NET-1蛋白在肝癌中的表达和意义

目的研究NET-1基因在肝癌中的表达和意义,分析其与临床病理因素的相关性。方法Western blot法检测8例肝癌组织中NET-1的表达,免疫荧光细胞化学法检测肝癌SMMC-7721细胞中NET-1蛋白的表达,免疫组化法检测130例肝癌石蜡包埋组织中NET-1蛋白的表达。结果Western blot法检测显示,8例肝癌组织匀浆中均有NET-1的表达。免疫荧光细胞化学激光共聚焦观察显示,NET-1在SMMC-7721细胞浆中表达呈不规则颗粒状,分布在高尔基体附近。免疫组化结果显示,肝癌组织中NET-1蛋白检出率为96.9%(126/130),其表达强度与癌细胞学类型密切相关;在透明细胞型、多形细胞型和肉瘤样型中,NET-1蛋白检出率和阳性强度显著高于肝细胞型(P< 0.05)。NET-1基因与癌病理分级、临床分期和癌伴肝炎肝硬化呈等级正相关,而与癌伴片块状坏死呈负相关(P均<0.05),与患者AFP水平、肿瘤大小及肿瘤生长方式无明显相关。结论在肝癌中,NET-1表达于胞浆,定位于近高尔基体处。NET-1蛋白表达可能促进肝癌细胞失控性增生和失分化。     

肝癌及相关组织中NET-1基因与蛋白的表达

背景与目的:NET-1是最近发现的肿瘤相关基因,它在肝癌中的表达目前尚未见报道。本研究在胚胎肝、成人肝、肝癌及相应的癌旁组织中筛检和比较NET-1基因和蛋白表达,以探讨NET-1基因在肝癌表达的特征。方法:用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测3例胚胎肝、4例成人肝、4例验证肝癌组织和28例肝癌与相应癌旁组织中NET-1mRNA的表达,由四星图像分析系统软件检测NET-1基因mRNA的光密度。用基因生物工程方法制备NET-1多克隆抗体,并用激光共聚焦显微镜观察免疫荧光细胞化学检测培养的人肝癌细胞系SMMC-7721中NET-1抗体的表达,免疫组化法检测28例肝癌与癌旁组织中NET-1蛋白的表达。结果:(1)正常成人和胎儿肝组织中NET-1基因mRNA不表达,4例验证肝癌组织中NET-1基因mRNA均呈阳性表达;肝癌与癌旁组织中NET-1基因mRNA高表达,阳性率均为85.71%(24/28)。肝癌组织中NET-1mRNA的平均光密度显著高于癌旁组织(0.64与0.47,P<0.05)。(2)经激光共聚焦显微镜观察SMMC-7721细胞中NET-1抗体的表达定位于胞浆。(3)免疫组化检测NET-1多克隆抗体在同组肝癌和癌旁组织中NET-1蛋白检出率分别为96.43%(27/28)和71.43%(20/28),两者差异具有显著性意义(P<0.05)。(4)RT-PCR方法和免疫组化方法检测肝癌和癌旁组织中NET-1基因mRNA表达与蛋白表达两者之间阳性率无显著性差异,并呈显著性正相关(癌中r=0.48,癌旁r=0.40,均P<0.05)。结论:NET-1基因表达可能是肝癌发生的早期分子事件,该基因在肝癌诊断中可能有一定的参考价值。     

Role of the pituitary tumor transforming gene 1 in the progression of hepatocellular carcinoma

In order to demonstrate the role of the pituitary tumor transforming gene 1 (PTTG1) in the development of hepatocellular carcinoma (HCC) and its value as a molecular target for cancer therapy, we analyzed the expression of PTTG1 mRNA and protein, and their relation to clinicopathological characteristics and basic fibroblast growth factor (bFGF) expression in HCC. It was observed that the level of PTTG1 mRNA and the positive rate of PTTG1 protein in cancerous tissues were significantly higher than that in adjacent non-cancerous tissues (both P< 0.001). The PTTG1 protein levels were correlated with several clinicopathological parameters, including alpha-fetoprotein level, portal vein tumor thrombosis, tumor stage, and bFGF protein level (P< 0.05). The proliferation indices were significantly less and the apoptotic rates were significantly higher in the HepG2 and SMMC-7721 cells treated with PTTG1 siRNA transfection than their untransfected counterparts. The expressions of Caspase-3, Bax, p21 and p53 in HepG2 and SMMC-7721 cells were significantly increased after siRNA knockdown of PTTG1 expression. In conclusion, the PTTG1 gene is up-regulated in the cancerous tissue from patients with HCC and involved in the progression of HCC. Inhibiting PTTG1 expression decreases cell proliferation and induces apoptosis in hepatic cancer cell lines, indicating that PTTG1 may be a new therapeutic target for HCC treatment.     

