单磷酸类脂A预处理对内毒素血症小鼠丙二醛生成的影响

迄今 ,脓毒症休克仍旧是威胁人类生命的重要原因之一。脓毒症休克的发病原因多是由革兰氏阴性菌内毒素引起的 ,其发病机制非常复杂 ,尚无有效的治疗措施。单磷酸类脂Ａ(ＭｏｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌＬｉｐｉｄＡ ,ＭＰＬＡ)为脂质Ａ的无毒衍生物 ,它不仅毒性小 ,且保留了脂多糖 (Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ,ＬＰＳ)的免疫调节性[1～ 3] 。本实验旨在探讨ＭＰＬＡ预防性保护内毒素血症小鼠的可能机制。1　材料和方法1 1　主要试剂 :ＬＰＳ(ＬｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅＯ111∶Ｂ4 ,Ｓｉｇｍａ) ;ＭＰＬＡ(大肠杆菌细菌…     

LPS结合蛋白的结构和功能

ＬＰＳ结合蛋白（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ，ＬＢＰ） ,是存在于正常人和动物血清中的一种糖蛋白。因其对细菌内毒素（ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ） ,即脂多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ,ＬＰＳ）中的类脂体Ａ具有高度亲和性 ,易与ＬＰＳ结合而命名〔１ -３〕。ＬＢＰ最早由Ｔｏｂｉａｓ等〔１〕于１９８６年 ,从急性反应期的兔血清中发现并分离 ;Ｌｅｉ等〔２〕于１９８８年 ,从大鼠体内分离出ＬＢＰ；Ｒｏｂｅｒｔ等〔３〕又于次年从人和其它动物体内分离出各自的ＬＢＰ。ＬＢＰ是一种…     

灵杆菌LPS的抑瘤作用研究

灵杆菌ＬＰＳ (ＢａｃｔｅｒｉｕｍＰｒｏｄｉｇｉｏｓｕｍＬＰＳ ,ＢＰ ＬＰＳ)是从非致病性革兰氏阴性菌 (产色型灵杆菌ＢＰ Ｓ0 0 3号 )中提取的一种活性物质。以三氯乙酸法(ＴｒｉｃｈｌｏｒｏａｃｅｔｉｃＡｃｉｄ ,ＴＣＡ )及酚水法(ＰｈｏｎｅｌＷａｔｅｒ,ＰＷ )两种不同工艺提取的ＢＰ ＬＰＳ ,进行了抑瘤试验。产色型灵杆菌ＢＰ Ｓ0 0 3号 (来源于黑龙江省应用微生物研究所 )作为菌种 ,经发酵后收集菌体 ,分别经ＴＣＡ法与ＰＷ法提取纯化得ＢＰ ＬＰＳ。ＴＣＡ法提取物简称ＢＰ(Ｔ) ＬＰＳ ;ＰＷ法提取物简称ＢＰ(Ｐ) ＬＰＳ。…     

N-乙酰半胱氨酸对LPS诱导离体兔肺动脉反应性改变的影响

目的 :内毒素的活性成分脂多糖 (ＬＰＳ)所致动物肺损伤常伴有肺动脉高压 (ＰＡＨ)。ＬＰＳ是否通过抑制肺动脉内皮依赖性舒张作用而促进ＰＡＨ的形成 ,目前还不清楚。Ｂｅｒｎａｒｄ等报道Ｎ -乙酰半胱氨酸 (Ｎ -Ａｃｅｔｙｌｃｙｓｔｅｉｎｅ ,ＮＡＣ)可改善内毒素所致的肺损伤。本研究旨在离体水平观察ＮＡＣ对ＬＰＳ引起的肺血管反应性改变有何影响 ,并探讨其细胞保护作用。方法 :制备离体兔肺动脉环。①对照组 ,培养基中加入生理盐水溶剂 ;②ＬＰＳ组 ,培养基中加入ＬＰＳ 4μｇ/ｍＬ ;③ＬＰＳ ＮＡＣ组 ,培养基中含ＬＰＳ 4μｇ/ｍ…     

甘氨酸与多粘菌素B在拮抗内毒素的协同效应研究

在本室发现甘氨酸具有拮抗内毒素（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ,ＬＰＳ）作用的基础上,本研究从以下三个方面观察甘氨酸和多粘菌素Ｂ联合应用对内毒素的拮抗作用：第一部分观察甘氨酸、多粘菌素Ｂ联合用药在体外与内毒素作用后,静脉注入体内引起的致热性变化,观察指标包括平均体温反应曲线、最大体温反应幅度、体温反应指数;第二部分观察甘氨酸和多粘菌素Ｂ联合拮抗内毒素最佳组合比例;第三部分观察甘氨酸、多粘菌素Ｂ联合用药对小鼠的毒性。结果如下：１－多粘菌素Ｂ、甘氨酸在拮抗内毒素时有明显协同作用（Ｐ＜０－０５）…     

