豚鼠胰腺的胰高血糖素、促性腺激素释放激素和促性腺激素释放激素受体的免疫组织化学双标记研究

目的：阐明胰外分泌部产生的促性腺激素释放激素（ＧｎＲＨ）的受体与胰岛胰高糖素的共存关系．方法：制备豚鼠胰腺石蜡连续切片，以ＡＢＣ法分别进行ＧｎＲＨ和ＧｎＲＨ受体、胰高血糖素和ＧｎＲＨ受体的免疫组织化学染色．结果：ＧｎＲＨ免疫反应阳性细胞分布于胰腺的外分泌部，ＧｎＲＨ受体免疫反应阳性细胞位于胰岛内，与胰高血糖素免疫反应阳性细胞的数量及分布特点完全一致．结论：胰岛内胰高血糖素细胞可能为胰外泌部自身合成的ＧｎＲＨ的靶细胞，提示胰外分泌部可能对胰内分泌具有调节作用     

促性腺激素释放激素对大鼠胰腺细胞内cAMP含量的影响

目的:通过观察GnRH类似物(GnRHR激动剂和拮抗剂)对大鼠胰腺细胞内cAMP含量的影响,了解cAMP在GnRHR介导的信号转导通路中的作用.方法:以不同浓度GnRH类似物对原代培养的大鼠胰腺细胞进行刺激,借助放免法测定观察在体外条件下GnRH类似物对大鼠胰腺细胞内cAMP含量的影响.结果:在量效实验中,各浓度GnRHR激动剂均能使细胞内cAMP含量增加,其中10<'-8>～10<'-5>mol/L中4个浓度组最为明显,与对照组相比有非常显著差异(P<0.01).应用GnRHR拮抗剂(10<'-6>mol/L)后明显抑制了激动剂组增高cAMP含量的作用,其cAMP水平与对照组比较没有显著差异(P>0.05).在时效实验中,应用10<'-7>mol/L Gn-RHR激动剂刺激细胞,从10 min起细胞内cAMP含量即开始增多,到1 h达到峰值,以后逐渐下降,8 h后恢复到原水平.结论:由以上结果推测cAMP可能是GnRHR介导的信号转导通路中的信号分子之一.     

促性腺激素释放激素分泌系统的研究进展

促性腺激素释放激素 (gonadotropin releasinghormone ,GnRH)是一种 1 0肽 ,分布在下丘脑、胎盘绒毛、胰腺癌和乳腺癌组织、消化道、胸腺等多种组织中[1,2 ] 。不同器官内的GnRH发挥着不同的功能。胎盘绒毛的GnRH主要调节绒毛促性腺激素等多种绒毛激素的释放。乳腺癌的GnRH则对     

豚鼠胰腺的胰高血糖素,促性腺激素释放激素和促性腺激素释？…

阐明胰外分泌部产生的促性腺激素释放激素的受体与胰岛胰高糖素的共存关系。方法：制备豚鼠胰腺石蜡连续切片，以ＡＢＣ法分别进行ＧｎＲＨ和ＧｎＲＨ受体，胰高血糖素和ＧｎＲＨ受体的免疫组织染色。结果：ＧｎＲｈ免疫反应阳性细胞分布于胰腺的外分泌部，ＧｎＲＨ受体免疫反应阳性细胞位于胰岛内，与胰高血糖素免疫反应阳性细胞的数量及分布特点完全一致。     

