黑逍遥散干预APP/PSI双转基因小鼠海马区Aβ降解相关基因和蛋白表达效应的研究

目的观察黑逍遥散对阿尔茨海默症(Alzheimer disease,AD)小鼠海马区β淀粉样蛋白前体(Amyloid beta precursorprotein,APP)、β淀粉样多肽1-42(β-amyloid1-42 Peptide,Aβ1-42)、糖原合成酶激酶-3β(Glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)、脑啡肽酶(Neprilysin,NEP)、胰岛素抵抗酶(Insulin-degrading enzyme,IDE)基因和蛋白表达的影响。方法 42只APP/PS1双转基因雄性小鼠称重后,按随机原则分为模型组(10只)、阳性对照组(10只)、黑逍遥散高剂量组(11只)、黑逍遥散低剂量组(11只)。10只同月龄、同种系的野生型C57BL/6雄性小鼠为空白组。连续灌胃3个月后,采用Morris水迷宫进行行为学检测,采用qRT-PCR和Western Bloting分别检测小鼠海马区APP(Aβ1-42)、GSK-3β、NEP、IDE基因和蛋白的表达。结果干预3个月后,小鼠逃避潜伏期:模型组较空白组显著延长,用药各组较模型组显著缩短,差异具有统计学意义(P<0.01);小鼠跨原平台次数:模型组较空白组显著减少,用药各组较模型组显著增多,差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。与空白组相比,模型组小鼠海马区APP基因和Aβ1-42蛋白,以及GSK-3β基因和蛋白相对表达量显著升高,NEP与IDE基因和蛋白相对表达量显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05);与模型组相比,各用药组小鼠海马区APP基因和Aβ1-42蛋白以及GSK-3β基因和蛋白相对表达量显著降低,NEP与IDE基因和蛋白相对表达量明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论黑逍遥可通过调节Aβ在海马区的异常代谢等作用,减缓AD小鼠认知能力的损伤。     

知母皂苷对Aβ_(1-42)诱导的皮层神经元突触损伤的保护作用

目的:探讨知母皂苷(SAa B)对Aβ_(1-42)诱导的皮层神经元损伤是否有保护作用。方法:MTT法测皮层神经元细胞存活率;免疫荧光染色法检测神经元突触素(SYP)、突触后致密蛋白95(PSD-95)表达的改变。Western印迹法检测神经元SYP、PSD-95、p-Akt473、p-m TOR蛋白表达水平表达的改变。结果:Aβ_(1-42)作用48 h可使大鼠大脑皮层神经元细胞存活率明显降低,使神经元SYP、PSD-95、p-Akt473和p-m TOR蛋白表达明显降低。SAa B(0.01,0.1,1,5,10μmol/L)可明显对抗Aβ_(1-42)引起的神经元细胞存活率下降,并呈一定浓度依赖性。SAa B也可使SYP、PSD-95、p-Akt473和p-m TOR蛋白表达明显增加。结论:知母皂苷能够抑制Aβ_(1-42)诱导的皮层神经元突触损伤,这种作用可能与PI3K/Akt/m TOR信号转导通路有关。     

海马注射β-淀粉样蛋白对BACE1 mRNA的影响及通络救脑口服液的干预作用

目的:探讨大鼠大脑海马注射β-淀粉样蛋白1-40对BACE1mRNA表达的影响及通络救脑口服液对其的干预作用。方法:采用大脑海马立体定向注射β-淀粉样蛋白1-40诱导Alzheimer's病动物模型后,药物干预4周,第5周应用实时定量PCR法检测BACE1mRNA表达。结果:模型组BACE12-ΔΔCt为4.67±0.52,2-ΔΔCt显著多于假手术组(1.07±0.08,P<0.01),表明模型组BACE1mRNA表达上调;与模型组比较,盐酸多萘哌齐组(1.80±0.23)、通络救脑口服液48mg、24mg、12mg/kg·d分别为2.92±0.22、1.54±0.25和0.54±0.11,2-ΔΔCt显著减少,表明BACE1mRNA表达下调。结论:大脑海马注射β-淀粉样蛋白1-40后大鼠海马组织BACE1mRNA表达水平明显增高,通络救脑口服液可以抑制海马组织BACE1mRNA的表达,从而发挥其抗老年性痴呆的作用。     

