老年慢性阻塞性肺疾病患者外周血T细胞表达趋化因子受体3的研究

目的 探讨趋化因子受体3(CXCR3)在老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)发病中的作用.方法 研究对象均为65岁以上的老年人,分为COPD急性加重期组(20例)、COPD稳定期组(17例)及对照组(14例),分离外周血单个核细胞,流式细胞仪检测CD4+和CD8+T细胞分别占总T细胞的百分比,CD4+CXCR3+T细胞占总CD4+T细胞的百分比,CD8+CXCR3+T细胞占总CD8+T细胞的百分比,以及CD4+CXCR3+和CD8+CXCR3+T细胞上CXCR3的平均荧光强度(MFI).结果 ①三组间及COPD急性加重期组治疗前后CD4+、CD8+T细胞分别占总T细胞的百分比,差异无统计学意义.②CD8+CXCR3+T细胞占总CD8+T细胞的百分比及CD4+CXCR3+T细胞占总CD4+T细胞百分比:COPD急性加重期组较COPD稳定组及对照组明显降低,COPD稳定组较对照组明显升高,差异有统计学意义,P＜0.05.CD4+CXCR3+和CD8+CXCR3+T细胞上CXCR3的MFI三组间差异无统计学意义.③COPD急性加重期组经治疗后CD8+CXCR3+T细胞占总CD8+T细胞的百分比及CD4+CXCR3+T细胞占总CD4+T细胞百分比,CD4+CXCR3+和CD8+CXCR3+T细胞上CXCR3的MFI,均明显降低,差异有统计学意义,P＜0.05.结论 COPD稳定期T细胞上CXCR3的过度表达在COPD慢性炎症过程中起作用.     

CXCR5~+CD8~+ T细胞在HIV感染中的免疫特征及其与疾病进展关系的研究

目的探讨HIV感染者外周血CXCR5~+CD8~+T细胞的频率、功能变化及其与病情进展的相关性。方法收集40例HIV感染者和15例健康对照者,采用流式细胞分析术检测其外周血CXCR5~+CD8~+T细胞频率及IFN-γ和IL-10表达,并分析其与血浆HIV载量和外周血CD4~+T细胞计数的相关性。结果与健康对照组相比,HIV感染组外周血CXCR5~+CD8~+T细胞频率上调(P0.05),且与外周血CD4~+T细胞计数呈弱正相关(r=0.349,P=0.027),与血浆HIV载量呈弱负相关(r=-0.377,P=0.040);HIV感染者外周血CXCR5~+CD8~+T细胞IFN-γ表达与血浆HIV载量呈负相关(r=-0.514,P=0.002);而CXCR5~+CD8~+T细胞IL-10的表达在HIV感染者中明显上调(P0.05),与外周血CD4~+T细胞计数呈弱负相关(r=-0.317,P=0.046),与血浆HIV载量呈正相关(r=0.670,P=0.002)。结论 HIV感染者外周血CXCR5~+CD8~+T细胞频率功能变化与疾病进展密切相关。     

慢性HBV感染者外周血CXCR5~+CD4~+Tfh细胞的测定及其与FoxP3~+Treg细胞的相关性

目的:探讨慢性乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)感染不同阶段患者外周血CD4+T淋巴细胞中CD4+CXCR5+Tfh细胞及CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞的百分比及其意义.方法:应用流式细胞术检测15例慢性无症状HBV携带者(chronic asymptomatic HBV carriers,AsC)、42例慢性乙型肝炎(chronic hepatitisB,CHB)患者(HBeAg阳性25例、HBeAg阴性17例)、11例非活动性HBsAg携带者(inactive HBsAg carriers,InC)外周血CD4+CXCR5+Tfh细胞及CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞占CD4+T淋巴细胞的百分比,并与15例健康对照(healthycontrol,HC)进行比较.结果:AsC、HBeAg(+)CHB、HBeAg(-)CHB组外周血CD4+CXCR5+Tfh细胞占CD4+T淋巴细胞的比例分别为17.66(15.34%-20.56%),21.95(19.60%-26.32%),22.33(17.58%-24.85%),显著高于HC组的13.67(9.80%-15.32%),差异具有统计学意义(P<0.001).与AsC及InC组的16.11(12.33%-19.73%)相比,HBeAg(+)、HBeAg(-)CHB组外周血CD4+CXCR5+Tfh细胞占CD4+T淋巴细胞的比例显著升高(P<0.05).此外,AsC组外周血CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞占CD4+T淋巴细胞的比例为7.70(6.35%-9.13%),显著高于HC组的6.53(5.54%-7.35%),P<0.05.HBeAg(+)CHB组外周血CD4+T淋巴细胞中CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞的频率为7.52(6.09%-8.49%),与AsC组相比呈降低的趋势.外周血CD4+CXCR5+Tfh细胞占CD4+T淋巴细胞的比例与HBVDNA载量呈负性相关(r=-0.275,P<0.05);而与血清ALT水平、HBsAg滴度无相关性.结论:CD4+CXCR5+Tfh细胞可能参与了慢性HBV感染所介导的免疫反应,外周血CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞及CD4+CXCR5+Tfh细胞的消长可能与疾病的活动性相关.     

