依托咪酯通过下调LncRNA GPC3-AS1调控卵巢癌细胞CAOV3增殖及凋亡

摘要：目的:探讨依托咪酯对卵巢癌细胞CAOV3增殖、凋亡的影响及其对LncRNA GPC3-AS1的调控作用。方法:体外培养人卵巢癌细胞CAOV3,使用不同剂量的依托咪酯处理细胞,另外将si-NC、si-GPC3-AS1转染至CAOV3细胞,分别将pcDNA、pcDNA-GPC3-AS1转染至CAOV3细胞后加入依托咪酯处理细胞;采用MTT实验与平板克隆形成实验检测细胞增殖能力;采用qRT-PCR检测GPC3-AS1的表达量;采用流式细胞术检测细胞凋亡能力; Western blot法检测B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）蛋白表达量。结果:与对照组比较,依托咪酯中、高剂量组可明显降低细胞存活率、GPC3-AS1的表达水平及Bcl-2蛋白水平,减少克隆形成数,提高凋亡率及Bax蛋白水平（P<0.01）;转染si-GPC3-AS1可明显降低细胞存活率、GPC3-AS1表达水平及Bcl-2蛋白水平,减少克隆形成数,提高凋亡率及Bax蛋白水平（P<0.05）;转染pcDNA-GPC3-AS1可明显减弱依托咪酯对CAOV3细胞增殖及凋亡的作用（P<0.05）。结论:依托咪酯可能通过下调GPC3-AS1的表达而抑制卵巢癌细胞增殖及诱导细胞凋亡。     

马甲子提取物调控HCG18对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响

摘要：目的:探索马甲子提取物对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制。方法:分别使用0,25,50,75μg·ml-1马甲子提取物处理宫颈癌细胞SiHa,噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、P21、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达,实时荧光定量PCR（qPCR）检测长链非编码RNA（lncRNA）人类白细胞抗原复合体18（HCG18）表达。在细胞中转染si-HCG18,观察抑制HCG18对细胞SiHa增殖、凋亡的影响。在细胞中转染pc DNA 3.1-HCG18,并使用75μg·ml-1马甲子提取物进行处理,探讨过表达HCG18对马甲子提取物诱导的SiHa增殖、凋亡的影响。结果:与0μg·ml-1马甲子提取物组比较,25,50,75μg·ml-1马甲子提取物显著提高SiHa细胞的增殖抑制率、凋亡率、P21、Bax蛋白水平,显著减少Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量及HCG18表达量,且呈浓度依赖性（P<0.05）。抑制HCG18显著减少SiHa细胞HCG18表达量及Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量,显著提高P21、Bax蛋白水平、细胞增殖抑制率、凋亡率（P<0.05）。过表达HCG18能逆转马甲子提取物抑制细胞SiHa增殖、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达,以及促进细胞SiHa凋亡、P21、Bax蛋白表达的作用。结论:马甲子提取物通过调控lnc RNA HCG18表达抑制宫颈癌细胞增殖和诱导细胞凋亡。     

苦参醇A对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞增殖凋亡的影响研究

摘要：目的:探讨苦参醇A（KA）对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:体外培养人视网膜血管内皮细胞,使用高糖诱导细胞,分别加入不同剂量的KA处理细胞;采用CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;采用qRT-PCR检测LncRNA DLX6-AS1、miR-145-5p的表达量;双荧光素酶报告实验与RIP实验验证DLX6-AS1、miR-145-5p的靶向关系;分别将si-DLX6-AS1、pc DNA-DLX6-AS1转染至高糖诱导的细胞中,采用上述方法检测细胞增殖及凋亡能力。结果:高糖诱导细胞可降低细胞活力、增高凋亡率（P<0.05）,DLX6-AS1的表达水平显著升高（P<0.05）,miR-145-5p的表达水平显著降低（P<0.05）,而KA可明显逆转高糖对细胞增殖、凋亡及DLX6-AS1、miR-145-5p表达的作用（P<0.05）,且呈剂量依赖性;双荧光素酶报告实验与RIP实验证实DLX6-AS1能够靶向结合miR-145-5p;转染si-DLX6-AS1后细胞活力升高（P<0.05）,凋亡率降低（P<0.05）,而转染pc DNA-DLX6-AS1能够明显减弱KA对高糖诱导视网膜血管内皮细胞增殖、凋亡的作用。结论:苦参醇A可能通过调控DLX6-AS1/miR-145-5p分子轴从而促进高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞增殖及抑制细胞凋亡。     

