N-乙酰半胱氨酸对矽尘诱导肺泡巨噬细胞自噬影响

目的 探讨抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383在染尘不同时间的自噬活动影响。方法 常规培养NR8383细胞,染尘3、6、12、20、24 h,并给予NAC,分别收集细胞上清液,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-βⅠ（TGF-βⅠ）表达水平,自噬水平检测采用蛋白免疫印迹法和细胞免疫荧光法。结果 体外巨噬细胞染尘模型最佳时间为20 h;NAC+矽尘组NR8383细胞TNF-α表达[（116.82±8.98）pg/mL]低于矽尘组[（1823.58±764.85）pg/mL]（P<0.05）;NAC+矽尘组NR8383细胞TGF-βⅠ表达[（8.27±3.62）pg/mL]与矽尘组[（14.28±5.71）pg/mL]比较差异无统计学意义（P>0.05）;NAC+矽尘组与矽尘组NR8383细胞LC3蛋白表达[分别为（3.52±0.57）、（3.84±0.53）pg/mL]高于对照组[（2.24±0.56）pg/mL];免疫荧光结果显示,矽尘组NR8383细胞在20 h荧光信号强于对照组;NAC+矽尘组NR8383细胞荧光强度与矽尘组无明显差异。结论 矽尘刺激使NR8383细胞自噬表达增强;NAC可降低细胞上清液中TNF-α分泌水平,NAC可能参与染尘肺泡巨噬细胞的炎症反应过程。     

N-乙酰半胱氨酸对甲苯二异氰酸酯诱导人支气管上皮细胞自噬激活作用的影响

目的 探讨N-乙酰半胱氨酸（NAC）对于甲苯二异氰酸酯（TDI）诱导人支气管上皮细胞（HBECs）自噬激活的影响。方法 （1）制备TDI-人血清白蛋白（HSA）偶联物，分别采用Gutmann法和BCA蛋白定量法测定偶联物中TDI和HSA的水平。（2）以不同浓度TDI-HSA（0、40.00、80.00和120.00 mg/L）处理HBECs 12 h，采用活细胞成像技术检测细胞中活性氧（ROS）水平，酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清液中IL-4和IL-6的水平，蛋白质印迹法（Western blot）检测自噬相关蛋白腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、磷酸化AMPK（p-AMPK）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、磷酸化mTOR（p-mTOR）、酵母自噬相关基因6（Beclin1）、微管相关蛋白1A/1B-轻链3（LC3）和泛素结合蛋白p62的表达水平。（3）采用NAC（5 mmol/L）预处理HBECs 4 h后，再用TDI-HSA（120.00 mg/L）染毒12 h，检测细胞中ROS及IL-4、IL-6的水平，测定自噬相关蛋白AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR、Beclin1、LC3、p62的表达水平。结果 （1）合成的TDI-HSA偶联物中TDI和HSA质量浓度分别为21.90 mg/L、1 955.00 mg/L，摩尔比为4.41。（2）随着TDI-HSA染毒剂量的增加，HBECs细胞中ROS和IL-4、IL-6水平明显增加，差异具有统计学意义（P<0.05）。TDI-HSA中（80.00 mg/L）、高（120.00 mg/L）剂量染毒组自噬相关蛋白p-AMPK/AMPK比值、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin1表达明显增加，p-mTOR/mTOR比值和p62表达明显减少，差异均有统计学意义（P<0.05）。（3）与TDI-HSA高剂量染毒组相比，TDI-HSA+NAC组HBECs细胞中ROS和IL-4、IL-6水平明显降低，差异具有统计学意义（P<0.05）；自噬相关蛋白p-AMPK/AMPK比值、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin1表达明显降低，p-mTOR/mTOR比值和p62表达明显升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 通过抑制TDI-HSA诱导的HBECs中ROS水平，可显著抑制HBECs自噬激活，并降低细胞上清液中IL-4、IL-6的水平。     

