CD27和CD28在肺结核病人抗原特异性CD4＋T细胞中的表达分析

目的 研究肺结核病人与健康人外周血结核抗原特异性CD4^＋T细胞中CD27和CD28的表达情况,了解不同分化程度T细胞在结核发病中的作用.方法 以荧光标记的抗CD4、CD154、CD27、CD28四种抗体共染色,用流式细胞仪检测肺结核病人和健康人外周血CD4^＋ CD154^＋ T细胞中CD27和CD28的分布比例.通过对比分析,了解不同分化阶段CD4^＋T细胞在病人与健康人之间的分布差异.结果 特异性结核抗原刺激后,肺结核病人外周血CD4^＋ CD154^＋ T细胞中CD27^＋ CD28^＋（早期分化）、CD27^- CD28^＋ 和CD27^＋ CD28^-（中期分化）以及CD27^-CD28^-（晚期分化）T细胞的比例分别为（49.55±6.15）%、（26.85±3.87）%、（7.2±1.37）%和（16.35±3.97）%;而在健康人中这四群细胞的比例分别为（51.81 ±4.94）%、（29.83±5.33）%、（12.65±4.48）%和（5.7±2）%.结核病人与健康人以早期分化CD4^＋T细胞为主,在晚期分化CD4^＋T细胞比例上差异有统计学意义（t=2.26,P〈0.05）.结论 肺结核病人抗原特异性CD4^＋T细胞中晚期分化阶段细胞的比例显著高于健康人,提示抗原特异性CD4^＋T细胞的分化程度与结核病相关.     

雷帕霉素对健康人外周血T淋巴细胞的免疫抑制作用

目的探讨体外雷帕霉素（Rapa）对健康人外周血T淋巴细胞的免疫调节作用及可能机制。方法分离健康人外周血T淋巴细胞,在植物血凝素（PHA）刺激下,用不同浓度的Rapa与T淋巴细胞作用。采用MTT法检测T淋巴细胞增殖,FCM检测T淋巴细胞CD152＋和CD28＋的表达,RT-PCR测定IFN-γ和IL-10 mRNA的表达水平。结果 Rapa可明显抑制健康人的T淋巴细胞增殖（P〈0.05）,对健康人的CD3＋CD152＋细胞以及CD3＋CD28＋细胞无显著影响,Rapa可抑制健康人T淋巴细胞IFN-γ和IL-10 mRNA表达（P〈0.05）,并且随着Rapa浓度增加其免疫抑制作用也增强。结论 Rapa对健康人T淋巴细胞有免疫抑制作用,可能与抑制T淋巴细胞增殖和相关的细胞因子的mRNA有关。     

CD4+CD25+调节性T细胞对狼疮样小鼠的干预性研究

目的分析CD4+CD25+调节性T细胞（regulatory T cells,Tregs）对狼疮样小鼠的干预效应,为系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）的免疫干预提供新的思路。方法采用磁活性标记的细胞分选方法（magnetic activated cell sorting,MACS）分选BALB/c小鼠CD4+CD25+T细胞,应用流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测分选细胞纯度。将68w♀CB6F1小鼠随机分为3组,包括正常对照组、狼疮鼠模型组（亲代淋巴细胞免疫）、狼疮鼠干预组（亲代淋巴细胞免疫后2w,输入5×106Tregs/鼠）。分别于诱导后2、4、8、12w,采用ELISA法检测ANA和抗-dsD-NA抗体,并观察肾标本的病理学改变。结果BALB/c小鼠脾脏单个核细胞经MACS分选后,CD4+CD25+T细胞纯度达98.5%。经亲代淋巴细胞输注后,CB6F1小鼠出现体重降低、皮肤干涩;ANA和抗ds-DNA抗体上升;以及狼疮肾炎的病理学改变。而输入Tregs对已出现自身抗体的狼疮鼠有明显的逆转...     