糖尿病足患者外周血T细胞的分化

目的探讨糖尿病足(DFU)患者外周血中T细胞分化情况及其功能。方法采用流式细胞术分析DFU患者外周血中CD4~+、CD8~+T细胞亚群分布情况,包括初始T细胞、活化T细胞及效应T细胞;分析DFU患者外周血CD4~+、CD8~+T细胞迁移分子CC趋化因子受体(CCR)5、CCR4、CXC趋化因子受体(CXCR)3的表达情况;分析DFU患者外周血CD4~+、CD8~+T细胞分泌炎症因子干扰素(IFN)γ,白细胞介素(IL)2,肿瘤坏死因子(TNF)-α情况。结果与对照组比较,DFU患者外周血初始CD4~+、CD8~+T细胞比例显著降低,活化与效应T细胞比例显著升高(P<0.05);迁移分子受体CCR4表达无显著差异(P>0.05),CCR5与CXCR3表达在DFU患者中显著降低(P<0.05);DFU患者中,炎症因子IFNγ在活化T细胞中高表达,在效应T细胞中几乎不表达,而IFNγ与TNF-α在效应T细胞中高表达,在初始T细胞中几乎不表达。结论DFU患者外周血T细胞亚群发生变化,其分泌的炎症因子影响了T细胞的免疫功能发挥。     

高盐对乳鼠心脏成纤维细胞增殖与胶原分泌的影响及相关机制

目的观察高盐对乳鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖及胶原分泌的影响,并分析其可能的相关机制。方法胰酶、Ⅱ型胶原酶两步消化法消化分离乳鼠心肌组织,通过差速贴壁法收集、培养乳鼠CFs。CFs传至第4代去血清同步化24 h,分为对照组(培养基Na+终浓度139 mmol/L)、高盐组(培养基Na^+终浓度146、149、152、155、158、161、164、167、170、173和176 mmol/L),培养24、48、72和96 h后,CCK-8检测CFs增殖情况。选择增殖作用最为明显的Na+浓度和作用时间,以Na^+139 mmol/L为对照进行后续实验,高盐组(培养基Na^+终浓度161 mmol/L),甘露醇组(甘露醇浓度为29.334 mg/ml),其中甘露醇组与高盐组渗透压相同。CCK-8检测渗透压对CFs增殖的影响。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测CFs培养上清液中Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达。Western印迹检测CFs中转化生长因子(TGF)-β1、p-smad3及smad7蛋白的表达情况。结果CCK-8结果显示,Na+146~176 mmol/L作用48、72 h可促进乳鼠CFs增殖(Na+161 mmol/L作用48 h最明显);检测渗透压对CFs增殖显示,高盐组(Na+161 mmol/L)细胞发生增殖明显,而甘露醇组细胞较对照组(Na+139 mmol/L)并无增殖差异;ELISA结果显示,高盐组中Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达均增加(P<0.05),甘露醇组胶原Ⅰ和胶原Ⅲ表达较对照组比无差异(P>0.05)。Western印迹结果显示,高盐组TGF-β1和p-smad3蛋白表达较对照组和甘露醇组明显增多(P<0.05),smad7蛋白表达明显减少(P<0.05);甘露醇组TGF-β1、p-smad3、smad7蛋白表达与对照组比较无差异(P>0.05)。结论高盐可诱导乳鼠CFs发生增殖,且能够促使Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原分泌增加,且与渗透压改变无关,其机制可能与TGF-β1/smads表达异常相关。     

趋化因子受体3在老年COPD中的作用

目的探讨老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)发病机制中趋化因子受体3(CXCR3)的作用。方法选择COPD急性加重期、稳定期患者和对照组各30例,分别作为A、B、C组,用流式细胞术进行检测。结果CD+4CXCR3+T细胞占总CD+4T细胞的百分比及CD+8CXCR3+T细胞占总CD+8T细胞的百分比的比较中,A组治疗前均明显低于B、C组(P均0.05)治疗后CD+4CXCR3+T细胞占总CD+4T细胞的百分比、CD+8CXCR3+T细胞占总CD+8T细胞的百分比、CD+4CXCR3+T与CD+8CXCR3+T细胞MFI相比治疗前均显著下降(P0.05)。结论 COPD稳定期T细胞上CXCR3+表达明显增多,在COPD慢性炎症反应中可能发挥着重要作用。     