慢性重型肝炎患者血中LPS、sCD14变化的临床意义

我们检测 2 4例慢性重型肝炎 (慢重肝 )患者血中内毒素(ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ,ＬＰＳ)及可溶性ＣＤ14(ｓＣＤ14)的水平 ,现将结果报告如下。1　材料和方法1 1　检测对象　临床确诊慢重肝患者 2 4例 (分期例数见表1) ,健康献血员对照组 10例。慢性乙型肝炎 (慢乙肝 )患者16例。1 2　检查方法　内毒素的测定采用基质显色法 ,试剂盒购自上海伊华临床医学科技公司 ,血浆内毒素浓度≥ 5 0ｐｇ/ｍｌ定为内毒素血症 (ＥＴＭ)。ｓＣＤ14和肿瘤坏死因子 (ＴＮＦ α)的测定应用ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法 ,试剂盒均由深圳晶美生物工程有…     

用细菌／杆状病毒系统在昆虫细胞中表达HIV—2外膜糖蛋白gp105和跨膜糖蛋白g

目的 用细菌／杆状病毒（Ｂａｃ ｔｏ Ｂａｃ）表达系统在昆虫细胞Ｓｆ９中表达ＨＩＶ－２外膜糖蛋白ｇｐ１０５跨膜糖蛋白ｇｐ３６,为研制艾滋病疫苗和诊断试剂奠定基础。方法 分别将ＨＩＶ－２外膜蛋白ｇｐ１０５和跨膜蛋白ｇｐ３６全基因序列克隆到杆状病毒转座载体ｐＦａｓｔ Ｂａｃ ＴＨａ和ｐＦａｓｔ Ｂａｃ ＴＨｂ中我角体启动子下游,构建成重组转座载体ｐＦａｓｔ Ｂａｃ ＨＴａ－ｐｇ１０５和ｐＦａｓｔ Ｂａｃ ＨＴｂ－ｇｐ３６,利用细菌／杆状病毒（Ｂａｃ ｔｏ Ｂａｃ）表达系统筛选重组杆状病毒,并在昆虫细胞Ｓｆ９中表达ＨＩＶ－２的ｇｐ１０５和ｇｐ３６。结果 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析结果表明,ｐｇ１０５基因表达产物为－６６０００ｕ糖蛋白,ｐｇ３６基因则表达－４１０００ｕ糖蛋白,与天然产物一致。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ结果显示：     

八肽胆囊收缩素对脂多糖诱导大鼠肺组织 NF-κB活性增高的抑制作用

目的和方法 :研究证实 ,内毒素激活核转录因子κＢ(ｎｕｃｌｅａｒｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｋａｐｐａＢ ,ＮＦ -κΒ) ,进而诱导前炎性因子大量生成 ,是内毒素休克和急性肺损伤的关键发病学环节。防止ＮＦ -κＢ激活或抑制其活性已成为治疗急性肺损伤和内毒素休克的新途径。我们以往的研究发现 ,脑肠肽八肽胆囊收缩素(ｃｈｏｌｅｃｙｓｔｏｋｉｎｉｎｏｃｔａｐｅｐｔｉｄｅ,ＣＣＫ - 8)具有明显的抗内毒素休克效应 ,可提高平均动脉压 ,降低肺动脉高压 ,减轻肺组织的病理变化 ,对抗脂多糖 (ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈｒｉ…     

脂多糖诱发急性肺炎时中性粒细胞碱性磷酸酶细胞化学定位观察

目的 探讨脂多糖诱发急性肺炎时，大白鼠中性粒细胞碱性磷酸酶（ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＬＰ）的超微定位及其在炎平过程中的相关功能。方法 采用腹腔内（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ，一种提自大肠杆菌的内毒素）的方式诱发大白鼠急性肺炎，使中性粒细胞在肺内不同部位集聚。用铈作为捕捉剂，以检测ＡＬＰ活性。对照组为介质中除去底物或加入２ｍｍ０ｌ／Ｌ左旋咪唑。电镜下行酶活性定位     

酵母蛋白质组氨酸激酶在昆虫细胞中的表达

以ＤＮＡ聚合酶链式反应从酵母基因组ＤＮＡ中钓取编码酵母组氨酸激酶活性区的ＤＮＡ，将此ＤＮＡ克隆入Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ转递质粒。然后用Ｂａｃｕｌｏ Ｇｏｌｄ ＤＮＡ与重组质粒ｐＶＬ１３９３共转染昆虫细胞（ＳＦ９），在感染了重组Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ的ＳＦ９细胞中表达了ＹＨＫ活性蛋白，该蛋白在体外组氨酸激酶试验中表现出自身组氨酸残基磷酸化的活性。     