系统性硬皮病患者外周血CD4^＋T细胞中CD40L表达水平的研究

目的研究系统性硬皮病（SSc）患者外周血CD4^＋T细胞中CIM0配体（CIMOL）的表达水平。方法应用密度梯度离心法分离26例SSc患者（女16例,男10例）和25例正常对照者（女15例,男10例）的外周血单个核细胞,磁珠分选CD4^＋T细胞。RT—PCR检测CD4^＋T细胞中CD40L mRNA的表达水平;流式细胞术检测CD40L蛋白在CD4^＋T细胞中的表达水平。结果SSc女性患者CD4^＋T细胞中CD40L mRNA和CD40L蛋白的表达水平均显著高于正常女性对照组[5．61±1．86vs2．80±0．94,P〈0．01;（6．70±3．55）％vs（2．37±1．39）％,P〈0．05];SSc男性患者CD40L mRNA和CD40L蛋白的表达水平与正常男性对照组相比差异均无统计学意义[2．59±0．89vs1．92±0．56,P〉0．05;（2．06±1．09）％vs（2．13±0．87）％,P〉0．05]。结论女性SSc患者CD^＋T细胞中CD40L表达显著增高,而男性患者无明显改变,提示CD40L仅在女性SSc发病中起着重要的作用。     

急性ITP患儿外周血CD4＋CD25＋Tr细胞及其与IL-18的相关性研究

目的：探讨外周血CD4＋CD25＋调节性T（Tr）细胞和IL-18水平在急性特发性血小板减少性紫癜（AITP）患儿中的变化及AITP的发病机制。方法：选择42例AITP患儿（AITP组）和42例健康查体者（对照组）,用流式细胞仪检测外周血Tr细胞数量及占CD4＋细胞比例,ELISA法检测血浆中IL-18水平。结果：AITP组Tr细胞、Tr细胞/CD4＋细胞比值和Foxp3＋Tr细胞水平较正常对照组降低,而IL-18水平则显著升高,差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;AITP组外周血Tr细胞/CD4＋细胞水平与IL-18水平呈负相关（r=0.821,P〈0.01）。结论：AITP患儿存在细胞免疫功能紊乱,Tr细胞数量的减少可能刺激外周血淋巴细胞IL-18的生成,在AITP发病机制中起一定的作用。     

淋巴瘤患者外周血T细胞CD8^＋CD28^-、CD4^＋CD25^＋的表达及意义

目的探讨恶性淋巴瘤患者外周血T细胞CD8^＋CD28^-、CD4^＋CD25^＋的表达及意义。方法采用流式细胞术检测35例恶性淋巴瘤患者外周血T细胞CD8^＋CD28^＋、CD8^＋CD28^-及CD4^＋CD25^＋。结果恶性淋巴瘤患者外周血T细胞CD8^＋CD28^-、CD4^＋CD25^＋与正常对照差异有统计学意义（P〈0．01）；治疗有效后三者趋于正常（P〉0．05）；而无效组与正常对照组相比差异仍有统计学意义（P〈0．01）。结论恶性淋巴瘤患者外周血T细胞CD8^＋CD28^-、CD4^＋CD25^＋一及CD4^＋CD25^＋表达异常，不同治疗效果表达不同，恶性淋巴瘤患者有免疫功能异常，治疗有效后免疫功能恢复正常。     

特发性血小板减少性紫癜患者外周血Treg细胞及相关细胞因子检测的临床意义

目的：检测特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者外周血中CD4＋、CD25＋调节性T（Treg）细胞的比例及相关细胞因子水平的变化,探讨其在ITP发病中的作用。方法：依据临床诊断标准,检测22例健康人、35例初诊ITP患者的外周血标本,流式细胞学方法检测各组CD4。CD25h,￡hTreg细胞和CD4＋CD25＋CD127d。mTreg细胞的表达水平,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测Treg细胞分泌的细胞因子IL-10、IL-2、TNF—α、IFN-γ的表达水平。结果：初诊ITP患者CD4＋CD25highTreg细胞、CD4＋CD25＋CD127d;mTreg细胞比例明显低于正常对照组（P〈0．01）,ITP患者血清IL-2、TNF—α及IFN-γ水平明显高于正常对照组（P〈0．01）;血清IL-10水平明显低于正常对照组（P〈0．01）。结论：调节性T（Treg）细胞表达异常是特发性血小板减少性紫癜发病机制的重要环节,对ITP患者应定期观察其血液中IL、TNF—α和IFN-γ水平变化,以判断其病情变化、疗效观察。     