成人隐匿性自身免疫性糖尿病患者CD_4~+CD_(25)~+ T细胞亚群的变化

目的探讨成人隐匿性自身免疫性糖尿病(LADA)患者外周血免疫调节性CD4+CD25+T细胞亚群的变化及其意义。方法以流式细胞仪检测32例LADA、16例T1DM、25例T2DM及27例正常对照外周血CD4+CD25+、CD3+CD8+T细胞。结果①LADA组外周血CD4+CD25+T细胞低于而CD3+CD8+T细胞高于T1DM组、T2DM组和正常对照组;②LADA患者CD3+CD8+T细胞比例与起病年龄、FC-P、2hC-P呈负相关。结论LADA患者免疫调节性CD4+CD25+T细胞减少,不能有效维持对胰岛自身抗原的耐受;细胞毒性CD3+CD8+T细胞增多从而破坏胰岛β细胞,导致自身免疫性糖尿病的发生和发展。     

高糖通过Rho/ROCK信号通路诱导人肾小球系膜细胞的炎症反应及纤维化

目的 探讨Rho/ROCK信号通路在高糖诱导的人肾小球系膜细胞(HMCs)炎症反应及纤维化中的作用.方法 将传代培养的HMCs同步化后分组:(1)正常糖浓度对照组(NG,5.5 mmol/L葡萄糖);(2)高糖组(HG,30 mmol/L葡萄糖);(3)甘露醇渗透压对照组(Man,5.5 mmol/L葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇);(4)NG+Y-27632(10 μmmol/L)组;(5)HG+Y-27632(10 μmmol/L)组,培养12、24、36、48、72 h后收集上清及细胞,用Western印迹检测RhoA蛋白的活化,用实时PCR检测细胞中RhoA、ROCK-Ⅰ、结缔组织生长因子(CTGF)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA浓度的变化,用ELISA方法检测上清中纤维连接蛋白(FN)、CTGF、TNF-α的蛋白含量.结果 (1)高糖刺激HMCs的RhoA活化,于30 min即可出现活性升高,1 h达到高峰,之后活化的RhoA表达逐渐下降(P=0.02).(2)高糖培养下的HMCsRhoA、ROCK-Ⅰ、CTGF、TNF-α mRNA的表达较NG组明显升高(P＜0.05),并有一定的时间依赖性,Man组与NG组相比差异无统计学意义(P＞0.05).(3)经Y-27632预处理后,在正常糖和高糖浓度培养24 h或48 h后,NG+Y-27632组和HG+Y-27632组与未处理组相比RhoA、ROCK-Ⅰ、CTGF、TNF-α mRNA的表达明显下降(P＜0.01).(4)高糖呈时间依赖方式增加HMCs的FN、CTGF、TNF-α分泌(P＜0.05).(5)经Y-27632预处理,继续培养12、24、36、48、72 h后NG组和HG组中FN、CTGF、TNF-α蛋白的分泌较处理前明显降低(P＜0.05).结论 高糖可通过Rho/ROCK信号通路介导HMCs的炎症反应和纤维化,抑制此通路可作为减缓糖尿病肾病发生发展的潜在靶点.

Abstract：

Objective To investigate the role of Rho/ROCK signaling pathway in the process of human mesangial cells (HMCs) inflammation and fibrosis induced by high glucose. Methods Synchronized HMCs were divided into following groups: ( 1 ) Normal glucose control group ( NG, 5.5 mmol/L glucose); ( 2 ) High glucose group ( HG, 30 mmol/L glucose); (3) Mannitol group( Man,5.5 mmol/L glucose+ 24.5 mmol/L mannitol); (4) NG +Y-27632 group( 10 μ mmol/L Y-27632 ); ( 5 ) HG Y-27632 group ( 10 μmmol/L Y-27632 ). The supernatant and cells were collected at 0,12,24,36,48, and 72 h. Western blot was used to detect the active RhoA and total RhoA,while RhoA, ROCK-Ⅰ, CTGF, and TNF-α mRNA expressions were determined with realtime PGR method in the cells, then ELISA method was used to check protein levels of FN, CTGF, and TNF-α in the supernatant. Results ( 1 ) RhoA activation was stimulated after treatment for with 30 mmol/L glucose, peaked at 1 h, and then decreased ( P = 0. 02). (2) RhoA, ROCK-Ⅰ, CTGF, and TNF-α mRNA expressions in HMC cultured under high glucose were higher than those in the normal group ( P ＜ 0.05 ), and there was certain time-dependence. Besides, there was no statistical significance between Man and NG groups( P＞0. 05 ). ( 3 ) After Y-27632 pretreatment and being cultured with normal glucose and high glucose for24 h or48 h, RhoA, ROCK-Ⅰ, CTGF, and TNF-α mRNA expressions were significantly decreased ( P＜0.01 ) as compared with groups without treatment. (4) High glucose increased FN, CTGF,and TNF-α protein secretion of HMC in a time-dependent manner( P＜0. 05 ). ( 5 ) After Y-27632 pretreatment and being cultured with normal and high glucose for 12,24,36,48,72 h, FN, CTGF, and TNF-α protein secretions were significantly reduced( P＜0.05 ). Conclusion Rho/ROCK signaling pathway may mediate inflammation and fibrosis induced by high glucose in HMCs, supporting a potential role for inhibitors of Rho/ROCK in the treatment of diabetic nephropathy.     

