当归补血汤水提液预处理对缺氧/复氧H9c2心肌细胞线粒体损伤保护机制研究

目的探讨当归补血汤预处理对缺氧/复氧H9c2心肌细胞线粒体损伤保护机制。方法复制缺氧/复氧大鼠H9c2心肌细胞损伤模型,以始终在正常培养条件下的心肌细胞为正常对照组,将预先加入当归补血汤的细胞(当归补血汤组)在正常条件下培养24 h,与未处理细胞(模型组)同时进行缺氧/复氧培养,JC-1染色,流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧簇(ROS)水平,RT-PCR荧光相对定量检测B淋巴细胞瘤2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(Bax)、bcl-2/腺病毒E1B 19 000相互作用蛋白3(Bnip3)的mR NA表达水平,Western blot检测细胞色素C蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,模型组线粒体膜电位下降的细胞比例显著增加(P0.05),细胞内ROS水平增加明显(P0.05),细胞色素C蛋白表达显著升高(P0.05),Bcl2 mR NA表达水平明显降低(P0.05),Bax mR NA表达水平显著升高(P0.05)。当归补血汤干预后,与模型组比较,线粒体膜电位下降的细胞明显减少(P0.05),细胞色素C蛋白表达水平显著降低(P0.05),Bcl2 mR NA水平显著升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 H9c2心肌细胞缺氧/复氧后,线粒体膜电位明显下降,细胞色素C释放增加。当归补血汤可能通过促进Bcl2表达,减少ROS产生等机制稳定心肌细胞线粒体膜电位,减轻复氧后对线粒体功能的损伤作用。     

苓桂养心汤对扩张型心肌病大鼠心肌保护作用及肌浆网钙调控蛋白的影响

目的:明确苓桂养心汤对扩张型心肌病(DCM)大鼠心功能、心肌的保护作用;观察苓桂养心汤对DCM大鼠损伤心肌肌浆网(SR)钙调控相关蛋白的影响,探讨其可能的作用机制。方法:以60只SD大鼠腹腔注射阿霉素1.0 mg/kg/次,每周2次,连续6周,总量12 mg·kg-1建立DCM模型,另设正常组(10只),观察2周,8周后将存活DCM模型大鼠随机分为培哚普利组、苓桂养心汤组、模型组,连续灌胃给药8周。治疗后对上述各组大鼠行心脏超声检查;采血测定大鼠血清B型尿钠肽(BNP)水平及肌钙蛋白-Ⅰ(cTnI);取大鼠左心室心肌进行苏木素-伊红(HE)染色和透射电子显微镜检测大鼠心肌病理学形态。采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)分别测定大鼠心肌肌浆网钙泵(SERCA2a),钙释放通道(RyR2),受磷蛋白(PLB),肌集钙蛋白(Calsequestrin),L-型钙离子通道(CAV1.3)的mRNA及蛋白表达水平。结果:与模型组比较,苓桂养心汤组可以改善DCM模型大鼠的心腔大小、心功能、心肌损伤及心肌病理学形态。与模型组比较,苓桂养心汤组SERCA2a,RyR2,CAV1.3,Calsequestrin mRNA表达升高;PLB mRNA表达下降。与模型组比较,苓桂养心汤组SERCA2a及Calsequestrin蛋白表达升高;PLB蛋白表达下降。结论:苓桂养心汤能缩小DCM大鼠左心室内径,提高左心室射血分数和缩短率,降低血清BNP和cTnI水平,保护DCM大鼠损伤心肌,改善心功能。苓桂养心汤可部分调控DCM大鼠心肌肌浆网钙泵,兰尼碱受体,受磷蛋白,肌集钙蛋白,L-型钙离子通道的mRNA基因和蛋白表达。苓桂养心汤治疗DCM大鼠的作用机制,可能与通过调节DCM大鼠心肌肌浆网钙调控相关蛋白的基因及蛋白表达,改善心肌细胞钙转运及心脏舒缩功能有关。     

马齿苋总黄酮对缺氧/复氧致心肌细胞凋亡的影响

目的观察马齿苋总黄酮(PTF)对缺氧/复氧致H9c2心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Caspase-3 mRNA表达的影响。方法利用体外培养的H9c2心肌细胞建立缺氧/复氧模型,采用荧光染色法观察心肌细胞凋亡形态变化,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率、RT-PCR检测心肌细胞凋亡基因Caspase-3的表达。结果与A/R组比较,PTF组缺氧/复氧损伤后有部分细胞发生凋亡形态变化,但数量较A/R组明显较少;PTF组均可明显降低细胞凋亡率(P0.05);PTF组可有效减少缺氧/复氧损伤的H9c2心肌细胞内Caspase-3 mRNA的表达。结论 PTF可抑制模拟缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡,其作用可能是通过下调Caspase-3表达实现的。     