传染性单核细胞增多症患儿CD3^＋CD4^-CD8^-T细胞与T淋巴细胞亚群变化情况及临床意义

目的 研究传染性单核细胞增多症（IM）患儿外周血CD3^＋CD4^-CD8^-T细胞（DNT细胞）及T淋巴细胞亚群变化及其临床意义.方法 采用免疫荧光流式细胞技术检测了48例IM患儿及40例正常儿童外周血DNT细胞与T淋巴细胞亚群CD3^＋T细胞、CD3^＋CD4^＋T细胞及CD3＋CD8＋T细胞水平.结果 IM患儿DNT细胞百分比（9.39±4.89）%高于正常对照组（4.26±1.68）%（P＜0.01）,CD3^＋CD4^＋T细胞百分比（21.45±9.87）%明显低于对照组（32.43±5.07）%（P＜0.01）;而CD3＋T细胞及CD3＋CD8＋T细胞百分比均明显高于对照组（P＜0.01）.结论 IM患儿DNT细胞升高及T淋巴细胞亚群比例改变,提示IM患儿存在免疫功能异常,为IM患儿临床免疫治疗提供理论依据.     

类风湿关节炎患者外周血单个核淋巴细胞IL-21受体表达及意义

[目的]检测类风湿关节炎（RA）患者外周血单个核淋巴细胞表面IL-21受体（IL-21R）表达，探讨其在疾病发生过程中的免疫病理作用。[方法]收集26例RA患者和18硎健康成人对照外周血标本，分离外周血单个核淋巴细胞，利用流式细胞仪控测IL-21R在外周血CD4^＋、CD8^＋T细胞、B细胞和NK细胞表面表达，分析它们在疾病发展过程中的作用。[结果]RA患者外周血CD4^＋、CD8^＋T细胞、B细胞和NK细胞表达IL-21R水平比健康者比较显著升高（P〈0.05）。RA患者接受有效的药物治疗，待症状控制后，分析发现RA患者外周血CD4^＋、CD8^＋T细胞、B细胞、NK细胞IL-21R水平呈明显下降（P〈0．05）。[结论]RA患者外周血单个核淋巴细胞表达IL-21R水平明显升高，提示IL-21R在关节炎症炳变过程中起着重要作用，可能诱导关节滑模炎症病变，参与关节滑膜组织及全身免疫病理损伤。     

肝癌患者外周血CD4^＋／CD25^＋调节T细胞分析

目的探讨肝癌患者外周血CD4^＋／CD25^＋调节T细胞（Treg）水平的变化特点及其临床意义。方法采用流式细胞仪检测63例原发性肝癌患者和30例健康人外周血CD4^＋／CD25^＋调节T细胞水平,并进行水平比较和分层分析。结果肝癌组外周血CD4^＋／CD25^＋调节T细胞水平（14．06±2．34）％,明显高于健康对照组（6．05±1．57）％（P〈0．05）;外周血CD4^＋／CD25^＋调节T细胞水平与肝癌病理类型无相关性（P〉0．05）;与临床分期密切相关,Ⅰ＋Ⅱ期亚组（8．31±1．43）％与健康对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）,而与Ⅲ期亚组（13．68±2．31）%、Ⅳ期亚组（18．50±2．98）％比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论肝癌患者外周血CD4^＋／CD25^＋调节T细胞水平明显升高,且与肿瘤的发生发展密切相关,可作为评估肝癌患者预后的一项指标。     