N-乙酰半胱氨酸激活蛋白激酶B通路减轻镉诱导的睾丸间质细胞凋亡

目的 探究N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine, NAC)基于蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称AKT)通路对镉诱导小鼠睾丸间质细胞凋亡的调控机制。方法 将小鼠睾丸间质细胞(TM3)分为对照组、镉染毒组(Cd, 5、10、20、30、40和50μmol/L)、NAC组(NAC,500μmol/L)及NAC+镉染毒组(500μmol/L NAC+20μmol/L Cd),其中NAC+Cd染毒组先用NAC预处理30 min,再联合镉染毒24 h。CCK8测定细胞存活率,Hoechst染色检测细胞形态,流式细胞仪分析细胞凋亡率,同时测定丙二醛(malondialdehyde, MDA)、谷胱甘肽(glutathione, GSH)含量,Western blot免疫印迹法分别检测AKT蛋白、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein, Bax)的表达水平。结果 镉可抑制TM3细胞增殖且存在剂量-效应关系。细胞形态观察发现,随着镉染毒浓度的增加,细胞缩...     

N-乙酰半胱氨酸在有或无caspase抑制条件下对Cr(Ⅵ)诱导的肝细胞凋亡的拮抗作用

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)在有或无caspase抑制条件下,对Cr(Ⅵ)诱导的肝细胞线粒体依赖性凋亡的拮抗作用。方法将L-02肝细胞随机分成对照组、Cr(Ⅵ)处理组、Z-VAD-fmk预处理组[Z-VAD-fmk预处理细胞1h,加入Cr(Ⅵ)]、NAC预处理组[NAC预处理细胞1h,加入Cr(Ⅵ)]、联合预处理组[Z-VAD-fmk和NAC分别预处理细胞1h,加入Cr(Ⅵ)],Cr(Ⅵ)终浓度为20μmol/L,处理6h。流式细胞仪检测细胞凋亡率,荧光分光光度法检测线粒体膜电位(△ψm)和通透性转运孔(PTP)的改变,单细胞凝胶电泳法观察细胞凋亡形态及细胞DNA损伤情况。结果终浓度20μmol/L的Cr(Ⅵ),处理6h,可诱导细胞凋亡,在有或无caspase抑制条件下,NAC均明显减轻了Cr(Ⅵ)引起的肝细胞线粒体膜电位下降及PTP孔开放(P<0.05),使细胞DNA损伤程度减轻(P<0.05),从而对细胞凋亡有明显拮抗作用(P<0.05),但与非caspase抑制条件下相比,caspase抑制条件下NAC的保护效果有明显降低(P<0.05)。结论在有或无caspase抑制条件下,NAC对Cr(Ⅵ)诱导的L-02肝细胞凋亡具有重要拮抗作用,caspase在该凋亡过程中不起决定性作用。     

N-乙酰半胱氨酸对镉致人胚肾细胞凋亡拮抗作用

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl cysteine,NAC)对氯化镉所致人胚肾(human embryonic kidney,HEK)细胞凋亡的拮抗作用。方法应用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术(flowcytometry,FCM)检测不同CdCl₂浓度(0,10,20,40,80μmol/L)处理以及不同浓度NAC(1,2,4,8 mmol/L)和镉联合作用对HEK细胞相对存活率和凋亡率的影响。结果单纯染镉时,与对照组(0μmol/L)比较,20,40,80μmol/L CdCl₂3组HEK细胞相对存活率明显降低(P<0.01),HEK细胞凋亡率明显升高(P<0.01);NAC与镉联合作用时,与40μmol/L CdCl₂比较,40μmol/L CdCl₂+4,8 mmol/L NAC2组HEK细胞相对存活率明显提高,40μmol/L CdCl₂+2,4,8 mmol/L NAC3组HEK细胞凋亡率明显降低。结论一定浓度氯化镉可引起HEK细胞凋亡增加,NAC可以拮氯化镉引起的细胞凋亡。     

同型半胱氨酸体内外诱导鼠胚胎心肌细胞凋亡的研究

目的 探讨同型半胱氨酸(HCY)是否能诱导啮齿类动物胚胎心肌细胞凋亡及剂量与凋亡的关系。 方法 应用大鼠胚胎心肌细胞体外培养及小鼠体内致畸实验,加入4-20 mmol/L的HCY,经荧光显微镜及透射电镜观察细胞凋亡情况。 结果 体外心肌细胞培养中,心肌细胞凋亡的比例随着HCY剂量的增加而增加。培养12 h出现凋亡,14 h达到高峰。小鼠体内致畸实验,给予孕鼠HCY 0.74 mmol/kg,胚胎心肌和脑组织中凋亡细胞明显可见。 结论HCY可以诱导胚胎心肌细胞凋亡,可能是HCY导致胚胎发育异常的机制之一。     