RMP基因沉默对肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移能力的影响

目的:建立RMP(RPB5-mediating protein)基因沉默的稳定细胞株,研究RMP小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移的抑制作用.方法:首先,体外合成3条RMP基因的siRNA,并转染到SMMC-7721细胞中,RT-PCR检测3条siRNA对RMP基因表达的抑制作用,筛选出最佳干扰序列;然后,pGPU6-Neo-RMP-484真核表达载体转染,G418筛选出稳定干扰RMP基因的细胞株,RT-PCR法检测该稳定细胞株中RMP基因的干扰效率,MTT法检测RMP-siRNA对SMMC-7721细胞增殖及细胞黏附能力的影响,划痕实验检测细胞迁移能力的变化.结果:利用RNA干扰技术成功建立了RMP基因下调的稳定细胞株,与SMMC-7721细胞对照组比较,其RMP mRNA表达水平下调了(83.67±2.56)%.稳定转染siRNA的细胞株细胞增殖受到抑制,增殖抑制率可达(74.33±0.58)%.稳定转染细胞株的细胞黏附能力有所增加,迁移率则相应降低.结论:成功筛选出了稳定转染RMP-siRNA重组载体的细胞株.pGPU6-Neo-RMP-484重组载体能有效抑制RMP基因在肝癌SMMC-7721细胞内的表达,可作为RMP分子机制研究的细胞模型.RMP基因的下调能有效抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖,使其黏附率增加,同时细胞的迁移率降低.     

Overexpression of WWP1 Promotes tumorigenesis and predicts unfavorable prognosis in patients with hepatocellular carcinoma

WW domain-containing E3 ubiquitin protein ligase 1 (WWP1) has been speculated to play important roles in the development of several kinds of cancers. However, the role of WWP1 in hepatocellular carcinoma(HCC) is not clear. In the present study, we investigated the expression and prognostic role of WWP1 in primary hepatocellular carcinoma (HCC) using cell lines and 149 archived HCC samples. Correlation between the functions of WWP1 in HCC was also explored. We used human HCC cell lines (BEL-7402, SMMC-7721, Hep-G2, Hep-3B, SK-hep1 and Huh7) and a normal hepatocyte cell line (LO2) along with HCC samples from patients who had undergone resection for HCC previously at our hospital. A battery of methods (real-time quantitative polymerase chain reaction; western blotting; immunohistochemical analyses; cell proliferation and colony formation assays; cell migration and cell invasion assays) were employed to assess various aspects of WWP1. We found that WWP1 expression was upregulated aberrantly at mRNA and protein levels in human primary HCC tissues. Amplified expression of WWP1 was highly correlated with poor outcome. Silencing of WWP1 expression by siRNA inhibited the proliferation, colony formation, migration and invasion of HCC cells in vitro, and resulted in significant apoptosis and cycle arrest in HCC cells. Our findings suggest that WWP1 might have an oncogenic role in human primary HCC, and that it could be used as a prognostic marker as well as a potential molecular target for the treatment of HCC.     

TPX2 knockdown suppressed hepatocellular carcinoma cell invasion via inactivating AKT signaling and inhibiting MMP2 and MMP9 expression