乙肝病毒感染者外周血调节性T细胞检测的临床意义

目的探讨乙型肝炎患者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平的表达及其临床意义。方法应用流式细胞仪检测外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞表达水平。结果急性乙型肝炎、慢性活动性乙型肝炎、肝硬化患者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平明显高于正常对照（P〈0.01）,肝癌患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平与正常对照比较（P〈0.05）;HBeAg阳性患者者CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平明显高于HBeAg阴性患者（P〈0.01）。结论乙型肝炎病毒感染后患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞表达异常。     

Graves病中调节性T细胞功能的改变

目的探讨Graves病发生的免疫机制，了解调节性T细胞在其发病中的作用。方法流式细胞术检测32例Graves病（GD组）和20例正常人（正常对照组）中CD4^＋CD25^＋T细胞的比例。免疫磁珠法（MACS）分离CD4^＋CD25^＋T细胞，酶联免疫吸附（ELISA）法检测IL-10的水平，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测FOXP3的表达。结果与正常对照组相比，GD组CD4^＋CD25^＋T细胞数量无明显改变（P=0．804），而FOXP3表达减少（24h和48hP均〈0．01），IL-10分泌减少（24h和48hP均〈0．01）。结论GD患者调节性T细胞在外周血淋巴细胞中的比例虽无明显改变，但其功能明显减弱，可能是导致其发病的原因之一。     

原发性ITP患儿外周血血小板相关抗体和淋巴细胞亚群的变化及临床意义

目的：观察原发性ITP患儿外周血血小板抗体及淋巴细胞亚群变化,探讨其与ITP的关系及临床意义。方法：采用流式细胞技术检测患儿与正常儿童外周血血小板相关抗体（PAIgA、G、M）水平及淋巴细胞亚群（CD3＋、CD3＋CD4＋、CD3＋CD8＋、CD4＋/CD8＋、CD19＋、CD3-CD（16＋56）＋）水平。结果：新诊断ITP组与持续性ITP组PAIg（G、M）水平明显高于正常儿童（P〈0.001）;新诊断性ITP组与持续性ITP组和对照组比较,CD3＋T细胞、CD4＋/CD8＋T细胞比值、CD3-CD（16＋56）＋NK细胞降低,CD3＋CD8＋T细胞、CD19＋B细胞升高,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：原发性ITP患儿存在细胞免疫和体液免疫紊乱,血小板相关抗体和淋巴细胞亚群水平检测的联合使用对原发性ITP的诊断、疗效评估有较好的实用价值。     

传染性单核细胞增多症不同病原的免疫状态改变及免疫干预研究

目的研究不同痛原感染引起传染性单核细胞增多症时机体免疫功能改变及其意义,以及免疫干预对传染性单核细胞增多症免疫紊乱的改善情况。采用ELISA法检测柯萨奇B组病毒抗原（CVB—Ag）、IgM抗体（CVB—IgM）、EB病毒VCAIgM抗体（EBV～IgM）、巨细胞病毒IgM抗体。采用免疫散射比浊法测定免疫球蛋白浓度。采用直接免疫荧光标记流式细胞术（FCM）检测外周血T细胞亚群。结果①EBV合并其他病毒感染组外周血T细胞亚群及免疫球蛋白浓度与EBV病毒感染组比较差异无显著性。EBV合并其他病毒感染组CD4^＋T比例、CDC＋／CD8^＋比值较其他病毒感染组降低（P〈0．05）。EBV合并其他病毒感染组IgG、IgM浓度较其他病毒感染组升高（F〈0．05）。EBV感染组外周血CD4^＋／CD8^＋比值较其他病毒感染组降低（P〈0．05）。②免疫干预治疗后,与治疗前比较,患儿CD4^＋T细胞比例、CD4^＋／CD8＋升高（P〈0．05）。与常规治疗组比较,免疫干预治疗后患儿CD4^＋T细胞比例、CD4^＋／CD8^＋、CD19^＋细胞比例升高,CD3^＋T细胞比例、CD8^＋T细胞比例降低（P〈0．05）。结论EBV感染是引起传染性单核细胞增多症细胞免疫紊乱的重要原因。免疫干预治疗有助于尽快调整机体的免疫功能,促进机体康复。     

