基于COI 条形码的鹿类中药材DNA 条形码分子鉴定

目的：利用COI 序列建立统一的鹿类药材分子鉴定方法。方法：对鹿茸、鹿角、鹿鞭、鹿筋、鹿尾、鹿胎分别进行DNA 提取、COI 序列扩增和序列测定,构建鹿类药材COI 序列数据库,并对市售鹿类药材进行调查分析。结果：所有鹿类药材均可以使用COI 通用引物进行PCR 扩增和测序;鹿类药材COI 序列数据库包含8 个物种101 份样品,物种之间相互区分明显;市售40 份药材中18 种为药典规定物种,22种为非药典规定物种。结论：COI 序列的DNA 条形码分子鉴定方法可以作为鹿类药材的统一鉴定方法,并为市售鹿类药材的鉴定提供科学依据。     

鹿茸饮片的DNA条形码鉴别研究

 目的 建立一种快速、准确和标准化的鹿茸饮片DNA条形码鉴别方法,并分析鹿茸药材原动物间的亲缘关系。方法 通过下载GenBank鹿类动物线粒体细胞色素C氧化酶亚基 I(COI基因,经比对分析,在靠近COI 基因5′端设计了一对鹿科动物DNA条形码通用引物,对来源于鹿科动物3个属共计19份样本的鹿茸进行了PCR扩增和序列分析,并构建系统进化树。结果 通过遗传距离和分子系统树分析显示DNA条形码鉴别方法能够在属水平和种水平将鹿科3属9种鹿成功的鉴别开来,对90%的鹿茸样本可进行有效地鉴定,而梅花鹿、马鹿中各一个样本未得到准确鉴定,具体原因有待进一步研究。结论 所建立的鹿茸药材DNA条形码鉴别方法,准确可靠,可用于正品鹿茸马鹿和梅花鹿及其混伪品进行准确鉴定。     

鹿茸线粒体DNA的指纹鉴定研究

 目的 通过鹿茸特异性引物鉴别和随机扩增多态DNA(RAPD)鉴别的比较,选择一种更简便的方法用于鉴别鹿茸。 方法 采用盐析法从梅花鹿茸、马鹿茸、驯鹿茸、市售鹿茸等样品中抽提线粒体DNA,并应用试剂盒进行纯化。进行特异性引物扩增和序列测定,同时进行随机扩增多态DNA扩增。结果 梅花鹿茸,马鹿茸,驯鹿茸以及部分市售鹿茸经特异性引物扩增后均可在琼脂糖凝胶中显示313 bp片段,只是条带亮度不同。而其余市售鹿茸无扩增条带; 随机扩增多态DNA不仅有效显示阳性与阴性的DNA扩增结果,而且对梅花鹿茸,马鹿茸,驯鹿茸的聚合酶链反应产物的差异,以不同的条带数目和条带亮度得以验证。结论 随机扩增多态DNA鉴别鹿茸真伪的方法更准确快捷,通过随机扩增多态DNA扩增后主条带与梅花鹿茸或马鹿茸扩增的条带大小和亮度一致,则为正品;如不一致,则为《中国药典》规定外的鹿茸或其他混淆品。这种方法对于筛选、甄别市售动物中药材,特别是名贵中药具有广阔的应用前景。     

紫外光谱法对俄罗斯产鹿茸与国产鹿茸质量比较

俄罗斯产花鹿茸、马鹿茸、鹿角伪品骨质贴的鹿皮充鹿茸、国产花鹿茸、马鹿茸、市售鹿茸片、鹿茸粉按照一定的提取方法提纯后 ,测定提取物在紫外区(长 2 0 0～ 3 50 nm)的吸收光谱 ,并与中国药典规定鉴别方法进行比较区别 ,并提出客观的鉴别指标。1　仪器试剂和药品日本岛津 UV-2 1 0紫外分光光度仪 ;95%醇、茚三酮、硫酸铜分析纯 ;俄产梅花鹿茸、马鹿茸、马鹿茸骨化部分 ,1 994年从俄罗斯鹿场带回中国 ;国产梅花鹿茸、马鹿茸由黑河药材公司提供市售鹿茸片、鹿茸粉 (福和党药店购进 ) ;各种实验用鹿茸材料均由药检所中药室鉴定。2　试验方法…     

基于COI条形码序列的鹿茸及其混伪品的DNA分子鉴定

目的:利用COI序列对鹿茸及其混伪品进行DNA条形码鉴别,考察其可行性.方法:对鹿茸及其混伪品源自动物鹿科4属7种共14份样品的COI条形码序列进行研究,分析药材正品来源的种内变异,与混伪品的种间变异,以及系统树中物种的聚类情况.结果:梅花鹿和马鹿COI序列种内变异较小,混伪品的种间序列差异较大,种间最小K-2P距离远大于梅花鹿和马鹿种内最大K-2P距离.由所构建的系统聚类树可以看出,同属聚在一起,且各物种又形成相对独立的支,支持率较高.基于COI序列的NJ树能够明显地看出,鹿茸与其混伪品能够明确地区分开.结论:运用COI条形码序列能够准确鉴定鹿茸的基源动物及其混伪品,本研究为鹿茸的鉴别提供了新的可行性方法.     

