转录因子E2F-1的研究进展

目的:总结国内外关于E2F-1在细胞增殖、凋亡及其在肿瘤中的作用的研究进展。方法:应用Medline及CNKI期刊全文数据库系统,以"E2F-1、细胞增殖、凋亡及肿瘤为关键词,检索1999-01-2009-12的相关文献,共检索英文文献1 453篇、中文文献29篇。纳入标准:1)E2F-1的来源和分子结构特征;2)E2F-1与细胞周期的关系;3)E2F-1和细胞增殖的关系;4)E2F-1和凋亡的关系;5)E2F-1和肿瘤的关系。根据纳入标准,附合分析条件的文献有52篇,最后纳入分析33篇。结果:E2F-1是细胞周期调节的关键因子,具有调节细胞增殖和凋亡的双重作用,在肿瘤中表现出抑癌基因和癌基因的功能。结论:E2F-1可能是抗肿瘤研究的靶点。     

CDK6及E2F-1参与细胞周期调控pRb通路的研究进展

目前肿瘤的本质被认为是一种细胞周期病,细胞周期的调控是一种受多条件限制、由多因素参与的复杂并且精细的过程,其经典途径包括pRb途径及p53途径,其中任何一个环节出现异常,均可能导致肿瘤的发生。细胞周蛋白依赖性激酶6(CDK6)、核转录调节因子E2F-1均参与细胞周期调控的RB通路,在G1期向S期转换过程中起到非常关键的作用。现有研究已证实,在人体的很多肿瘤中CDK6、E2F-1表达均呈现异常,其与肿瘤的发生发展有密切联系。因此,进一步了解二者在细胞周期调控中的作用及其在不同类别肿瘤中的表达异常对了解肿瘤的发生发展有重大意义。     

EGCG对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及E2F-1表达的影响

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法采用CCK-8法检测EGCG对鼻咽癌细胞株CNE-2Z增殖的影响;AnnexinV /PI双标记流式细胞术检测EGCG的凋亡诱导作用;实时荧光定量PCR和Western blot检测核转录因子E2F-1及其上游调控蛋白CyclinD1和 p21的表达水平。结果EGCG处理后,CNE-2Z细胞的增殖明显受到抑制,其细胞凋亡率亦显著增高,呈量效关系;随着EGCG浓度增高,E2F-1 mRNA和蛋白表达水平明显下降,其上游调控蛋白CyclinD1的表达亦明显下调,而p21的表达则明显上调。结论EGCG可明显抑制鼻咽癌细胞增殖和诱导细胞凋亡,可能与其直接或间接下调核转录因子E2F-1有关,CyclinD1和p21参与其调控。     

E2F因子与表皮细胞的增殖和凋亡

近 10年来 ,有关细胞周期和细胞增殖的研究有了惊人的发展 ,而有关 2个肿瘤抑制因子pRB和p5 3的研究尤其受到关注。目前普遍认为 ,这 2个因子是与其他一系列肿瘤相关基因和蛋白共同作用 ,通过多种通道发挥肿瘤抑制活性的。E2F因子作为 1个重要的细胞周期调控因子 ,既促进细胞增殖又参与了对细胞凋亡的调控 ,其与 pRB、p5 3的密切关系已日益受到重视。1　E2F转录因子概述1.1　E2F因子的结构和分类E2F蛋白因子 (E2factor)最初是在腺病毒的E2启动子中被发现的 ,因其具有激活此类启动子的作用 ,因而得名[1] 。E2F因子最简单的活性形式是 …     

p14ARF、E2F-1与肺癌

p14ARF基因和核转录因子E2F-1在细胞周期调控,细胞凋亡和肿瘤发生中具有重要作用。近年来,有研究表明p14ARF在肺癌中的表达率低于正常组织,E2F-1的表达率高于正常组织。本文将就p14ARF、E2F-1与肺癌的关系进行综述。     