恐惧应激对大鼠小肠促性腺激素释放激素受体的影响

目的：观察恐惧应激状态下SD大鼠小肠黏膜促性腺激素释放激素（GnRH）受体的分布和表达变化。方法：建立SD大鼠恐惧应激模型,分别取急性应激组（2~12 h）、慢性应激组（1 d~4周）和相应对照组的小肠。用免疫组化和Western blot法检测GnRH受体在各实验组大鼠小肠中的分布和表达变化。结果：免疫组化显示：急性应激组、慢性应激组和相应对照组的小肠黏膜层均呈GnRH受体免疫反应阳性,无明显差异。阳性反应物质定位于细胞膜和细胞质,细胞核呈阴性。Western blot结果表明：在急性应激状态下,GnRH受体表达有增多的趋势,但与相应对照组相比无显著性差异（P〉0.05）;慢性应激组与其相应对照组相比,GnRH受体表达明显增加（P〈0.05）。整个慢性应激过程中,GnRH受体表达增多持续1~4 d。1~3周时,GnRH受体表达降低,3~4周时又有所回升,并接近慢性应激相应对照组。结论：随着恐惧应激时间的延长,GnRH受体在小肠中表达增加。提示GnRH在恐惧应激中,对消化功能的影响具有潜在的生理调节功能。     

促性腺激素释放激素及其受体在肿瘤治疗中的应用

促性腺激素释放激素(GnRH)是由下丘脑神经元分泌的一种十肽类激素,其生理功能是调节垂体前叶促性腺激素的分泌,进而刺激黄体生成素及卵泡刺激素的分泌以调节性激素的水平。GnRH对垂体外的多种外周组织的生理功能也有调节作用。近年研究发现,乳腺、卵巢、子宫内膜、前列腺、胰腺、肺、肝脏发生的肿瘤细胞上均有GnRH受体分布,GnRH类似物可抑制这些肿瘤细胞生长。GnRH及其类似物的抗肿瘤效应是通过调节垂体促性腺激素水平来实现的。本文对GnRH及其受体在肿瘤治疗中的应用进展进行综述。     

促黄体激素释放激素类似物治疗前列腺肿瘤

前列腺癌(prostate cancer,PCA)在欧美等西方国家是最常见的恶性肿瘤之一。PCA在我国较少见,发病率约为2.41/10万男性人口。随着生活水平提高和人口老龄化,我国PCA发病率有逐年增高的趋势。导致前列腺癌潜在的危险因素很多,如年龄、家族遗传和种族是该病确定的危险因素;而激素、脂肪饮食、微量元素等可能是潜在的致病因子。     

促性腺激素释放激素受体在EMS患者子宫内膜的表达

【目的】检测促性腺激素释放激素受体（GnRH—R）在子宫内膜异位症（EMS）患者子宫内膜组织的表达，探讨其存在的意义。【方法】应用免疫组化和巢式PCR方法，从蛋白和mRNA水平检测GnRH—R表达。【结果】GnRH—R蛋白在EMS和对照组在位子宫内膜组织及体外培养子宫内膜细胞中持续表达；在异位内膜组织中的表达率为54．2％，低于对照组（P〈0．01）。GnRH—R mRNA的表情况与蛋白相符。【结论】在EMS在位、异位内膜存在着GnRH—R的自／旁分泌调节，GnRH—R可能成为临床GnRH类似物（GnRH—α）治疗的靶点。     

促性腺激素释放激素激动剂对卵巢癌大鼠化疗效果的影响

目的 研究促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)对大鼠卵巢组织中雌激素受体α(ERa),ERB,孕激素受体(PR)和雄激素受体(AR)的表达的影响以及对环磷酰胺在卵巢癌大鼠模型中治疗效果的影响。方法 (1)80只Fischer-344大鼠分为4组,分别接受生理盐水、环磷酰胺((3TX)、GnRHa和CTX GnRHa治疗,采用免疫组化和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法比较各组大鼠卵巢组织中ERα,ERB,PR和AR的表达水平;(2)使用NuTu-19卵巢癌细胞系在20只Fischer-344大鼠上建立卵巢癌模型,分为3组,分别接受生理盐水、CTX和CTX GnRHa治疗,比较各组大鼠的生存时间。结果(1)4组大鼠卵巢组织中ERct、ERβ、PR、AR mRNA强度分别为0．24～0．29、1．13～1．35、0．68～0．88、1．39～1．63,免疫组化评分结果分别为4．7～5．1、15．1～15．5、8．5～9．1、17．9～19．0,各组大鼠的受体表达水平差异没有统计学意义;(2)(3TX组和联合治疗组大鼠的生存时间分别为76．0d和79．6d,两者差异没有统计学意义。结论 在大鼠模型中应用GnRHa的过程中不会改变大鼠卵巢组织中ERα、ERβ、PR、AR的表达水平,也不会影响CTX对卵巢癌大鼠模型的治疗效果。     

