藁本内酯对糖氧剥夺-再灌注诱导的血管内皮细胞凋亡和ERK磷酸化水平的影响

目的:研究藁本内酯预处理对糖氧剥夺-复糖氧损伤人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)损伤和凋亡自噬蛋白及ERK磷酸化水平的影响。方法:将融合生长的HUVEC给予藁本内酯预处理1h后,用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)制备糖氧剥夺-复糖氧损伤(oxygen-glucose deprivation-reperfusion injury,OGD-R)模型,观察细胞一般形态,微板法检测细胞外乳酸脱氢酶(LDH)含量;高内涵分析系统检测Beclin-1、p53的表达与细胞周期,蛋白免疫印迹法测定细胞内ERK磷酸化水平及Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:与溶剂对照组比较,OGD-R损伤的HUVEC细胞形态异常,细胞外LDH含量增加,细胞内Beclin-1、p53、Bax、Bcl-2表达和ERK磷酸化水平明显上升;藁本内酯20、40、60μmol/L可改善OGD-R损伤的HUVEC的形态,降低细胞外LDH含量,降低细胞内Beclin-1、p53、Bax,提升Bcl-2的表达和进一步提高ERK磷酸化水平。结论:藁本内酯预处理对OGD-R损伤的HUVEC有保护作用,可缓解OGDR损伤导致的细胞凋亡与自噬,该作用与ERK相关通路的激活有关。     

桃红四物汤对人脑微血管内皮细胞OGD损伤的保护作用及机制

目的:通过建立糖氧剥夺(OGD)诱导的人脑微血管内皮细胞(h-BMECs)损伤模型,观察桃红四物汤对细胞的保护作用及机制。方法:体外建立人脑微血管内皮细胞糖氧剥夺损伤模型,随机分为正常组、模型组、桃红四物汤高、中、低质量浓度组(0.8,0.4,0.2 g·L-1)和阳性药尼莫地平组。噻唑蓝(MTT)比色法检测h-BMECs细胞活性,酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平、细胞中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达水平。结果:桃红四物汤可显著提高拟缺血损伤的人脑微血管内皮细胞活性,降低LDH漏出率(P0.05,P0.01),改善细胞形态,降低MDA水平(P0.05),增强SOD活性(P0.05,P0.01)。增加内皮细胞VEGF和HIF-α蛋白的表达(P0.05,P0.01)。结论:桃红四物汤对拟缺血损伤人脑微血管内皮细胞具有保护作用,其机制与增强细胞抗氧化能力,通过HIF-α途径增强VEGF表达有关,显示中药组方可发挥整体调节的治疗优势。     

梓醇对PC12细胞氧糖剥夺损伤的保护作用及对电压依赖性钾通道亚型表达的影响

目的:考察梓醇对氧糖剥夺的PC12细胞损伤的保护作用及对电压依赖性钾通道亚型表达的影响。方法:采用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)合并无糖培养基造成PC12细胞氧糖剥夺模型,给予梓醇预处理24h后,MTT法检测细胞存活率;倒置显微镜观察细胞形态;测定细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性;测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量;还原型谷胱甘肽(GSH)含量;Western blot检测PC12细胞内电压依赖性钾通道Kv1.4、Kv1.5、Kv 2.1、Kv 4.2蛋白的表达。结果:PC12细胞氧糖剥夺损伤后细胞存活率下降,梓醇100μmol/L、10μmol/L能明显对抗氧糖剥夺对PC12细胞的损伤,使细胞存活率明显增加。PC12细胞氧糖剥夺损伤后培养液中LDH释放增多,细胞内SOD活性显著下降,MDA含量升高、GSH含量降低,梓醇能抗氧化应激,抑制细胞LDH释放,升高细胞内SOD活力,升高细胞内GSH含量,降低细胞内MDA含量。PC12细胞氧糖剥夺损伤后,细胞内电压依赖性钾通道Kv1.5和Kv2.1蛋白表达明显上调,梓醇能下调氧糖剥夺PC12细胞内Kv1.5和Kv2.1蛋白表达。结论:梓醇对缺糖缺氧PC12有保护作用,能抗氧化应激损伤,其机制可能与下调电压依赖性钾通道Kv1.5和Kv2.1蛋白表达有关。     