蛇葡萄素对人宫颈癌SiHa细胞增殖、周期及凋亡的影响

目的探究蛇葡萄素(ampelopsin,AMP)对人宫颈癌SiHa细胞增殖、周期、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法MTT法检测不同浓度(10、20、40、80、160、320μmol·L^-1)和不同干预时间(24、48、72 h)的AMP对SiHa细胞增殖抑制作用;Hoechst 33258法、Annexin-FITC/PI法检测AMP对SiHa细胞凋亡的影响;流式细胞术检测细胞周期变化;Rh-123法检测线粒体膜电位的变化;Western blot检测AMP对SiHa细胞中Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达的影响。结果AMP对SiHa细胞抑制率呈浓度和时间依赖性(P<0.05),最低IC 50值为40.33μmol·L^-1;随着AMP浓度的增加或作用时间的延长,细胞凋亡率逐渐增加(P<0.05);当AMP浓度为80μmol·L^-1时,细胞周期阻滞在G 2/M期,呈一定的时间依赖性;线粒体膜电位随AMP浓度上升而下降;Bax/Bcl-2和Cleaved-caspase-3表达水平均上调,呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。结论AMP明显抑制SiHa细胞的增殖,阻滞细胞周期于G 2/M期,可能通过线粒体途径诱导SiHa细胞凋亡。     

YB-1表达对宫颈癌细胞增殖的影响

目的 探索YB-1的表达水平对宫颈癌细胞增殖的影响及其可能的机制.方法 免疫组化检测宫颈鳞癌组织及癌旁正常组织中YB-1的表达水平,并分析其与临床病理间的关系;慢病毒转染将YB-1过表达载体转染至宫颈癌细胞SiHa中,RT-PCR检测转染效果.CCK-8实验和克隆形成实验检测YB-1过表达后SiHa细胞增殖和克隆能力变化情况;流式细胞术检测转染后SiHa细胞周期的变化.结果 相对于癌旁组织,宫颈鳞癌组织中YB-1存在明显的过表达,且与组织学分型和淋巴结转移存在明显的相关性(P<0.05);CCK-8实验发现相对于对照组,YB-1过表达的SiHa细胞株的增殖和克隆能力明显增加(P<0.05);流式细胞术检测细胞周期发现YB-1过表达的SiHa细胞比例在G1期相对减少,S期相对增多,大约90％左右的细胞停滞在G1/S期.结论 宫颈癌组织中YB-1存在高表达,在非角化型癌多见且更易出现淋巴结转移.YB-1的过表达能够促进宫颈癌SiHa细胞增殖.     

大黄素通过上调lncRNA MEG3表达并抑制PI3K/AKT信号通路影响喉癌细胞的增殖和凋亡

摘要：目的:探讨大黄素对喉癌M4E细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法:大黄素作用于M4E细胞24 h,四噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,实时定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测母系表达基因3（MEG3）水平,Western Blot检测细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、活化的半胱天冬酶-3（Cleaved-caspase-3）、磷酸化磷酸化磷脂酞肌醇3-激酶p85亚单位（p-PI3Kp85）和磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）蛋白。转染MEG3过表达载体至M4E细胞,上述相同方法检测MEG3过表达对M4E细胞增殖、凋亡及相关蛋白表达的影响。结果:与对照组相比,大黄素作用后,M4E细胞增殖抑制率、凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白水平和MEG3水平显著升高（P<0.05）,p-PI3Kp85和p-AKT蛋白水平显著降低（P<0.05）。MEG3过表达可提高M4E细胞增殖抑制率、凋亡率和Cleaved-caspase-3蛋白水平（P>0.05）,降低CyclinD1蛋白水平（P<0.05）。低表达MEG3逆转了大黄素对M4E细胞增殖、凋亡及p-PI3Kp85和p-AKT蛋白表达的影响（P<0.05）。结论:大黄素可能通过上调MEG3表达并抑制PI3K/AKT信号通路抑制喉癌细胞的增殖,并诱导其凋亡。     