促性腺激素释放激素兴奋试验在男性内分泌疾病中的应用

促性腺激素释放激素(ＬＨＲＨ)是下丘脑分泌的一种释放激素,其作用于垂体,使其释放促卵泡激素(ＦＳＨ)和黄体生成素(ＬＨ),后两者再作用于性腺,调节生殖功能〔1〕。临床上利用人工合成的ＬＨＲＨ来刺激腺垂体,以评估垂体对下丘脑ＬＨＲＨ的反应功能,从而为临床提供诊断依?..     

地高辛标记反义RNA探针对大鼠不同组织生长抑素mRNA原位杂交的实验研究

应用地高辛（ＤＩＧ）标记的生长抑素（ＳＯＭ）反义ＲＮＡ探针，与Ｗｉｓｔａｒ大鼠胃、十二指肠和甲状腺组织进行原位分子杂交，以显示不同组织中ＳＯＭｍＲＮＡ对ＳＯＭ细胞进行分子水平的细胞定位和形态学观察。结果显示：杂交阳性信号呈蓝色位于胞质内，背景清晰，细胞轮廓清楚，主要分布于胃粘膜底部，十二指肠阳性细胞较少，在甲状腺滤泡旁和滤泡上皮细胞之间均可见到形态不一的杂交阳性细胞。用ＲＮａｓｅＡ预处理标本和免去探针均无杂交信号出现。表明ＤＩＧ标记的反义ＲＮＡ探针具有高度的敏感性和特异性。     

原发性肝内胆管结石患者肝细胞中UDP—GT mRNA原位分子杂交

目的：观察原发性肝内胆管结石患者肝细胞内葡萄糖醛酸转移酶（ＵＤＰ－ＧＴ）活性变化和该酶ｍＲＮＡ表达。     

原位杂交法检测视网膜色素上皮细胞炎前因子mRNA的表达

目的　观察视网膜色素上皮细胞 ( RPE)在炎性介质刺激下炎前因子 m RNA的表达 .方法　培养的人 RPE经IL - 1β ( 10μg· L- 1 )和脂多糖 ( 1m g· L- 1 )的刺激后 ,用生物素标记的寡核苷酸探针进行原位杂交 ,检测 RPE炎前因子IL - 1β,IL - 6,IL - 8和 TNF-α m RNA表达 .杂交结果使用图像分析法进行比较 .结果　原位杂交显示 RPE细胞质中均呈现浓淡不一的淡蓝色着色 ,胞核不着色 .其中 IL - 6m RNA在脂多糖刺激下染色较浅 ,增加脂多糖的剂量不能提高其表达 .图像分析显示在 IL - 1β ( 10μg· L- 1 )和脂多糖 ( 1m g· L- 1 )刺激下 ,RPE表达 IL - 6m RNA的吸光度分别为 10 8± 18和3 5± 14 ,二者之间有显著性差异 ( P<0 .0 1) .结论　在 IL - 1β和脂多糖刺激下 ,人 RPE可以表达炎前因子 IL - 1β,IL - 6,IL - 8和 TNF-α的 m RNA .     

应用原位杂交技术检测鼻咽癌p16 mRNA基因表达研究

目的:研究p16 mRNA在鼻咽癌组织中的表达情况，探讨p16 mRNA与鼻咽癌生物学行为的关系。方法:应用生物素标记RNA探计的原位杂交技术，对20例散发性鼻咽癌(NPC)患者及3个NPC家系中NPC患者的组织标本进行mRNA检测，探讨p16 mRNA的异常表达在NPC的发生发展中的作用，以20例鼻咽炎患者的鼻咽部组织做为对照。结果:20例NPC标本原位杂交阳性8例，p16 mRNA阳性表达为40％(8／20)，3个高发家系的NPC标本无阳性表达，20例对照(鼻咽炎患者的标本)全部有p16 mRNA阳性表达。结论:p16 mRNA在鼻咽癌组织中呈低表达，提示p16基因作为一种重要的抑癌基因，它的突变或缺失可能与鼻咽癌的发生发展及恶性行为起一定的作用。     