银杏内酯B对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用

目的:研究银杏内酯B对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法:体外培养第4～6代HUVECs,分为空白对照组、H2O2损伤模型组(300μmol/L)、银杏内酯B(1、5、10μmol/L)预处理2 h加H2O2损伤组。用MTT比色法检测HUVECs活力,试剂盒检测丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、乳酸脱氢酶(LDH)含量,一氧化氮合酶(NOS)活性,激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内活性氧(ROS),流式细胞仪分析细胞凋亡率。结果:与空白对照组比较,模型组细胞活力显著降低、MDA和LDH含量显著增加、NO含量及NOS活性显著下降、细胞凋亡率显著,提示H2O2明显造成HUVECs损伤和死亡。银杏内酯B使内皮细胞增殖活力显著增加、MDA和LDH含量显著减少、NO含量及SOD、GSH、NOS活性显著增加、细胞凋亡率显著降低,提示银杏内酯B可干扰H2O2对内皮细胞的损伤作用。结论:银杏内酯B具有抗氧化作用,能抑制H2O2诱导内皮细胞凋亡,减轻H2O2对内皮细胞的损伤作用,从而产生保护血管内皮细胞的作用。     

Z-藁本内酯对人脐静脉内皮细胞保护作用及其机制研究

目的 通过观察Z-藁本内酯对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)及核因子-κB (NF-κB)表达的影响,探讨其对炎性因子损伤内皮细胞的保护作用及其机制.方法 向体外培养的HUVEC中加入TNF-α10 ng/mL造成细胞损伤,同时加入不同浓度(5、10、20 μmol/L)的Z-藁本内酯,共同孵育24 h,MTT法检测各组细胞活力,ELISA法测定细胞培养液中 ICAM-1和VCAM-1的量,Westernblotting法检测各组细胞NF-κB蛋白表达.结果 与对照组比较,TNF-α可造成HUVEC明显损伤(P＜0.05、0.01),显著增加HUVEC中ICAM-1和VCAM-1的表达(P＜0.01).与模型组比较,Z-藁本内酯可以剂量相关地降低ICAM-1 (P＜0.01)和VCAM-1 (P＜0.05)的表达,显著减少细胞NF-κB蛋白 的表达(P＜0.05).结论 Z-藁本内酯可减轻TNF-α对HUVEC的损伤,其作用机制可能与通过抑制NF-κB的激活,进而减少ICAM-1和VCAM-1的表达有关.     

藁本内酯对缺糖缺氧/复氧所致PC12细胞线粒体分裂的影响

该文旨在探讨川芎中主要活性成分藁本内酯对缺糖缺氧/复氧(oxygen and glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)致PC12细胞损伤时线粒体分裂的影响及机制。通过体外建立OGD/R模型,经藁本内酯预处理PC12细胞3 h后,采用CCK-8法检测细胞活力;倒置显微镜下观察藁本内酯不同浓度组对OGD/R损伤后PC12细胞形态的影响;透射电镜下观察OGD/R损伤后PC12细胞线粒体分裂的情况。DCFH-DA免疫荧光染色法检测细胞内活性氧含量(reactive oxygen species,ROS)变化;流式细胞术检测线粒体膜电位(mitochondria membrane potential,MMP)变化,Hochest 33258观察PC12细胞凋亡情况;Western blot法检测线粒体和胞质中细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)的含量变化,及线粒体分裂相关蛋白Drp 1及Fis 1的表达。结果显示,与模型组相比,藁本内酯可以增加PC12细胞的存活率,细胞数目明显增多,细胞形态较正常,呈簇状生长。进一步实验表明,藁本内酯可以抑制OGD/R损伤后PC12细胞内ROS的释放及线粒体膜电位的下降,减少Cyt C自线粒体至胞浆的释放,并促进线粒体分裂蛋白Drp 1和Fis 1的表达,促进了线粒体分裂。回复性实验表明,当给予线粒体分裂抑制剂mdivi-1后,抑制了线粒体分裂,同时细胞存活率显著下降,表明藁本内酯可以通过促进线粒体分裂抑制细胞损伤而发挥神经保护作用。初步证明藁本内酯抗缺血性脑损伤的作用机制可能与促进线粒体分裂,维持自身稳态有关。     