TRAIL与卡铂联合诱导卵巢癌细胞凋亡的研究

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）与卡铂（CBP）联合应用对体外培养的卵巢A2780细胞的生物学效应及其作用机制。方法采用MTT法、流式细胞术，检测体外培养的A2780细胞在卡铂和TRAIL共同作用下的细胞增殖抑制效应以及细胞凋亡程度，应用半定量逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）法检测TRAIL受体的mRNA表达水平。结果A2780细胞对TRAIL敏感，TRAIL与卡铂联合用药对细胞的增殖抑制呈现高效协同作用，与单独用药组比较有显著性差异（P〈0．05）；流式细胞术分析协同性杀伤作用主要由于TRAIL和CBP联合诱导细胞凋亡引起；RT—PCR法检测结果显示A2780细胞在TRAIL与卡铂联合用药后均表现死亡受体DR4、DR5表达水平上调和诱骗受体DcR1、DcR2表达水平下调。结论在体外TRAIL与化疗药物联用能明显抑制肿瘤细胞增殖，诱导肿瘤细胞凋亡，卡铂能明显增强TRAIL对肿瘤细胞的敏感性，其诱导机制可能与死亡受体DR4、DR5表达水平上调和诱骗受体DcR1、DcR2表达水平下调相关。     

E2F3a在U251胶质瘤细胞中的功能研究

背景与目的：E2F3a是一种重要的转录激活因子,在多种肿瘤组织中均呈现表达上调。E2F3a在恶性化程度较高的神经胶质瘤中表达较高,目前它在胶质瘤细胞中的功能尚不清楚。本文的目的是研究E2F3。对U251胶质瘤细胞周期和凋亡的影响。方法：通过脂质体介导质粒转染在U251细胞中过表达E2F3a：用Western blotting检测细胞内E2F3a蛋白质的表达水平：用PT-核DNA染色结合流式细胞术分析细胞周期分布：用Annexin V—PE和7-AAD染色结合流式细胞术分析细胞凋亡比例;用实时荧光定量PCR方法测定细胞内A2、B1、D1和E细胞周期素mRNA的相对表达水平。结果：与空载体转染对照组相比．E2F3a过表达可将位于S期的细胞比例提高28％（P〈0．01）,将位于G0/G1期和G2/M的细胞比例分别降低15％和13％（P〈0．01）。E2F3a过表达对细胞凋亡无明显影响。进一步研究发现,E2F3a可显著上调细胞周期素D1和E的mRNA表达．而不影响周期素A2和B1的mRNA表达。结论：E2F3a是胶质瘤细胞增殖的促进因子,它可通过上调细胞周期素D1和E的表达加速细胞由G,期进入S期。     

E2F-1对胃癌细胞侵袭转移影响的观察

目的:探讨E2F-1对人胃癌细胞MGC-803生物学行为的影响。方法:利用脂质体将pCMV-E2F-1-HA质粒和pCMV-HA质粒分别转染人胃癌细胞MGC-803,应用RT-PCR和蛋白质印迹法检测MGC-803细胞中E2F-1基因的表达;应用体外侵袭实验、迁移实验、细胞基质黏附实验和克隆实验分别检测E2F-1对胃癌细胞MGC-803的侵袭力、迁移力、黏附能力和增殖力的影响。结果:转染pCMV-E2F-1-HA质粒的MGC-803细胞检测到E2F-1的表达;转染pCMV-E2F-1-HA质粒的MGC-803细胞的侵袭力、迁移能力和增殖力较转染pCMV-HA质粒的MGC-803细胞和未转染的MGC-803细胞明显降低(P<0.05),细胞黏附能力未见明显变化,P=0.072。结论:E2F-1高表达对人胃癌细胞MGC-803的生物学特性有较大的影响,具有抑制其侵袭转移的作用。     

乳腺癌组织中E2F-1和Skp2的表达及意义

目的:研究乳腺癌组织中E2F-1、Skp2的表达及其与临床病理指标和预后的关系。方法:应用免疫组化SP法,检测56例乳腺癌组织、30例癌旁正常乳腺组织石蜡切片中E2F-1和Skp2的表达,并分析与临床病理学指标之间的关系。结果:56例乳腺癌组织中E2F-1、Skp2的表达率分别为60.71%和51.79%。E2F-1和Skp2的表达与乳腺癌的组织学分级、临床TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05),而与原发肿瘤大小、患者年龄、病理类型无关(P>0.05)。在乳腺浸润性导管癌中E2F-1与SKP2表达水平呈显著正相关(P<0.05)。结论:E2F-1、SKP2高表达与乳腺癌的发生、发展及浸润转移有关,可作为判断乳腺癌生物学行为和预后的重要指标。     