黑逍遥散对AD模型小鼠海马区Aβ1-42,GSK-3β,NEP,IDE表达的影响

目的:研究黑逍遥散对阿尔茨海默症(Alzheimer disease,AD)小鼠海马区β淀粉样多肽1-42(β-amyloid 1-42peptide,Aβ1-42),糖原合成酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β),脑啡肽酶(neprilysin,NEP),胰岛素抵抗酶(insulindegrading enzyme,IDE)表达的影响。方法:42只APP/PSI双转基因小鼠称体质量后,按随机原则分为4组,分别为模型组,阳性药组(盐酸多奈哌齐,3. 25 mg·kg-1),黑逍遥散高、低剂量组(6,3 g·kg-1)。10只同月龄、同种系的野生型C57BL/6J小鼠为正常组。连续灌胃12周后,Morris水迷宫予以行为学检测,苏木素-伊红(HE)染色观察海马神经元的形态改变,采用免疫组化技术分别检测小鼠海马区Aβ1-42,GSK-3β,NEP,IDE蛋白的表达。结果:治疗3个月后,与正常组比较,AD模型组小鼠,逃避潜伏期均延长,跨原平台次数减少(P 0. 01),小鼠海马区Aβ1-42,GSK-3β蛋白阳性表达显著增强,NEP与IDE蛋白阳性表达显著减弱(P 0. 01),HE染色显示AD模型小鼠海马神经细胞损伤严重;与模型组比较,用药各组小鼠的逃避潜伏期均显著缩短、跨原平台次数均显著增加(P 0. 05,P 0. 01),小鼠海马区Aβ1-42,GSK-3β蛋白阳性表达显著减弱,NEP与IDE蛋白阳性表达显著增强(P 0. 05,P 0. 01),HE染色显示各治疗组小鼠海马神经细胞损伤减轻。结论:黑逍遥散能够显著改善AD小鼠的学习记忆能力,可能与调节Aβ在海马区的异常沉积和降解作用等方面来减轻AD小鼠认知能力损伤有关。     

滋补脾阴法对脾阴虚糖尿病大鼠脑组织β淀粉样蛋白及胰岛素降解酶的调节作用

目的：观察脾阴虚糖尿病大鼠海马及大脑皮质中不同形式的β淀粉样蛋白（Aβ）、胰岛素降解酶（IDE）变化,及其在脾阴虚糖尿病认知功能障碍中的作用,并观察滋补脾阴法对其影响。方法：将大鼠随机分为空白对照组（Cont）、糖尿病组（DM）、脾阴虚组（pi）、脾阴虚糖尿病组（piDM）、滋补脾阴方药治疗组（ZBPYR）5 组。采用梯度离心的方法提取可溶性与不可溶Aβ,通过ELISA 方法测定各组大鼠海马及大脑皮质中可溶性与不可溶的Aβ1-42 及Aβ1-40 的含量变化,通过Western blot 方法观察各组大鼠海马及皮质中IDE 蛋白表达变化。结果：DM 组、piDM 组大鼠海马、大脑皮质可溶性与不可溶Aβ1-42 均高于Cont 组（P<0.05）,ZBPYR 组较DM 组、piDM 组降低了海马、大脑皮质可溶性与不可溶Aβ1-42 的表达（P<0.05）。DM 组、pi 组、piDM 组大脑皮质可溶性Aβ1-40 较Cont 组增加（P<0.05）,ZBPYR 组较DM 组、piDM 组有所下降（P<0.05）。DM 组、piDM 组海马IDE 蛋白表达较Cont 组降低（P<0.05）,ZBPYR 组海马较DM 组、piDM 组升高（P<0.05）;DM 组、pi 组、piDM 组大鼠大脑皮质IDE 蛋白水平较Cont 组降低（P<0.05）,ZBPYR 组大脑皮质较DM 组降低（P<0.05）。结论：脑组织中Aβ1-42 增加可能是糖尿病大鼠、脾阴虚糖尿病大鼠认知功能障碍的主要病理变化,IDE 表达下降可能是导致Aβ1-42 增加的原因之一,滋补脾阴法可能通过上调IDE 蛋白表达降低Aβ1-42 的含量。     

红花黄色素对Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用研究

目的:探讨红花黄色素对Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其机制。方法:采用Aβ_(1-42)损伤SH-SY5Y细胞模拟体外AD,不同浓度(0. 01、0. 1、1g/l)红花黄色素进行干预。倒置显微镜下观察细胞形态; MTT法测定细胞存活率;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞内Aβ_(1-42)水平; Western Blot检测SH-SY5Y细胞内APP、BACE-1、SAPPα、NEP、IDE、ERK和P-ERK蛋白表达水平。结果:红花黄色素各剂量均能够减少Aβ_(1-42)引起的SH-SY5Y细胞的损伤,使细胞的存活率显著提高,且具有剂量依赖性;ELISA结果显示,红花黄色素0. 1、1g/L可降低SH-SY5Y细胞内的Aβ_(1-42)水平; Western Blot结果显示红花黄色素各剂量均可以上调SAPPα、NEP、IDE和P-ERK蛋白的表达,下调APP和BACE-1蛋白的表达。结论:红花黄色素可以通过调节Aβ_(1-42)相关代谢酶而减少Aβ_(1-42)的含量,发挥抗AD作用,该作用可能与MAPK/ERK通路的激活有关。     