红景天苷对缺氧诱导培养乳鼠心肌细胞的保护作用

目的 研究中药红景天苷对缺氧诱导培养乳鼠心肌细胞损伤的保护作用并探讨其作用机制.方法 采用体外培养乳鼠心肌细胞,以N2饱和缺氧培养基制备心肌细胞缺氧损伤模型,分别用红景天苷10 mg/L、50mg/L、100mg/L进行治疗后检测心肌细胞丙二醛(MDA)量、超氧化物歧化酶(SOD)活力、细胞内[Ca2+],肌浆网钙泵(SERCA)活性变化.结果 与正常对照组比较,缺氧模型组心肌细胞MDA水平增高,SOD活力下降,SERCA活性下降,细胞内[Ca2+]增加;红景天苷治疗后MDA水平下降(P＜0.05),SOD活力增高(P ＜0.05),SERCA活性增强(P＜0.05),细胞内[Ca2+],减少(P＜0.01),并呈一定剂量依赖趋势.结论 红景天苷对缺氧诱导培养乳鼠心肌细胞损伤具有保护作用,可能与其减轻氧自由基损伤,有可提高SERCA活性减轻钙超载有关.     

马齿苋总黄酮对缺氧/复氧致心肌细胞损伤的影响及机制研究

目的: 研究马齿苋总黄酮(PTF)对缺氧/复氧致心肌细胞损伤的影响及机制。 方法: 利用体外培养的H9c2心肌细胞建立缺氧/复氧模型。将培养的心肌细胞分为5组:正常对照组、缺氧/复氧损伤模型组、缺氧/复氧损伤加10 mg·L^-1 PTF组、 缺氧/复氧损伤加20 mg·L^-1 PTF组、缺氧/复氧损伤加40 mg·L^-1 PTF组。MTT法检测心肌细胞存活率,荧光分光光度法测定心肌细胞内钙离子浓度,比色法测定心肌细胞培养液中一氧化氮(NO)浓度,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率、RT-PCR检测心肌细胞凋亡基因Caspase-3 mRNA的表达。 结果: 与A/R组比较,PTF组(终质量浓度为10,20,40 mg·L^-1)均可明显提高缺氧/复氧损伤的心肌细胞存活率,降低NO浓度、细胞内钙离子浓度、细胞凋亡率[(18.25±2.64,P<0.05),(13.83±1.52,11.21±1.76, P<0.01)],PTF组可有效减少缺氧/复氧损伤心肌细胞内Caspase-3 mRNA的表达。 结论: PTF可通过抑制心肌细胞内钙超载、减轻过量NO的细胞毒性作用、下调Caspase-3表达,从而保护心肌细胞。     

当归补血汤预处理对缺氧损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的:观察当归补血汤抗心肌细胞缺氧损伤的作用,并探讨其作用机制。方法:建立大鼠H9C2心肌细胞缺氧损伤模型,以正常培养条件下的心肌细胞为正常对照组,将预先加入当归补血汤的细胞(当归补血汤预处理组)在正常条件下培养24h,随后与未处理细胞(缺氧组)同时进行缺氧培养,Annexin V/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡率,DCFH-DA荧光探针流式细胞仪检测细胞内活性氧簇(ROS)水平,RT-PCR荧光相对定量检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和p53的m RNA表达水平,Western blot检测Cyt C蛋白表达水平。结果:缺氧组细胞凋亡率、细胞内ROS水平、Cyt C蛋白表达水平,p53 m RNA表达水平均明显高于正常对照组(P0.05)。经当归补血汤预处理的缺氧损伤心肌细胞凋亡率、细胞内ROS水平、Cyt C蛋白表达水平、p53 m RNA表达水平均明显低于缺氧组(P0.05),HIF-1αm RNA水平明显高于缺氧组(P0.05)。结论:H9C2心肌细胞缺氧损伤后细胞凋亡显著增加。当归补血汤能够抑制缺氧损伤心肌细胞凋亡,其可能通过降低p53 m RNA表达,促进HIF-1αm RNA表达等机制来减轻缺氧对心肌细胞的损伤作用。     

