微小RNA-106b与中枢神经系统月瘤关系的研究进展

微小RNA(miRNA)是一类小分子非编码RNA,参与生长发育、分化、信号传导、细胞增殖和凋亡等生物学过程,在包括肿瘤在内的多种生理和病理过程中具有重要作用.MiR-106b是miR-106b家族(miR-106b、miR-25、miR-93)中的一员,miR-106b的异常表达在肿瘤等疾病的发生、发展中起重要作用.本文就miR-106b与中枢神经系统肿瘤关系的研究进展做一综述.     

miR-10b、miR145及miR155在乳腺癌患中的表达及临床意义

目的 探讨microRNA-10b(miR-10b)、microRNA-145(miR-145)及microRNA-155(miR-155)在乳腺癌患者病理组织及血清中的表达水平,进而评价其在乳腺癌诊断中的价值.方法 收集100例正常健康志愿者,150例乳腺癌患者血液和39例乳腺癌患者的癌组织和癌旁组织,提取血液和组织中的microRNA,采用实时荧光定量PCR检测miR-10b、miR-145及miR-155表达水平,分析其与乳腺癌患者临床病理参数之间的相关性,并绘制ROC曲线分析其在乳腺癌诊断中的价值.结果 治疗前乳腺癌患者血清中的miR-10b,miR-145和miR-155表达水平高于对照组(P＜0.05),三者表达水平均与肿瘤转移显著相关,与年龄、组织学特征、ER表达无相关性(P＞0.05)miR-10 b与临床分期显著相关(P＜0.05),miR-10b的ROC曲线下面积为0.936,miR-145的ROC曲线下面积为0.904,miR-155的ROC曲线下面积为0.91.miR-10b,miR-145,miR155在Ⅲ级乳腺癌患者肿瘤组织的表达水平明显高于Ⅰ～Ⅱ级乳腺癌患者癌组织的表达水平(P＜0.05).结论 血清中miR-10 b、miR-145及miR-155有可能作为乳腺癌早期诊断的肿瘤标志物.     

乳腺浸润性导管癌患者血清miR-10b水平变化及其与临床病理特征的关系分析

目的 探究乳腺浸润性导管癌患者血清microRNA-10b(miR-10b)水平变化及其水平表达与临床病理特征的关系.方法 选取82例乳腺浸润性导管癌患者作为实验组,另选取82例行健康检查的健康女性作为对照组.检测并比较两组血清miR-10b水平,分析实验组患者miR-10b水平与人类表皮生长因子受体2(HER-2)、...     

莫西沙星干预治疗对耐多药肺结核患者血清miRNA-99b、125b、155水平的影响

目的探讨莫西沙星干预治疗对耐多药肺结核病(MDR-TB)患者血清miRNA-99b、125b、155水平的影响。方法收录MDR-TB患者共150例。随机等分为莫西沙星组(75例)和对照组(75例)。于入组前(T_0),治疗后3个月(T_1)和9个月(T_2)3个时间点检测3种结核相关miRNA(miR-99b、miR-125b、miR-155)水平变化。结果 T_1时,莫西沙星组miR-99b明显低于对照组(P<0.05)。T_2时,两组患者3种结核相关miRNAs较T_0和T_1时均明显下降(P<0.05);莫西沙星组miR-99b、miR-125b和miR-155明显低于对照组(P<0.05)。T_1时,莫西沙星组可见有效亚组患者miR-99b水平明显下降(P<0.05),有效亚组miR-99b、125b均明显低于无效亚组(P<0.05);莫西沙星有效亚组miR-99b水平明显低于对照组有效亚组(P<0.05)。T_2时,莫西沙星组可见有效亚组患者miR-99b、miR-125b和miR-155较T_0和T_1时水平明显下降(P<0.05),莫西沙星有效亚组miR-99b和miR-155水平均明显低于对照组有效亚组(P<0.05)。莫西沙星干预治疗与miR-99b△3、miR-125b△3和miR-155△3呈负相关。结论 miR-99b、miR-125b和miR-155 3种结核相关miRNA可能参与莫西沙星的抗结核作用,提高MDR-TB患者化疗疗效。     