脂多糖对人脐静脉血管内皮细胞的直接损伤作用

血管内皮细胞 (ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ,ＥＣ)炎症反应是感染性休克向不良方向演变的重要原因 ,有关激活剂 (ＬＰＳ、ＩＬ 1)导致ＥＣ活化的研究是败血症病理反应的中心课题。内毒素引起微循环ＥＣ损伤是内毒素性组织损伤的重要环节之一。本实验探讨了ＬＰＳ对体外培养脐静脉ＥＣ的直接损伤作用。1　材料与方法1 1　材料 :ＲＭＰＩ 16 40培养基、ＬＰＳ(Ｓｉｇｍａ产品 )1 2　细胞培养及鉴定 :内皮细胞传 4代。ＰＭＮ的分离采用Ｐｅｒｃｏｌｌ’ｓ分离液 5 0 0ｇ离心 2 0ｍｉｎ取白细胞层用培养基稀释成2× 10 6 ｍＬ备用。1 3　…     

54例非霍奇金病Bcl-2、Bax、Fas和Fas-L蛋白表达及其意义

研究凋亡相关蛋白Ｂｃｌ－２、Ｂａｘ、Ｆａｓ和Ｆａｓ－Ｌ在非霍奇金淋巴瘤中的表达及意义。方法应用免疫组化Ｓ－Ｐ法对５４例ＮＨＬ进行检测。结果：（１）Ｂｃｌ－２、Ｂａｘ、Ｆａｓ和Ｆａｓ－Ｌ阳性率分别为５０％、８３．８％、８８．９％和８８．７％。     

外源性一氧化氮抗内毒素致大鼠肺微血管 高通透性的作用及机制研究

目的 :肺内中性粒细胞 (ＰＭＮｓ)聚集及微血管通透性增高是内毒素活性成分脂多糖 (ＬＰＳ)致急性肺损伤 (ＡＬＩ)的重要发病环节。一氧经氮 (ＮＯ)对微血管通透性的病理生理作用迄今尚无定论。本实验旨在观察气管内滴注ＮＯ供体硝普钠 (ＳＮＰ)能否通过促进ＰＭＮ凋亡 ,减轻肺内ＰＭＮ聚集 ,起到抗ＬＰＳ所致的以微血管通透性增高为特征的ＡＬＩ的作用。方法 :动物实验采用气管内滴注给药。分假手术 (Ｓｈａｍ)组、ＬＰＳ( 1 0 0 μｇ/只 )组、ＬＰＳ ＳＮＰ( 5μｇ/只 )组。 6ｈ后测定支气管肺泡灌洗液 (ＢＡＬＦ)中蛋白含量、肺组织中伊…     

鼠抗人Fas单克隆抗体的制备及鉴定

采用Ｊｕｒｋａｔ细胞Ｂａｌｂ／ｃ小鼠制备１株抗人ＦａｓｍＡｂ２Ａ１,它能特异性识别Ｊｕｒｋａｔ,Ｒａｊｉ,ＴＨＰ－１细胞膜表面５０ＫＤ左右的蛋白,并能与ＳｒＦａｓ标准蛋白反应,其识别的细胞膜蛋白与单抗特异性抗人Ｆａｓ ＰｃＡｂＮ－１８相一致。ｌｅｑ     

慢乙肝肠源性内毒素血症患者血清中脂多糖结合蛋白、sCD14的检测

慢性乙型肝炎 (简称慢乙肝 )常伴有肠源性内毒素血症(ＩＥＴＭ )。脂多糖 (ＬＰＳ )与其在单核 /巨噬细胞表面受体ＣＤ14的结合 ,可诱导在单核 /巨噬细胞表面分泌、释放ＴＮＦ α,进而加重肝细胞的损害。脂多糖结合蛋白 (ＬＢＰ )影响并调节ＬＰＳ与ＣＤ14的结合及对肝细胞的毒性。我们测定了慢乙肝患者血清中ＬＢＰ、ｓＣＤ14水平 ,旨在探讨其在慢乙肝肠源性内毒素血症中的作用。1　材料和方法1 1　病例选择　 36例慢乙肝均为住院病人 ,男 31例、女 5例 ,年龄 2 1～ 45岁。其中轻度 10例、中度 12例、重度 14例。所有病例均经肝活检并以活…     