细胞周期调控与肿瘤研究的关系

细胞周期的紊乱导致细胞无控制增殖从而出现肿瘤，细胞周期的正调控因素中最重要的是细胞周期蛋白和相应激酶组成的成熟促进因子(MPF)．还包括癌基因产物．激素和细胞生长因子，负调控因素与抑癌基因产物关系甚为密切。     

GADD45g 通过抑制E2F1在急性髓系白血病中发挥抑癌作用

[摘要] 目的：检测转录因子E2F1 与生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45g（GADD45g）基因在急性髓系白血病（AML）患者中表达的相关性,探讨GADD45g 是否通过抑制E2F1 诱导AML细胞DNA损伤、凋亡、衰老、周期阻滞和提高药物敏感性。方法：选取2013 年1 月至2016 年12 月中国医学科学院血液病医院初诊为AML患者32 例骨髓标本及AML细胞系U937、HL60、THP-1和Molm-13,用qPCR检测组织和细胞中GADD45g 和E2F1 mRNA的表达水平,并分析其相关性。构建E2F1 过表达载体,并制备重组慢病毒在过表达GADD45g 的Molm-13 和THP-1 细胞中过表达E2F1,通过彗星实验、Annexin V/7AAD流式细胞术、β-半乳糖苷酶染色和PI 染色流式细胞术等确定GADD45g 是否通过抑制E2F1 对AML细胞发挥抑癌作用。结果：AML患者骨髓和细胞系中GADD45g 和E2F1 mRNA的表达呈显著负相关（r=–0.663,P<0.01）。GADD45g 在AML细胞系中过表达显著抑制了E2F1的表达（均P<0.01）。成功构建同时过表达GADD45g 和E2F1 的Molm-13 和THP-1 细胞,与对照组比较,过表达组细胞GADD45g和E2F1 蛋白表达水平均显著升高（均P<0.01）。与过表达GADD45g 的细胞相比,同时过表达GADD45g 和E2F1 细胞的凋亡、衰老率和DNA损伤水平均显著降低（均P<0.01）;在过表达GADD45g 的细胞中过表达E2F1 逆转了GADD45g 诱导的周期阻滞（均P<0.01）,进而降低了过表达GADD45g 对化疗药物的敏感性（均P<0.01）。结论：GADD45g 通过抑制E2F1 在AML中发挥抗肿瘤作用。     

失巢凋亡效应分子bcl-2转录抑制因子1的研究进展

bcl-2转录抑制因子1(Bit1)是失巢凋亡效应分子,可通过下调bcl-2表达发挥非caspase依赖型促凋亡功能。已有研究发现,Bit1可通过Erk、FAK-PI3K-Akt-NF-κB等通路影响细胞生存与凋亡。Bit1在各肿瘤中表达水平呈现显著肿瘤特异性,并与肿瘤TNM分期、分化程度及预后密切相关。文章将对Bit1在不同肿瘤中的表达情况、主要作用机制及其意义进行综述。     

细胞周期蛋白E1与恶性肿瘤关系的研究进展

细胞周期蛋白E1（Cyclin E1）,是由CCNE1基因编码的一种核蛋白,在细胞周期中表现为循环式的表达,在整个细胞周期进程中发挥至关重要的作用。该蛋白通过激活细胞周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）并与之形成复合物,促进细胞通过细胞周期G1/S期限制点,发挥调控真核细胞有丝分裂的作用。正常情况下,Cyclin E1在细胞周期中有序的进行表达和降解。但在异常情况下,Cyclin E1在细胞周期中无序的不稳定表达可导致细胞周期失调控,干扰细胞的有丝分裂,进一步导致细胞染色体的不稳定性,促进肿瘤的发生。近期有研究表明Cyclin E1异常表达参与肿瘤治疗过程中肿瘤细胞对化疗药物产生的抵抗,并与喉癌、胃癌和肝癌等多种肿瘤的发生和发展相关。本文就细胞周期蛋白与恶性肿瘤的关系概况作一综述。     