人参总皂苷对波动性高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的 观察人参总皂苷( TSPG)在体外培养的波动性高糖环境下对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡及超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量的影响,探讨其可能的保护性干预作用.方法 参考文献报道,选用HUVEC进行体外培养,建立波动性高糖损伤模型,用MTT法检测波动性高糖对HUVEC的损伤情况;观察各实验组HUVEC形态学变化;流式细胞术检测TSPG对HUVEC凋亡的影响;测定各实验组培养上清液中SOD、MDA水平.结果 (1)空白对照组细胞呈形态较规则的铺路石样且边界清楚,其他实验组细胞生长均有不同程度的损伤,但加TSPG组细胞形态变化明显优于波动性高糖组;(2)波动性高糖可诱导HUVEC产生凋亡,凋亡率明显高于空白对照组,MDA含量升高,而SOD活性则明显下降,两组比较,差异具有显著性意义(P＜0.001);(3)人参总皂苷组的HUVEC凋亡率下降,SOD活性上升,MDA含量下降,与模型组比较,均有显著性差异(P＜0.05).结论 TSPG可明显抑制波动性高糖所致的HUVEC凋亡,可使细胞上清液中SOD活性增加,MDA含量降低,从而对波动性高糖所致的HUVEC损伤表现出一定的保护作用.     

心肌尔康对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的作用

目的:研究心肌尔康(XJEK)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的作用,并探讨相关的作用机制。方法:体外培养HUVECs细胞,随机分为7组,分别为空白组,AngⅡ(1×10~(-5)mol·L~(-1))组,AngⅡ(1×10~(-5)mol·L~(-1))+心肌尔康不同质量浓度组(0.1,0.2,0.4,0.8,1.6 g·L~(-1)),噻唑蓝(MTT)比色法检测HUVECs的活性;Griess法测定一氧化氮(NO)含量;流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)的水平;钙成像仪测定细胞胞浆内游离钙离子(Ca~(2+))浓度;比色法及TBA法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测内皮型一氧化氮合酶(e NOS)蛋白表达水平。结果:与空白组比较,AngⅡ组内皮细胞活力,NO释放,e NOS蛋白表达及SOD活力明显降低,MDA,ROS含量和内皮细胞胞浆内Ca~(2+)浓度明显升高(P0.05,P0.01);与AngⅡ组比较,心肌尔康可剂量依赖性提高内皮细胞活力,促进NO释放、增加e NOS蛋白的表达;升高SOD活力,抑制MDA,ROS含量和内皮细胞胞浆内Ca~(2+)浓度的升高,各指标差异均具有显著性(P0.05,P0.01)。结论:心肌尔康对AngⅡ诱导的内皮损伤具有明显的保护作用,其可能机制为抑制细胞内Ca~(2+)超载和降低氧化应激水平。     