市售鹿茸片基因组DNA提取方法的比较

目的建立一种稳定高效获得鹿茸片DNA基因组的提取方法,为相似形态中药总DNA提取奠定基础,便于应用分子生物学进行药材鉴定。方法将乌鲁木齐市售鹿茸饮片选取3份为材料,通过两种试剂盒和CTAB三种不同方法提取,提取的DNA再进行琼脂糖凝胶电泳法、紫外分光光度法进行浓度和纯度检测。结果 3种方法均可以从市售鹿茸饮片中提取到基因组DNA,但天根组织提取试剂盒得到的基因组DNA的纯度和浓度最高,提取效果最佳;CTAB法提取效果相对最差。结论天根组织提取试剂盒基因组DNA提取方法操作简便、稳定、高效,提取的DNA效果较好,纯度和浓度检查均合格。     

紫外光谱法对鹿茸质量的比较鉴别

<正> 花鹿茸、马鹿茸、市售鹿茸片、鹿茸粉按照一定的提取方法提纯后,测定提取物在紫外区(波长200～350nm)的吸收光谱,并与中国药典规定的鉴别方法进行比较鉴别,提出客观的鉴定指标。一、仪器、试剂和药品1.日本岛津UV-260紫外分光光度仪。     

中药材鹿茸的分子分类学鉴定研究

目的 建立中药材鹿茸的分子分类学鉴定试剂盒。方法 根据对不同产地的梅花鹿、马鹿线粒体DAN进行PCR扩增和序列测定，并与亲缘关系较近的伪充药材来源动物线粒体DNA同位置序列比较，找到鹿的特征片段，经过实际经验，筛选出适合片段作为鹿的种属特异性PCR引物。结果 该引物与相关试剂组成试剂盒后，可用于中药材鹿茸与伪充药材的鉴别。结论 用分子分类学方法鉴别中药材鹿茸，具有科学、稳定、准确、简便等特点，值得推广。     

穿山甲属动物的DNA条形码及在穿山甲商品鉴定中的应用

目的:完善基于COI序列的DNA条形码鉴定法,用于穿山甲属动物及其商品药材的分子鉴定。方法:从穿山甲属动物及穿山甲常见混伪品原动物的鳞甲、肌肉组织或蹄甲中提取DNA,扩增COI序列并双向测序,对序列进行K2P遗传距离分析、Barcoding gap检验、单倍型分析、系统发育树的聚类分析、条形码间隙自动检索法(ABGD)(Automatic barcode gap discovery)划分。用建立的DNA条形码方法对收集的35份穿山甲商品进行鉴定。结果:COI序列扩增成功,对齐后序列长度为600 bp。遗传距离分析显示,种间差异大于种内差异,物种间具有一定遗传间隔;系统发育树的聚类分析和ABGD划分能够有效鉴别穿山甲及其混伪品。对35份甲片商品进行了准确鉴定;发现近来出现较多的印度穿山甲甲片,对其进行性状描述。结论:基于COI序列的DNA条形码是鉴定穿山甲的有效手段。     

应用PCR-RFLP方法鉴定梅花鹿茸与马鹿茸

目的 建立一种应用限制性片段长度多态性技术鉴别梅花鹿茸与马鹿茸的方法。方法 提取各种鹿茸样品的基因组DNA,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)对正品鹿茸的特异性片段进行扩增,鉴别鹿茸的真伪,然后对正品鹿茸利用动物通用引物进行PCR扩增,并通过限制性片段长度多态性分析进一步对正品鹿茸的种属来源进行确证。结果 通过对特异性片段的PCR扩增,可将梅花鹿茸及马鹿茸与驯鹿、麋鹿、新西兰鹿等伪品鹿茸加以区分,通过对限制性内切酶Msp I 进行酶切后的片段长度进行分析,可进一步区分梅花鹿茸与马鹿茸。结论 本实验建立了一种基于限制性片段长度多态性技术快速、准确的鉴别鹿茸真伪及种属鉴定的方法,为解决中药易混品种难以鉴定的问题提供了又一个新方法。     