miR-125b甲基化在同型半胱氨酸促进血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)促进血管平滑肌细胞增殖中miR-125b甲基化的作用。方法原代培养人脐静脉平滑肌细胞(VSMCs),并分为空白对照组(0μmol·L-1Hcy),不同浓度Hcy干预组(50、100、200及500μmol·L-1Hcy),以荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-125b的表达变化;利用miR-125b前体和抑制剂转染VSMCs后MTT法检测细胞增殖活性;生物信息学分析miR-125b启动子区Cp G岛分布情况,巢式降落式甲基特异性PCR(nt-MSP)法检测miR-125b甲基化状态的变化;并利用DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂胞苷(AZC)干预细胞后再次检测miR-125b的表达。结果与对照组相比,100,200及500μmol·L-1Hcy可使miR-125b的表达水平降低,差异有显著性(P<0.01);miR-125b前体可以抑制VSMCs增殖,而miR-125b抑制剂可以促进VSMCs增殖(P<0.01);以miR-125b基因上游3 700 bp作为研究对象,生物信息学分析发现miR-125b启动子区含有一个长度为792bp(1881-2672区域)的CpG岛,且在Hcy干预下miR-125b的甲基化水平增强(P<0.01);而用AZC干预后,发现miR-125b表达上调,差异有显著性(P<0.05)。结论 Hcy可能通过下调miR-125b表达从而促进VSMCs增殖,可能通过上调miR-125b基因甲基化水平从而下调miR-125b表达。     

二烯丙基二硫诱导人胃癌MGC803细胞的差异microRNA表达

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人胃癌MGC803细胞的差异miRNAs表达。方法采用miRNAs芯片与qRT-PCR检测DADS诱导人胃癌MGC803细胞的差异miRNAs表达。结果 microRNA芯片检测显示,30 mg·L~(-1)DADS处理24 h后,MGC803细胞的差异miRNAs表达中,miR-200b、miR-22、miR-7、miR-143、miR-138、miR-34a、miR-150等7个miRNA表达明显上调,miR-222、miR-21、miR-15b、miR-182、miR-18a等5个miRNA下调。q PCR证实,30 mg·L~(-1)DADS处理MGC803细胞后,miR-200b、miR-22、miR-7、miR-143、miR-138、miR-34a、miR-150等表达较未处理组明显上调(P <0. 05)。且q PCR检测显示,miR-200b与miR-22在MGC-803、BGC-823、MKN-28、SGC-7901、HGC-27等各种人胃癌细胞表达较正常人胃癌GES-1细胞明显下调(P <0. 05)。miR-200b与miR-22在胃癌组织中表达较正常胃组织明显下调(P <0. 05)。结论DADS诱导人胃癌MGC803细胞的差异miRNAs表达有7个miRNA明显上调,5个miRNA下调。miR-200b与miR-22在胃癌组织与细胞中表达下调。DADS可上调MGC803细胞miR-200b与miR-22表达。     