lncRNA FOXD2-AS1靶向miR-3194-3p对口腔鳞癌细胞增殖及凋亡影响的体外研究

摘要：目的:探讨lncRNA FOXD2-AS1对口腔鳞癌细胞增殖及凋亡的影响及分子机制。方法:实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测口腔鳞癌细胞系中lncRNA FOXD2-AS1和miR-3194-3p的表达水平;将FOXD2-AS1干扰表达载体、miR-3194-3p模拟物、miR-3194-3p抑制剂+FOXD2-AS1干扰表达载体转染至CAL27细胞中,Western blot法检测蛋白表达; MTT检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测lncRNA FOXD2-AS1和miR-3194-3p的靶向关系。结果:口腔鳞癌细胞系中lncRNA FOXD2-AS1表达水平升高,miR-3194-3p表达水平降低（P<0.01）。lncRNA FOXD2-AS1低表达或miR-3194-3p高表达,口腔鳞癌CAL27细胞中细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）表达水平和细胞存活率降低,裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cleaved-caspase-3）表达水平和细胞凋亡率升高（P<0.01）;且lncRNA FOXD2-AS1低表达降低了β-连环蛋白（β-catenin）蛋白表达。lncRNA FOXD2-AS1靶向调控miR-3194-3p,低表达miR-3194-3p逆转了FOXD2-AS1低表达对口腔鳞癌细胞CAL27增殖和凋亡及Wnt/β-catenin信号通路的影响。结论:下调lncRNA FOXD2-AS1表达可能通过上调miR-3194-3p抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制口腔鳞癌细胞增殖,促进细胞凋亡。     

夏枯草提取物对人乳头瘤病毒阳性宫颈癌细胞的凋亡作用

目的 研究夏枯草提取物(EPV)对人乳头瘤病毒(HPV)阳性人宫颈癌细胞的凋亡作用。方法 培养人宫颈癌细胞SiHa、HeLa(HPV阳性)及C-33-A(HPV阴性),与20、40、80 μg/mL的EPV共孵育24 h,对照组加入等体积的DMSO,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡及细胞周期。取对数生长期的SiHa、HeLa细胞,与40 μg/mL EPV共孵育24 h,Western blotting法检测凋亡相关蛋白caspase 3、caspase 9、Bcl-2、Bax的表达情况。结果 EPV剂量相关地抑制HPV阳性人宫颈癌细胞SiHa、HeLa活力(P<0.05、0.01、0.001);诱导SiHa、HeLa细胞凋亡(P<0.05、0.01),使SiHa、HeLa细胞周期阻滞在G₀/G₁期,抑制其增殖;对C-33-A细胞无显著作用。显著上调SiHa、HeLa细胞内Cle caspase 3、Cle caspase 9、Bax表达,下调Bcl-2表达(P<0.05、0.01、0.001)。结论 EPV可诱导HPV阳性人宫颈癌SiHa、HeLa细胞凋亡,对HPV阴性C-33-A细胞无显著作用,为夏枯草及其制剂在临床上治疗宫颈癌提供依据。     

蒺藜皂苷通过上调PDCD4表达阻滞肺癌A549细胞周期并诱导细胞凋亡

摘要：目的:研究蒺藜皂苷（STT）对肺癌A549细胞周期和凋亡的影响和机制。方法:肺癌A549细胞分成Control、STT、STT+si-NC、STT+si-PDCD4组,使用噻唑蓝（MTT）方法测定细胞增殖,平板克隆实验测定细胞克隆能力,碘化丙啶（PI）单染法检测细胞周期,膜联蛋白V-FITC（Annexin V-FITC）/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、p27、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（C-caspase-3）、caspase-3、程序性细胞死亡4（PDCD4）蛋白表达。结果:与Control组比较,STT组细胞增殖能力、克隆能力显著降低（P<0.05）,细胞G0/G1比例和凋亡率显著升高（P<0.05）,Cyclin D1蛋白表达明显减少（P<0.05）,p27、C-caspase-3、caspase-3、PDCD4等蛋白表达水平升高（P<0.05）。与STT+si-NC组比较,STT+si-PDCD4组细胞存活率和克隆形成数目明显增加（P<0.05）,G0/G1细胞比例降低与细胞凋亡率明显降低（P<0.05）,细胞中Cyclin D1蛋白水平升高（P<0.05）,p27、C-caspase-3、caspase-3、PDCD4等蛋白水平下降（P<0.05）。结论:蒺藜皂苷通过上调PDCD4表达阻滞肺癌A549细胞周期并诱导细胞凋亡。     