妊娠期糖尿病患者外周血中CD4~+Foxp3~+调节性T细胞的表达与血清25羟维生素D水平关系的研究

目的探讨GDM患者外周血中CD4~+Foxp3~+调节性T细胞的表达与血清25羟维生素D[25(OH)D]水平的关系。方法选取2018年10月至2019年3月于遵义医科大学附属医院内分泌科、产科门诊及住院患者120例,分为GDM组(孕24～28周)45例,正常妊娠(孕24～28周)对照组(GNGT组)45名,非妊娠单纯T2DM患者(T2DM组)30例。采用流式细胞术检测外周血中CD4~+Foxp3~+调节性T细胞的表达,电化学发光法测定25(OH)D水平。结果 GNGT、T2DM及GDM组血清25(OH)D水平依次降低[(36.11±5.85)vs(20.92±5.81)vs(10.74±6.48)μg/L,P0.05]。血清25(OH)D与外周血中CD4~+Foxp3~+调节性T细胞占CD4~+T细胞比例及HDL-C呈正相关(r=0.384、0.496,P0.05),与FIns、HbA_1c、HOMA-IR呈负相关(r=―0.583、―0.657、―0.492,P0.05)。结论 GDM患者血清25(OH)D水平及外周血中CD4~+Foxp3~+调节性T细胞表达降低可能与GDM的发生发展有关。     

房颤对外周血CD34+造血祖细胞的影响及SDF-1/CXCR4在心房中的表达

目的:研究不同类型的房颤(AF)对人外周血CD34+造血祖细胞（CD34+HPCs）的影响,以及持续心房快速起搏犬心肌基质细胞衍生因子-1（SDF-1）及其受体CXCR4的表达,初步探讨CD34+HPCs及SDF-1/CXCR4在AF时心肌损伤修复中的作用。方法: 应用流式细胞术测定阵发性AF患者组(n=35)、持续性AF患者组(n=35)及窦性心律者对照组(n=30)外周血中CD34+HPCs的百分含量;并对持续性AF患者组中24例患者成功进行体外直流电复律后48 h,测定外周血中CD34+HPCs的百分含量。另外,将成年健康杂种犬13条随机分为两组:即快速起搏组(n=7)和假手术组(n=6),均开胸后于右心耳缝植AOO型起搏器,快速起搏组以400次/min起搏6周,假手术组不起搏。应用RT-PCR测定左心耳和左心房CXCR4 mRNA的表达水平,用蛋白质免疫印迹法检测左心房SDF-1蛋白的表达。结果: 持续性AF患者组外周血中CD34+HPCs的百分含量明显高于阵发性AF患者组和对照组（P<0.05）;而后两组间无差别。持续性AF患者成功进行体外直流电复律后48 h,外周血中CD34+HPCs的百分含量较复律前明显下降（P<0.05）。快速起搏组犬左心耳和左心房CXCR4 mRNA表达的水平明显高于假手术组（P<0.05）,左心耳增高16.7%,左心房增高18.8%;SDF-1蛋白质表达的水平亦明显高于假手术组（P<0.01）。结论: 持续性AF患者外周血中CD34+HPCs的数量增加;心房快速起搏犬心房SDF-1/CXCR4的表达增加。CD34+HPCs和SDF-1/CXCR4可能参与了持续性AF患者心房损伤时心肌组织的修复过程。     

