genistein治疗组 0 4mg kgGenistein治疗组 (皮下注射 ) ,Cisplatin( 4mg kg ,静脉推注 )治疗组 ,Genistein与Cisplatin联合治疗组。观察不同药物治疗后第 7、14、2 1、2 8d各组裸鼠皮下移植瘤生长情况及裸鼠体重的变化 ,并进行病理组织学检查。结果　 0 .4mg kgGenistein皮下注射 ,对SKOV3裸鼠移植瘤的生长有明显抑制作用 ,与对照组相比 ,瘤体重量降低 ,肿瘤体积减小 ,坏死面积显著增加 ,但对裸鼠体重无明显影响。应用 0 4mg kgGenistein与 4mg kgCisplatin(静脉推注 )联合处理SKOV3裸鼠移植瘤有增强抑制作用。结论　Genistein具有抑制人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的作用 ;Genistein与化疗药物联合应用可增强抑瘤作用     

川芎嗪抑制IL-8诱导人卵巢癌SKOV3细胞的迁移作用

目的:观察外源白介素-8(Interleukin-8,IL-8)对人卵巢癌SKOV3细胞迁移的影响,及川芎嗪(Tetramethylpyrazine,TMP)对它的干预作用,初步研究其可能机制.方法:TMP处理SKOV3细胞后,MTF法确定药物浓度;细胞划痕实验观察外源IL-8对SKOV3细胞迁移能力的影响,采用Tra...     

杨梅素对人卵巢癌SKOV3细胞的凋亡诱导作用

目的:观察杨梅素对人卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制及凋亡诱导作用,并探讨其可能机制。方法:体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,按杨梅素给药浓度将细胞分为对照组和低、中、高浓度杨梅素组,杨梅素给药浓度分别为0、20、40和60 mg·L^-1。MTT法检测各组SKOV3细胞存活率;激光共聚焦显微镜观察各组SKOV3细胞核形态变化并计算异常细胞核比率;免疫荧光法检测各组SKOV3细胞中凋亡相关蛋白-活化半胱氨酸蛋白酶3(active Caspase-3)的表达;Western blotting法检测各组SKOV3细胞中DNA损伤相关蛋白γ-H₂AX的表达水平。结果:与对照组比较,低、中和高浓度杨梅素组SKOV3细胞存活率明显下降(t=-12.35,t=-11.42,t=-10.21,P<0.05);激光共聚焦显微镜下各浓度杨梅素组细胞出现核皱缩等凋亡形态学改变,且细胞中异常细胞核比率高于对照组(t=6.87,t=9.35,t=7.22,P<0.05),高浓度杨梅素组异常细胞核比率高于低、中浓度杨梅素组(t=9.55,t=7.25,P<0.05);随着杨梅素给药浓度的增加,SKOV3细胞中active Caspase-3的表达水平有升高趋势,各浓度杨梅素组SKOV3细胞中γ-H₂AX的表达水平高于对照组(t=5.41,t=3.21,t=6.58,P<0.05)。结论:杨梅素可抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖并诱导其凋亡,DNA双链断裂可能是其促凋亡的机制之一。     

人腹膜间皮细胞对卵巢癌SKOV3细胞黏附、迁移和侵袭力的影响

目的：探讨人腹膜间皮细胞（HPMC）对卵巢癌SK-OV3细胞黏附、迁移、侵袭力的影响及可能机制.方法：建立HPMC原代培养的方法;采用免疫细胞组织化学法鉴定原代HPMC;验证HPMC中部分细胞因子的表达;采用黏附、迁移及侵袭实验观察HPMC与卵巢癌SKOV3细胞相互作用时对SKOV3细胞转移力的影响,及其作用机制是否与CXCL12-CXCR4轴有关.结果：成功培养出了HPMC.鉴定分离出的细胞符合间皮细胞的特征.HPMC中表达CXCL12、间皮素,不表达CXCR4.SKOV3与HPMC共同培养组的吸光度、迁移和侵袭细胞数显著高于单独SKOV3培养组,差异有统计学意义（P〈0.05）.稳定高表达CXCR4的SKOV3细胞（SKOV3-CX-CR4-cDNA）与HPMC共同培养组的吸光度、迁移和侵袭的细胞数目显著高于其余3组,差异均有统计学意义（P〈0.05）.结论：HPMC与SKOV3细胞相互作用时,增强了SKOV3细胞黏附、迁移和侵袭力,其作用机制与CXCL12-CXCR4轴有关.     

