过氧化氢刺激视网膜神经细胞凋亡的MAPK/AP1信号通路参与机制

目的本文对过氧化氢刺激视网膜神经细胞凋亡的MAPK/AP1信号通路参与机制进行研究,为相关治疗提供参考。方法分离培养大鼠视网膜神经细胞至生长状态良好:细胞随机分为3组:对照组(control,n=9)、过氧化氢处理组(Hyd Per,n=9)、MAPK信号通路抑制剂PD98059组(PD98059,n=9)。各组细胞给予相应处理后分析各组视网膜神经细胞中细胞凋亡蛋白及MAPK/AP1信号通路蛋白的表达。结果与对照组相比,过氧化氢刺激后视网膜神经细胞Bcl2的表达明显降低(P0.01),而Bax、Caspase6、Ras、Raf、MEK、ERK1/2及c-fos及c-jun的表达明显增强(P0.01),DHE染色后细胞的荧光强度明显增强,且PD98059处理后上述异常明显恢复(P0.01)。结论过氧化氢刺激视网膜神经细胞发生明显的细胞凋亡,且此过程与MAPK/AP1信号通路的过度活化有关。     

IGFBP-rP1通过调控MEK/ERK信号通路对抑制子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖的影响及机制探讨

目的:探讨外源性胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1 (IGFBP-rP1)联合MEK/ERK信号通路抑制剂PD98059对子宫内膜癌细胞HEC-1A增殖的影响及其机制.方法:体外培养人子宫内膜癌细胞HEC-1A细胞,向培养基中添加不同浓度人重组胰岛素生长因子结合蛋白相关蛋白1 (rhIGFBP-rP1)和PD98059,上调IGFBP-rP1的水平,采用Cell CountingKit-8(CCK-8)法检测不同浓度rhIGFBP-P1及rhIGFBP-P1联合MEK/ERK信号通路抑制剂PD98059对HEC-1A细胞增殖的影响,并用蛋白免疫印迹(western blot)法分析不同浓度rhIGFBP-rP1作用下子宫内膜癌细胞HEC-1A细胞总的ERK1/2和磷酸化ERK1/2水平变化.结果:添加rhIGFBP-rP1子宫内膜癌细胞HEC-1A增殖受到明显抑制,其抑制作用呈浓度和时间依赖性(P＜0.05);4ag/ml rIGFBP-rP1对HEC-1A增殖抑制作用随着时间延长越来越明显,12、24、48、72 h增殖抑制率比较差异有统计学意义(P＜0.05).而MEK/ERK通路抑制剂PD98059能增强其抑制作用,rIGFBP-rP1(4μg/ml)与PD98059(25 μmol/L)联用,以上各时间点细胞增殖抑制率分别增至(10.04±2.71)％、(17.02±1.58)％、(28.59±2.04)％、(35.29±1.12)％,各组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);Western blot示添加rhIGFBP-rP1,磷酸化的ERK1/2水平显著降低,磷酸化的ERK1/2水平与rhIGFBP-rP1呈剂量依赖性.结论:IGFBP-rP1可以通过MEK/ERK信号通路抑制细胞增殖.     

大鼠胃黏膜细胞EGFR通过ERK-1/2信号传导通路激活AP-1

目的 探讨大鼠胃黏膜细胞EGFR活化AP—1的信号传导通路。方法 用EGFR配体TGF—α刺激分离的大鼠胃黏膜细胞。Western blot和EMSA方法检测ERK—1／2信号传导通路的活化程度。结果 1nmol／L TGF—α刺激胃黏膜细胞30min不仅显著诱导AP—1的活性，而且明显激活MEK和ERK—1／2；EGFR特异性抑制剂PD153035或MEK特异性抑制剂PD98059能完全阻断TGF—α诱导的胃黏膜细胞AP—1活化。结论 大鼠胃黏膜细胞EGFR通过ERK—1／2信号传导通路激活AP—1。     