叶酸抑制同型半胱氨酸诱导大鼠原代神经元凋亡的作用

目的 观察叶酸对同型半胱氨酸诱导的大鼠原代神经元凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法 分离24 h内新生Sprague-Dawley(SD)大鼠大脑海马组织,于37℃、5%CO2条件下进行原代神经元纯化培养。将培养4 d纯化后的原代神经元根据叶酸浓度以及是否添加100μmol/L同型半胱氨酸（Homocysteine, Hcy）分为8组：（1）叶酸缺乏组（0μmol/L）,(2)叶酸正常组（10μmol/L）,(3)叶酸低添加组（20μmol/L）,(4)叶酸高添加组（40μmol/L）,(5)叶酸缺乏+Hcy组,（6）叶酸正常+Hcy组,（7）叶酸低添加+Hcy组,（8）叶酸高添加+Hcy组,干预培养8 d后,检测各组原代神经元的活力、凋亡以及端粒损伤情况。每组设置3个复孔,至少进行3次独立重复实验。结果 在未添加Hcy的4组中,与叶酸缺乏组相比,叶酸正常组及两添加组细胞活力升高,凋亡率降低,端粒损伤水平降低（P<0.05）。与未添加Hcy的4组比较,添加Hcy的4组细胞活力降低,凋亡增加,端粒损伤水平显著升高（P<0.05）。与叶酸正常+Hcy组比较,叶酸缺乏+Hcy组...     

N-乙酰半胱氨酸对氟诱导睾丸支持细胞内质网应激的作用

目的探讨N-乙酰半胱氨酸对氟化钠(NaF)介导睾丸支持细胞内质网应激的抑制作用。方法将原代培养大鼠睾丸支持细胞进行分组:0μg/ml NaF(对照组)、6μg/ml NaF组、12μg/ml NaF组、24μg/ml NaF组、N-乙酰半胱氨酸(2 mmol/L NAC)组、6μg/ml NaF+2 mmol/L NAC组、12μg/ml NaF+2 mmol/L NAC组和24μg/ml NaF+2 mmol/L NAC组,各组以相应药物孵育24 h。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定各组细胞生长活性;荧光探针法分析各组细胞内活性氧(ROS)水平;免疫印迹法(Western blot)检测内质网应激相关蛋白GRP78、PERK和CHOP的表达。结果 2 mmol/L NAC有效提高了细胞存活率(P0.01);NAC明显抑制了NaF介导的细胞内ROS水平的升高,与NaF组相比,各NAC组的ROS水平均显著降低(P0.01);NaF诱导内质网应激相关蛋白GRP78、PERK和CHOP表达明显上调,经2mmol/L NAC处理后,其有效拮抗了GRP78、PERK和CHOP蛋白表达的上调(P0.01)。结论 ROS激活了内质网应激相关信号通路,而NAC通过减少ROS的产生,拮抗了NaF介导的睾丸支持细胞内质网应激。     

自噬在氯化镉诱导小鼠初级精母细胞凋亡中的作用

目的 探究自噬在氯化镉(cadmium chloride, CdCl₂)诱导小鼠初级精母细胞(GC-2 spd)凋亡中的作用及其潜在作用机制。方法 以不同浓度CdCl₂(0、5和10μmol/L)染毒GC-2 spd细胞24 h。Hoechst33342染色法和单丹磺酰戊二胺法分别检测凋亡小体和自噬体;TUNEL荧光染色检测细胞凋亡情况;在不含/含CdCl₂(10μmol/L)的细胞培养液中分别加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(60μmol/L)、凋亡抑制剂胱天蛋白酶家族抑制剂(50 nmol/L)、自噬激动剂雷帕霉素(50 nmol/L)和溶酶体抑制剂氯喹(10μmol/L)处理GC-2 spd细胞24 h, Western blot检测细胞内自噬相关蛋白LC3、P62以及促凋亡蛋白cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9的表达水平。结果 CdCl₂染毒细胞24 h后,自噬体聚集且凋亡细胞增多。Western blot结果显示,5和10μmol/L CdCl_2<...     