Objective： Targeting protein for Xenopus kinesin-like protein 2 （TPX2） is a nuclear proliferation-related protein that plays a critical role in the formation of mitotic spindle. High expression of TPX2 has been observed in several types of tumors. However, the role of TPX2 in hepatocellular carcinoma （HCC） remains unclear. Our study aimed to investigate the effect of TPX2 on HCC cell invasion. Methods： The immortalized normal human liver cell line L02 and six HCC cell lines including SMMC- 7721, BEL-7402, Huh-7, HepG2, Hep3B and SKHepl were subjected to qRT-PCR and western blot for TPX2 mRNA and protein, respectively. Furthermore, TPX2 small interfering RNA （siRNA） was used to knock down TPX2 expression in SMMC-7721 and HepG2 cells. Cell proliferation and invasion were determined by MTT and transwell assays. Otherwise, expression of p-AKT, MMP2 and MMP9 were evaluated by western blot in SMMC-7721 cells. Results： The expression of TPX2 in HCC cell lines was markedly higher than that in normal human liver cell line. TPX2 knockdown using a specific TPX2-siP, NA reduced the number of invaded cells and inhibited cell proliferation in SMMC-7721 and HepG2 cells. Furthermore, TPX2 knockdown resulted in inactivation of AKT signaling and down-regulation of MMP2 and MMP9 expression in SMMC-7721 cells. Conclusions： Our study identified that TPX2 might contribute to tumor cell invasion through activating AKT signaling and subsequently increasing MMP2 and MMP9 in HCC.     

HOXB7基因敲除对人肝癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力的影响

目的 研究同源异型盒基因HOXB7（Homebox7）对人肝癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响及部分机制。方法 采用荧光定量PCR法选取HOXB7 mRNA高表达的人肝癌SMMC-7721细胞和HepG2细胞;设计靶向HOXB7的shRNA,瞬时转染肝癌SMMC-7721细胞,荧光定量PCR和Westernblot法检测shRNA靶向沉默的效果,CCK8、Transwell和划痕实验分别用于检测细胞增殖、侵袭和迁移能力;Western blot法测量肝癌SMMC-7721细胞中Smad3、p-Smad3表达水平。结果 HOXB7 shRNA转染的肝癌SMMC-7721细胞中HOXB7基因mRNA和蛋白表达水平均显著降低,同时细胞增殖、侵袭和迁移能力随之下降,且TGF-β通路中p-Smad3蛋白表达水平下调。结论 HOXB7可促进肝癌细胞增殖、侵袭以及迁移能力,其机制可能与调节Smad3磷酸化水平有关。     

干扰PRMT2基因对肝癌细胞系生物学行为的影响

目的:研究抑制蛋白质精氨酸甲基转移酶2(protein arginine methyltransferase 2,PRMT2)基因的表达对肝癌细胞系生物学行为的影响。方法:qRT-PCR检测人肝癌细胞系(HepG2和SMMC-7721)和人正常肝细胞(LO2)中PRMT2的表达情况;设计并合成针对PRMT2基因的3对小干扰RNA,体外通过脂质体Lipofectamine 3000转染到相对高表达PRMT2的人肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721中抑制PRMT2基因的表达,并设置阴性对照组（NC组）和空白对照组。qRT-PCR、Western blot检测转染后细胞PRMT2 mRNA水平和蛋白水平的变化。CCK-8法检测转染后细胞增殖能力,Transwell小室检测细胞体外迁移及侵袭能力。结果:与人正常肝细胞LO2相比,PRMT2基因在人肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721中相对高表达。将siPRMT2转染HepG2和SMMC-7721细胞后,与NC组相比,siPRMT2-1和siPRMT2-2组的PRMT2 mRNA和蛋白表达均明显降低（P均<0.05）,NC组与空白对照组无明显差异。与NC组相比,将siPRMT2-1和siPRMT2-2转染进HepG2和SMMC-7721细胞后,细胞增殖速度减慢、迁移和侵袭能力显著减弱（P均<0.05）,NC组与空白对照组无明显差异。结论:RNA干扰抑制PRMT2表达后,抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭,PRMT2可能影响肝癌的预后。     

Overexpression of LSD1 in hepatocellular carcinoma: a latent target for the diagnosis and therapy of hepatoma

The aim of this study was to investigate the expression of LSD1 in human hepatocellular carcinoma (HCC) cell lines and HCC samples. In this study, we examined LSD1 expression in 60 paired liver cancer tissues and adjacent noncancerous tissues by Western blot. In addition, we analyzed LSD1 expression in 198 HCC samples by immunohistochemistry. The relationship between LSD1 expression and clinicopathological features was investigated. The HCC cell line SMMC-7721 was transfected with LSD1 siRNA expressing plasmids. We subsequently examined in vitro cell growth using the MTT assay and anchorage-independent growth through a soft-agar colony-formation assay. In addition, the expression levels of Bcl-2 and c-Myc were also examined. Immunohistochemistry and Western blotting consistently confirmed LSD1 overexpression in HCC tissues compared with adjacent non-neoplastic tissues (P?<?0.01). Additionally, immunostaining showed more LSD1-positive cells in the higher tumor stage (T3–4) and tumor grade (G3) than in the lower tumor stage (T1–2, P?<?0.001) and tumor grade (G1–2, P?<?0.001). Knockdown of LSD1 expression in HCC cells led to decreased cell proliferation. The expression of Bcl-2 and c-Myc were down-regulated after transfection of LSD1 siRNA into HCC cell line SMMC-7721. In conclusion, because LSD1 was overexpressed in HCC and has an important role in the development of HCC, LSD1 could be a latent target in the diagnosis and therapy of HCC.     