PI3K/Akt/mTOR和MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞生长中协同作用及机制

目的初步探讨PI3K/Akt/m TOR和MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞生长中的协同作用。方法采用不同浓度的PI3K/Akt/m TOR和MAPK/ERK信号通路抑制剂rapamycin与PD98059分别单独及联合作用于胃癌细胞SGC-7901。采用CCK8法检测SGC-7901细胞增殖情况;实时荧光定量PCR检测关键基因m RNA的表达;蛋白印迹法(WB)检测相关蛋白的表达;流式细胞术检测细胞周期和凋亡的变化。结果 Rapamycin(12.5、25、50、100、150、200 nmol/L)与PD98059(25、50、100、200、300、400μmol/L)单独作用可抑制SGC-7901细胞增殖活性,联合作用也可抑制其活性,且联合组的抑制作用强于单独作用(P0.05)。与rapamycin、PD98059单独作用相比,联合组对AKT、m TOR、MEK、ERK基因m RNA表达和p-AKT、p-m TOR、p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白表达的抑制作用明显增强(P0.05)。联合组阻滞于G0/G1期的细胞比例显著增多,且具有更强的促凋亡作用。结论 PI3K/Akt/m TOR和MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞生长中具有一定的协同调控作用。     

MAPKs信号通路在光气吸入性肺损伤中的表达及作用

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPKs)的亚通路信号蛋白-细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK1/2)、P38和c-氨基末端蛋白激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)在大鼠光气吸入肺损伤组织中的表达及各通路在光气吸入性肺损伤中的作用.方法 选取30只雄性Wistar大鼠随机分成空气对照组、光气吸入组、PD98059(ERK1/2特异性阻断剂)、SB203580(P38特异性阻断剂)和SP600125(JNK特异性阻断剂)干预组,每组6只,应用定向流动光气吸入装置,复制大鼠光气(8.33 L/mg)吸入性肺损伤的模型,空气对照组吸入空气,3个干预组均在光气(8.33 L/mg)吸入前给予PD98059、SB203580、SP600125.分别采用免疫组化及蛋白质印迹( Western blot)法检测肺组织MAPKs(ERK1/2、P38、JNK)蛋白及磷酸化蛋白p-MAPKs (p-ERK 1/2、p-P38、p-JNK)的定性定量表达.观察肺组织病理学改变、计数支气管灌洗液(BALF)中中性粒细胞数、测定肺湿干比.结果 空气对照组仅肺泡上皮细胞及气道上皮细胞见少量p-ERK1/2、p-P38、p-JNK阳性表达;光气吸入组p-ERK1/2、p-P38、p-JNK阳性细胞数明显增多,广泛分布于肺内细胞:肺泡上皮细胞、气道上皮细胞、胸膜间皮细胞、浸润炎细胞及间质纤维细胞;干预组p-ERK1/2、p-P38、p-JNK阳性细胞数减少.各组ERK、P38、JNK的表达无明显变化;光气吸入组较空气对照组p-P38、p-JNK蛋白表达增强,3个干预组的p-ERK1/2、p-P38、p-JNK的蛋白表达水平均低于光气吸入组,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).与空气对照组[中性粒细胞计数:(2.05±0.75)×104,肺湿干比:(3.64％±0.72％)]比较,光气吸入组肺损伤程度严重,表现出肺损伤的典型病理学特征,且BALF中中性粒细胞数[(10.78±2.16)×104]增多,肺湿干比(7.65％±0.58％)升高,SP600125干预组和SB203580干预组BALF中中性粒细胞数[SP600125组:(7.86±2.12)×104,SB203580组:(8.43±1.51)×104]和肺湿干比[SP600125组:(6.10％±0.97％),SB203580组:(6.09％±1.43％)]降低,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 光气吸入可能激活MAPK信号通路,通过p-MAPKs表达增加在光气吸入后的肺损伤中发挥作用,其中以p-P38、p-JNK活性变化为主.     