砷对HaCaT毒作用及N-乙酰半胱氨酸拮抗作用

目的　研究亚砷酸钠(sodiumarsenite ,NaAsO2 )对人皮肤角质形成细胞系(HaCaT)的毒性作用及N 乙酰半胱氨酸(N acetylcysteine ,NAC)对砷毒性的拮抗作用。方法　NaAsO2 单独作用于HaCaT细胞2 4h或用NAC预处理后,加入NaAsO2 继续作用2 4h ,用AlamarBlue还原法检测细胞活力。结果　<1μmol/L的NaAsO2 单独作用于细胞2 4h后,AlamarBlue还原率增高(P <0 . 0 5 ) ,10 μmol/L以上的NaAsO2 则使AlamarBlue还原率显著下降(P <0 . 0 1) ;用NAC预处理2 4h后再加入NaAsO2 ,2 0 μmol/L组AlamarBlue还原率与NaAsO2 单独作用相比显著增加(P<0 .0 5 )。结论　低浓度NaAsO2 刺激细胞增殖,高浓度具有细胞毒性;NAC可减轻砷的细胞毒性,细胞内的还原型谷胱甘肽(GSH)对砷的细胞毒性起保护作用。     

自噬基因Beclin1过表达诱导人卵巢癌细胞SKOV3自噬和凋亡的研究

目的:探讨自噬基因Beclin 1在人卵巢癌SKOV3细胞中过表达对其体外生长活性的影响。方法:构建自噬基因Beclin 1的真核表达载体pcDNA3.1/Beclin1,将其稳定转染SKOV3细胞,实现Beclin 1在SKOV3中的过表达;用MTT法分析Beclin1过表达对SKOV3增殖的影响,用流式细胞仪检测凋亡和自噬情况,电镜和荧光显微镜下观察自噬现象。结果:pcD-NA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后Beclin 1在mRNA和蛋白水平均高于空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组。Beclin 1在SKOV3中的稳定过表达后G1期细胞明显增多,S期细胞比例明显减少,细胞增殖受到抑制,凋亡率为(21.26±3.89)%,高于空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后MDC标记的自噬囊泡平均荧光强度高于pcDNA3.1转染组和未转染组。pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后在电镜下可见大量自噬囊泡形成。在荧光显微镜下见pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞中MDC标记的自噬囊泡明显增加。结论:自噬基因Beclin1过表达可诱导人卵巢癌细胞SKOV3自噬和凋亡,针对自噬基因Beclin1的卵巢癌基因治疗可能具有可行性。     

活性氧、线粒体膜电位在亚砷酸钠诱导凋亡中作用

有研究表明,砷可以引起机体内砷致机体脂质过氧化的产生及抗氧化能力降低,从而造成机体的氧化损伤^(1-2)。而肝脏是砷主要累及的靶组织⁽³⁾,但砷对肝细胞的作用特点研究较少。研究提示,活性氧(ROS)和线粒体膜电位(ΔΨm)在细胞凋亡中发挥着重要作用^(4-5)。为了进一步探讨砷对肝细胞的凋亡作用机制,本研究采用流式细胞仪检测细胞凋亡率和胞浆中ROS、ΔΨm水平,并探讨ROS和ΔΨm在NaAsO₂诱导L-02肝细胞凋亡过程中的作用。     

N-乙酰半胱氨酸和caspase-3抑制剂对镉诱导293细胞凋亡的拮抗作用

目的研究N-乙酰半胱氨酸(-Nacetyl cysteine,NAC)和caspase-3抑制剂(Z-DEVD-fmk)对镉致293细胞凋亡的影响,探讨氧化损伤和caspase途径在镉致细胞凋亡中的作用。方法体外培养的转化人胚肾293细胞分别以0、20、40、80、120、200μmol/L的氯化镉(CdCl2)处理0、3、6、12、24 h,NAC和Z-DEVD-fmk预处理组分别在镉处理前以2.5、5.0、10.0 mmol/L的NAC和0.1、1.0、10μmol/L的Z-DEVD-fmk预处理24 h和1 h,然后再以40μmol/LCdCl2处理24 h,MTT法测细胞相对存活率,流式细胞术Annexin-V-PI双染法检测细胞凋亡百分率。结果随着镉处理浓度的增加,CdCl2对细胞活力的抑制作用增强,细胞的相对存活率明显降低,与0μmol/L镉处理组比较,40、80、120、200μmol/L镉处理组293细胞的凋亡百分率显著升高(P<0.01);200μmol/L镉处理组与120μmol/L CdCl2组比较293细胞的凋亡百分率显著下降(P<0.01)。与40μmol/L镉处理组比较,5.0 mmol/L和10 mmol/L NAC预处理组细胞凋亡百分率显著降低,0.1、1.0、10μmol/L Z-DEVD-fmk预处理可使镉致293细胞凋亡百分率显著降低。结论NAC和Z-DEMD-fmk对镉诱导293细胞凋亡有明显的抑制作用,镉诱导细胞凋亡与氧化损伤和caspase途径密切相关。     