微RNA-125b靶向调控M2型丙酮酸激酶影响宫颈癌SiHa细胞机制验证

目的探讨宫颈癌细胞中微RNA(miR)-125b和M2型丙酮酸激酶(PKM2)的表达以及miR-125b对PKM2基因的调控作用,从而确定miR-125b下游调控的靶基因,阐明其在宫颈癌发生发展中可能的分子机制。方法培养宫颈癌SiHa细胞及正常上皮细胞(293T细胞),利用细胞转染技术过表达或沉默miR-125b。实验分为实验组:miR-125b mimics(M组)、miR-125b inhibitor(I组);阴性对照组:miR-125b mimics negative con-trol(MNC组)、miR-125b inhibitor negative control(INC组);空白对照组(B组):未进行转染。采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-125b的含量。采用免疫荧光及蛋白质印迹法检测各组细胞中PKM2蛋白的表达。结果与293T细胞相比,宫颈癌SiHa细胞中miR-125b的表达下调(0.82±0.05)(P<0.05),PKM2表达上调(3.4±0.5)倍(P<0.05)。SiHa细胞转染成功后,免疫荧光检测miR-125b模拟物组表达PKM2蛋白的细胞数目(1.0±0.7)低于模拟物阴性对照组表达PKM2蛋白的细胞数目(3.6±0.5)(P<0.05);miR-125b抑制物组中表达PKM2蛋白的细胞数目(6.0±0.7)高于抑制物阴性对照组表达PKM2蛋白的细胞数目(3.6±1.3)(P<0.05)。蛋白质印迹法检测miR-125b模拟物组的PKM2蛋白相对表达量(0.239±0.042)低于模拟物阴性对照组的PKM2蛋白相对表达量(0.314±0.018)(P<0.05);miR-125b抑制物组的PKM2蛋白表达水平(0.40±0.03)高于抑制物阴性对照组的PKM2蛋白表达水平(0.34±0.04)(P<0.05)。结论与正常上皮细胞相比,宫颈癌SiHa细胞中miR-125b表达下调,而PKM2蛋白表达上调;宫颈癌细胞中miR-125b表达下调可能会通过增加PKM2的表达,从而增强其糖酵解作用,促进肿瘤的生长。     

MiR-106b对子宫肌瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及与SULT2A1的靶向关系

目的:探讨微小RNA (miR)-106b在子宫肌瘤细胞增殖、侵袭和凋亡中的作用与潜在机制.方法:将体外培养的人子宫肌瘤细胞分为阴性对照(NC)组(转染miR-106b模拟物阴性对照)、miR-106b组(转染miR-106b模拟物)、反义(anti)-NC组(转染miR-106b抑制剂阴性对照)和anti-miR-1...     

miR-27a和miR-181b表达水平在胃癌早期诊断的价值

目的研究外周血中miR-27a、miR-181b的表达水平在胃癌早期的诊断价值。方法采用RT-PCR法检测46例胃癌患者(A组)、27例胃癌前病变患者(B组)及21例健康人(C组)外周血浆中miR-27a、miR-181b的表达水平。结果与C组相比,A组和B组血浆中miR-27a、miR-181b的表达明显增加(P<0.01或P<0.05),ROC曲线下面积分别为0.876、0.770和0.769、0.749;而A组和B组miR-27a、miR-181b表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论外周血浆中miR-27a、miR-181b有作为胃癌早期诊断标志物的潜力。     

外源高表达miR-133b抑制骨肉瘤的增殖与转移

目的分析miR-133b对骨肉瘤细胞增殖与转移的影响。方法q RT-PCR检测人骨肉瘤细胞系(MG-63)与人正常成骨细胞系(h FOB)中miR-133b的表达水平;运用MTT实验检测miR-133b对人骨肉瘤MG-63细胞的生长能力的作用;运用划痕实验检测miR-133b对人骨肉瘤MG-63细胞的迁移能力的作用;Transwell侵袭实验检测miR-133b对人骨肉瘤MG-63细胞的侵袭能力作用。结果qRT-PCR检测结果显示,MG-63细胞中miR-133b的表达水平明显低于h FOB细胞的表达水平(P<0.01);MTT检测发现,外源高表达miR-133b可抑制人骨肉瘤MG-63细胞的生长(P<0.01);划痕实验检测发现,外源高表达miR-133b可抑制人骨肉瘤MG-63细胞的迁移能力(P<0.01);Transwell侵袭实验显示,外源高表达miR-133b可抑制人骨肉瘤MG-63细胞的侵袭能力(P<0.01)。结论外源高表达miR-133b可抑制人骨肉瘤MG-63细胞的增殖与转移。     