Genistein对人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞系SKOV3体内和体外侵袭的抑制作用

目的研究genistein对人卵巢癌细胞系SKOV3 体内外侵袭能力的抑制作用.方法建立Borden小室体外侵袭模型以及瘤细胞体内皮下移植瘤侵袭模型,观察genistein对SKOV3的影响.结果 20 μmol/L genistein处理SKOV3细胞3 d后,细胞侵袭重建基底膜明显受到抑制,其抑制率呈剂量效应曲线.40 μmol/L genistein作用细胞后侵袭至滤膜下表面的细胞数最低.体内实验半定量分析结果表明,对照组SKOV3细胞的体内侵袭程度随时间延长而呈进行性,genistein处理组可明显阻止侵袭的进程,使肿瘤局限于0级或Ⅰ级,并明显降低Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级的侵袭百分比.结论 Genistein对人卵巢癌细胞系SKOV3 体内和体外的侵袭均有抑制作用.     

二氧化碳气腹环境对人卵巢癌细胞系SKOV3侵袭能力的影响

目的 研究腹腔镜手术中二氧化碳(CO2)气腹环境对恶性卵巢肿瘤细胞黏附、侵袭能力的影响,探讨恶性肿瘤行腹腔镜手术的安全性.方法 体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,模拟腹腔镜CO2气腹环境处理肿瘤细胞,噻唑蓝比色(MTT)法和Boyden小室侵袭运动实验检测SKOV3细胞的黏附、运动和侵袭能力;免疫组化和半定量RT-PCR方法检测SKOV3细胞黏附分子CD44及促血管生成因子bFGF的蛋白和mRNA表达.结果 与对照组比较,CO2处理组细胞对人工基底膜的黏附力明显增加(P＜0.01);处理组细胞运动和侵袭能力明显增强(P＜0.01);其CD44和bFGF蛋白分泌和mRNA表达量显著增加(P＜0.05).结论 CO2气腹环境能促进体外培养的恶性卵巢肿瘤细胞的侵袭转移,其作用机制可能与其促进卵巢癌细胞异质黏附和运动能力;增加细胞黏附分子和促血管生成因子的表达有关.     

OK-432抗人卵巢癌细胞SKOV3生长及诱导凋亡机制研究

目的 观察OK-432(主要活性成分为OK-PSA)体外对人卵巢癌细胞株SKOV3凋亡的影响,探讨其作用机制。方法 对数生长期的SKOV3细胞随机分为对照组和OK-432给药组(浓度分别为10、20、40、80、160mg/L),给药24h之后,倒置显微镜观察细胞形态,MTT法测定OK-432对SKOV3细胞增殖的影响。应用20mg/L的OK-432处理SKOV3细胞,免疫荧光法检测内质网功能相关蛋白PDI随时间表达情况,Western blotting检测SKOV3肿瘤细胞内质网应激和凋亡相关蛋白随时间表达水平。结果 MTT法检测结果显示,与对照组相比较,OK-432可呈剂量依赖性抑制SKOV3细胞增殖(P<0.05),20mg/L的OK-432即可使肿瘤细胞变圆,体积缩小,脱壁细胞增多;随着OK-432给药时间延长,PDI在细胞核周聚集的量逐渐增加,凋亡相关蛋白cleaved-caspase 3、内质网应激相关蛋白Grp-78、CHOP表达量也逐渐增加。结论 OK-432可能通过内质网应激来诱导SKOV3凋亡。     