下调MLLT3/AF9基因对肝癌SMMC-7721细胞增殖与侵袭能力的影响

目的 本文旨在研究组蛋白甲基转移酶MLLT3/AF9在人肝癌组织中的表达,观察体外下调MLLT3/AF9的表达对肝癌SMMC-7721细胞增殖与侵袭能力的影响。方法 应用Real-time PCR技术检测100例肝癌组织、癌旁组织和肝癌细胞系SMMC-7721、HepG2、Hu7、BEL-7402中MLLT3/AF9基因的表达水平;应用RNA干扰下调MLLT3/AF9的表达,采用CCK-8、Transwell实验和划痕实验检测MLLT3/AF9下调组和对照组SMMC-7721细胞的增殖及侵袭能力。结果 Real-time PCR检测结果显示肝癌组织中的MLLT3/AF9基因的表达量显著高于癌旁组织; Real-time PCR和Western blot检测到LVMLLT3-RNAi组中MLLT3/AF9 mRNA和蛋白的表达水平都降低,CCK-8、Transwell和划痕实验结果显示LV-MLLT3-RNAi组细胞的增殖和侵袭能力降低。结论 MLLT3/AF9在肝癌组织中表达水平明显升高,体外下调MLLT3/AF9的表达可以有效抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖与侵袭。     

肝癌细胞 67kDa层粘连蛋白受体的表达

背景与目的:本实验室最近发现人肝癌细胞 SMMC-7721表达的 67kDa层粘连蛋白受体( 67kDa Laminin receptor,67LR)与层粘连蛋白的结合能力明显高于正常肝细胞 L-02表达的 67LR,而 67LR在肝癌细胞和正常肝细胞中的表达水平尚不清楚.本研究旨在探讨 67LR在肝癌细胞中的表达,及其与层粘连蛋白结合能力的关系.方法:以人肝癌细胞 SMMC-7721、 HepG2和正常肝细胞 L-02为材料,采用 131I标记的层粘连蛋白测定其与细胞的结合能力;采用流式细胞术和 RT-PCR分析 67LR蛋白和 mRNA的表达水平. 结果: (1)相同条件下 SMMC-7721、 HepG2 细胞与层粘连蛋白特异结合量分别为 (17.54± 0.49) ng/105 cell、 (11.18± 0.53) ng/105 cell,而 L-02细胞的特异结合量为 (8.36± 0.48) ng/105 cell,表明肝癌细胞与层粘连蛋白的结合能力明显高于正常肝细胞( P< 0.01) ;(2)流式细胞术分析, SMMC-7721细胞的 67LR阳性表达率为 34.7%, L-02细胞的 67LR阳性表达率为 55.3%,而 HepG2 细胞则几乎不表达 67LR; (3)RT-PCR产物进行半定量分析发现,两株肝癌细胞的 67LR mRNA表达水平明显高于 L-02细胞.结论:肝癌细胞与层粘连蛋白的结合能力明显高于正常肝细胞 L-02,而细胞膜表面的 67LR水平却低于 L-02细胞,提示 SMMC-7721细胞 67LR的亲和力可能高于 L-02细胞,而且还涉及其它层粘连蛋白受体.     