OVCAR细胞转染miR-130b下调多梳基因-1蛋白表达增加对卡铂敏感性

目的观察miR-130b对卡铂抗卵巢癌的增敏作用,探讨其相关的作用机制。方法 OVCAR细胞Lipofectiamine 2000转染miR-130b模拟物和无miR-130b基因功能的miR-130b阴性对照,荧光定量PCR检测转染效果。转染细胞给予对倍稀释卡铂100,50,25,12.5,6.25,3.12,1.56和0.78μmo.lL-1处理68 h。MTT法检测OVCAR细胞存活;Western印迹法检测多梳基因-1(Bmi-1)蛋白表达。结果 荧光定量PCR结果显示,正常对照组、miR-130b模拟物转染组和阴性对照组miR-130b表达的相对值分别为0.22±0.08,0.46±0.12和0.23±0.10,miR-130b模拟物转染组显著高于正常对照组和阴性对照组(P<0.01),正常对照组和阴性对照组之间无统计学差异。卡铂对正常对照组、miR-130b模拟物转染组和阴性对照组卵巢癌OVCAR细胞的IC50值分别为32.4±4.6,14.7±2.1和(31.4±4.2)μmo.lL-1,miR-130b模拟物转染组IC50值显著低于正常对照组和阴性对照组(P<0.01)。正常对照组、miR-130b模拟物转染组和阴性对照组细胞多梳基因-1蛋白的相对表达量分别为0.75±0.16,0.21±0.12和0.77±0.18,miR-130b模拟物转染组显著降低(P<0.01)。结论 OVCAR细胞转染miR-130b可以显著增加卡铂对其敏感性,下调多梳基因-1蛋白表达可能是miR-130b增敏的作用机制之一。     

Diagnostic value of expressions of miR-27a and miR-181b for early detection of gastric cancer

目的 研究外周血中miR-27a、miR-181b的表达水平在胃癌早期的诊断价值.方法 采用RT-PCR法检测46例胃癌患者(A组)、27例胃癌前病变患者(B组)及21例健康人(C组)外周血浆中miR-27a、miR-181b的表达水平.结果 与C组相比,A组和B组血浆中miR-27a、miR-181b的表达明显增加(P＜0.01或P＜0.05),ROC曲线下面积分别为0.876、0.770和0.769、0.749;而A组和B组miR-27a、miR-181b表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 外周血浆中miR-27a、miR-181b有作为胃癌早期诊断标志物的潜力.     

雷公藤甲素通过miR-320bAR轴对前列腺癌细胞的抑制作用

目的 观察雷公藤甲素(triptolide, TPL)对前列腺癌细胞恶性生物学行为的作用,探究其作用机制。方法 用实时荧光PCR(real-time fluorescence PCR,RT-PCR)检测LNCaP、PC-3、DU145前列腺癌细胞、RWPE-1人正常前列腺上皮细胞中miR-320b和雄激素受体(androgen receptor, AR)mRNA的表达水平。用不同剂量的TPL处理PC-3细胞,用MTT法检测细胞的增殖活力。用RT-PCR检测miR-320b和AR的表达水平。用6.25 nmol·L^(-1) TPL处理细胞,在TPL处理的基础上转染miR-320b NC/mimics,用Transwell和平板克隆形成实验检测细胞的侵袭和克隆能力。用Western blot检测AR及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)过程中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达水平。用荧光素酶实验验证miR-320b与AR的靶向关系。结果 与RWPE-1人正常前列腺上皮细胞比较,miR-320b和AR分别在前列腺癌细胞中呈低表达和高表达状态(P<0.01)。与Control组比较,TPL可上调PC-3细胞miR-320b的表达水平、下调AR的表达水平,抑制细胞的增殖、侵袭能力,抑制AR、N-cadherin和vimentin的表达、上调E-cadherin的表达水平(P<0.05)。与TPL组比较,miR-320b可提高TPL对PC-3细胞侵袭和增殖能力的抑制作用,抑制AR、N-cadherin和vimentin的表达、上调E-cadherin的表达(P<0.05)。荧光素酶实验显示,AR是miR-320b的潜在靶基因,miR-320b对AR存在显著调控作用(P<0.01)。结论 TPL可能通过miR-320b/AR轴抑制前列腺癌细胞的恶性生物学行为。     