鹿茸多胺的抗脂质过氧化作用

目的 研究鹿茸多胺的抗氧化作用。方法 测定鹿茸多胺在体外对NADPH-维生素C和Fe^2 半胱氨酸系统诱发的微粒体脂质过氧化反应(MDA形成)的影响，对黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶系统超氧阴离子自由基(O2^-)产生(还原型细胞色素C形成)的影响，在体内对CCI。和乙醇诱发的小鼠肝脂质过氧化反应(MDA形成)的影响。结果 鹿茸多胺在体外能明显抑制NADPH-维生素C和Fe^2 一半胱氨酸系统诱发的大鼠脑、肝、肾微粒体脂质过氧化反应(MDA形成)，及黄嘌呤一黄嘌呤氧化酶系统O2^-的产生(还原型细胞色素C形成)。在体内能抑制CCl4和乙醇诱发的小鼠肝脂质过氧化反应(MDA形成)。结论 鹿茸多胺具有抗氧化作用。     

鹿角治疗乳癖症的研究Ⅰ.鹿角提取物的抗炎作用

马鹿鹿角提取物能抑制右旋糖酐和二甲苯所致急性渗出性炎症，对慢性肉芽组织增生性炎症也有明显的抑制作用，对组胺、５ＨＴ、ＰＧＥ１引起的毛细血管通透性增强有明显的抑制作用     

麋鹿角的药用考证

麋鹿角为古方记载之补益类名贵中药，至清末麋鹿在中国的灭绝，麋鹿角入药历史悠久，中医临床应用已经证实麋鹿角具有强精益血、滋阴壮阳等作用，本文总结了历代医家对于麋鹿角应用，初步探讨了麋鹿角临床应用适应症、用法及用量。     

鹿角方对压力负荷增加大鼠心肌I型和Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的为了进一步观察鹿角方抗心肌纤维化的作用及其可能作用机制。方法建立腹主动脉狭窄所致充血性心力衰竭心肌肥厚大鼠模型,观察左室质量(LVMI),采用RT-PCR方法观察心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA的表达,并采用放射免疫分析方法检测血浆和心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平。结果模型组LVMI明显高于假手术组(P＜0.001),鹿角方组LVMI与模型组比较有明显下降(P＜0.01);模型组Ⅰ型胶原mRNA的表达假手术组显著升高(P＜0.05),鹿角方组较模型组明显下降(P＜0.05);模型组Ⅲ型胶原mRNA与假手术组比较有显著升高(P＜0.05),鹿角方组较模型组显著下降(P＜0.05)。模型组血浆和左室心肌AngⅡ水平较假手术组显著升高(P＜0.001),鹿角方组明显降低血浆AngⅡ(P＜0.01)和左室心肌AngⅡ水平(P＜0.001)。结论心肌纤维是腹主动脉狭窄所致充血性衰竭心肌肥厚的一个重要的病理改变,鹿角方具有逆转充血性心力衰竭心肌纤维化的作用。     

鹿茸冻干粉的酶解及其酶解产物性质的研究

目的:通过研究鹿茸冻干粉酶解产物的促成骨细胞增殖活性,抗氧化性以及血管紧张素转化酶Ⅰ(angiotensin Ⅰ-converting enzyme,ACE,EC3.4.15.1)抑制活性,为阐明鹿茸强筋健骨的机制以及揭示鹿茸体内生理功能发挥的机制提供研究线索.方法:采用体内常见的消化酶胃蛋白酶和胰蛋白酶分别和同时对鹿茸冻干粉进行酶解,确定酶解完全的条件,收集相对分子质量小于1万的多肽混合物,对其抗氧化性,ACE抑制活性以及促成骨细胞增殖活性进行研究.结果:鹿茸冻干粉的不同酶解产物对羟自由基的清除效果非常明显,其IC50均低1 g·L-1,远低于维生素C的5.5 g·L-1,同时胃蛋白酶和双酶酶解产物对ACE抑制效果极佳,胰蛋白酶酶解产物对大鼠成骨细胞(UMR-106细胞)的促增殖作用达73.43%.结论:本实验进一步验证了鹿茸强筋健骨以及强身抗老等传统功效,对于ACE抑制活性的试探性研究也表明鹿茸酶解产物具有潜在的高血压防治功能;本实验结果也为进一步分离提取鹿茸酶解产物中的抗氧化性多肽,ACE抑制活性肽以及促成骨细胞活性肽提供强有力的依据.     