Flavopiridol增强TRAIL诱导SPC-A1细胞凋亡作用机制研究

目的:研究夫拉平度(FP)增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导非小细胞肺癌细胞SPC-A1凋亡的作用及其分子机制。方法:采用TRAIL、FP单独及联合作用的方法诱导细胞凋亡,MTT法检测各处理组细胞的增殖及活性;蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关基因蛋白水平的表达;定量PCR检测TRAIL受体及髓系细胞白血病-1(Mcl-1)、Fas相关死亡结构域样IL-1β转化酶样抑制蛋白(FLIP)、X染色体连锁的细胞凋亡抑制因子(XIAP)和Livin等凋亡基因的转录水平表达变化。结果:100nmol/L FP处理组(F)细胞存活率为(80.26±2.43)%,100ng/mL TRAIL处理组(T)为(90.49±1.60)%,FP和TRAIL联合组(F+T)为(47.48±1.41)%,联合组的细胞存活率低于单一处理组,F=406.08,P=0.000。FP和TRAIL合用时,FLIP和XIAP分别降为对照组的4%和15%,Mcl-1与Livin的表达量甚至低于可检测水平。Caspase-3和Caspase-8的活性片段约为对照组的4倍。细胞色素c由线粒体向细胞质的释放增加约7倍,而Bcl-2家族蛋白Bcl-2、Bax、Bak和Bcl-xl的表达量基本不变。FP作用后引起DR4的mRNA表达水平(2.51±0.14)上升,P<0.05。但FP和TRAIL单独作用并未引起Mcl-1、FLIP、XIAP和Livin在转录水平的表达变化。联合组加入广谱Caspase抑制剂Z-VAD-FMK后,细胞存活率由(58.26±1.75)%上升至(88.17±2.65)%,P=0.003。说明Z-VAD-FMK可明显抑制联合处理组的凋亡效应。结论:FP能显著增强TRAIL诱导SPC-A1细胞凋亡的作用,此协同促凋亡效应与抗凋亡基因Mcl-1、FLIP、XIAP和Livin的蛋白水平表达降低以及Caspase活性增强和线粒体损伤有关,同时涉及内源性(线粒体)及外源性(非线粒体)凋亡信号通路的共同作用。     

转录因子E2F-1 siRNA对胃癌MGC803细胞体外侵袭及增殖能力的影响

背景与目的:转录因子E2F-1作为细胞周期进程中重要的调控因子,与肿瘤的发生有着密切的关系.本研究通过转染人E2F-1基因的小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)表达质粒,探讨其对胃癌MGC803细胞中E2F-1表达及侵袭和增殖能力的影响.方法:用脂质体LipofectamineTM 2000将具有短发夹结构的人E2F-1 siRNA表达质粒转染至MGC803细胞,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印迹(Western blot)技术分别检测E2F-1 mRNA及蛋白的表达;应用体外侵袭实验及克隆实验分别检测E2F-1 siRNA表达质粒对MGC803细胞侵袭力和增殖能力的影响.结果:成功转染E2F-1 siRNA表达质粒48 h后.MGC803细胞中E2F-1基凶mRNA表达的抑制率超过90%;与未转染组及阴性对照组细胞比较,E2F-1蛋白的表达分别降低81.5%和79.6%.转染pSilencer4.1-E2F-1质粒组的穿膜细胞数(18.0±2.6)与阴性对照组(48.0±4.6)和空白对照组(54.0±5.6)比较差异有统计学意义(P<0.05),其细胞集落形成数(46.0±2.0)与阴性对照组(122.3±1.5)和空白对照组(128.7±2.1)比较差异也有统计学意义(P<0.05).结论:E2F-1 siRNA表达质粒可显著下调E2F-1基因在胃癌MGC803细胞中的表达,在一定程度上抑制胃癌细胞的侵袭和增殖.     