槲皮素通过促进Nrf2转位拮抗人肝细胞酒精性氧化损伤

目的探讨槲皮素诱导Ⅰ型血红素氧化酶(HO-1)对肝细胞酒精性氧化损伤的保护效应及相关信号通路。方法乙醇(100 mmol/L)孵育的人原代肝细胞经槲皮素(100μmol/L)处理24h后,测定细胞HO-1活性、Nrf2转位表达及细胞相应的氧化损伤程度;在此基础上,联合应用HO-1及各(MAPK)通路抑制剂,观察上述指标的变化。结果槲皮素处理使HO-1进一步升高,并明显减轻乙醇孵育所导致的细胞GSH耗竭、MDA升高及胞内门冬氨酸转氨酶(AST)与乳酸脱氢酶(LDH)的释放;HO-1诱导剂血红素也具有类似的效应,而HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ及p38与细胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)抑制剂(SB203580与PD98059)则明显抑制了Nrf2的转位活化及槲皮素的保护效应。结论槲皮素通过诱导HO-1保护肝细胞免受酒精性氧化损伤,其信号通路与p38及ERK活化促使Nrf2转位入核启动HO-1表达有关。     

萝卜硫素对大鼠子宫内膜异位组织Nrf2/Keap1/HO-1信号通路影响

目的:探讨萝卜硫素(SFN)对子宫内膜异位症(EMs)大鼠异位组织核因子E_2相关因子2(Nrf2)/Kelch样ECH相关蛋白(Keap1)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路的影响。方法:将造模成功的雌性SD大鼠随机分为模型组、阳性对照组(0.5 mg/kg,孕三烯酮胶囊)及低(5 mg/kg)、中(10 mg/kg)、高剂量(15 mg/kg)SFN组,每组8只;此外,设立空白对照(假手术)组。各组均给药8周后处死大鼠,计算子宫内膜异位病灶体积和粘连评分。实时荧光定量PCR技术检测Nrf2和HO-1的mRNA表达,免疫印迹法检测Nrf2、Keap1和HO-1蛋白表达。结果:与模型组相比,3种剂量SFN均能有效抑制EMs大鼠病灶体积和粘连评分,并呈剂量依赖趋势(P0.05)。此外,与空白对照组相比,模型组大鼠内膜组织中Nrf2、HO-1 mRNA表达水平以及Nrf2、Keap1、HO-1蛋白表达减少(P0.05)。给予SFN后,Nrf2、HO-1 mRNA表达水平以及Nrf2、Keap1、HO-1蛋白表达均升高,并呈浓度依赖性(P0.05)。结论:Nrf2/Keap1/HO-1信号通路参与EMs发生;SFN可能通过激活Nrf2/Keap1/HO-1信号通路,上调HO-1等抗氧化蛋白的表达而起到治疗EMs的效果。     

ERK及AP-1对二氧化硅上调人肺上皮细胞纤溶酶原激活物抑制因子-1表达的作用

目的 探讨细胞外信号调控激酶(ERK)/激活蛋白(AP-1)信号通路在二氧化硅诱导人肺上皮细胞(A549)纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)表达中的作用.方法 以人肺上皮细胞A549为研究对象,200 μg/ml二氧化硅刺激0-24h.干预实验采用姜黄素预处理以及c-Jun显性负性突变体(TAM67)瞬时转染阻断AP-1活性;PD98059预处理阻断ERK活性.以Western印迹检测ERK激酶活力、PAI-1蛋白表达,EMSA检测AP-I DNA结合活性.结果 (1)SiO2作用A549细胞4、8、16 h,AP-1DNA结合活性分别为对照的1.3、1.3、2.1倍,差异有统计学意义(P＜0.05);10、25、50μmol/L浓度姜黄素对二氧化硅诱导的PAI.1蛋白表达抑制率分别为20%、63%、65%,差异有统计学意义(P＜0.05);TAM-67对二氧化硅诱导的PAI.1蛋白表达的抑制率为59%,与二氧化硅刺激组比,差异有统计学意义(P＜0.05).(2)二氧化硅作用A549细胞诱导ERK激酶活化;PD98059对二氧化硅诱导的PAI-1蛋白表达的抑制率为51%,与二氧化硅刺激组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).(3)PD98059对二氧化硅诱导的AP-1 DNA结合活性的抑制率为73%,与二氧化硅刺激组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ERK/AP-1信号通路参与调控SiO2诱导的人肺上皮细胞PAl-1蛋白表达.     

