针灸治疗对狼疮性肾炎小鼠Th17/Treg细胞及其细胞因子表达影响的研究

目的:观察针灸治疗对狼疮性肾炎小鼠的影响,并探讨针灸对调节性T细胞(Treg)及辅助性T细胞17 (Th17)分化及其细胞因子表达的调控作用。方法:将MRL/lpr狼疮性肾炎模型小鼠随机分为针灸组、地塞米松组、模型组,每组10只。另取10只C57BL/6小鼠作为正常组。采用HE染色法检测小鼠肾脏病理改变;PI单染流式细胞术检测各组小鼠肾脏组织中Th17/Treg比例;采用q RT-PCR和ELISA法检测肾脏中叉头样转录因子3 (Foxp3)、维A酸相关孤儿受体-γt (RORγt)及白细胞介素-17 (IL-17)的水平。结果:与正常组比较,模型组肾小球肾炎、间质性肾炎以及血管病变评分、Th17/Treg比值及RORγt、IL-17蛋白及mRNA表达水平均显著升高(P<0.05),Foxp3蛋白及mRNA表达水平均下降(P<0.05)。与模型组比较,地塞米松组、针灸组肾小球肾炎、间质性肾炎以及血管病变评分、Th17/Treg比值及肾脏组织RORγt、IL-17蛋白及m RNA表达水平均显著降低(P<0.05);Foxp3蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05)。结论:针灸能显著减少狼疮性肾炎小鼠肾脏RORγt及IL-17表达,增加Foxp3水平,调控Th17/Treg比例,改善肾脏病理改变,从而对MRL/lpr狼疮肾炎小鼠肾脏起到保护作用。     

黄芪糖蛋白对胶原诱导性关节炎小鼠Th17/Treg细胞免疫平衡的影响

目的研究16k D黄芪糖蛋白对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型小鼠Th17/Treg细胞免疫平衡的影响,探讨黄芪糖蛋白治疗胶原诱导性关节炎小鼠的免疫作用机理。方法采用雄性Balb/c小鼠建立牛Ⅱ型胶原诱导性关节炎小鼠模型,将造模成功的小鼠随机分为CIA模型组、氢化可的松阳性对照组、黄芪糖蛋白高、中、低剂量组,另设空白对照组;各治疗组腹腔注射药物14天,对照组与模型组注射等体积生理盐水。采用流式细胞术检测各组小鼠外周血CD3~+CD4~+IL-17A~+Th17细胞、CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞比例;Western blot法检测各组小鼠脾组织中维甲酸相关孤独受体γt(retinoid-related orphan receptorγt,RORγt)和叉头状转录因子3(forkhead box protein 3,Foxp3)的蛋白表达水平。结果流式检测结果显示,黄芪糖蛋白可显著降低模型组小鼠外周血中CD3~+CD4~+IL-17A~+Th17细胞比例(P0.01),提高CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞的比例(P0.01)。Western blot结果显示黄芪糖蛋白可显著降低模型组小鼠脾组织中RORγt的表达(P0.01),提高Foxp3的表达(P0.01)。结论黄芪糖蛋白提高Foxp3的表达水平,降低RORγt的表达水平,恢复Th17/Treg细胞之间的平衡,可能是黄芪糖蛋白治疗胶原诱导性关节炎小鼠的机制之一。     