非小细胞肺癌中细胞周期蛋白D1与E的作用及相互关系

目的 :研究细胞周期蛋白D1与E在非小细胞肺癌 (NSCLC)发生、发展中的作用及相互关系。方法 :免疫组化方法检测 87例NSCLC肿瘤组织中细胞周期蛋白D1、E的表达及PCNA估计增殖指数 (PI) ,并将上述结果与临床病理及预后资料进行对比分析。结果 :87例NSCLC中细胞周期蛋白D1、E阳性率分别为 4 4 .8% (39/87)、4 8.3% (42 /87) ,细胞周期蛋白D1阳性组的PI值显著高于阴性组 (P〈0 .0 5 ) ,细胞周期蛋白E阳性组PI值与阴性组无显著差异 (P〉0 .0 5 ) ;细胞周期蛋白D1阳性组肿瘤直径、淋巴结转移率和生存率均与阴性组有显著差异(P〈0 .0 1、〈0 .0 5、〈0 .0 1) ,细胞周期蛋白E阳性组淋巴结转移率、临床分期和生存率均与阴性组有显著差异 (P〈0 .0 5、〈0 .0 5、〈0 .0 1) ;细胞周期蛋白D1阳性组中细胞周期蛋白E的阳性率显著高于其阴性组 (P〈0 .0 5 ) ;细胞周期蛋白D1与细胞周期蛋白E双阳性组的PI值、肿瘤直径、淋巴结转移率显著高于非双阳性组 (P值均〈0 .0 5 ) ,生存率显著低于非双阳性组 (P〈0 .0 1)。结论 :细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白E均参与NSCLC的发生、发展 ,并影响其预后 ,但两者在其中所起作用不同 :细胞周期蛋白D1是调节NSCLC增殖的主要因素 ,细胞周期蛋白E主要与NSCLC进展有关 ;细胞周期蛋白D1可促     

TNFR1与PDC-E2对胶质瘤细胞凋亡影响的相关性研究

目的:胶质瘤是一种最常见的中枢神经系统恶性肿瘤,生长迅速,恶性程度高.研究胶质瘤细胞凋亡过程中肿瘤坏死因子受体1(TNFRl)和丙酮酸脱氢酶复合物E2(PDC-E2)蛋白的表达变化,探讨TNFR1和PDC-E2在此过程中的作用.方法:培养TNFR1的小干扰细胞,将干扰掉TNFR1的质粒转染入U87MG细胞,检测TNFR1和PDC-E2对胶质瘤细胞凋亡的影响.通过免疫共沉淀方法检测TNFR1和PDC-E2在体外的相互作用;通过免疫荧光检测两者在U87MG细胞内的共定位;在转染干扰掉TNFR1的胶质瘤细胞中,检测TNFR1和PDC-E2的相互作用对凋亡标记物Caspase-3蛋白表达量的调节作用.结果:将TNFR1的小干扰质粒转染入U87MG细胞,结果显示未干扰掉的TNFR1对胶质瘤细胞凋亡有抑制作用,干扰掉TNFR1时对胶质瘤细胞凋亡的抑制作用减弱.体外HEK293T细胞及胶质瘤细胞中的免疫共沉淀以及免疫荧光显示TNFR1和PDC-E2存在相互作用;在胶质瘤细胞中检测到TNFR1和PDC-E2的相互作用协同促进Caspase-3的表达.结论:TNFR1和PDC-E2抑制胶质瘤细胞的凋亡,协同作用比单独对凋亡的影响更加明显;TNFR1和PDC-E2存在相互作用,两者协同作用更能增高作用底物Caspase-3的表达.     

MTS1基因β启动子E2F1结合位点序列突变重组质粒的构建与表达

目的：深入研究MTS1基因β启动子的转录激活与E2F1转录因子的相互作用关系，阐明该转录水平的调控机制。方法：用PCR定点突变方法或酶切连接法，构建β启动子0.38kb SacⅡ-Sac I酶切片段中E2F1 A，B，C任意2个位点或3个位点均突变的pGL3重组质粒。用脂质体介导的基因瞬时转染法，将构建的重组质粒转染MTS1基因双等位缺失的急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞，检测pGL3重组质粒中荧光素酶报告基因的表达。结果：构建的E2F1 A，B，C结合位点突变的重组质粒经Sac I或Nae I酶切鉴定和DNA序列分析得到证实。与E2F1位点野生型重组质粒比较，突变型重组质粒在Jurkat细胞中荧光素酶报告基因的表达量减少，以3个位点均突变的重组质粒为明显。结论：构建的E2F1 A，B，C2个或3个结合位点均突变重组质粒成功，可通过基因转染用于研究MTS1基因的功能试验中；MTS1基因β启动子的转录活性可能与E2F1转录因子的反式激活有关。