电针通过核转录因子κB通路调节β淀粉样蛋白与Tau蛋白改善糖尿病认知障碍大鼠学习记忆能力

目的:通过观察电针治疗前后糖尿病认知障碍大鼠海马组织中核转录因子κB(NF-κB)、Tau蛋白表达及β淀粉样蛋白(Aβ)含量的变化,探讨电针改善糖尿病认知障碍大鼠学习记忆能力的相关机制。方法:雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组和电针组,每组9只。采用高脂高糖饲料饲养结合腹腔注射链脲佐菌素法复制2型糖尿病认知障碍大鼠模型。电针组针刺“后三里”“内庭”“胰俞”,同侧“后三里”“内庭”连接电针仪,每次20 min,每日1次,每周6次,连续4周。干预后检测大鼠随机血糖,采用Morris水迷宫实验检测逃避潜伏期,ELISA法检测海马组织中Aβ1-42含量,Western blot法检测海马组织中Tau、NF-κB p65蛋白相对表达量,实时荧光定量PCR法检测海马组织中Tau、NF-κB p65 mRNA相对表达量。结果:与正常组比较,模型组大鼠随机血糖、逃避潜伏期、Aβ1-42含量及Tau、NF-κB p65蛋白与mRNA的相对表达量均升高(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,电针组随机血糖、逃避潜伏期、Aβ1-42含量及Tau、NF-κB p65蛋白与mRNA的相对表达量...     

醒脑益智汤对AD模型小鼠tau蛋白及Aβ表达的影响

目的观察醒脑益智汤对AD模型小鼠tau蛋白及Aβ表达的影响。方法小鼠右侧海马注射3μL老化的Aβ_(25-35)(3 nmol/L)构建AD模型,将114只ICR小鼠随机分成假手术组、模型组、醒脑益智汤组(18 g生药/kg)、醒脑益智汤组(9 g生药/kg)、醒脑益智汤组(4.5 g生药/kg)、多奈哌齐组(1.3 mg/kg)。造模后第2天,小鼠分别灌胃给予不同剂量的醒脑益智汤及盐酸多奈哌齐,灌胃28 d。第23天进行Morris水迷宫训练;第28天,ELISA及硫黄素S染色测定Aβ表达;Western blot测定tau蛋白磷酸化位点(Ser 202,Thr 231)、PI3K/Akt及NEP、IDE蛋白表达。结果醒脑益智汤可降低AD模型小鼠的游泳潜伏期,降低Aβ表达,抑制tau蛋白化点(Ser 202,Thr 231)发生磷酸化,增加p-PI3K、p-Akt、NEP及IDE的表达(P0.05)。结论醒脑益智汤可能是通过PI3K/Akt信号通路,抑制tau蛋白位点的异常磷酸化,通过增加NEP、IDE的表达,抑制AD模型小鼠脑内的Aβ表达,进而改善其学习记忆能力。     

脑尔康对阿尔茨海默病模型大鼠海马β淀粉样肽1-42及脑啡肽酶表达的影响

目的:观察复方中药脑尔康对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型大鼠海马β淀粉样肽1-42(β-amyloid peptide1-42,Aβ1-42)及其降解酶——脑啡肽酶(neprilysin,NEP)表达的影响,探讨其抗痴呆的作用机制。方法:48只健康雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、吡拉西坦组和大、中、小剂量脑尔康组,每组8只。除空白对照组外,其余各组大鼠双侧海马CA1区各一次性注射凝聚态Aβ1-425μL(2μg/μL)制备AD模型,空白对照组注射等体积生理盐水。3个剂量脑尔康组大鼠给予脑尔康[60、30、15g/(kg·d)]连续灌胃28d,吡拉西坦组给予吡拉西坦[0.375g/(kg·d)]灌胃,空白对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃。采用Y型电迷宫检测大鼠学习记忆能力,采用免疫组织化学法检测海马内Aβ1-42和NEP的表达。结果:大鼠海马注射Aβ1-42后,与空白对照组比较,模型组大鼠学习记忆能力下降,海马内Aβ1-42表达明显增多(P0.01)。用药干预28d后,与模型组比较,吡拉西坦组和各剂量脑尔康组大鼠学习记忆能力改善(P0.05,P0.01),海马内Aβ1-42的表达下降(P0.05,P0.01),NEP的表达增加(P0.05,P0.01),其中以大剂量脑尔康组效果最佳。结论:复方中药脑尔康可能通过上调AD模型大鼠海马NEP的表达来降低Aβ1-42的含量,改善其学习记忆能力,发挥抗痴呆作用。