玉屏风颗粒对变应性鼻炎大鼠Th17/Treg平衡及相关细胞因子的影响

目的研究玉屏风颗粒对变应性大鼠Th17/Treg免疫平衡的影响。方法采用OVA制备AR大鼠模型,大鼠随机分为正常组、模型组、氯雷他定组、玉屏风颗粒组(12、6 g/kg)。各组干预后评估大鼠AR行为学总分,HE和AB-PAS染色观察鼻黏膜组织病变情况,ELISA检测AR大鼠血清中的IL-17、TGF-β1水平,RT-PCR检测鼻黏膜组织中RORγt mRNA、Foxp3 mRNA的表达,Western blot检测鼻黏膜组织中RORγt、Foxp3蛋白表达。结果与模型组比较,玉屏风颗粒组(12、6 g/kg)大鼠挠鼻次数、打喷嚏次数等行为学总分降低(P0.05);上皮细胞结构完整、少量炎症细胞浸润、杯状细胞化生明显减少;血清中的IL-17水平降低、TGF-β1水平升高(P0.05);鼻黏膜RORγt mRNA表达降低、Foxp3 mRNA表达升高(P0.05);鼻黏膜组织RORγt/Foxp3蛋白表达比例升高(P0.05)。结论玉屏风颗粒能明显改善变应性大鼠鼻黏膜炎性症状,其作用机制可能与调节Th17/Treg平衡及相关细胞因子有关。     

消水方联合顺铂对肺癌移植瘤胸腔积液小鼠模型Th17/Treg免疫平衡的影响

目的:探讨消水方联合顺铂对肺癌移植瘤胸腔积液小鼠模型Th17/Treg细胞免疫平衡的影响。方法:将75只C57BL/6小鼠随机分为消水方(33.5 g·kg~(-1))组、顺铂(6 mg·kg~(-1))组、消水方(27 g·kg~(-1))+顺铂(6 mg·kg~(-1))组、模型组、空白组。除空白组小鼠胸腔内注射磷酸盐缓冲液(PBS)外,其余各组小鼠均采用Lewis肺癌细胞胸腔注射建立模型,连续给药10 d后各组取10只小鼠处死,采用流式细胞技术检测外周血中Th17,Treg细胞数量;流式微球阵列法(CBA)以及酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血中白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-17A(IL-17A),白细胞介素-21(IL-21),白细胞介素-23(IL-23)和转化生长因子-β1(TGF-β1)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠脾组织维甲酸相关孤核受体γt(RORγt),叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)mRNA及蛋白表达。结果:各组小鼠外周血Th17,Treg细胞数量均高于空白组(P0.05,P0.01)。其中消水方+顺铂组、消水方组较模型组能明显增加Th17细胞数量(P0.05),降低Treg细胞数量(P0.01)。消水方+顺铂组IL-6,IL-17A,IL-21含量分别较其余各组均显著升高(P0.01);消水方+顺铂组较消水方组、模型组IL-23含量升高(P0.05),TGF-β1含量降低(P0.05)。与顺铂组、模型组比较,消水方+顺铂组、消水方组可上调脾组织中RORγt mRNA表达(P0.01),下调Foxp3 mRNA表达(P0.05)。与模型组比较,消水方+顺铂组可上调脾组织RORγt蛋白表达(P0.05),下调Foxp3蛋白表达(P0.01)。结论:消水方联合顺铂可能通过上调Th17细胞水平,下调Treg细胞水平,从而纠正Th17/Treg免疫失衡,发挥抑制MPE作用。     

疏肝平喘方通过转化生长因子-β1/Smad信号通路对哮喘小鼠免疫平衡的影响

目的：阐明疏肝平喘方对哮喘小鼠维甲酸相关核孤儿受体γt（RORγt）/叉头框蛋白P3（Foxp3）以及辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）平衡的干预作用,对转化生长因子-β1（TGF-β1）/Smad信号通路的影响。方法：建立空白对照组、哮喘模型组、疏肝平喘组及地塞米松组实验动物模型。酶联免疫吸附试验检测肺组织匀浆中白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-17A（IL-17A）和TGF-β1水平,流式细胞仪检测肺组织中Th17/Treg细胞量,蛋白质印迹法检测肺组织中RORγt、Foxp3的蛋白表达,以及逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肺组织TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA表达水平。结果：疏肝平喘方能够降低哮喘小鼠肺组织IL-6、TGF-β1,与地塞米松比较,差异均有统计学意义（均P<0.05）,调节IL-10、IL-17A,与地塞米松组相当（均P>0.05）;Th17/Treg细胞量,RORγt、Foxp3的蛋白表达量,与地塞米松相当（均P>0.05）。与哮喘模型组比较,疏肝平喘方组、地塞米松组的TGF-β1、Smad2、Smad3的mRNA表达水平下降,而Smad7的mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论：疏肝平喘方在改善气道炎症方面,和地塞米松疗效相当,是通过TGF-β1/Smad信号通路,从而调节哮喘小鼠的Th17/Treg免疫平衡。     