转染Smac对肝癌细胞凋亡的影响

目的探讨过表达Smac基因对人肝癌HepG2细胞凋亡、细胞周期及凋亡相关蛋白Survivin、半胖氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）表达的影响。方法从人K562细胞中扩增Smac cDNA,构建含Smac cDNA的真核表达载体pEGFP-C1-Smac,并转染人肝癌细胞HepG2。流式细胞仪检测分析细胞凋亡百分率,凋亡相关蛋白Survivin、Caspase-3的表达及细胞周期。结果转染Smac基因组、转染空载体组、未转染组细胞凋亡率差异有统计学意义（P〈0.05）。转染Smac基因组细胞凋亡率高于未转染组,也高于转染空载体组细胞,差异均有统计学意义（P〈0.05）。转染Smac基因组细胞Survivin的表达显著高于未转染组,也显著高于转染空载体组细胞,差异均有统计学意义（P〈0.05）。未转染组、转染空载体组、转染Smac基因组中Caspase-3蛋白表达差异无统计学意义（P〉0.05）。未转染组、转染空载体组、转染Smac基因组HepG2细胞的G0/G1期、S期、G2/M各期细胞比例差异无统计学意义（P〉0.05）。结论过表达Smac可诱导人肝癌HepG2细胞凋亡率增加,促进细胞凋亡。     

藏红花素联合顺铂对人宫颈癌HeLa细胞协同抑制作用的研究

目的 探索藏红花素联合顺铂对人宫颈癌HeLa细胞的协同抑制作用及相关调控机制。方法 取对数生长期人宫颈癌HeLa细胞,设置空白对照组（DMSO）、藏红花素组（400 μg·mL^-1）、顺铂组（5 μg·mL^-1）、联合组（藏红花素400 μg·mL^-1+顺铂5 μg·mL^-1）。干预48 h后,CCK-8检测HeLa细胞增殖抑制率,采用CompuSyn软件计算藏红花素与顺铂的联合指数（CI）,Annexin V-FITC染色法检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期分布,Western blotting检测激活型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Cleaved Caspase-3）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、细胞周期素D1（Cyclin D1）、周期蛋白依赖激酶2（CDK2）的表达。结果 与顺铂组比较,联合组细胞增殖抑制率显著升高（P<0.05）,CI为0.68,具有中度协同效应;细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,G₀/G₁期细胞比例显著升高（P<0.05）,而G₂/M期比例显著降低（P<0.01）,Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达水平及Bax/Bcl-2比值均显著升高（P<0.05）,Cyclin D1、CDK2蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。与空白对照组比较,藏红花素组G₀/G₁期细胞比例显著升高而G₂/M期比例显著降低（P<0.01）,Cleaved Caspase-3、Bax表达水平及Bax/Bcl-2比值均显著升高（P<0.01）,Cyclin D1、CDK2表达水平显著降低（P<0.05）。结论 藏红花素联合顺铂可协同抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖和生长,其作用机制可能与调控凋亡相关蛋白的表达从而促进细胞凋亡、阻滞细胞周期进程有关。     