NET-1 shRNA抑制肺癌细胞A549中NET-1表达及对癌细胞增殖的影响

目的:探讨转染PSilencer4.1 - NET -1 shRNA进入肺癌细胞株A549后对细胞中NET -1基因的表达及细胞增殖的影响.方法:转染PSilencer4.1 - NET -1 shRNA进入肺癌细胞株A549,同时设立空转染对照组与空白组,Western blot检测细胞NET -1蛋白,逆转录聚合酶链反应(RT - PCR)检测癌细胞中NET -1mRNA的含量,WST -8法检测细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞周期的相关变化.结果:PSilencer4.1 - NET-1 shRNA转染组中NET -1 mRNA的含量及细胞NET -1蛋白与对照组比较明显降低,实验组细胞的增殖明显慢于对照组与空白组,癌细胞阻滞在G1期占63.24％,S期细胞比例明显下降,与对照组比较均有统计学意义(P＜0.05).结论:肺癌细胞中NET -1持续低表达可导致癌细胞增殖抑制、生长减慢,在肺癌患者的预后判断中有一定的参考价值.     

miR-223-3p 通过靶向RAC1 调控肝细胞癌SMMC-7721 细胞的增殖和凋亡

目的：探讨miR-223-3p 通过调控Ras 相关C3 肉毒素底物1（Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1，RAC1）对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法：选用2016 年8 月至2018 年8 月吉林市中心医院手术切除的30 例HCC 组织及其癌旁组织标本和人HCC 细胞系SMMC-7721、Bel-7402、HepG2 及人正常肝细胞QSG-7701，用qPCR检测HCC组织和细胞系中miR-223-3p的表达水平。分别将miR-223-3p mimics、miR-223-3p inhibitor 和siRAC1转染至SMMC-7721 细胞，通过CCK-8、克隆形成实验和Annexin V-FITC/PI 染色流式细胞术检测SMMC-7721 细胞的增殖、克隆形成和凋亡水平。用双荧光素酶报告基因实验检测miR-223-3p 与RAC1 的靶向关系，Western blotting 检测细胞中RAC1 蛋白的表达水平。结果：miR-223-3p 在HCC组织的表达水平显著低于癌旁组织（P<0.01），其表达水平与肿瘤大小、TNM分期及肿瘤分化病理特征相关（P<0.05 或P<0.01）；miR-223-3p 在HCC细胞系表达水平显著低于QSG-7701 细胞（均P<0.01），以在SMMC-7721细胞中表达水平最低。双荧光素酶报告基因实验证实RAC1 是miR-223-3p 靶基因，miR-223-3p 靶向负调控RAC1 的表达。转染miR-223-3p mimics 显著抑制SMMC-7721 细胞的增殖和克隆形成能力（P<0.05 或P<0.01），并促进细胞凋亡（P<0.01）；转染miR-223-3p inhibtor 则逆转miR-223-3p mimics 对细胞的抑制作用。结论：过表达miR-223-3p 抑制HCC细胞增殖和克隆形成能力并促进细胞凋亡，其机制可能与靶向下调RAC1表达有关。     

转录水平RNA干扰肝素酶基因对肝癌细胞侵袭能力的影响

目的 探讨转录水平基因沉默（TGS）技术和转录后水平基因沉默（PTGS）技术对肝素酶（HPA）基因干扰效果及其对肝癌SMCC-7721细胞侵袭能力的影响。方法 从HPA基因启动子区和编码区分别设计并合成TGS和PTGS的小干扰RNA（siRNA）,并转染肝癌细胞SMMC-7721;实时半定量PCR和Western blotting检测TGS和PTGS siRNA转染后48、72和96h HPA的表达,并设空白组作为对照;Transwell小室实验检测干扰后SMMC-7721细胞的侵袭能力。结果 TGS和PTGS两种技术在转染48h后,从mRNA和蛋白水平上均能成功干扰HPA表达;转染后72h,PTGS组HPA恢复表达,而TGS组仍保持沉默;转染后96h,两组HPA均恢复表达。Transwell小室实验表明,TGS和PTGS组HPA基因均能使SMCC-7721的穿膜细胞数减少,TGS组效果更明显。结论 TGS技术沉默肝癌SMMC-7721细胞中HPA基因的能力优于PTGS技术,并使肝癌细胞的侵袭能力显著降低。     