艾灸对实验性RA家兔Th17/Treg平衡的影响

目的:观察艾灸对类风湿关节炎(RA)的抗炎作用,探索艾灸对Th17/Treg平衡的影响。方法:将日本大耳白兔按随机数字表法分为空白组、模型组、治疗组,分别于造模前后以及治疗第1、2、3周测量膝关节周长,用ELISA法测滑膜液的IL-10、IL-17含量,用RT-PCR法测滑膜组织中Foxp3、RORγt基因表达量。结果:与模型组比较,治疗组膝关节周长明显偏低。与空白组比较,模型组IL-10量偏低,IL-17量明显偏高,IL-10/IL-17值明显偏低;与模型组比较,治疗组IL-10量偏高,IL-17含量偏低,IL-10/IL-17值偏高。与空白组比较,模型组Foxp3mRNA表达存在下降趋势,但差异无统计学意义,RORγtmRNA表达升高,Foxp3/RORγt值降低;与模型组比较,治疗组Foxp3mRNA表达存在升高趋势,但差异无统计学意义,RORγmRNA表达降低,Foxp3/RORγt值存在升高趋势,但差异无统计学意义。结论:对于RA艾灸具有明显的抗炎效应,艾灸可显著调节RA家兔滑膜液IL-10、IL-17的含量,可调节滑膜组织中Foxp3、RORγt基因的表达,表明艾灸具有调节Th17/Treg平衡的作用,可能是艾灸治疗RA抗炎效应的重要机制之一。     

加味归脾合剂治疗慢性免疫性血小板减少症气虚证临床研究

目的:观察加味归脾合剂治疗慢性免疫性血小板减少症(ITP)的疗效,探讨中药复方制剂对ITP患者Treg/Th17免疫紊乱调控的有效干预机制。方法:将符合标准的60例慢性ITP患者随机分为中药组和激素组各30例,中药组予加味归脾合剂治疗,激素组予泼尼松治疗,记录治疗前后ITP患者血清中细胞因子Treg细胞、Th17细胞以及Treg/Th17比值,Foxp3mRNA、RORγt mRNA、Foxp3/RORγt比值检测结果及外周血血小板计数。结果 :(1)血小板计数:中药组和激素组治疗后均有所上升,与治疗前比较差异有统计学意义(P0.01),组间比较差异无统计学意义(P0.05)。(2)Treg/Th17:中药组与激素组治疗前与正常对照组比较,Treg细胞、Th17细胞、Treg/Th17比值、Foxp3mRNA、RORγt mRNA表达、Foxp3/Ro Rγt比值差异均有统计学意义(P0.05);治疗后中药组Treg细胞表达与Treg/Th17比值、Foxp3mRNA表达、Foxp3/Ro Rγt比值检测均高于激素组,组间比较差异有统计学意义(P0.05);Th17和RORγtmRNA表达,组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:加味归脾合剂可有效提升血小板计数及Treg细胞、Treg/Th17比值、Foxp3mRNA、Foxp3/Ro RγT比值,其上调Treg细胞及Foxp3mRNA表达,从而改善Treg/Th17免疫功能紊乱,健脾益气统血是治疗ITP气虚证的主要机制之一。     