罗哌卡因抑制THRIL对子宫内膜癌细胞增殖、细胞周期和迁移的影响

摘要：目的:探讨罗哌卡因对子宫内膜癌细胞增殖、细胞周期和迁移的影响及分子机制。方法:将RL-95-2细胞分为对照组、低、中、高药物剂量组、高剂量药物+pc DNA组、高剂量药物+pc DNA-THRIL组。四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞周期; Transwell检测细胞迁移;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测THRIL表达水平;蛋白质印迹（Western blot）法检测Ki67、神经钙黏蛋白（N-cadherin）、上皮钙黏蛋白（E-cadherin）蛋白表达。结果:不同浓度罗哌卡因处理子宫内膜癌细胞RL-95-2后,中、高剂量药物组细胞存活率降低,G0-G1期细胞所占比例升高,S期细胞所占比例降低,迁移细胞数降低,THRIL表达水平降低,Ki67、N-cadherin表达水平降低,E-cadherin表达水平升高,且呈剂量依赖性（P<0.05）;而低剂量药物组各指标无明显变化（P>0.05）。过表达THRIL逆转了罗哌卡因对RL-95-2细胞增殖和迁移的作用。结论:罗哌卡因可能通过下调THRIL抑制子宫内膜癌细胞增殖和迁移,阻滞细胞周期。     

STC 1 过表达抑制人宫颈癌CaSki 细胞增殖

目的研究STC1基因对人宫颈癌CaSki细胞增殖及周期的影响。方法 CaSki细胞分为3组：实验组转染pcDNA3.1（＋）-STC1质粒;空载体转染pcDNA3.1（＋）空载体;空白对照组不加任何干扰。挑选稳定表达克隆,用RT-PCR及Western blot检测细胞中STC1基因表达水平;MTT法检测转染STC1基因对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测转染STC1基因后细胞周期的变化。结果稳定转染后,与空载体组相比,实验组STC1基因的表达水平显著提高（P﹤0.01）,CaSki细胞存活率下降（P﹤0.05）,G1期细胞比例显著上升（P﹤0.05）,细胞出现G1期阻滞。结论 STC1基因与CaSki细胞增殖相关,其高表达引起的宫颈癌细胞增殖速度降低可能与其所致的细胞G1期延长有关。     

Lipocalin-2过表达对人肺癌 A549细胞增殖、凋亡及侵袭力的影响

目的：采用基因过表达方法上调人肺癌 A549细胞 Lipocalin-2表达,观察 Lipocalin-2对细胞增殖、凋亡、细胞周期调控及侵袭力的影响。方法构建 Lipocalin-2过表达慢病毒载体,转染人肺癌 A549细胞。Real-time PCR 和 Western blot 检测转染后人肺癌 A549细胞中 Lipocalin-2表达水平。MTT 实验检测细胞增殖。流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况。Transwell 小室实验检测细胞侵袭力。结果与阴性对照组和空载体对照组比较,转染组 Li-pocalin-2 mRNA 和蛋白表达水平均显著增加,差异有统计学意义（ P ﹤0.05）。Lipocalin-2过表达慢病毒载体转染后,细胞增殖率和侵袭力显著增加,同时细胞凋亡率及 G0/ G1期细胞比例显著降低,S 期细胞比例显著提高,差异有统计学意义（ P ﹤0.05）。结论 Lipocalin-2过表达通过调控人肺癌 A549细胞周期、抑制凋亡促进细胞的增殖,还明显提高细胞的侵袭力。     

基于Nrf2/HO-1通路探讨葛根素对高糖诱导成骨细胞凋亡的影响

摘要：目的:探讨葛根素对高糖诱导的成骨细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法:体外培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1细胞,试验分为对照组(葡萄糖浓度为5.5 mmol·L-1)、高糖组(葡萄糖浓度为33 mmol·L-1)、高糖+葛根素组(葛根素终浓度分别为0.1,1,10μmol·L-1)。采用CCK-8法检测葛根素对高糖诱导的MC3T3-E1细胞活力影响;采用流式细胞法观察葛根素对高糖诱导的MC3T3-E1细胞凋亡能力的影响;采用免疫印迹法（WB）检测凋亡相关蛋白以及核相关E2因子2/血红素加氧酶-1（Nrf2/HO-1）信号通路相关蛋白表达;添加Nrf2/HO-1信号通路特异性抑制剂ML385检测其对细胞凋亡的影响。结果:与对照组相比,高糖组细胞活力、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）蛋白水平、HO-1蛋白水平及细胞核Nrf2蛋白水平降低（P<0.05）,细胞凋亡率、Bcl-2相关X蛋白质（Bax）、cleaved-caspase 3蛋白水平及细胞浆Nrf2蛋白水平升高（P<0.05）;与高糖组相比,高糖+各浓度葛根素组细胞活力、Bcl-2蛋白水平、HO-1蛋白水平及细胞核Nrf2蛋白水平依次升高（P<0.05）,细胞凋亡率、Bax、cleaved-caspase 3蛋白水平及细胞浆Nrf2蛋白水平依次降低（P<0.05）;与高糖+高浓度葛根素相比,高糖+高浓度葛根素+抑制剂组细胞凋亡率、Bax、cleaved-caspase 3蛋白表达升高（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达降低（P<0.05）。结论:葛根素可能通过激活Nrf2/HO-1信号通路,抑制高糖诱导的成骨细胞凋亡。     