微小RNA-130a和微小RNA-130b在肝硬化患者血清中的表达及其意义

目的研究肝硬化患者血清中微小RNA-130a(miR-130a)和miR-130b的表达及意义。方法收集15例肝硬化患者和15例健康志愿者的肘静脉血液,并分别设为试验组和对照组。用反转录聚合酶链式反应法检测血清中的miR-130a和miR-130b的表达情况。结果试验组和对照组的miR-130a相对表达量分别为(1.57±0.36)和(1.40±0.46),miR-130b相对表达量分别为(2.18±0.60)和(1.64±0.26),差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论 miR-130a和miR-130b在肝硬化患者血清中的表达量显著高于健康志愿者,其很有可能作为肝硬化早期诊断指标。     

微小RNA-26b在肺腺癌中的表达及意义

目的探讨微小RNA-26b(miR-26b)在肺腺癌中的表达及意义。方法采用实时荧光定量PCR检测38例肺腺癌患者癌组织及其癌旁组织中miR-26b的表达,分析miR-26b的表达与其临床病理特征之间的相关性。结果肺腺癌组织miR-26b mRNA的表达低于癌旁组织(0.5653±0.3315 vs.3.1470±0.4584)(P<0.01)。miR-26b的表达与患者TNM分期、病理分级、淋巴结转移和分化程度相关(P<0.05),尚未发现与性别、年龄、吸烟和肿瘤直径存在相关关系(P>0.05)。结论 miR-26b在肺腺癌组织中低表达,可作为评估肺腺癌患者预后的潜在标志物。     

miR-130b与碘难治性分化型甲状腺癌的关系研究

目的探讨miR-130b与碘难治性分化型甲状腺癌(RR-DTC)的关系。方法选取2013年1月至2015年12月在我院就诊并行~(131)I照射治疗的远处转移DTC患者104例,随访36个月,根据治疗结果,将患者分为RR-DTC组(41例)和碘治疗有效组(R-DTC组)(63例),检测患者~(131)I照射治疗前肿瘤组织miR-130b的表达水平,观察患者血清甲状腺球蛋白(Tg)的变化趋势及其与miR-130b的相关性。结果①~(131)I照射治疗前,R-DTC组和RR-DTC组患者肿瘤组织中miR-130b水平分别为(0.79±0.10)和(0.43±0.07),RR-DTC组患者miR-130b水平明显低于R-DTC组,而血清Tg水平高于R-DTC组(P<0.05)。治疗后,RR-DTC组患者Tg同比下降率和T/B分别为10.13%±9.87%和4.29%±1.64%,明显低于R-DTC组(P<0.05)。②Spearman相关性分析显示,Tg同比下降率、T/B与miR-130b呈正相关性(r_s=0.928、0.896,P<0.05)。③ROC曲线分析显示,miR-130b诊断RR-DTC的截断值为0.485,曲线下面积为0.662。根据miR-130b的截断值,将RR-DTC组患者分为<0.485亚组(23例)和≥0.485亚组(18例)。④随访期间,<0.485亚组和≥0.485亚组RR-DTC患者3年生存率分别为34.78%、50.0%,经Log-rank检验,差异无统计学意义(P>0.05)。结论甲状腺癌组织miR-130b表达有望成为难治性分化型甲状腺癌潜在的辅助诊断指标之一。     

下调miR-19b表达对骨肉瘤MG63细胞侵袭、迁移及Wnt/β-Catenin通路的影响

摘要：目的:探讨下调miR-19b表达对骨肉瘤MG63细胞侵袭、迁移能力的影响,并探讨可能机制。方法:采用脂质体转染法转染人骨肉瘤MG63细胞,实验分为空白组、miR-19b inhibitor NC组、miR-19b inhibitor组,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖情况,通过Transwell小室法检测各组细胞侵袭、迁移情况,通过免疫印迹(WB)法检测侵袭、迁移以及Wnt/β-连环蛋白(β-Catenin)通路相关蛋白表达情况。结果:与空白组、miR-19b inhibitor NC组相比,miR-19b inhibitor组miR-19b相对表达量、转染后48 h、72 h吸光度(A)值、侵袭与迁移细胞数、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Wnt、细胞核β-Catenin表达水平显著降低(P<0.05),细胞质β-Catenin表达水平显著升高(P<0.05)。结论:下调miR-19b表达可能通过抑制Wnt/β-Catenin信号通路激活,从而抑制骨肉瘤MG63细胞侵袭、迁移。     