类风湿关节炎患者外周血CD4 T细胞关节局部趋化机制

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血CD4 T细胞比例变化情况及其对关节局部趋化的机制。方法流式细胞术分析RA患者外周血单个核细胞(PBMC)中CD4 T细胞的比例,并分析CD4 T细胞比例与RA疾病活动性评分系统(DAS28)评分间的关系。激光共聚焦方法检测RA患者滑膜局部浸润CD4 T细胞情况。流式细胞术分析RA患者CD4 T细胞表面趋化因子受体表达情况。结果与对照组相比,RA患者外周血PBMC中CD4 T细胞的比例显著降低(P0.01),且RA患者外周血CD4 T细胞比例与DAS28评分呈明显负相关(r=-0.753 0,P=0.001 2)。关节局部CD4 T细胞浸润的激光共聚焦结果显示,与对照组相比,RA患者滑膜中具有更多的CD4 T细胞浸润。趋化因子受体分析结果显示,RA患者外周血CD4 T细胞表面CCR5、CXCR1和CXCR3的表达显著升高(P0.01)。结论 RA患者外周血CD4 T细胞表面表达升高的CCR5、CXCR1和CXCR3可能参与外周血CD4 T细胞向滑膜局部的趋化。     

肥胖2型糖尿病患者血浆中葡萄糖转运蛋白表达及其与细胞外信号调节激酶关系的临床观察

目的探讨肥胖T2DM患者血浆中葡萄糖转运蛋白(Glut)的表达及其与细胞外信号调节激酶(ERK)的关系。方法将研究对象分为T2DM合并超重/肥胖(T2DM+OB/OW)组、单纯T2DM(T2DM)组、糖调节正常合并超重/肥胖(OB/OW)组及正常对照(NC)组。采用全自动生化分析仪测定血糖浓度;ELISA检测血胰岛素含量;比色法检测血脂四项及HbA1c水平;Western blot检测Glut1、Glut2和Glut4蛋白的表达;RT-PCR检测Glut1、Glut2、Glut4和ERK mRNA的表达。结果 T2DM+OB/OW组及T2DM组FPG、2hPG、HbA1c水平[FPG:(8.90±3.70),(9.30±2.80)mmol/L vs(3.90±0.70),(4.10±0.90)mmol/L;2hPG:(20.10±3.50),(18.48±4.59)mmol/L vs(6.70±0.80),(6.60±0.75)mmol/L;HbA1c:(9.9±3.19)%,(8.68±2.75)%vs(5.05±0.37)%,(5.47±0.59)%]均高于OB/OW组及NC组(P<0.01);T2DM+OB/OW、T2DM及OB+OW组TC和TG水平[TC:(5.06±0.97),(5.13±1.27),(4.67±0.83)vs(3.51±0.89)mmol/L;TG:(3.52±2.68),(3.79±3.56),(1.87±0.95)vs(1.41±1.21)mmol/L]均高于NC组(P<0.01);OB/OW组FIns水平[(7.98±2.01)vs(5.91±3.02),(5.49±1.36)mmol/L]高于T2DM、NC组(P<0.05)。T2DM+OB/OW、T2DM组Glut1,Glut2,Glut4表达均低于OB+OW、NC组(P<0.01);T2DM+OB/OW组Glut2表达低于T2DM组;T2DM+OB/OW、T2DM组Glut2和Glut4的mRNA表达低于OB/OW、NC组;T2DM+OB/OW、T2DM组ERK的mRNA表达高于OB/OW、NC组。结论肥胖T2DM患者体内Glut1、Glut2和Glut4的表达均降低,其中,Glut2和Glut4的表达与ERK的表达呈负相关。     

HIV感染者外周血CXCR4/CXCL12表达情况及临床意义

目的观察不同病情状态的HIV感染者外周血趋化因子C-X-C基元受体4(CXCR4)/趋化因子C-X-C基元配体12(CXCL12)的表达情况,并分析其临床意义。方法纳入2017年1月至2019年12月本院收治97例HIV感染者,采用全自动病毒载量仪检测HIV感染者血浆病毒载量,分别依据病毒载量及CD4细胞水平分组;比较患者外周血CXCR4、CXCL12表达情况,分析二者在不同病情HIV感染者中表达意义。结果Ⅱ组(100 copies/mL病毒载量≤1 000 copies/mL)、Ⅲ组(病毒载量1 000 copies/mL)的CXCR4表达低于Ⅰ组(病毒载量在40～100 copies/mL),CXCL12表达高于Ⅰ组,且Ⅲ组的CXCR4表达低于Ⅱ组,CXCL12表达高于Ⅱ组(P 0.05);低CD4细胞未治疗组患者CXCR4水平低于高CD4细胞未治疗组,且CXCL12水平高于高CD4细胞未治疗组(P 0.05)。相关性检验结果显示,病毒载量(HIV RNA定量)与HIV感染者外周血CXCR4表达呈负相关(r=-0.856,P 0.05),与CXCL12表达呈正相关(r=0.897,P 0.05);CD4细胞水平与HIV感染者外周血CXCR4表达呈正相关(r=0.796,P 0.05),与CXCL12表达呈负相关(r=-0.871,P 0.05)。结论不同病情状态的HIV感染者外周血CXCR4/CXCL12表达差异显著,CXCR4、CXCL12异常表达可为监测HIV感染者机体状况提供重要信息。     