RNA干扰技术靶向hTERT基因治疗肝癌的实验研究

背景与目的：RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA介导的、在转录后mRNA水平关闭相应基因表达的新基因阻断技术,在基因功能研究、基因治疗方面已显示出巨大的前景。目前,利用RNAi已抑制了包括cyclophilin、GAPDH、p53、c-myc在内的多个内源基因的表达。同时在艾滋病、病毒性肝炎等的治疗研究中也已取得一定进展。但对肝癌等恶性肿瘤中高表达的hTERT基因,国内外还未见相关研究报道。本研究利用RNAi技术,在体内外抑制hTERT基因表达,探讨RNAi对肝癌治疗的可行性。方法：设计干扰hTERT基因的小片段RNA,构建重组表达质粒pTzu6 1-shRNA-hTERT并导入肝癌SMMC7721细胞株和裸鼠移植瘤,在体内外诱导RNAi,采用流式细胞检测技术、RT—PCR法、免疫组化等同时检测RNAi治疗组和对照组hTERT基因表达及细胞增殖变化,结果：体外细胞实验显示,重组质粒pTZU6 1—shRNA—hTERT导入肝癌SMMC7721细胞株3～7天后,肝癌细胞生长抑制率达37．5％;细胞周期相分布发生显著变化,S期细胞明显减少,G1／G0期细胞显著增加;hTERT的mRNA表达由99．4％下调到53．1％,hTERT蛋白表达由86．3％下调到46．6％。裸鼠体内实验结果显示,质粒pTZu6 1-shRNA-hTERT注射裸鼠皮下移植瘤7天后,瘤体积明显缩小,hTERT的mRNA表达由99．1％下调到76．2％,hT．ERT蛋白表达由87．2％下调到61．8％。体内、外对照组各指标均无变化。结论：RNAi明显抑制了靶基因hTERT的表达及肝癌细胞增殖,是潜在的肿瘤治疗新方法。     

黄芩素诱导人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡作用的研究

目的:研究12-脂氧合酶(12-lipoxygenase,12-LOX)在人肝癌细胞株SMMC-7721中的表达,以及选择性12-LOX抑制剂黄芩素对人肝癌细胞SMMC-7721生长、凋亡的影响.方法:采用免疫细胞化学染色及RT-PCR检测12-LOX的蛋白质和mRNA在SMMC-7721中的表达.应用MTT、流式细胞术及TUNEL检测细胞生长及凋亡.蛋白印迹法检测分析Caspase-3,Bcl-2,Bax,phospho-ERK1/2,ERK1/2和β-actin蛋白质的表达.结果:免疫细胞化学技术显示12-LOX蛋白表达于SMMC-7721细胞质.RT-PCR检测到黄芩素呈浓度-时间依赖性地抑制12-LOX mRNA表达.采用黄芩素小同浓度或不同时间段干预细胞SMMC-7721,MTT法检测细胞增殖呈剂量、时问依赖性的下降.原位末端转移酶标记技术及流式细胞仪分析证实12-LOX抑制剂诱导细胞凋亡.蛋白印迹法检测显示,黄芩素干预后,Bcl-2蛋白表达明显下降和Bax蛋白轻微上升,细胞凋亡蛋白酶-3活性水平与黄芩素浓度正相关,黄芩素对细胞凋亡相关蛋白的影响被12 (S)-HETE逆转,12(5)-HETE可能激活ERK1/2磷酸化.结论:人肝癌细胞株SMMC-7721存在12-LOX的表达,12-LOX抑制剂黄芩素可抑制细胞生长和诱导细胞凋亡.     

人剪切修复基因XPD对肝癌细胞生长的抑制作用

目的探讨野生型人剪切修复基因着色性干皮病基因D(xeroderma pigmentosum D,XPD)对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响,并探讨其机制。方法用脂质体转染法瞬时转染SMMC-7721细胞,转染重组质粒XPD-N2和空载质粒N2,并用未转染的与XPD-N2、N2具有相同遗传背景和代数的SMMC-721细胞作为空白对照。荧光显微镜观察绿色荧光蛋白报告基因表达情况,流式细胞仪检测细胞周期,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot法检测细胞中XPD、c-myc、cdc25A、cdK2表达量变化,MTT法观察细胞增殖的活力。结果提取出的重组质粒pEGFP-N2-XPD用酶切鉴定,与Genebank上的相符。在荧光显微镜下,可以在SMMC-7721-pEGFP-N2、SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD细胞中观察到绿色荧光蛋白的表达,质粒的转染效率为30%左右。流式细胞仪结果显示,pEGFP-N2-XPD重组质粒转染入细胞后,肝癌细胞进入S期发生阻滞,停滞在G1期。RT-PCR、Western blot检测发现SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD细胞与SMMC-7721-pEGFP-N2和SMMC-7721两对照组相比,其XPD 表达明显增高（P<0.05）。c-myc、cdc25A、cdK2相对表达量明显减少,差异有统计学意义（P<0.05）。与两对照组相比,SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD细胞增殖率明显减弱（P<0.05）。结论野生型XPD基因可以在转录和翻译水平抑制SMMC-7721细胞内c-myc、cdc25A、cdK2的表达。而且野生型XPD基因通过抑制cdK2的表达作用于S期DNA损伤检控点,从而抑制SMMC-7721细胞增殖。     