激素抵抗性哮喘患者外周血CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋调节性T细胞及白细胞介素10、转化生长因子β1水平变化及其临床意义

目的 研究激素抵抗性哮喘（SRA）患者外周血CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋调节性T细胞（Treg）及白细胞介素10（IL-10）、转化生长因子β1（TGF-β1）水平变化及其临床意义.方法 选取哮喘患者79例,分为SRA组（31例）和激素敏感性哮喘（SSA）组（48例）.同时选取健康体检者45例作为对照组,采用流式细胞术检测CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋ Treg的表达水平,酶联免疫吸附法检测血清IL-10和TGF-β1水平.结果 SRA组和SSA组CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋ Treg在CD4＋T细胞中的比例和绝对值分别为0.0225±0.0063、（1.09±0.23）×10^7/L和0.0345±0.0094、（1.35±0.14）×10^7/L,均较对照组[0.0537±0.0128、（2.06±0.27）×10^7/L]明显下降,且SRA组的下降程度更加明显,差异均有统计学意义（P＜0.05）.SRA组和SSA组血清TGF-β1水平均较对照组明显下降[（138.12±23.26）、（176.25±40.37） ng/L比（281.22±47.15） ng/L],差异有统计学意义（P＜0.05）.SRA组血清IL-10水平较对照组明显下降[（516.43±86.33） ng/L比（763.02±90.19） ng/L],差异有统计学意义（P＜0.05）.而SSA组血清IL-10水平与对照组比较差异无统计学意义（P＞ 0.05）.SRA组血清IL-10和TGF-β1水平均较SSA组明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）.SRA组和SSA组血清IL-10和TGF-β1水平与CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋ Treg水平呈明显正相关（P＜0.01）.结论 CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋ Treg、IL-10和TGF-β1之间的相互作用在SRA的发生、发展中发挥了重要作用,而通过增加外周血CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋ Treg数量,稳定其功能,增加IL-10和TGF-β1表达,可能是治疗SRA的重要途径.     

中国HIV感染者IL-2和IL-7参与高效抗反转录病毒治疗的抗病毒免疫反应及其在病毒控制中的作用

目的观察中国HIV-1感染者在高效抗反转录病毒治疗（Highly active antiretroviral therapy,HAART）中,外周血HIV-1RNA、CD4＋T淋巴细胞数量和IL-2、IL-7的相关关系,探讨这些^y链细胞因子与抗HIV病毒免疫应答及其在病毒控制中的作用。方法2009年6月至2010年12月,35椤iI接受初次HAART的慢性HIV-1感染者被纳入本研究并随访48周,检测HAART治疗0、24、48周时的外周血HIV．1RNA定量、CD4＋T淋巴细胞数、IL-2以及IL-7水平,并分析其相关性。结果35例HIV．AIDS在HAART治疗前的IL-2水平[（9．67±2．6）pg／ml]明显低于正常对照值[（27．36±5．05）pg／ml],在经过48周治疗后显著升高[（19．8±3．3）pg／ml],而在HAART治疗前的IL-7水平[（81．74±20．47）pg／ml]明显高于正常对照值[（2．06±1．52）pg／ml],在48周治疗后则显著降低[（8．36±2．16）pg／ml]。IL-2水平在HAART的0、48周与CD4＋细胞计数呈相同变化趋势但相关性不明显（O周：R=0．21,P=0．063;48周：R=0．19,P=0．103）,24周呈正相关（R=0．24,P=0．033）,而IL-7水平在HAART的0周与CD4＋细胞计数呈负相关（R=-0．28,P=0．012）,在24、48周无相关。IL-2水平和HIVRNA病毒载量呈负相关（R=-0．17,P=0．032）,而IL-7水平和HIV RNA病毒载量关系不明显（P=0．76）。结论48周HAART治疗中IL-2和IL-7水平均有明显变化。与CD4＋T细胞计数变化密切相关,与外周血HIV RNA水平有一定关系。提示这些细胞因子在免疫重建和病毒控制中起重要作用。     