川芎嗪对皮质神经元在氧糖剥夺损伤中的保护作用

目的:探讨川芎嗪对培养大鼠皮质神经元在氧糖剥夺损伤中的保护作用及可能机制。方法:原代培养新生大鼠皮质神经元,利用氧糖剥夺建立皮质神经元缺血再灌损伤模型。应用四甲基偶氮唑盐(MTT)测定细胞活力。应用乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)试剂盒分别检测LDH、SOD活性及MDA含量。应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:氧糖剥夺损伤后细胞存活率降低,LDH释放上升,SOD活性下降,MDA含量明显增加,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。川芎嗪可浓度依赖性地提高细胞的存活率和SOD水平,减少LDH释放和MDA含量,抑制细胞凋亡(P<0.05)。结论:川芎嗪对培养大鼠皮质神经元在氧糖剥夺损伤中有保护作用,其保护机制可能与葛根素稳定细胞膜,减轻氧化损伤,及抑制细胞凋亡有关。     

马里苷对高糖损伤人脐静脉内皮细胞的作用

目的观察两色金鸡菊黄酮类化合物马里苷对高糖损伤人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的作用。方法取对数生长期的细胞,分为正常对照组(NG)、高糖模型组(HG)及马里苷不同浓度(50、100、200、400μmol/L)给药组。采用CCK-8法检测细胞活力;ELASA法检测MDA含量及SOD、CAT、GSH-PX活力; Western blot法检测炎性因子VEGF、ICAM-1、MCP-1在HUVEC细胞中的蛋白表达。结果与NG组比较,及HG组细胞活力明显降低(P0.05); MDA含量显著升高(P0.05),SOD、CAT、GSH-PX活性降低(P0.05);与HG组(50 mmol/L)比较,马里苷药物干预组(50、100、200、400μmol/L)细胞活性明显增加,差异有统计学意义(P0.05),且随浓度增加细胞活性明显增加。Western blot蛋白印迹结果显示,与NG组比较,HG组VEGF、ICAM-1、MCP-1蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P0.05);与HG组比较,马里苷干预组VEGF、ICAM-1、MCP-1蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论马里苷对高糖损伤的HUVEC细胞具有一定保护作用。     

附子人参不同配伍比例对缺糖缺氧/复糖复氧损伤大鼠心肌细胞的保护作用

目的观察不同配伍比例的附子人参对缺糖缺氧/复糖复氧损伤大鼠心肌细胞的保护作用。方法将原代培养6 d的心肌细胞分为正常对照组、模型组、不同配伍比例的附参组、空白血清组。建立原代大鼠心肌细胞缺糖缺氧/复糖复氧损伤模型,观察不同配伍比例的附子人参血清对损伤心肌细胞自发搏动、细胞活力的作用,并测定心肌细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量以及心肌组织上清液中一氧化氮(NO)分泌量和乳酸脱氢酶(LDH)释放率。结果与空白血清组比较,各附参配伍组心肌细胞自发搏动频率、细胞活力显著升高(P0.05),心肌细胞SOD活性显著升高(P0.05),MDA含量、NO分泌量和LDH释放率均显著降低(P0.05),而且附参(2∶1)组对心肌细胞的自发搏动频率、细胞活力、SOD、MDA和LDH作用均不同程度地优于其余各配伍组。结论各附参配伍组对缺糖缺氧/复糖复氧损伤大鼠心肌细胞具有保护作用,其中以附参(2∶1)组作用效果最为显著。     

山核桃叶总黄酮对H9C2心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的:研究山核桃叶总黄酮对H9C2心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用。方法:体外培养大鼠H9C2心肌细胞,用不同浓度氯化钴并优化不同缺氧及复氧时间建立缺氧复氧损伤模型。缺氧复氧前加入终浓度为2.5、5、10μg/m L的山核桃叶总黄酮预处理,通过检测细胞上清液中LDH释放量,细胞内MDA含量和SOD活性;并采用MTS检测缺氧复氧损伤后细胞的成活率以及Hoechst-PI双染和流式细胞术观察细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹检测细胞内HIF-1α蛋白表达,来考察山核桃叶总黄酮保护心肌细胞缺氧复氧损伤的作用。结果:利用1 200μmol/L氯化钴缺氧18 h,复氧2 h可建立缺氧损伤心肌细胞模型。与模型组比较,山核桃叶总黄酮能降低H9C2细胞缺氧复氧损伤后LDH释放量及细胞内MDA含量,提高SOD活性,减少细胞凋亡,并使细胞HIF-1α蛋白表达恢复正常水平。结论:山核桃叶总黄酮对心肌细胞缺氧复氧损伤具有一定的保护作用,其机制可能与抗氧化、增强细胞清除自由基能力、减少脂质过氧化物产生及抑制细胞凋亡有关。     