用原位杂交及免疫组化方法显示人胚胎甲状腺褪黑素受体

目的：在前期工作的基础上进一步观察人胚胎甲状腺组织中腿黑素（Ｍel)受体的存在及其分布。方法：取人胚胎（胎龄６个月）甲状腺,石蜡包埋,切片,以免疫组化ＡＢＣ法及原位杂交方法进行染色。结果：免疫组化方法显示,人胚胎甲状腺细胞的细胞膜、细胞质和细胞核中Ｍel受体mt1和ＭＴ２亚型均呈棕褐色阳性染色;原位杂交方法显示mt１和ＭＴ２分布于甲状腺细胞的细胞质及细胞核内,呈蓝紫色阳性染色。结论：人胚胎甲状腺组织中存在褪黑素受体mt1和ＭＴ２亚型,分布于甲状腺细胞的细胞膜、细胞质、细胞核内。     

NMDA受体亚单位NR1、NR2A和NR2B mRNA在成年大鼠海马的表达

目的 研究NMDA受体亚单位（NR1，NR2A和NR2B）mRNA在正常成年大鼠海马结构各区的表达及形态特点。方法 原位核酸分子杂交组织化学反应和图像处理与分析。结果 NR1，NR2A和NR2BmRNA在正常大鼠海马结构各区锥体细胞和颗粒细胞普遍表达，其中NR1mRNA的表达最强，NR2AmRNA的表达最弱，NR1mRNA在齿状回（DG）的表达水平明显强于CA1区和CA3区；NR2AmRNA在CA1区的表达水平则强于CA3区和DG；NR2BmRNA在海马各区的表达水平基本相同。结论 NR1，NR2A和NR2BmRNA在正常成年大鼠海马各区的表达模式不同，其中NR2AmRNA在海马CA1区以及NR1mRNA在DG高表达的分布特点可能与海马的学习，记忆等生理功能以及选择性易损现象有关。     

人肝癌细胞自分泌促性腺激素释放激素的形态学证据

目的：明确肝癌组织细胞是否具有分泌促性腺激素释放激素（GnRH)的功能。方法：采用免疫组化和原位杂交技术，研究人肝癌组织中GnRH及其受体的表达。结果：10例石蜡包埋的肝细胞癌（HCC）组织中有7例表现为GnRH及其受体蛋白免疫反应阳性，GnRH及其受体均定位于肝癌细胞的胞膜和胞质；4例新鲜肝癌组织中有2例检测出GnRH-mRNA，阳性杂交信号定位于肝癌细胞的胞质，胞核未见杂交信号。结论：本研究表明，肝癌组织细胞具有自分泌GnRH的功能，为进一步探讨GnRH与肝癌生物学特性之间的关系提供了理论基础。     

原位杂交研究GPRC6A mRNA在小鼠组织中的分布规律

目的：探讨G蛋白偶联受体C组6A（G protein-coupled receptor family C, group 6, subtype A, GPRC6A） mRNA在小鼠体内的分布规律。方法：比较传统和TSA信号放大系统分析石蜡包埋的小鼠组织中GPRC6A mRNA的分布情况。为了确保信号特异性,将GPRC6A基因剔除小鼠组织放在同一张切片上作阴性对照。结果：建立了一种用非同位素标记的互补RNA探针原位杂交检测石蜡包埋的小鼠组织中低表达GPRC6A mRNA 的方法。TSA信号放大系统明显提高原位杂交检测该受体的敏感性。GPRC6A基因剔除小鼠组织中没有可测信号。GPRC6A mRNA至少在消化腺、副消化腺中表达,同时也在肾、睾丸、子宫、脑、肌肉脂肪中有表达。结论：GPRC6A mRNA 的分布模式与GPRC6A基因剔除小鼠的基因表型基本一致。