强直性脊柱炎患者T细胞极化状态分析

目的：探索强直性脊柱炎（AS）患者体内T细胞组成的变化。方法：利用流式细胞术分析CD4＋T、CD8＋T、Th1（CD4＋CD30-T）、Th2（CD4＋CD30＋T）、Tc1（CD8＋CD30-T）、Tc2（CD4＋CD30＋T）细胞的组成比率。结果：与正常对照相比,AS患者外周血CD4＋T细胞百分含量明显降低,Th1细胞、Th1/Th2、Tc1/Tc2也明显降低,而Tc1与Tc2均升高。结论：免疫系统紊乱与强直性脊柱炎发生发展相关。Tc细胞亚群紊乱引起的免疫损伤是AS发生的可能机制。     

豚鼠感染1型嗜肺军团菌后免疫功能指标表达的动态观察

目的 观察豚鼠感染1型嗜肺军团菌（IP1）后外周血γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素6（IL-6）、仅肿瘤坏死因子（TNF-α）、CD4^＋和CD8^＋水平的改变。方法 检测正常豚鼠外周血上述细胞因子和T细胞亚群的水平作为对照组，观察豚鼠感染IP1后24、72和120h外周血上述细胞因子和T细胞亚群的水平，并与对照组加以比较。结果 豚鼠感染IP1后各时间段外周血细胞因子和T淋巴细胞亚群水平均出现了一定程度的升高，其中IFN-γ,IL-6和CD8^＋升高更为显著。结论 豚鼠感染LP1后免疫功能表达出现了不同程度的增强。     

活动期肺结核患者CD4^＋、CD154^＋T细胞亚群数量的改变

目的探讨CD4^＋、CD154^＋T细胞亚群在活动期肺结核患者和PPD皮试阳性健康人中的分布情况及其规律。方法建立以流式细胞仪检测CD4^＋、CD154^＋T细胞亚群的方法,比较CD4^＋、CD154^＋T细胞亚群在初治肺结核病人和PPD阳性健康人的特性。结果PBMCs抗原刺激时同时加入PE标记抗人CD154抗体的持续标记方法优于细胞破膜染色的检测方法（1．51±0．36／0．40±0．13,P〈0．05）;新分离未经刺激的CD4^｜＋T淋巴细胞不表达CD154,特异抗原刺激后CD154表达显著增加;活动期初治肺结核PBMCs的CD4^＋、CD154^＋T细胞亚群数量显著低于PPD阳性健康者（0．72±0．32／1．65±0．76,P〈0．01）。结论CD4^＋、CD154^＋T细胞亚群数量在活动期初治肺结核患者显著降低,可能与结核病发病关系密切。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞对狼疮样小鼠的干预性研究

目的分析CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)对狼疮样小鼠的干预效应,为系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的免疫干预提供新的思路。方法采用磁活性标记的细胞分选方法(magnetic activated cell sorting,MACS)分选BALB/c小鼠CD4+CD25+T细胞,应用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测分选细胞纯度。将6~8w♀CB6F1小鼠随机分为3组,包括正常对照组、狼疮鼠模型组(亲代淋巴细胞免疫)、狼疮鼠干预组(亲代淋巴细胞免疫后2w,输入5×106Tregs/鼠)。分别于诱导后2、4、8、12w,采用ELISA法检测ANA和抗-dsD-NA抗体,并观察肾标本的病理学改变。结果BALB/c小鼠脾脏单个核细胞经MACS分选后,CD4+CD25+T细胞纯度达98.5%。经亲代淋巴细胞输注后,CB6F1小鼠出现体重降低、皮肤干涩;ANA和抗ds-DNA抗体上升;以及狼疮肾炎的病理学改变。而输入Tregs对已出现自身抗体的狼疮鼠有明显的逆转效应,CB6F1小鼠于输注后抗-dsDNA即...