从Th17/Treg失衡探讨肝纤维化“主客交浑”机制

目的:从Th17/Treg失衡探讨肝纤维化"主客交浑"机制。方法:选取健康雄性大鼠16只,随机分成正常组和模型组。采用猪血清腹腔注射法复制大鼠肝纤维化模型,造模结束后检测两组大鼠肝纤维化指标、Th17细胞和Treg细胞的相关指标,了解Th17/Treg平衡的变化情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝纤维化指标LN、Ⅳ-C、PCⅢ、HA明显升高,差异有统计学意义(P0.01);模型组大鼠RORγt、Foxp3、IL-6、IL-17、IL-10、RORγt/Foxp3、IL-6/IL-10、IL-17/IL-10均较正常组显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:肝纤维化大鼠出现了以Th17细胞占优势的Th17/Treg失衡,失衡的Th17/Treg可能是肝纤维化"主客交浑"的机制之一。     

复方生地合剂对MRL/lpr小鼠脾脏组织Th17/Treg平衡的影响

目的探讨复方生地合剂治疗系统性红斑狼疮(SLE)的可能作用机制。方法将30只MRL/lpr小鼠(狼疮模型鼠)随机分组为模型组、复方生地合剂组、强的松组,每组10只,另以10只C57BL/6小鼠为空白组。复方生地合剂组给予浓度为2.8g/ml的复方生地合剂人临床等效剂量18.495ml/(kg·d)灌胃,强的松组给予浓度为1.23g/ml强的松片混悬液10ml/(kg·d)灌胃,模型组和空白组给予生理盐水10ml/(kg·d)灌胃,各组均每日1次。连续灌胃8周后检测血清白细胞介素17A(IL-17A)、转化生长因子β1(TGF-β1)水平,检测脾脏淋巴细胞中辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)水平和脾脏组织维甲酸相关孤核受体(RORγt)和叉头状转录因子p3(Foxp3) mRNA表达。试验期间观察各组小鼠死亡情况。结果复方生地合剂组死亡2只,强的松组死亡1只,模型组死亡3只,空白组无死亡。与空白组比较,模型组小鼠血清IL-17A水平、脾脏组织RORγt mRNA表达升高,脾脏淋巴细胞Th17/CD4~+、Th17/Treg值亦升高,血清TGF-β1水平、脾脏组织Foxp3 mRNA表达、Treg/CD4~+值降低(P0.05或P0.01)。与模型组比较,复方生地合剂组和强的松组小鼠血清IL-17A水平、RORγt mRNA表达、Th17/CD4~+、Th17/Treg值降低,血清TGF-β1水平、Treg/CD4~+值升高(P0.05或P0.01)。复方生地合剂组和强的松组各指标比较差异无统计学意义(P0.05)。结论复方生地合剂可以改善脾脏组织Th17/Treg平衡,可能是其治疗SLE的作用机制之一。     

胡柚皮黄酮对非酒精性脂肪性肝炎小鼠Th17/Treg平衡的调节作用

主要通过观察胡柚皮黄酮(PTFC)对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)小鼠Th17/Treg平衡的调节作用,探讨其干预NASH进展的免疫机制。以高脂饮食16周建立C57BL/6小鼠NASH模型,在造模第7周起分别预以25,50,100 mg·kg^-1·d^-1的PTFC灌胃干预10周,生化法检测血清TG,CHOL,ALT,AST水平,HE染色观察肝组织病理学变化;Real-time PCR检测肝组织RORγt和Foxp3 mRNA表达;流式CBA法检测血清IL-17,IL-6,IL-10,IL-4水平。研究发现,模型组小鼠血清CHOL,ALT,AST水平较正常组升高,TG水平下降;肝组织RORγt mRNA表达增强,Foxp3 mRNA表达下降,RORγt/Foxp3比值下降;血清IL-17,IL-6水平升高,IL-10,IL-4水平降低;PTFC干预后能明显减轻NASH小鼠肝组织炎症程度,改善肝功能,同时能够促进肝组织Foxp3 mRNA的表达而抑制RORγt mRNA表达,有效降低促炎因子IL-17和IL-6的水平而提高抑制性细胞因子IL-10和IL-4的水平。研究表明,高脂饮食诱导的NASH小鼠存在着Th17/Treg的免疫失衡,PTFC能通过调节Th17/Treg的平衡而缓解NASH的炎症反应,防止其进展。