细胞外信号调节蛋白激酶1/2信号通路对SiO2活化的肺成纤维细胞转化生长因子-β1表达的影响

目的 探讨细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)信号通路对矽尘诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)中转化生长因子(TGF-β1)表达的影响及调控作用.方法 收集矽肺患者支气管肺泡灌洗液中的肺泡巨噬细胞(AM),在体外将AM分别用不含SiO2的DMEM培养液和含SiO2(50 μg/ml)的DMEM 培养液培养作用18 h后,将收集的AM条件培养上清液与HELF共同孵育.通过采用免疫细胞化学法检测应用ERK1/2抑制剂PD98059干预后SiO2活化的矽肺患者AM上清介导的HELF中TGF-β1表达的改变.结果 SiO2处理组HELF中TGF-β1的表达量(0.3227±0.0238)明显高于空白对照组(0.1637±0.0196)及AM对照组(0.2406±0.0225),而PD98059干预组TGF-β1的表达量(0.2711±0.0229)明显低于SiO2处理组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 PD98059对由SiO2刺激的矽肺患者AM条件培养上清介导的HELF中TGF-β1的表达有一定抑制作用,ERK信号途径在一定程度上可能介导SiO2刺激的HELF细胞因子表达.

Abstract：

Objective To investigate the effect and regulation of extracellual signal-regulated kinase (ERK1/2)signaling pathway on the expression of transforming growth factor-β1 (TGF-β1) in human embryonic lung fibroblasts induced by SiO2. Methods Human alveolar macrophages were collected from a silicotic patient by bronchoalveolar lavage and in the presence or absence of SiO2 (50 ug/ml) exposition for 18h, and then the conditioned supernatants were used to incubate HELF. The expressions of TGF-β1 of the HELF acted with the conditioned AM supernatant fluid were detected with the immunocytochemistry method after treatment with PD98059 of inhibitor of ERK. Results The expression of TGF-β1 in HELF of the SiO2 treatment group(OD value is 0.322 7±0.023 8)exceed blank group (OD value is 0.163 7±0.019 6) and AM control group(OD value is 0.240 6±0.022 5) by the immunocytochemistry method. But the expression of TGF-β1 had reduction in some extent in the PD98059 intervention group (OD value is 0.271 l±0.022 9). The values were statistically different (P＜0.05). Conclusion ERK inhibitor PD98059 have inhibition effect on the expression of transforming growth factor-pi and expression of cytokine of human embryonic lung fibroblasts stimulated by SiO2, The study indicate that the proliferation and collagen prodction of HELF activated by SiO2 are mediated by ERK/MAPK signal pathway in some extent. PD98059 may antagonizes silica-induced lung fibrosis by inhibiting the expression of transforming growth factor-β1.     

丝裂原活化蛋白激酶信号途径在苯并[a]芘影响内皮细胞热休克蛋白70基因表达中的作用

目的研究丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)信号途径在苯并[a]芘(BaP)影响内皮细胞热休克蛋白70(HSP70)基因表达中的作用.方法猪主动脉内皮细胞以不同浓度BaP(0、0.1、0.5、1.0、5.0、10.0 μmol/L)染毒24 h,或以PD98059(10μmol/L)或SB203580(20μmol/L)预处理1 h后再加一定剂量的BaP共同孵育24 h.分别以Western-blot法检测各组细胞磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(extracellularsignal regulated protein kinase,ERK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(c-Jun amino-terminal kinase,JNK)、磷酸化p38和HSP70表达水平的改变.结果随BaP浓度的升高,MAPK途径的3种磷酸化激酶表达水平出现不同程度的改变,其中磷酸化ERK1表达改变最明显,呈剂量反应性增加.BaP抑制内皮细胞HSP70表达,在中、高剂量(≥1.0μmol/L)暴露时,HSP70表达明显低于对照组,差异有显著性(P＜0.05);尽管ERK途径抑制剂PD98059可部分减弱BaP对HSP70表达的抑制效应,但经PD98059预处理后内皮细胞HSP70表达水平仍明显低于正常状态下的表达水平,差异亦有显著性(P＜0.05).结论BaP可能通过ERK1途径而影响内皮细胞HSP70基因表达,同时可能还有其他信号途径在BaP影响HSP70基因表达过程中起作用.     