法舒地尔通过Rho/ROCK信号通路对高糖培养人肾小球系膜细胞炎症反应及纤维化的影响

目的 体外实验研究法舒地尔(fasudil)通过抑制Rho/ROCK信号通路对高糖培养下的人肾小球系膜细胞(HMCs)炎症反应及其纤维化的影响.方法 传代培养的HMCs同步化后分组:(1)正常糖浓度对照组(NG,含葡萄糖5.5 mmol/L);(2)高糖组(HG,含葡萄糖30.0 mmol/L);(3)甘露醇渗透压对照组(Man,含5.5 mmol/L葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇);(4)高糖+法舒地尔处理组(HG+F组,法舒地尔浓度分别为25、50、100 μmol/L).培养12、24、36、48、72 h收集上清及细胞,用实时PCR检测细胞中小G蛋白(RhoA)、小G蛋白激酶-Ⅰ(ROCK-Ⅰ)、纤维结缔组织生长因子(CTGF)mRNA浓度的变化,用ELISA方法检测上清中纤维连接蛋白(FN)、CTGF、TNFα的蛋白含量.结果 (1)高糖培养下的HMCs中RhoA、ROCK-Ⅰ、CTGF mRNA的表达较NG组明显升高(P＜0.05),并有一定的时间依赖性,Man组与NG组相比差异无统计学意义(P＞0.05).(2)正常培养的HMCs经不同浓度法舒地尔预处理后,高糖继续培养24 h或48 h,HG+F组与HG组对比,RhoA、ROCK-Ⅰ、CTGF mRNA的表达明显下降(P＜0.05),并有一定的浓度依赖性.(3)高糖呈时间依赖方式增加HMCs对FN、CTGF、TNFα蛋白的分泌(P＜0.05),而NG组和Man组无此作用(P＞0.05).(4)经不同浓度法舒地尔预处理后,高糖继续培养12、24、36、48、72 h后FN、CTGF、TNFα蛋白的分泌较HG组明显降低(P＜0.05).结论 法舒地尔通过抑制高糖激活的HMCs的Rho/ROCK信号转导通路,从而降低下游的炎性因子和细胞因子的分泌,减少HMCs的炎症反应及纤维化,为糖尿病肾病的治疗提供新的依据.

Abstract：

Objective To study the effect of fasudil on inhibiting the Rho/ROCK signaling pathway under high glucose in human mesangial cells (HMCs) inflammation and fibrosis. Methods Synchronized HMCs were divided into following groups: (1) Normal glucose control group ( NG, 5. 5 mmol/L glucose) ;(2) High glucose group (HG, 30 mmol/L glucose) ; (3) Mannitol group (Man, 5.5 mmol/L glucose + 24. 5 mmol/L mannitol) ; (4) High glucose + fasudil group ( HG + F, the concentrations of fasudil were 25 ,50 and 100 μmol/L, respectively). Collect the supernatant and cells at 0, 12, 24, 36, 48 and 72 h respectively, and determine the concentration changes of the RhoA, ROCK- Ⅰ, connective tissue growth factor (CTGF)mRNA with real-time PCR method in the cells, then used the ELISA method to check the protein content of the fibronectin ( FN) , CTGF, TNFα in the supernatant. Results ( 1) RhoA, ROCK- Ⅰand CTGF mRNA of the HMCs cultured under the high glucose expressed significantly higher than those in the normal group, and there was certain time-dependence. Besides, there was no statistic significance by comparing Man and NG. (2) Under the high glucose situation, after the fasudil pretreatment with different concentrations and 24 h or 48 h culture with high glucose, RhoA, ROCK- Ⅰ , CTGF mRNA expression was significantly decreased in HG + F, compared with HG, and there was certain concentration-dependence. (3) High glucose increased the FN, CTGF, TNFα protein secretion of HMCs in a time-dependent manner, but normal glucose and mannitol had no such effect. (4) After the fasudil pretreatment with different concentrations and culture with high glucose for 12, 24, 36, 48, 72 h, the FN, CTGF, TNFα protein secretion was significantly reduced compared with HG. Conclusion Fasudil can reduce the secretion of downstream inflammatory factors and cytokines by inhibiting high glucose-activated HMCs Rho/ROCK signaling pathway, and reduce the inflammation and fibrosis of HMCs. This provides a new basis for the therapeutic target in the treatment of diabetic nephropathy.     