细胞周期蛋白依赖激酶4 对肾癌细胞增殖和侵袭的影响

目的　探讨下调细胞周期蛋白依赖激酶4（CDK4）表达对肾癌细胞增殖和侵袭的影响。方法　将培养的肾癌\r\nSN12PM6 细胞分为3 组,以脂质体Lipofectamine2000 分别将siRNA-CDK4 和siRNA-NC 质粒转染至siRNA CDK4 组和\r\nsiRNA NC 组细胞中,以未处理细胞为对照组;采用Western blot 和RT-PCR 检测转染效果,MTT 试剂盒检测细胞增殖能\r\n力,流式细胞仪检测细胞周期,Transwell 法检测细胞的侵袭能力。结果　与对照组相比,siRNA-NC 组CDK4 mRNA 和蛋\r\n白的相对表达量无明显变化（P>0.05）,而siRNA CDK4 组CDK4 mRNA 和蛋白的相对表达量显著降低（P<0.05）;与对照\r\n组比较,siRNA-NC 组OD 值、G1 期和S 期细胞比例、侵袭细胞数无明显变化（P>0.05）,而siRNA CDK4 组OD 值、S 期细\r\n胞比例、侵袭细胞数均显著下降,G1 期细胞比例显著上升,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论　下调CDK4 表达可抑制\r\nN12PM6 细胞的增殖和侵袭,并将细胞阻滞于G1 期。     

LncRNA RSU1P2在宫颈癌肿瘤细胞中作为ceRNA拮抗let-7a促进肿瘤发生的影响研究

目的 观察lncRNA RSU1P2对宫颈癌肿瘤细胞的影响.方法 在Caski、HeLa和C33A细胞中通过转染质粒使RSU1P2过表达,通过MTT试验和集落形成测定法检测RSU1P2对细胞活力的影响,用Transwell测定RSU1P2对细胞的转移和侵袭能力的影响,通过流式细胞仪测定RSU1P2对细胞周期和细胞凋亡的影响通过蛋白(质)印迹法(Western blot)检测EMT相关蛋白的变化,通过动物实验测定RSU1P2在体内对宫颈癌组织的影响等.结果 在Hela和C33A等细胞中RSU1P2过表达后,细胞增殖能力、转移侵袭能力和VM均增强(P<0.05),细胞G1期与S期比例和细胞凋亡数减少(P<0.05).与对照组相比,RSU1P2-A组裸鼠的平均体重和肿瘤体积的中分别提高了约110％(P<0.05).结论 lncRNA RSU1P2在宫颈癌组织中通过调节let-7A与其靶基因的分配从而促进癌细胞的发生发展.     