细胞外信号调节激酶通路对二氧化硅活化的肺成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK)信号转导通路对经SiO2活化的矽肺患者肺泡巨噬细胞(AM)条件上清刺激的人胚肺成纤维细胞(HELF)增殖的影响.方法 将矽肺患者支气管肺泡灌洗液中的AM体外再次染尘,取其上清与HELF共同孵育,用特异性阻断剂PD98059进行干预,实验分为空白对照组、AM对照组、SiO2处理组、PD98059干预组,通过噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术法及免疫印迹(Western blot)法观察成纤维细胞细胞增殖活性及p-ERK1/2蛋白表达情况.结果　SiO2处理组及AM对照组细胞增殖的吸光度(A值)增高,分别是空白对照组的2.6和2.0倍,差异有统计学意义(P＜0.05).25和50 μmol/L PD98059组HELF细胞增殖的A值分别是SiO2处理组的72.1%和48.5%,差异有统计学意义(P＜0.05).经SiO2粉尘刺激的AM培养上清作用于HELF后,p-ERK1/2表达明显上调,15min时已有表达,30min时活化明显,表达最强(A值为0.4653±0.0265),60min后仍处于较高的状态而表达有所减弱.除15 min外,SiO2处理组各时间点ERK1/2的蛋白表达分别是同期AM对照组的1.25、1.23、1.25倍,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 加尘AM培养上清可能通过ERK1/2信号途径促进HELF的增殖及ERK1/2的活化,而参与矽肺的发生发展.     

ERK信号转导通路调控乙醛刺激的肝星状细胞增殖的研究

目的特异性ERK阻断剂PD98059作用于乙醛刺激的HSC后,观察HSC内ERK活性、细胞增殖、细胞周期时相和细胞周期蛋白(Cyclins)表达的变化;为肝纤维化的发生和防治提供依据.方法体外培养人鼠HSC;HSC经PD98059预处理,用乙醛刺激后收集细胞,分别采用Western?blot、MTT比色法、流式细胞仪、RT-PCR法检测ERK活性、细胞增殖、细胞周期时相及CycinnDlmRNA表达的变化.结果HSC被乙醛刺激后,磷酸化ERK(p-ERK)水平增高、细胞周期蛋白CyclinDlmRNA表达增加、细胞由G1-S期转化增多、促进细胞增殖;20、50、100rLmol几PD98059均能抑制乙醛刺激的HSC内p-ERK水平,50、100pmol几的PD98059可明显抑制乙醛刺激的HSC内CyclinDlmRNA表达,并明显抑制细胞由Gl-S期的转化和细胞增殖,与对照组比较有统计学差异(P<0.05).结论乙醛刺激HSC后,引起ERK信号传导通路活化;ERK信号传导通路调控乙醛刺激的HSC增殖可能与其调控HSC内CycinnDlmRNA表达和细胞周期变化有关.     

ERK1/2通路抑制剂PD98059影响卵巢癌细胞SKOV3增殖、侵袭能力的研究

目的:探讨MAPK/ERK信号传导通路抑制剂PD98059对卵巢癌细胞SKOV3的增殖、侵袭能力的影响。初步探讨阻断MAPK/ERK信号传导通路治疗卵巢癌的可能性。方法:体外培养人上皮性卵巢癌细胞SKOV3,采用CCK-8细胞增殖方法检测卵巢癌细胞SKOV3增殖情况,Western blot检测p-ERK蛋白表达,Transwell细胞侵袭实验检测SKOV3细胞的侵袭能力。结果:CCK-8法显示PD98059在一定范围内能够明显抑制卵巢癌细胞SKOV3的增殖,其作用具有时间依赖性及浓度依赖性,PD98059有效浓度为25μmol/L,在此有效浓度作用下有效时间为24h;Western blot法检测结果显示PD98059能够下调pERK1/2,即抑制ERK1/2磷酸化,从而使得ERK1/2信号传导途径失活;Transwell细胞侵袭实验结果显示PD98059在一定浓度范围内能抑制卵巢癌细胞SKOV3的侵袭与转移能力。结论:PD98059可以通过抑制ERK1/2信号途径,抑制人上皮性卵巢癌SKOV3细胞的增殖、侵袭转移。     