Celebrex对VEGF诱导的内皮细胞迁移的影响及其机制

目的:观察选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂celebrex对血管内皮生长因子(VEGF)诱导的内皮细胞细胞迁移能力的影响及其与细胞内MMP-9表达的关系。方法:体外培养内皮细胞系ECV304,将细胞分为4组:①空白对照组(ECV304);②VEGF组(ECV304+VEGF);③celebrex+VEGF组(ECV304+VEGF+cele-brex);④celebrex组(ECV304+celebrex)。观察:①用损伤修复实验观察不同浓度celebrex对ECV304细胞迁移能力影响及对VEGF诱导下ECV304细胞迁移速度影响;②用半定量RT-PCR法检测VEGF及celebrex对ECV304细胞MMP-9 mRNA表达的影响。结果:ECV304细胞的迁移速度随VEGF浓度(0.02,0.2,2μmol/L)的增加呈降低趋势;celebrex+VEGF组(2μmol/L celebrex+5μg/L VEGF)迁移速度为(3.55±0.02)μm/h与VEGF组(5μg/L VEGF)迁移速度(7.66±0.02)μm/h比较,两者有显著差异(P<0.01);celebrex+VEGF组(2μmol/L celebrex+5μg/L VEGF)的MMP-9表达量明显低于VEGF组(5μg/L VEGF)。结论:celebrex能抑制VEGF诱导的ECV304细胞迁移,并使COX-2下游的MMP-9表达量显著下调,这是可能的机制之一。     

纳秒级陡脉冲对人卵巢癌细胞SKOV3生长抑制及诱导凋亡作用

目的 探讨纳秒级陡脉冲对人卵巢癌细胞的生长抑制和凋亡诱导作用.方法 采用人卵巢癌细胞SKOV3,应用MTT比色法,倒置显微镜,荧光显微镜及Annexin-FITC技术等方法进行检测和观察.结果 中(8.5 kV/cm)、高(10 kV/cm)场强处理组对SKOV3细胞活性具有明显抑制作用,呈剂量依赖性,在处理后2～4 h内呈时间依赖性;倒置显微镜和荧光显微镜下观察到典型的凋亡细胞形态;流式细胞仪示,中、高场强处理组早期凋亡率分别为(22.21±2.71)%、(57.30±6.51)%,与对照组(3.04±0.44)%比较均有显著性差异.结论 一定范围内的纳秒级陡脉冲能明显抑制SKOV3细胞增殖,亦诱导SKOV3细胞凋亡.     

洛铂诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡的研究

目的探讨洛泊对体外培养的浆液性卵巢癌细胞SKOV3凋亡的诱导作用。方法体外培养卵巢癌细胞SKOV3,用MTT比色法检测洛铂对SKOV3细胞株的增殖抑制作用以及流式细胞仪检测洛铂对SKOV3细胞株的凋亡率。结果体外培养的卵巢癌SKOV3细胞经不同浓度的洛泊处理后细胞生长明显受到抑制,洛泊作用于卵巢癌SKOV3细胞可诱导细胞的凋亡。结论卵巢癌SKOV3细胞对洛泊敏感,洛泊对卵巢癌细胞的杀伤作用是通过诱导细胞凋亡途径实现的。     

Genistein sensitizes ovarian carcinoma cells to chemotherapy by switching the cell cycle progression in vitro

Objective： To address how genistein sensitizes the chemotherapy-resistant ovarian carcinoma cells and promotes apoptosis in the respect of cell cycle and the regulation of survivin expression in the process. Methods： Ovarian SKOV-3 carcinoma cell line was treated with genistein or cisplatin either alone or in combination. Cell viability was showed by MTT method. Cell cycle and apoptosis were detected by flow cytometry. Survivin mRNA and protein were revealed by RT-PCR and immunocytochemistry, respectively. Results： Genistein could reduce the cell viability in a dose-dependent manner, while cisplatin did so at a much higher level. In contrast, if the two agents were treated in combination, half growth inhibition （IC50） value for cisplatin was reduced remarkably and the effect was synergistic as analyzed by isobologram. In particular, the reduced cell viability was exhibited by a switch in cell cycle progression, as the cells were arrested in G2/M phase and the G0/G1 phase- fraction was significantly decreased. The reduced cell viability appeared to involve apoptosis, based on our results from flow cytometry and Hoechst 33258 staining. In the meanwhile, genistein performed the inhibitory effect on cisplatin-induced survivin expression. Conclusion： Genistein can sensitize ovarian carcinoma cells to cisplatin therapy with the inhibition of survivin expression as the potential mechanism.     