siRNA 靶向沉默 KIF20A 基因对人肝癌 SMMC -7721细胞体外增殖和侵袭迁移的影响

目的：研究 KIF20A 对肝癌 SMMC -7721细胞系增殖和侵袭迁移能力的影响。方法：利用 RNA 干扰技术下调肝癌细胞系 SMCC -7721中 KIF20A 的表达。qRT - PCR 和 Western blot 分别检测细胞 KIF20A 在mRNA 和蛋白水平表达中的变化。CCK -8实验检测增殖能力的改变。Transwell 实验检测迁移、侵袭能力的改变。结果：qRT - PCR 和 Western blot 结果显示 KIF20A - siRNA 能够成功下调 KIF20A 的表达,CCK -8和Transwell 实验分别证实肝癌 SMMC -7721细胞增殖和侵袭迁移能力下降。结论：抑制 KIF20A 的表达能够降低肝癌细胞的增殖和侵袭迁移能力。     

Mig-6基因表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究Mig-6对肝癌细胞增殖和凋亡的影响,以探讨Mig-6在肝癌中的作用机制。方法:采用Mig-6过表达质粒和siRNA转染肝癌细胞,使用Real-time PCR和Western Blot法检测转染后的过表达或沉默效果;CCK-8实验检测细胞增殖水平的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡百分比的变化;蛋白免疫印迹检测相关蛋白的表达变化。结果:转染Mig-6能抑制肝癌细胞的增殖,促进肝癌细胞的凋亡;干扰Mig-6能促进肝癌细胞的增殖,抑制肝癌细胞的凋亡。上调Mig-6能增加肝癌细胞Caspase-3 的活性,抑制P-ERK的磷酸化;干扰下调Mig-6能抑制肝癌细胞Caspase-3 的活性,增加P-ERK的磷酸化。结论:在肝癌细胞中,Mig-6表现出抑制细胞增殖及促进细胞凋亡的作用,该作用可能与Mig-6能增加Caspase-3 的活性,同时抑制P-ERK的表达有关。     

肝癌组织中EGFL9基因的表达及其对Huh-7肝癌细胞系增殖、侵袭和迁移的影响

目的:研究表皮生长因子样结构域9（epiderma growth factor-like domain 9,EGFL9）基因在肝癌组织及细胞系中的表达水平及其对Huh-7肝癌细胞系增殖、侵袭和迁移的影响。方法:采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,RT-qPCR）方法检测EGFL9基因在20例肝癌及对应的癌旁肝组织标本中的表达水平。下载癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库内肝癌基因表达数据,对EGFL9在肝癌中的表达进行分析。RT-qPCR检测EGFL9基因在Huh-7、SMMC-7721及HepG2三种常见的肝癌细胞系和HL-7702正常肝脏细胞系中的表达水平。采用慢病毒介导的siRNA及基因转导技术分别构建EGFL9基因敲减及过表达的Huh-7肝癌细胞,以噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法、Transwell侵袭实验和迁移实验观察EGFL9基因敲减及过表达对Huh-7肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。结果:RT-qPCR结果显示,EGFL9基因在20例肝癌组织中的表达量高于对应的癌旁组织。TCGA数据库分析结果也显示,EGFL9在肝癌组织中的平均表达量明显高于癌旁组织。EGFL9在3株肝癌细胞系中的表达水平均高于正常肝脏细胞系。EGFL9基因敲减的Huh-7肝癌细胞的增殖速度明显慢于对照Huh-7肝癌细胞,其侵袭、迁移能力也明显被抑制;EGFL9基因过表达的Huh-7肝癌细胞实验结果则与之相反。结论:EGFL9在肝癌组织和细胞中的表达水平明显上调,且可促进肝癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力,提示EGFL9可能是一个潜在的肝癌治疗靶点。