天麻素对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激的影响

目的 考察天麻素对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化应激的影响.方法 建立高糖诱导的HUVEC氧化损伤模型,用不同质量浓度的天麻素干预.MTT法检测HUVEC存活率;相关试剂盒测定一氧化碳(NO)的量、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)以及总抗氧化能力(T-AOC)的活性、丙二醛(MDA)的量,DCFH-DA染色法检测胞内活性氧(ROS)水平,实时荧光定量PCR法测定细胞中NF-κB基因的表达.结果 与对照组相比,模型组HUVEC氧化应激作用明显增强,而天麻素能提高HUVEC中NO的量及SOD和CAT活性,提高细胞的总抗氧化能力,降低MDA的量与ROS水平,显著降低细胞中NF-κB3基因的表达.结论 天麻素通过提高抗氧化酶活性、降低脂质过氧化产物和ROS水平,抑制高糖诱导的HUVEC氧化应激作用,其作用机制可能与NF-κB通路密切相关.     

大鼠酒精性肝病形成中肝脏HIF-1α VEGF mRNA表达的变化

目的：观察缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）及其下游分子VEGF基因在酒精性肝病大鼠肝组织中的表达,分析它们与酒精性肝病发生发展的关系。方法：以白酒-玉米油-吡唑混合液灌胃14周建立酒精性肝病动物模型,常规HE和Masson染色动态观察4、8、14周时肝组织脂肪变程度和炎症程度的变化;XOD法检测血清SOD活性,TBA法检测血清MDA含量;ELISA法检测肝组织中TNF-α含量;RT-PCR技术动态检测肝组织HIF-1α及其下游分子VEGF mRNA的表达。结果：随着饮酒时间的延长大鼠血清MDA含量和肝组织TNF-α水平、HIF-1αmRNA和VEGFmRNA表达逐渐增加,血清SOD活性逐渐降低,同时肝组织脂肪变程度和炎症程度逐渐加重;在造模4周,血清MDA和SOD水平、肝组织TNF-α含量、HIF-1αmRNA和VEGFmRNA表达与正常组差异无显著性（P〉0.05）;在造模8周MDA和TNF-α含量较正常组明显增高、SOD活性较正常组明显降低（P〈0.01、P〈0.05）,HIF-α、VEGF mRNA表达较正常组有增高趋势,但差异无显著性;至造模14周时MDA和TNF-α含量、HIF-1α和VEGF mRNA表达均较正常组及模型4周组显著增高（P〈0.01、P〈0.05）,SOD活性则明显降低;相关性分析显示,HIF-1αmRNA表达水平与肝组织脂肪变程度、炎症程度、VEGFmRNA表达、TNF-α含量及血清MDA水平均呈明显的正相关,而与血清SOD活性呈明显的负相关（P〈0.01、P〈0.05）。结论：HIF-1α及其下游因子VEGF参与酒精性肝病的发生发展。     