外周血衰老CD8+T细胞频率与2型糖尿病合并代谢相关脂肪性肝病的相关性分析

目的 探讨 T2DM 合并代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)患者外周血衰老 CD8⁺T 细胞频率变化。 方法 选取 2018 年 1 月至 2019 年 5 月于安徽医科大学第二附属医院内分泌科住院的T2DM 患者 102 例,按照是否合并 MAFLD 分为 T2DM 合并 MAFLD 组(T2DM+MAFLD,n=52)和单纯 T2DM 组(T2DM,n=50),选取同期体检健康者为正常对照组(NC,n=40)。检测各组外周血衰老 CD8⁺T 细胞水平,收集临床资料和实验室检查指标,计算改良稳态模型评估胰岛素抵抗指数(HOMA‐IR)。Spearman 相关分析衰老 CD8⁺T 细胞与临床指标的相关性。Logistic 回归分析 T2DM 合并 MAFLD 的影响因素。多元线性回归分析衰老 CD8⁺T 细胞的影响因素。 结果 T2DM+MAFLD组外周血衰老 CD8⁺T 细胞水平高于 NC、T2DM 组(P<0. 05)。Spearman 相关分析显示,外周血衰老CD8<...     

L-选择素在系统性红斑狼疮患者外周血CD4~+CD25~+T淋巴细胞的表达及其与Foxp3的相关性

目的了解黏附分子L-选择素(L-selectin,CD62L)在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血CD4+CD25+T淋巴细胞的表达,及其与CD4+CD25+Treg细胞转录因子Foxp3的相关性。方法用流式细胞仪检测68例SLE患者外周血CD4+、CD4+CD25+T淋巴细胞CD62L和Foxp3的表达。根据SLEDAI评分,68例SLE患者中活动组36例,稳定组32例;健康对照组35人。结果活动组SLE患者外周血CD4+CD25+CD62L+T淋巴细胞为(1.71±1.60)%,低于对照组的(5.87±3.03)%(P0.01)和稳定组的(4.91±1.69)%(P0.01),差异具有显著性意义;且与SLEDAI呈负相关(r=-0.695,P=0.000),与补体C3水平呈正相关(r=0.522,P=0.000)。活动组SLE患者外周血CD4+CD25+CD62L+Foxp3+T淋巴细胞为(1.06±0.47)%,低于对照组的(3.17±0.87)%(P0.01)和稳定组的(3.46±1.15)%(P0.01),差异有显著性意义。CD4+T淋巴细胞CD62L的表达与CD4+CD25+T淋巴细胞CD62L和Foxp3的表达呈负相关(r=-0.689,P=0.000;r=-0.568,P=0.000);CD4+CD25+T淋巴细胞CD62L的表达与Foxp3的表达呈正相关(r=0.891,P=0.000)。结论CD62L在SLE患者外周血CD4+CD25+T的低表达及与Foxp3表达密切相关,可能在SLE发病中起着重要作用。     

氨茶碱对健康人外周血T细胞及CD4~+亚群凋亡的影响

目的观察氨茶碱对分离培养的健康人外周血T细胞及CD4+亚群凋亡的影响。方法密度梯度离心法及尼龙棉柱法分离健康成年人外周血T细胞,及CD8阴性选择磁性分离健康成年人外周血CD4+T细胞。分两部分进行:①外周血T细胞分对照组、氨茶碱组(0.14～18μg/ml),培养72h后用流式细胞术检测凋亡率变化;②CD4+T细胞分对照组、小剂量氨茶碱组(1.13μg/ml)培养48～72h后用流式细胞术检测凋亡率变化。结果①T细胞的分离纯度为81.3%～94.5%,CD4+T细胞的分离纯度为84%～90%;②(0.14～18μg/ml)氨茶碱共培养人外周血T细胞72h后,其中氨茶碱1.13～18μg/ml组凋亡率差异有统计学意义(P值均<0.05);氨茶碱0.14～0.56μg/ml组凋亡率与阴性对照组比较差异无统计学意义;③氨茶碱1.13μg/ml组干预后,培养CD4+T细胞48～72h,经流式细胞术检测凋亡率,与阴性对照组相比,P值均<0.05,48h的凋亡率与72h者相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论小剂量氨茶碱(1.13μg/ml)可诱导人外周血T细胞和CD4+T细胞凋亡率增加。     