N-乙酰半胱氨酸对稳定期慢性阻塞性肺疾病的治疗作用

目的：探讨N-乙酰半胱氨酸（NAC）对稳定期慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者的治疗效果。方法：选取本院2012年8月-2013年2月确诊为COPD稳定期的60例患者,按照随机数字表法将其分为观察组和对照组各30例。对照组给予常规治疗,观察组在常规治疗基础上联合NAC治疗1年,观察比较两组FEV1%pred、SGRQ评分、急性加重次数及住院次数的差异。结果：两组治疗后与治疗前比较,FEV1%pred明显升高（P〈0.05）,SGRQ评分、急性加重次数、住院次数均明显降低（P〈0.05）;且两组治疗后比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：NAC可以显著改善稳定期COPD患者肺功能、生活质量,并降低急性加重次数、住院次数,值得临床推广。     

S-腺苷蛋氨酸和叶酸抑制同型半胱氨酸诱导的海马神经细胞凋亡

目的研究S-腺苷蛋氨酸和叶酸抑制同型半胱氨酸诱导的海马神经细胞凋亡作用及其相关机制。方法用同型半胱氨酸、S-腺苷蛋氨酸和叶酸处理体外培养的海马神经细胞,观察神经细胞的凋亡情况,以及凋亡相关蛋白的表达变化。结果用250μmol/L同型半胱氨酸作用4h可使神经细胞凋亡率显著升高,并呈时间依赖性。甲基供体S-腺苷蛋氨酸和叶酸可显著抑制同型半胱氨酸引起的神经细胞凋亡。同型半胱氨酸可显著促进凋亡相关蛋白P53、Bax的表达,抑制Bcl-2的表达。S-腺苷蛋氨酸和叶酸可抑制同型半胱氨酸引起的凋亡相关蛋白表达的改变。结论S-腺苷蛋氨酸和叶酸可显著抑制同型半胱氨酸引起的神经细胞凋亡,凋亡相关蛋白表达的变化可能是S-腺苷蛋氨酸和叶酸作用的分子机制之一。     

大剂量N-乙酰半胱氨酸对染尘大鼠模型的抗氧化作用

目的观察大剂量N-乙酰半胱氨酸(NAC)在矽肺形成过程中的抗氧化作用。方法 选取Wistar健康大鼠96只,随机分为模型组、预防治疗组、对照组3组,每组32只。模型组和预防治疗组均以气管滴注二氧化硅混悬液建立染尘大鼠模型,预防治疗组以大剂量N-乙酰半胱氨酸灌胃进行干预治疗,对照组给予等量的生理盐水。分别在染尘后的第3、7、14、28天分批处死大鼠取材。切取肺组织样本作病理切片,分别行苏木精-伊红(HE)染色,Masson染色,观察肺组织病理变化,并对病理切片(14d、28d)肺纤维化进行半定量评分。测定肺组织匀浆羟脯氨酸(Hyp)含量(样本碱水解法)和微量丙二醛(MDA)的含量(TBA法)。结果与模型组比较,大剂量NAC预防治疗组病理显示肺泡炎症和纤维化程度减轻,肺纤维化得分明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。模型组丙二醛的含量各时间点与对照组相比,均明显增高,差异有统计学意义(P<0.01),高峰位于第7天,预防治疗组丙二醛的含量均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。肺匀浆羟脯氨酸的含量比较,模型组在第7天明显升高,高峰位于第28天,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01),预防治疗组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 早期应用大剂量NAC可增强肺组织的抗氧化作用,减轻二氧化硅对大鼠肺组织的损伤,部分抑制肺间质纤维化。     