芳香化酶抑制剂对子宫内膜异位症在位内膜细胞的影响

目的 观察芳香化酶抑制剂来曲唑对体外培养子宫内膜异位症(EMs)在位内膜细胞的影响,探讨来曲唑在EMs治疗中的作用.方法 建立细胞模型,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和流式细胞术观察各浓度来曲唑对EMs在位内膜的影响.结果 10-7、104、10-9、10-10mmol/L来曲唑刺激后EMs在位内膜细胞增殖指数分别为(14.42±0.41)%、(15.62±0.26)%、(15.46±0.44)%、(20.32±0.26)%,均小于阴性对照的(26.26±0.25)%(P＜0.05).来曲唑对EMs在位内膜细胞增殖抑制作用随浓度增大而增大,随时间延长而增强,呈时间-剂量依赖性.结论 来曲唑具有抑制EMs在位内膜细胞增殖的作用,且呈时间-剂量依赖性.     

芳香化酶抑制剂对子宫内膜异位症在位内膜细胞的影响

目的 观察芳香化酶抑制剂来曲唑对体外培养子宫内膜异位症(EMs)在位内膜细胞的影响,探讨来曲唑在EMs治疗中的作用.方法 建立细胞模型,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和流式细胞术观察各浓度来曲唑对EMs在位内膜的影响.结果 10-7、104、10-9、10-10mmol/L来曲唑刺激后EMs在位内膜细胞增殖指数分别为(14.42±0.41)%、(15.62±0.26)%、(15.46±0.44)%、(20.32±0.26)%,均小于阴性对照的(26.26±0.25)%(P＜0.05).来曲唑对EMs在位内膜细胞增殖抑制作用随浓度增大而增大,随时间延长而增强,呈时间-剂量依赖性.结论 来曲唑具有抑制EMs在位内膜细胞增殖的作用,且呈时间-剂量依赖性.     

多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞胰岛素抵抗的相关信号通路

胰岛素抵抗（insulin resistance,IR）与多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）的发生发展有关,而与IR相关的胰岛素信号通路异常会引起卵巢局部代谢紊乱,进而影响卵泡发育及卵子质量。PCOS卵巢颗粒细胞中胰岛素作用的经典通路,包括磷脂酰肌醇3激酶（phosphoinositide 3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路和丝裂原激活的蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）/细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）通路;与炎症相关的通路包括Toll样受体（Toll-like receptor,TLR）/核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路等;氧化应激相关通路包括核转录因子红系2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)/血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)途...     

脂肪酸合酶及其抑制剂在子宫内膜癌中的研究进展

脂肪酸合酶（fatty acid synthase,FASN）是脂肪酸合成的关键酶,可催化脂质从头合成。正常组织中的脂肪酸大多来源于食物,而在子宫内膜癌细胞中脂肪酸依赖于脂质的从头合成。既往研究表明,FASN的表达与子宫内膜癌的发生、发展及预后不良相关,FASN的过表达与丝裂原细胞外激酶（mitogen extracellular kinase,MEK）/细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）/丝裂原激活的蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）和磷脂酰肌醇3激酶（phosphoinositide 3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）信号转导通路相关。因此,特异性阻断FASN的活性可显著抑制肿瘤细胞的生长和增殖。综述子宫内膜癌中FASN的作用机制、FASN抑制剂（如C75、C93、奥利司他等）在子宫内膜癌或其他肿瘤中的研究进展,旨在为...     