大蒜素联合顺铂对人宫颈癌细胞增殖的抑制作用

目的探讨大蒜素联合顺铂对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用并探讨其机制。方法取对数生长期HeLa细胞，设对照组、大蒜素（50 μg/mL）组、顺铂（5 μg/mL）组、联合给药组（大蒜素50 μg/mL+顺铂5 μg/mL）。药物干预48 h后，通过MTT法检测细胞增殖抑制率，运用CompuSyn软件计算大蒜素与顺铂联合指数（CI），流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡水平，Western blotting法检测Cyclin D1、CDK2、P27、Cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与大蒜素组和顺铂组比较，联合给药组HeLa细胞增殖抑制率显著升高（P<0.05、0.01），CI为0.69（提示大蒜素与顺铂具有中度协同效应）。与对照组比较，大蒜素组和顺铂组G₀/G₁期细胞比例和细胞凋亡率显著升高（P<0.05、0.01），Cyclin D1、CDK2、Bcl-2表达显著下调且P27、Cleaved Caspase-3、Bax表达显著上调（P<0.05、0.01），Bax/Bcl-2比值显著升高（P<0.01）。与大蒜素组和顺铂组比较，联合给药组G₀/G₁期细胞比例和细胞凋亡率显著升高（P<0.05、0.01），Cyclin D1表达显著下调且P27、Cleaved Caspase-3、Bax表达显著上调（P<0.05、0.01），Bax/Bcl-2值显著升高（P<0.01）。结论大蒜素联合顺铂具有协同抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖的作用，可能与调节细胞周期和凋亡相关蛋白表达，进而阻滞细胞周期进程并促进细胞凋亡有关。     

千金藤素调控肝癌细胞 HepG2增殖和凋亡的实验研究

目的探讨千金藤素对肝癌细胞 HepG2增殖、凋亡的影响和机制。方法 2020年 1—6月,从上海通派生物科技有限公司购入肝癌细胞 HepG2,用千金藤素( 20 μmol/L)处理肝癌细胞 HepG2,MTT方法测定增殖活性, PI单染法检测细胞周期, Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,蛋白质印迹法( Western blotting)检测细胞周期蛋白 D1(cyclin D1)、 p21、Bcl-2相关 X蛋白( Bax)、活化胱天蛋白酶 3(cleaved caspase-3)、核因子 κB p65(NF-κB p65)蛋白表达。用 NF-κB信号激活剂和千金藤素联合处理肝癌细胞,检测细胞增殖、周期、凋亡变化。结果千金藤素处理后的肝癌细胞增殖活性下降,细胞 G0/G1期比例［(65.81±3.73)%比( 50.61±4.17)%］升高,细胞凋亡率［(13.47±1.58)%比( 2.18±0.12)%］升高,细胞中 p21、Bax、cleaved-caspase-3蛋白水平升高, cyclin D1蛋白水平下降, NF-κBp65蛋白水平( 0.19±0.02比 0.36±0.05)降低。 NF-κB信号激活剂处理可以提高千金藤素条件下肝癌细胞增殖活性( 0.46±0.03比 0.35±0.04)减少 G0/G1期比例,降低细胞凋亡率,降低细胞中 p21、Bax、cleavedcaspase-3蛋白表达水平,提高细胞中 cyclin D1和 NF-κBp65蛋,白水平。结论千金藤素抑制肝癌细胞增殖,阻滞细胞周期,诱     

靶向沉默SSBP1基因对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移的影响

目的 观察靶向沉默线粒体单链DNA结合蛋白(SSBP1)基因对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移的影响.方法 设计并构建靶向SSBP1 基因的特异性siRNA,采用脂质体介导瞬时转染肝癌HepG2细胞,细胞分3组:对照组、空白转染组、转染组.Real time-PCR和Western-blot检测靶向干扰后SSBP1 mRNA和蛋白表达变化.CCK-8法检测细胞增殖.流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率及线粒体膜电位.划痕实验及Transwell 侵袭实验检测细胞侵袭转移能力.Western-blot检测增殖、侵袭转移相关基因蛋白表达状况.结果 SSBP1 siRNA能够显著抑制SSBP1 mRNA和蛋白表达.与对照组和空白转染组比较,转染SSBP1 siRNA后HepG2细胞增殖能力、G2期和S期细胞比例、线粒体膜电位明显降低,G1期细胞比例、细胞凋亡率明显升高(P<0.05);同时细胞增殖相关基因PCNA、凋亡抑制基因Bcl-2、转移相关基因MMP-9蛋白表达显著下调,凋亡诱导基因Bax蛋白表达显著上调(P<0.05).结论 靶向沉默SSBP1基因能够通过线粒体途径抑制肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移,并诱导其凋亡.