大蒜素抑制H2O2诱导的心肌细胞凋亡的实验研究

目的 探究大蒜素对过氧化氢（Hydrogen Peroxide, H2O2）诱导的H9c2细胞凋亡的影响。方法 H2O2和不同浓度大蒜素分别作用于H9c2细胞,Western blot检测对Caspase-3表达的影响,流式细胞术检测对细胞凋亡的影响,RT-PCR和Western blot检测对血红素氧合酶1(Heme Oxygenase-1,HO-1)表达的影响。分别通过HO-1抑制剂ZnPP9(Zinc protoporphyrin IX)和PI3K/AKT抑制剂LY294002,MTT检测对细胞增殖活性的影响,Western blot检测对p-Akt、 核转录因子Nrf2(nuclear factor-erythroid 2 related factor 2)和HO-1等表达的影响。结果 对照组和100 μM H2O2+大蒜素(0、5、10、20、40 mg/L)组细胞凋亡率分别为(4.83±0.66)%、(68.38±6.97)%、(61.19±6.01)%、(47.32±5.21)%、(22.07±3.73)%和(20.05±2.93)%、与Caspase-3蛋白表达趋势一致,并具有浓度依赖性(P＜0.05)。大蒜素作用下,HO-1 mRNA和蛋白表达亦呈浓度依赖性增加(P＜0.05)。H2O2组细胞相对增殖活性降低至(61.38±1.76)%(P＜0.05),大蒜素处理使其上调至(81.64±3.79)%(P＜0.05),而ZnPP9可阻断该上调,为(69.82±2.22)%(P＜0.05)。大蒜素明显增加p-Akt、Nrf2和HO-1等表达,可被LY294002阻断(P＜0.05)。结论 大蒜素可通过Akt/Nrf2途径上调HO-1表达并抑制H2O2诱导的H9c2细胞凋亡。     

内质网应激在维生素E琥珀酸酯诱导的胃癌细胞凋亡和自噬中作用的研究

目的 明确内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)在维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate, VES)激活人胃癌MKN28细胞自噬和凋亡中发挥的作用。方法 体外培养人胃癌MKN28细胞,不同剂量(5,10,15,20μg/ml)VES处理细胞24小时后,Western blot检测ERS标志物GRP78,自噬标志物LC3、Beclin-1,凋亡相关蛋白Caspase-3和ERS凋亡通路关键信号分子CHOP的表达情况,流式细胞仪检测不同剂量组凋亡率。选择ERS抑制剂4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid, 4-PBA),ERS激活剂衣霉素(Tunicamycin, TM)自噬激活剂雷帕霉素(Rapamycin, RAPA),设置对照组、4-PBA组(3 mmol/L)、TM组(5μg/ml)、VES组(20μg/ml)、VES+4-PBA组、RAPA组(100 nmol/L),检测GRP78、LC3、Beclin-1、Caspase-3和CHOP蛋白的表达情况,同时检测不同组细胞凋亡率或在电子显微镜下观察自噬体形态...     

N-乙酰半胱氨酸对乌拉坦诱发肺瘤抑制作用的研究

Ｎ乙酰半胱氨酸（ＮＡＣ）作为一种巯基化合物因其具有明显的抗氧激活性而成为化学预防研究的对象。本实验室在Ａｍｅｓ试验中证实了ＮＡＣ的抗诱变活性［１］,美国国立癌症研究所化学预防部已将ＮＡＣ进入Ｉ期临床试验［２］。近年来肺癌趋于高发,为了探讨ＮＡＣ对肺肿瘤的化学预防作用,我们选择了乌拉坦作为诱发小鼠肺瘤模型的致瘤剂,观察ＮＡＣ的化学预防作用。一、材料和方法乌拉坦（北京化工厂出品,ＣＰ）、ＮＡＣ（镇江化学工业厂研究所提供,中国药典标准。昆明种小鼠由天津医学实验动物中心提供,体重１８～２０ｇ,共１２０…     

mTOR信号通路在细胞自噬和凋亡调节中的作用

自噬及凋亡广泛存在于细胞中,是细胞内生物大分子的降解再循环过程,在细胞生长代谢中发挥着重要作用.两者相互作用,共同推动和影响细胞的程序性死亡,维持机体自身稳态及外界环境刺激下的应激反应.mTOR信号通路是一条经典的调控自噬凋亡信号通路,在细胞代谢中发挥重要作用.结合mTOR信号通路探讨自噬及凋亡在细胞代谢及生物体生长发...