胞外信号调节激酶-丝裂原活化蛋白激酶信号通路在氟致大鼠海马神经元突触可塑性损伤中的作用

目的探讨氟对体外培养大鼠海马神经元胞外信号调节激酶-丝裂原活化蛋白激酶(ERK-MAPK)信号通路关键分子以及突触可塑性相关蛋白表达的影响。方法取出生24 h内的SPF级SD大鼠海马组织体外培养海马神经元,分别设对照(培养基)组、氟处理组(0.8μg/ml氟化钠)、ERK1/2抑制剂组(25μmol/L PD98059)、抑制剂+氟处理组(0.8μg/ml氟化钠+25μmol/L PD98059),继续培养24 h。观察海马神经元的形态,采用CCK8法检测细胞存活率,采用Western-blot技术检测ERK1/2、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)及突触素(SYN)、生长相关蛋白(GAP-43)、神经营养因子(BDNF)突触可塑性相关分子的蛋白表达水平。结果与对照组比较,氟处理组、抑制剂+氟处理组海马神经元存活率均降低,差异有统计学意义(P0.05);与氟处理组相比,ERK1/2抑制剂组、抑制剂+氟处理组海马神经元存活率均升高,差异有统计学意义(P0.05)。神经网络丰富型神经元的构成比依次为氟处理组抑制剂+氟处理组ERK1/2抑制剂组、对照组,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,氟处理组、ERK1/2抑制剂组、抑制剂+氟处理组海马神经元中p-ERK1/2、p-CREB的蛋白表达水平均降低,差异有统计学意义(P0.05);与氟处理组相比较,抑制剂+氟处理组海马神经元中p-ERK1/2、pCREB蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P0.05)。而各组海马神经元ERK1/2、CREB蛋白的表达水平间比较,差异均无统计学意义(P0.05)。与对照组比较,氟处理组、抑制剂+氟处理组海马神经元中SYN、GAP-43、BDNF的蛋白表达水平均降低,差异均有统计学意义(P0.05);与氟处理组比较,ERK1/2抑制剂组、抑制剂+氟处理组海马神经元中SYN、GAP-43、BDNF蛋白的表达水平升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论氟可损伤海马神经元突触可塑性,抑制ERK-MAPK通路可减缓这种损伤作用;ERK-MAPK通路在氟致海马神经元突触可塑性损伤中起调控作用。     

亚慢性镉暴露BALB/c小鼠丝裂原活化蛋白激酶信号通路蛋白在肾损伤中的作用

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase,MAPK）和细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinases,ERK）在亚慢性镉染毒小鼠肾脏损害发生后表达的变化及其意义。方法 21只雌性BALB/c小鼠随机分成3组,高、低剂量染镉组分别腹腔注射CdCl2溶液10.0、2.5 μmol/kg,对照组腹腔注射等量生理盐水,每周3次连续染毒14周。对肾脏进行苏木精-伊红(HE)染色、碘酸雪夫(PAS)染色和胶原纤维染色（Masson染色）,观察肾组织病理变化;免疫印迹(Western blot)法检测肾脏中ERK、p38、c-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白及其磷酸化蛋白的表达差异。结果 高剂量染镉组pERK、pp38和pJNK蛋白表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),低剂量染镉组pJNK蛋白表达水平高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。镉染毒组的bcl-2、bax蛋白表达水平降低,且bcl-2/bax比值低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。镉染毒组肾小球和肾小管均有损害。结论 CdCl2可能通过调节ERK、JNK和p38蛋白激酶信号相关蛋白表达水平的变化,引发肾脏损害。     

青石棉诱导呼吸道上皮BEAS-2B细胞表达白细胞介素-8的研究

目的研究青石棉纤维作用于呼吸道上皮BEAS-2B细胞后白细胞介素-8(IL-8)蛋白和基因的表达水平及酪氨酸激酶抑制剂PD98059对IL-8表达的影响。方法用定量聚合酶链反应法测定青石棉纤维诱导BEAS-2B细胞后的IL-8mRNA水平;用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定BEAS-2B细胞培养上清液中IL-8蛋白水平。结果不同浓度青石棉刺激BEAS-2B细胞后,细胞培养上清液中IL-8释放量明显增加,同样BEAS-2B细胞中IL-8mRNA表达显著上升,使用酪氨酸激酶抑制剂PD98059可明显抑制IL-8的蛋白及mRNA表达水平。结论青石棉可诱导IL-8的高表达,而这种表达可为PD98059所抑制,提示IL-8的表达受丝裂原活化蛋白激酶信号通路中磷酸化ERK蛋白表达的控制。