骨桥蛋白促进卵巢癌细胞SKOV3侵袭潜能的实验研究

目的检测卵巢癌细胞株SKOV3中骨桥蛋白（OPN）的表达,探讨OPN对卵巢癌细胞侵袭潜能的影响。 方法pcDNA3.1(-)/OPN重组质粒转染SKOV3细胞,以空质粒转染作对照。采用RT PCR及Western blot法检测OPN mRNA和蛋白表达水平,并用基质凝胶侵袭实验检测两组细胞侵袭力。 结果重组质粒转染SKOV3细胞后OPN mRNA和蛋白表达明显升高。侵袭实验证实重组质粒转染组细胞侵袭力明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论OPN对卵巢癌细胞的侵袭潜能有促进作用。     

舒林酸对卵巢癌SKOV3细胞作用的初步研究

目的:研究舒林酸对卵巢癌SKOV3细胞的生长和细胞运动的影响以及对基质金属蛋白酶2(MMP2)、环氧合酶-2(COX-2)表达的影响:方法:将不同浓度的舒林酸加入培养液中观察其对SKOV3细胞形态的影响,采用MTT法观察舒林酸对SKOV3细胞生长的影响,通过划痕试验观察舒林酸对SKOV3细胞运动的影响,利用免疫细胞化学方法研究舒林酸对SKOV3细胞MMP2、COX-2表达的影响。结果:舒林酸与SKOV3细胞体外培养可使肿瘤细胞伪足回缩、细胞变圆,MTT试验提示舒林酸可抑制卵巢癌SKOV3细胞的生长,划痕试验提示舒林酸可抑制SKOV3细胞的运动,免疫细胞化学实验提示舒林酸显著抑制SKOV3细胞MMP2、COX-2的表达,有时间和剂量依赖效应。结论:舒林酸可能通过抑制MMP2、COX-2的表达而抑制卵巢癌SKOV3细胞的生长和运动。     

雄黄诱导卵巢癌细胞珠SKOV3和COC1凋亡的实验研究

目的:探讨雄黄对卵巢癌细胞株SKOV3和COC1增殖能力的影响及可能机理。方法:采用不同浓度雄黄溶液作用于两珠细胞,用MTT法检测生长抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率及分析细胞周期;原位末端标记法(TUNEL)观察细胞凋亡形态学。结果:不同浓度的雄黄溶液对卵巢癌细胞株SKOV3及COC1均有不同程度的生长抑制作用,具有浓度和时间依赖性,且COC1比SKOV3对雄黄更敏感。结论:雄黄对卵巢癌细胞有生长抑制作用,诱导细胞发生G1期阻滞是雄黄抑制卵巢癌细胞生长作用的可能机制之一。     

CO2对人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤生长和转移的影响

目的探讨不同压力持续性CO₂气腹对人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤生长和转移的影响。方法将体外培养的人卵巢癌细胞株SKOV3分别暴露于不同压力（8、10、12mmHg）和作用时间（1、3h）的CO₂环境中，对照组细胞放入CO₂培养箱常规培养。收集各组细胞后接种于裸鼠腋下，建立有差异的裸鼠皮下移植瘤模型并绘制肿瘤生长曲线。接种6周后脱臼处死全部裸鼠，测量移植瘤的体积和重量，采用免疫组织化学法检测各组中增殖细胞核抗原（PCNA）和nm23-H1蛋白的表达。结果接种7d后各组均明显成瘤，各CO₂气体处理组的皮下移植瘤生长速度均快于对照组，其皮下移植瘤体积和重量也高于对照组（P＜0.01）。各CO₂处理组中肿瘤细胞PCNA蛋白表达阳性率均高于对照组（P＜0.01），各组间nm23-H1蛋白表达阳性率差异无统计学意义(P＞0.05)。结论CO₂气体本身对人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤的生长有明显的促进作用，对转移影响不大     