腹腔镜胆囊切除术后患者外周血T细胞比例及功能变化

目的探讨胆结石采用腹腔镜胆囊切除术(LC)进行治疗对患者全身免疫功能的影响。方法选取50例胆结石患者,随机分为LC组和开腹腹腔镜胆囊切除术(OC)组各25例。分别于手术前和手术后24 h收集患者外周血,采用密度梯度离心法分离获取外周血单个核细胞(PBMC)。采用流式细胞术检测PBMC中CD4 T淋巴细胞比例、CD8 T淋巴细胞比例,并计算CD4 T/CD8 T淋巴细胞比例比值。采用胞内染色方法分析外周血干扰素(IFN)-γ~+CD4 T细胞比例和穿孔素阳性CD8 T细胞比例。结果与手术前外周血CD4 T细胞比例相比,手术后24 h LC组患者外周血CD4 T细胞比例未出现显著变化(P0.05);而OC组患者术后24 h外周血CD4 T细胞比例与术前相比显著降低(P0.05)。两组患者术后24 h外周血CD8 T细胞比例与术前相比均未出现显著变化(P0.05)。LC组患者外周血CD4/CD8 T细胞比例比值未出现显著变化;OC组患者外周血CD4/CD8 T细胞比例比值显著降低(P0.05)。与手术前外周血IFN-γ~+CD4 T细胞比例相比,手术后24 h LC组患者外周血IFN-γ~+CD4 T细胞比例和穿孔素阳性CD8 T细胞比例均未出现显著变化(P0.05);而OC组患者术后24 h外周血IFN-γ~+CD4 T细胞比例较术前显著降低(P0.05),术后24 h外周血穿孔素阳性CD8 T细胞比例较术前显著升高(P0.05)。结论 LC治疗对患者全身免疫功能的影响要轻于OC,可在临床广泛推广使用。     

全反式维甲酸对高糖诱导的HK-2细胞外基质合成的影响及可能机制

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对高糖诱导HK-2细胞外基质合成的影响及其在延缓糖尿病肾病肾间质纤维化中的可能作用机制。方法将体外培养的HK-2细胞随机分为七组:A组(5.5 mmol/L D-葡萄糖)、B组(30 mmol/L D-葡萄糖)、C组(5.5 mmol/L D-葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇)、D组(10~(-7)mol/L ATRA+30 mmol/L高糖)、E组(10~(-6)mol/L ATRA+30 mmol/L高糖)、F组(10~(-5)mol/L ATRA+30 mmol/L高糖)、G组(10μmol/L Y-27632+30 mmol/L高糖),各组细胞均培养48 h。应用ELISA法检测细胞培养液结缔组织生长因子(CTGF)和Ⅳ型胶原的表达水平;RT-PCR法检测细胞Rho A、ROCK1的表达水平。结果 B组Rho A mRNA及ROCK1 mRNA的表达较A组显著升高(P<0.05),D、E、F组Rho A mRNA及ROCK1 mRNA较B组均表达减少(P<0.05),且随着ATRA浓度的升高呈现剂量依赖性。G组Rho A mRNA的表达与B组无明显差异,但ROCK1 mRNA的表达较B组显著减少(P<0.05);直线相关分析显示高糖组,D、E、F组Rho A mRNA与ROCK1 mRNA表达呈正相关(r=0.854,P=0.030;r=0.895,P=0.016;r=0.883,P=0.020;r=0.867,P=0.025);ELISA结果显示D、E、F组及G组CTGF、Ⅳ型胶原表达较B组显著下降(P<0.05),且下降程度与ATRA浓度呈现剂量相关性。结论 ATRA在一定浓度范围内可抑制高糖诱导的HK-2细胞外基质的合成,延缓肾间质纤维化,其机制可能与抑制Rho A/ROCK通路有关。     

耐药肺结核患者调节性T细胞与IL-17的免疫研究

目的研究耐药肺结核患者外周血中CD+4CD+25CD127low调节性T细胞及IL-17的表达水平与非耐药肺结核患者、健康对照者的差异。方法检测40例耐药肺结核患者(耐药组)、40例非耐药肺结核患者(普通组)和40例健康对照者(健康对照组)外周血CD+4CD+25CD127low调节性T细胞表达强度;并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测辅助性T细胞17(Th17)分泌的细胞因子IL-17表达水平。结果耐药组CD+4CD+25CD127low调节性T细胞表达为(7.85±2.03)%,普通组为(6.23±1.88)%,健康对照组为(5.14±1.67)%,三组之间差异显著(P均0.01);耐药组IL-17含量为(14.29±6.71)ng/L,而普通组为(19.64±7.82)ng/L,健康对照组为(25.42±8.67)ng/L,三组之间差异显著(P均0.01)。结论外周血CD+4CD+25CD127low调节性T细胞、IL-17水平在耐药肺结核患者和非耐药肺结核中表达的差异可能是耐药机制产生的原因之一,与耐药性的形成或严重程度有相关。