PCR-RFLP-SSCP及测序用于霍乱弧菌ctx-AB基因多态性的研究

建立ＰＣＲ ＲＦＬＰ ＳＳＣＰ及测序方法 ,用于分析霍乱弧菌肠毒素ＡＢ(ｃｔｘ ＡＢ)基因多态性。针对ｃｔｘ ＡＢ基因设计引物 ,扩增片段为 5 2 8ｂｐ ,包括ｃｔｘ Ｂ编码基因375ｂｐ ,引物序列为 5′ ＧＧＴＧＴＡＡＡＡＴＴＣＣＴＴＧＡＣＧ 3′和 5′ ＧＧＴＴＣＧＡＴＧＡＴＧＡＧＡＡＧＣ 3′。ＰＣＲ产物经ＲｓａⅠ酶切为317ｂｐ和 2 11ｂｐ 2个片段。对酶切产物进行单链构象多态性 (ＳＳＣＰ)分析 ,银染作者单位 :5 10 5 15广州 ,第一军医大学流行病学教研室 (芮勇宇 ,俞守义 ,王红 ) ;广东省卫生防疫站 (蔡初的 ,李建基 ,钟豪杰 )…     

人FascDNA的克隆及其在大肠杆菌中表达的研究

为获得高质量及充足的Ｆａｓ蛋白，采用ＰＣＲ技术调整Ｆａｓ基因的开放阅读框架，使之与生物素化蛋白基因阅读框架一致；缺失了ＦａｓｃＤＮＡ基因的起始密码子并增加一个大肠杆菌偏性终止密码子，构建ＦａｓｃＤＮＡ和生物素化融合原核表达质粒ＰｉｎＰｏｉｎｔ－Ｆａｓ。将重组质粒转入大肠杆菌ＨＢ１０１，经５００ｍｍｏｌＩＰＴＧ在３７℃条件下诱导４ｈ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检测融合蛋白在大肠杆菌得以高效表达，表达量为细菌总蛋白的１３．８％。用亲和层析树脂对生物素化融合蛋白进行亲和层析纯化，得到Ｆａｓ重组的蛋白，且表达的Ｆａｓ融合蛋白具有抗体结合活性。此蛋白的表达成功将解决Ｆａｓ膜蛋白不易提取的难题，为深入研究Ｆａｓ提供了良好材料来源     

第三相蛋白分离结合水平双相凝胶电泳对福赛类杆菌蛋白分离影响的研究

福赛类杆菌菌株 (ＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓｆｏｒｓｙｔｈｕｓＡＴＣＣ430 37)在以ＴＳＢ为基础培养基中加入酵母提取物 ,氯化血红素 ,维生素Ｋ3,ＤＴＴ及ＮＡＭ ,37℃厌氧 (80 %Ｎ2 ,10 %Ｈ2 ,10 %ＣＯ2 )培养 7ｄ ,超声波破碎细胞 ,然后用ＲｅａｄｙＰｒｅｐＴＭ ＳｅｑｕｅｎｔｉａｌＥｘｔｒａｃｔｉｏｎ试剂盒按说明书对超声破碎细菌全细胞蛋白进行分步系列提取。提取蛋白液采用ＩｍｍｏｂｉｌｉｎｅＤｒｙＳｔｒｉｐ试剂盒 ,在ｐＨ梯度 3～ 10 ,长度为 110ｍｍ的ＩＰＧ凝胶条上 ,放置于ＭｕｌｔｉｐｈｏｒⅡ水平型电泳仪上 15℃恒温等…     

溶血磷脂酸对大鼠心肌细胞膜Na+-Ca2+交换的影响

本研究采用蔗糖梯度离心法制各大鼠心肌细胞膜,观察溶血磷脂酸（ ＬＰＡ）对心肌细胞膜 Ｎａ~＋－Ｃａ~(２＋)交换的影 响。结果发现ＬＰＡ（１～２０ｎｍｏｌ／Ｌ）呈剂量依赖性和时间依赖性刺激Ｎａ~＋一Ｃａ~（２＋）交换活性增加。Ｇｐｐ（ＮＨ）ｐ呈剂量依赖 性替代ＬＰＡ刺激的Ｎａ~＋－Ｃａ~(２＋)交换活性;ＰＴＸ可抑制ＬＰＡ对Ｎａ~＋－Ｃａ~(２＋)交换的激活;Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ,Ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ,Ｐｒａｚｏｓｉｎ,Ａｔｒｏｐｉｎｅ,Ｌｏｓａｒｔａｎ,ＢＱ１２３和磷脂酰胆碱对ＬＰＡ诱导的Ｎａ~＋－Ｃａ~２＋交换活性无影响,而磷脂酰丝氨酸可增加对照和ＬＰＡ 两组的 Ｎａ~＋－Ｃａ~(２＋)交换活性。这些结果表明 ＬＰＡ可通过 ＰＴＸ敏感的 Ｇ蛋白刺激大鼠心肌细胞膜 Ｎａ~＋－Ｃａ~(２＋)交换活性。     

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