miR-155在消化道肿瘤中的研究进展

microRNAs(miRNAs)是一种非编码的小分子RNA,调控转录后的基因表达水平。microRNA-155(miR-155)是典型的多功能miRNA,参与了多种生物学过程,包括造血、炎症、免疫和肿瘤等。消化道肿瘤是严重威胁人类生命健康的疾病,近年来研究表明miR-155与消化道肿瘤的发生发展关系密切,在肿瘤的发病机制、诊断、治疗及预后等方面有重要作用。本文就miR-155在消化道肿瘤的研究现状做一综述。     

microRNA-378b对心脏成纤维细胞纤维化水平的影响及机制研究

目的 研究 microRNA-378b(miR-378b)对心脏成纤维细胞的纤维化水平的影响及分子机制。方法 小鼠行慢性心肌梗死手术构建体内心肌纤维化模型,利用转化生长因子-β(TGF-β)诱导原代心脏成纤维细胞发生纤维化以构建体外心肌纤维化模型;实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)法检测 2 种纤维化模型中 miR-378b 的表达水平;Western blotting 法检测 miR-378b 模拟物和抑制物对心脏成纤维细胞 α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA,心肌纤维化特异性指标)表达量的影响;TargetScan、miRDB 和 miRWalk 软件预测 miR-378b 的下游靶基因,双荧光素酶实验验证 miR-378b 与生长相关蛋白 43(GAP43)的靶向关系;Western blotting 法检测 miR-378b 模拟物和抑制物对心脏成纤维细胞 GAP43 表达的影响;Western blotting 法检测体内和体外 2 种纤维化模型中 GAP43 的蛋白水平。结果 小鼠心肌纤维化模型组 miR-378b 表达量较假手术组显著降低(P<0.01),心脏成纤维细胞 TGF-β处 理 组 miR-378b表达量较对照组显著降低(P<0.001)。在基础水平和 TGF-β 处理后,与对照模拟物组比较,miR-378b 模拟物显著降低细胞的α-SMA蛋白水平(P<0.05);在基础水平,与对照抑制物组比较,miR-378b抑制物可显著升高细胞的α-SMA蛋白水平(P<0.05);但在 TGF-β 处理的细胞中,miR-378b 抑制物不能进一步增加α-SMA蛋白表达量。GAP43 是 miR-378b 直接作用的下游靶基因,与对照组比较,miR-378b可负调控心脏成纤维细胞GAP43的蛋白表达水平(P<0.01)。心肌纤维化模型组小鼠心肌 GAP43 蛋白表达量较假手术组显著升高(P<0.01),心脏成纤维细胞 TGF-β处理组GAP43蛋白表达量较对照组显著升高(P<0.001)。结论 miR-378b 可抑制心脏成纤维细胞纤维化,该功能可能通过抑制其下游靶基因 GAP43 发挥作用。     

miRNA在肝癌患者血清中的表达及意义

目的 探讨肝细胞性肝癌(HCC)患者血清中miR-27a、miR-30a、miR-106b、miR-490这四种miRNAs的表达变化及临床意义。方法 选取50例肝癌患者为研究组、50例慢性肝病患者及50例健康体检者为对照组,应用实时荧光定量PCR法检测各组血清四种miRNAs表达水平,并比较其与患者临床病理特征之间的关系,应用受试者回归(ROC)曲线分析miRNA对于肝癌诊断的价值。结果 血清miR-27a、miR-30a、miR-490在HCC患者、慢性肝病患者及健康对照中表达无显著差异(P＞0.05),HCC患者血清miR-106b表达水平较正常对照组及慢性肝病组均显著升高(P＜0.05);血清miR-106b表达水平在不同肿瘤分化程度及临床分期有显著差异(P＜0.05);ROC曲线分析显示血清miR-106b区分肝癌与慢性肝病及正常人的临界值为0.038,曲线下面积( AUC)为0.782,诊断敏感度为0.82,特异度为0.75。结论 miR-106b在肝癌患者血清中表达升高显著,可作为肝癌诊断与预后评估的有效指标。