葛根总黄酮对氧化应激损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用及其机制

目的:研究葛根总黄酮对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化应激损伤的影响,并探讨其相关的作用机制。方法:以HUVECs为研究对象,实验分为空白组、模型组、阳性药组(10μmol·L~(-1)依达拉奉)和葛根总黄酮10,20,40,80,160 mg·L~(-1)组;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测葛根总黄酮对HUVECs的保护作用,采用分光光度法测定细胞培养上清液中细胞内超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)及NO含量;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清液中内皮素-1(ET-1)含量;采用二氯荧光乙酰乙酸盐(DCFH-DA)法检测活性氧(ROS)水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测内皮型一氧化氮合酶(e NOS)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的表达。结果:与正常组比较,模型组细胞存活率显著降低(P0.01),SOD活性,NO水平和e NOS蛋白表达显著降低(P0.01),MDA,ET-1水平,细胞ROS水平和VCAM-1蛋白表达显著升高(P0.01);与模型组比较,葛根总黄酮(40,80,160 mg·L~(-1))可以显著提高氧化应激损伤的HUVECs的存活率(P0.05,P0.01),葛根总黄酮(20,40,80 mg·L~(-1))可显著增加SOD活性,升高NO水平,显著降低MDA,ET-1水平,显著降低细胞ROS水平,显著升高e NOS,降低VCAM-1的表达(P0.05,P0.01)。结论:葛根总黄酮对H2O2诱导HUVECs氧化应激损伤有保护作用,其作用机制可能与调节SOD,MDA,ET-1,NO氧化应激相关因子,调控内皮细胞功能相关蛋白e NOS,VCAM-1的表达有关。     

针刺治疗大鼠急性脑梗死前后HIF-1、VEGF变化规律探讨

近年来，对HIF-1(缺氧诱导因子-1)及VEGF(血管内皮细胞生长因子)的研究十分引人注目。HIF-1α亚基为HIF-1所特有，是HIF-1的调节及活性亚基，它受氧浓度调控，常氧下蛋白质半衰期不到5m，在低氧下，蛋白质表达迅速增加。HIF-1对缺氧具有特异感受性，它的表达受细胞内氧分压的严密调节。HIF-1参与体内许多缺氧反应性基因的转录调     

牡荆素鼠李糖苷对内皮细胞血管舒缩因子表达影响的实验研究

目的:观察牡荆素鼠李糖苷对缺氧-再给氧损伤内皮细胞产生血管舒缩因子表达的影响。方法:采用脐静脉内皮细胞培养的方法,以缺氧再给氧造成内皮细胞损伤,分别以放射免疫、Griess法、免疫组化法测定细胞培养上清中内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)、细胞内一氧化氮合酶(NOS)活性;RT-PCR方法测定细胞内ET-1,NOS mR-NA的转录。结果:不同浓度的牡荆素鼠李糖苷均可明显提高内皮细胞NOS mRNA的表达和NOS的活性;使内皮细胞血管舒张因子NO产量明显增加;缩血管因子ET-1 mRNA表达及ET-1明显减少。结论:牡荆素鼠李糖苷能通过蛋白及基因水平有效地调节缺氧再给氧损伤血管内皮细胞产生的血管活性物质的表达。     

肉桂对慢性缺氧心肌细胞的保护作用研究

目的:研究肉桂通过调控低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达,对慢性缺氧心肌细胞的保护作用。方法:将心肌细胞H9c2分为空白对照组、缺氧组、肉桂低剂量组、肉桂中剂量组、肉桂高剂量组。CCK-8法检测各组细胞增殖情况,TUNEL法检测各组细胞凋亡情况。应用试剂盒检测各组细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和硫代巴比妥酸反应产物(TBARS)水平; Western blot检测心肌肌钙蛋白T(cTnT)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、肌红蛋白(Myo)、HIF-1α和血管内皮因子(VEGF)表达。结果:缺氧处理后显著降低了心肌细胞H9c2增殖活力、SOD活性,且增加了细胞凋亡指数、MDA和TBARS含量(均P<0.05)。缺氧处理后显著降低了心肌细胞H9c2的cTnT、CK-MB、Myo、HIF-1α和VEGF表达量(均P<0.05)。各剂量肉桂组能够不同程度的逆转缺氧对心肌细胞H9c2上述指标的影响。结论:肉桂通过调控HIF-1α表达保护缺氧诱导的大鼠心肌细胞损伤。     