益气活血药对心梗后心功能不全大鼠心肌细胞RYR2、SERCA2a及PLB mRNA表达的影响

目的:探讨党参、黄芪、丹参等益气活血药对心梗后心功能不全大鼠心肌细胞RYR2,SERCA2a,PLB mRNA表达的干预作用。方法:SD大鼠42只,冠状动脉前降支结扎术后随机分成3组:假手术组(对照组)、模型组、中药组。模型组和对照组给予生理盐水灌服。中药组给予益气活血中药浸膏灌胃,治疗4周和8周后分别杀死一半大鼠,取出心脏PCR检测RYR2、SERCA2a及PLB mRNA。结果:各组心衰大鼠RYR2、SERCA2a及PLB mRNA的表达较对照组下降,但中药干预4周后中药组RYR2、SERCA2a及PLB mRNA表达较模型组都有明显增高(P<0.05)。中药干预8周后,RYR2、SERCA2a mRNA仍然高于模型组(P<0.05)。结论:党参、黄芪等中药能抑制心梗后心衰大鼠RYR2、SERCA2a及PLB mRNA下降的作用,但缺乏特异性,可能与益气活血药能促进心肌细胞的能量代谢,防止心衰后心肌细胞的凋亡,心室重构有关。     

冠心舒通胶囊对心肌细胞Ca~(2+)-CaM-CaMPKⅡδ信号系统的影响

目的考察冠心舒通胶囊含药血清对缺氧/复氧心肌细胞钙离子(Ca~(2+))-钙调蛋白(CaM)-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱδ(CaMPKⅡδ)信号通路的影响。方法采用胰酶消化法原代培养大鼠乳鼠心肌细胞,应用三气培养箱建立心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,细胞缺氧20h复氧4h后,运用血清药理学方法研究冠心舒通含药血清对缺氧/复氧损伤心肌的作用。荧光分光光度法测定心肌细胞胞质[Ca~(2+)]i,实时定量聚合酶链式反应(realtime-PCR)法测定CaM、CaMPKIIδmRNA表达。结果正常心肌细胞[Ca~(2+)]i、CaMmRNA、CaMPKIIδmRNA表达很低,缺氧/复氧后[Ca~(2+)]i较正常组增高,CaM、CaMPKIIδmRNA表达增高(P0.05),冠心舒通胶囊提取物大鼠灌胃剂量为53.8、107.7、215.4mg/kg所得的含药血清(体积分数为10%)细胞给药组[Ca~(2+)]i降低,CaM、CaMPKIIδmRNA表达下调,与模型组相比有统计学差异(P0.05)。空白血清对心肌细胞[Ca~(2+)]i、CaMmRNA、CaMPKIIδmRNA表达基本无影响(P0.05)。结论冠心舒通含药血清可对抗心肌细胞钙超载,主要是通过降低胞内钙的浓度以及抑制其胞内受体CaM及依赖性蛋白激酶CaMPKⅡδ的活性实现。     

黄芪及丹参对肥大心肌细胞肌浆网钙转运干预作用研究

目的:研究黄芪注射液、丹参注射液对体外培养肥大心肌细胞钙瞬变的影响及其作用机制。方法:实验对象分为5组:对照组、模型组、黄芪组、丹参组、联合用药组,给予相应药物后于24、48、72h,用激光共聚焦显微镜测钙瞬变波荧光强度峰值及半高宽度。采用RT-PCR法及Western blot法测定钙离子转运关键蛋白肌浆网钙泵(SERCA2a)及受磷蛋白(PLB)mRNA转录水平及其蛋白表达。结果:各时点模型组钙瞬变荧光强度净变化降低,半高宽度增加,SERCA2a mRNA及蛋白含量减低,PLB mRNA含量降低,蛋白含量增加。黄芪注射液、丹参注射液及其联合应用可于不同时间点,不同程度改善钙瞬变荧光强度净变化、半高宽度、SERCA2a mRNA及蛋白含量。结论:黄芪注射液,丹参注射液可以改善肥大心肌细胞钙瞬变功能,其机制可能与改善SERCA2a及PLB基因及蛋白含量有关。     

黄芪、丹参对肥大心肌细胞SERCA2a、PLB mRNA表达的影响

目的:研究黄芪注射液、丹参注射液对肥大心肌细胞SERCA2a、PLB mRNA的影响。方法:采用AngⅡ致乳鼠心肌细胞肥大模型,分为对照组、模型组、黄芪组、丹参组、联合组,采用RT-PCR法观察给药后24、48、72h心肌细胞PLB和SERCA2a mRNA水平。结果:AngⅡ可使PLB和SERCA2a mRNA水平降低,各时点SERCA2a下降均具有显著差异(P<0.05),48、72h PLB下降具有统计学意义(P<0.01),各用药组不同时点、不同程度改善PLB、SERCA2a mRNA水平与SERCA2a/PLB。结论:黄芪注射液、丹参注射液及其联合应用可以在不同时间改善SERCA2a、PLB mRNA水平和SERCA2a/PLB。