Stimulation of osteoblastic differentiation and mineralization in MC3T3-E1 cells by antler and fermented antler using Cordyceps militaris

Ethnopharmacological relevance

For thousands of years antlers have been used in Asian countries to promote rapid healing, treat weight loss, slow growth in children, strengthen weak bones, and alleviate cold hands and feet.

Aim of the study

The present study was performed to examine the effect of fermentation on the ability of antler to act as a stimulator of bone growth.

Materials and methods

This study used pre-osteoblast MC3T3-E1 cells to examine factors related to bone growth, such as cell proliferation, production of alkaline phosphatase (ALP), and deposition of extracellular matrix proteins (e.g., collagens, osteonectin, bone sialoprotein (BSP)), via the treatment of non-fermented and fermented antler.

Results

Antler fermentation using Cordyceps militaris was carried out at 25 °C for seven days. The total content of sugar, sialic acid, and protein increased with fermentation time. Cell proliferation was greater in the fermented antler- (FA-) treated groups than in the NFA- (non-fermented antler-) treated groups, in which proliferation increased significantly up to 137% of the basal value. Significant increases in mRNA expression and ALP activity were found at FA concentrations of 50-100 μg/ml; at 100 μg/ml the activity had increased 119% compared to the control activity. For NFA and FA the expression levels of type I collagen mRNA significantly increased in a dose-dependent manner at all treatment doses. However, significant differences between the antler groups were not observed. Mineralization significantly increased by NFA and FA treatment to 183% and 241%, respectively, when compared to colostrum, as a positive control (165%).

Conclusions

Antler treatment increased the proliferation of osteoblasts and bone matrix proteins, such as type I collagen and BSP. Antler fermented with Cordyceps militaris showed enhanced activity, and its stimulatory effects on cell proliferation and ALP production were greater than those of NFA. We surmise that these increases in activity were related to increased sialic acid content. Therefore, the results of this study suggest that the physiological effects of antler, including bone growth, may be increased through the fermentation process.     

鹿茸多肽提取工艺及其药理学作用

综述鹿茸多肽提取工艺及其药理学作用。鹿茸多肽的提取工艺包括萃取法、酶解法、超声波法、高压电场法。鹿茸多肽的分离纯化方法包括盐析法、超滤法、离子交换法、电泳法。鹿茸多肽的药理学作用广泛,主要对免疫系统、循环系统、神经系统、骨代谢以及糖代谢等起着重要作用,同时鹿茸多肽还具有抗炎、抗病毒、抗氧化和抗疲劳等作用。     

鹿茸在神经性疾病治疗中的作用

鹿茸是我国传统的名贵药材,是唯一能连续再生的哺乳动物器官,中药鹿茸在神经性疾病治疗中的作用,包括对神经细胞生长分化的促进,对相关疾病如帕金森、轻度认知障碍、阿尔兹海默、脑缺血引起神经功能损伤的减轻。鹿茸肽可以促进神经细胞的生长发育,诱导神经干细胞分化为神经元,并能抑制神经元凋亡,对神经细胞损伤的修复也有很好的效果,鹿茸蛋白可以不同程度的使神经递质的含量及其代谢水平得到恢复。     

基于熔解曲线分析技术的鹿茸药材分子鉴别

高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)是一种主要用于基因分型和突变扫描的分子诊断技术,在中药真伪鉴定中有着广泛应用前景。文章将高分辨率熔解曲线技术应用于鹿茸真伪鉴别,利用COⅠ序列,在退火温度为60℃,45个循环数的条件下,建立正品鹿茸药材熔解曲线模型,并筛选确定其DNA模板浓度、引物浓度、Mg2+浓度的适宜范围。结果表明,鹿茸药材在模板DNA质量浓度为10~100 mg·L-1、引物浓度0.2μmol·L-1,Mg2+浓度2.0 mmol·L-1的条件下,梅花鹿熔解曲线为双峰,其Tm分别为(81.96±0.07),(84.51±0.03)℃;马鹿熔解曲线为双峰,其Tm为(82.58±0.13),(85.95±0.05)℃。该方法可以实现简单、快速、高通量、可视化的鹿茸药材真伪鉴定。     

超临界CO2萃取鹿茸中的性激素研究

目的:研究超临界CO2萃取技术提取鹿茸中性激素.方法:超临界CO2萃取鹿茸中的性激素并采用放射免疫法分析其含量,利用GC-MS,TLC和HPLC分析了萃取物中其他成分.结果:以85%乙醇为夹带剂,夹带剂∶原料=1(mL·g-1),萃取压力30 MPa,萃取温度65℃,总提取率为1.56%,雌二醇和孕酮的质量分数分别为3.07,776.18 ng·g-1.结论:采用超临界CO2萃取技术提取鹿茸中的性激素是可行的.