人卵巢癌细胞系SKOV3对树突细胞免疫功能及凋亡的影响

目的:探讨人卵巢癌细胞系SKOV3对树突细胞(DC)免疫表型、细胞因子分泌及凋亡的影响。方法:采用外周血单个核细胞培养DC,以PBS溶液为对照,应用流式细胞仪检测人卵巢癌细胞系SKOV3培养上清液作用于DC后,其凋亡的发生率、免疫表型的表达,应用酶标记免疫吸附分析法(ELISA)检测DC白细胞介素-12(IL-12)的分泌情况。结果:人卵巢癌细胞系SKOV3培养上清液作用于DC后,可诱导DC发生凋亡,DC的CD80、CD83及人类白细胞(位点)DR抗原(HLA-DR)等表型明显下调,IL-12分泌明显下降,与对照组相比差异显著(P<0.05),且IL-12分泌随SKOV3作用时间的延长,其抑制作用更加明显。结论:人卵巢癌细胞系SKOV3可明显抑制DC的免疫功能,并诱导其凋亡。     

褪黑素联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用

目的：探讨褪黑素（MLT）、顺铂（DDP）单独及联合应用对人卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用,为MLT作为卵巢癌化疗辅助药物的研究提供理论依据。方法：将体外培养至对数生长期的卵巢癌SKOV3细胞分为对照组、单用MLT组（0.5、1.0和2.5 mmol/L）、单用DDP组（25和50 mg/L）、联合应用MLT及DDP组（MLT 0.5 mmol/L联合DDP 25 mg/L; MLT 0.5 mmol/L联合DDP 50 mg/L;MLT 1.0 mmol/L联合DDP 25 mg/L;MLT 1.0 mmol /L联合DDP 50 mg/L;MLT 2.5 mmol/L联合DDP 25 mg/L;MLT2.5 mmol/L联合DDP 50 mg/L）。应用显微镜观察法、MTT法测定用药后卵巢癌SKOV3细胞的凋亡及增殖抑制率,并采用免疫化学方法测定卵巢癌SKOV3细胞用药后的血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果：显微镜下观察结果显示用药组细胞贴壁能力减弱、变小变圆、折光性减弱、细胞皱缩、核固缩、染色质凝集、核碎裂。联合用药组凋亡细胞增多;MTT 法检测结果显示0.5、1.0和2.5 mmol/L-1的MLT单独应用或与25和50 mg/L的DDP联合应用均有抑制细胞生长作用（P<0.05）,且随浓度升高抑制率升高,联合用药组两药物间均有协同作用,两药相互作用指数（CDI）＜1;免疫化学染色法显示单用药组及联合用药组VEGF表达较对照组均降低,联合用药组VEGF表达明显降低（P<0.05）。结论：MLT对卵巢癌细胞生长有抑制作用,MLT联合DDP对VEGF表达下调有协同作用,提示适当浓度的MLT配伍DDP作用于卵巢癌细胞SKOV3可达到较好疗效。     

米非司酮对卵巢癌细胞系SKOV3增殖和CEACAM6表达的影响

目的  观察米非司酮对卵巢癌细胞系SKOV3增殖和癌胚抗原相关黏附分子6（CEACAM6）表达的影响。方法  不同浓度米非司酮（空白对照、1×10-7、1×10-6、1×10-5、5×10-5mol/L）干预卵巢癌细胞系SKOV3 24、48、72h;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测米非司酮对SKOV3的抑制作用;逆转录聚合酶链反应（RT PCR）和蛋白印记（Western blot）检测不同浓度米非司酮干预下CEACAM6 mRNA和蛋白表达水平的差异,并进行半定量分析。结果  与空白对照组比较,1×10-7和1×10-6mol/L米非司酮对SKOV3的生长没有明显的抑制作用（P＞0.05）;5×10-5mol/L米非司酮显著抑制SKOV3的生长（P＜0.01）,并降调SKOV3细胞中CEACAM6 mRNA和蛋白的表达水平（P＜0.05）。结论  米非司酮可明显抑制SKOV3的体外增殖,其作用机制可能与抑制CEACAM6的表达有关。