川芎苯酞类成分对氧糖剥夺/再灌注诱导MDCK-MDR1细胞损伤的作用及机制

目的探讨川芎中3个苯酞类成分藁本内酯、洋川芎内酯A和洋川芎内酯I对氧糖剥夺/再灌注诱导MDR1转染犬肾细胞(MDCK-MDR1)损伤的作用及机制。方法采用氧糖剥夺/再灌注诱导MDCK-MDR1细胞损伤模型,给予藁本内酯、洋川芎内酯A和洋川芎内酯I进行干预,采用MTT法检测细胞存活率;采用试剂盒检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用Western blotting法检测细胞紧密连接蛋白如claudin-5、occludin、ZO-1以及外排蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)和葡萄糖转运蛋白-1(glucose transporter-1,GLUT-1)表达情况;以芍药苷为探针药物,研究藁本内酯、洋川芎内酯A和洋川芎内酯I对芍药苷在氧糖剥夺/再灌注诱导的MDCK-MDR1细胞上跨膜转运的影响。结果与模型组比较,洋川芎内酯I(80μg/mL)显著提高MDCK-MDR1细胞存活率(P0.05);洋川芎内酯I(40、80μg/mL)显著抑制细胞上清液中LDH释放率(P0.05、0.01);藁本内酯(20、40μg/mL)和洋川芎内酯I显著抑制细胞凋亡率(P0.01);藁本内酯(20μg/mL)和洋川芎内酯I显著上调claudin-5蛋白表达水平(P0.05、0.01);藁本内酯(20、40μg/mL)、洋川芎内酯A(20μg/mL)和洋川芎内酯I(40、80μg/mL)显著上调occludin蛋白表达水平(P0.01);藁本内酯(20μg/mL)和洋川芎内酯I(40μg/mL)显著上调ZO-1蛋白表达水平(P0.05、0.01);藁本内酯、洋川芎内酯A(40、80μg/mL)和洋川芎内酯I显著下调GLUT-1蛋白表达水平(P0.01);藁本内酯(20μg/mL)、洋川芎内酯A和洋川芎内酯I(20μg/mL)显著下调P-gp蛋白表达水平(P0.01);藁本内酯(20μg/mL)、洋川芎内酯A(40、80μg/mL)和洋川芎内酯I显著促进芍药苷跨膜转运(P0.05、0.01)。结论藁本内酯、洋川芎内酯A和洋川芎内酯I能够上调紧密连接蛋白表达,抑制氧糖剥夺/再灌注诱导的MDCK-MDR1细胞损伤,促进探针药物的跨膜转运。     

洋参二醇皂苷对波动高糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护效应研究

目的探讨洋参二醇皂苷对波动高糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护效应及其机制。方法以体外培养人脐静脉内皮细胞为研究对象,通过每24 h间替更换高糖型DMEM全培养基(葡萄糖浓度25 mmol/L)与低糖型DMEM全培养基(葡萄糖浓度5.56 mmol/L)构建人脐静脉内皮细胞血糖波动模型。实验分为5组,包括正常低糖组、稳定高糖组、波动高糖组(间替高糖/低糖)、洋参二醇皂苷低剂量组(0.04 mg/m L)、洋参二醇皂苷高剂量组(0.08 mg/m L)。细胞培养8 d,观察细胞形态学表现,MTT测定细胞成活率,取细胞培养上清液检测乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、可溶性细胞间黏附分子-1(s ICAM-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,细胞裂解液检测胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果洋参二醇皂苷低、高剂量组细胞形态均较波动高糖组明显好转,细胞活性和细胞中SOD活性均明显高于波动高糖组(P均<0.05),LDH漏出率和细胞中TNF-α、s ICAM-1、ET-1、NO、MDA含量均明显低于波动高糖组(P均<0.05)。结论洋参二醇皂苷对波动高糖诱导的人脐静脉内皮细胞具有显著保护效应,其保护效应与其能够显著减轻葡萄糖波动诱导的氧化应激、炎症反应及细胞黏附分子的过度表达密切相关。