鲎试验测定长链脂肪乳注射液中细菌内毒素的方法学研究

目的：确定长链脂肪乳注射液中细菌内毒素鲎试验检查法的可行性。方法：供试品干扰试验后，采用凝胶鲎试验对样品中细菌内毒素进行检测。结果：三批长链脂肪乳注射液稀释至2倍时对细菌内毒素的检测无干扰作用，所测样品的细菌内毒素含量均小于0．5EU·ml^-1。结论：所建立方法检查长链脂肪注射液中的细菌内毒素可行。     

动态比浊法鲎试验定量分析催化剂的细菌内毒素

目的通过定量检测催化剂的细菌内毒素含量,为控制药品质量及筛选最佳生产工艺提供参考。方法应用动态比浊法及凝胶法鲎试验对催化剂的细菌内毒素进行定量和半定量检测。结果动态比浊法鲎试验定量检测了4批催化剂,其原液(原瓶加5.0mL水)细菌内毒素含量依次为20EumL-1-50EumL-1不等,样品在256倍稀释时其添加内毒素(2.0EumL-1)的回收率在75%-125%之间,此时对鲎试验反应无干扰作用,与凝胶法的检查结果一致。结论动态比浊法鲎试验可用来定量检测催化剂的细菌内毒素含量。     

鲎试验测定复方氨基酸(15)双肽(2)注射液中的细菌内毒素

目的:检测复方氨基酸(15)双肽(2)注射液中的细菌内毒素。方法:供试品干扰试验后,采用凝胶鲎试验对样品中的细菌内毒素进行检测。结果:三批复方氨基酸(15)双肽(2)注射液稀释至28倍时对细菌内毒素的检测无干扰作用,所测样品的细菌内毒素含量均小于7 EU.ml-1。结论:所建立方法检查复方氨基酸(15)双肽(2)注射液中的细菌内毒素可行。     

丹参川芎嗪注射液细菌内毒素检查法研究

目的 建立丹参川芎嗪注射液细菌内毒素检查法。方法 依据《中国药典》2015年版四部（通则1143）细菌内毒素检查法,通过预干扰预试验和干扰试验,确定丹参川芎嗪注射液最大无干扰的浓度,并进行方法学验证。结果 将丹参川芎嗪注射液稀释20倍,对细菌内毒素检测法无干扰作用。结论 丹参川芎嗪注射液内毒素检查法可用于检查丹参川芎嗪注射液。     

纳米银妇女外用抗菌凝胶的细菌内毒素检测

目的考察纳米银妇女外用抗菌凝胶的细菌内毒素检查方法的可行性。方法依据中国药典2005年版附录ⅪE细菌内毒素检查法,确定纳米银妇女外用抗菌凝胶的有效稀释浓度和细菌内毒素限值。结果纳米银妇女外用抗菌凝胶在稀释50倍后对细菌内毒素实验无干扰作用,其细菌内毒素含量均小于6.25EU/mL。结论该产品可以采用细菌内毒素检查法。     

不同提纯方法对多肽体外中和内毒素作用的影响

目的：体外检测不同方法纯化的粗肽对内毒素中和作用的强弱，为提纯粗肽的方法的筛选提供实验依据。方法：采用鲎试验反应的动态浊度法，对不同方法提纯出的粗肽在体外中和内毒素作用进行检测。结果：3种实验方法中，方法2、3的结果重复性好；6种多肽提纯方法提纯的多肽对细菌内毒素都有不同程度的中和作用，但B组样品2中和内毒素的作用最强。结论：用乙嗪加上TFA处理提纯的多肽对LPS的中和作用最强，适宜在肽提纯生产上采用。     

鲎试验测定注射用头孢雷特中细菌内毒素的方法学研究

目的：检测注射用头孢雷特中的细菌内毒素。方法：供试品干扰试验后,采用凝胶鲎试验对样品中细菌内毒素进行检测。结果：三批注射用头孢雷特浓度为2mg·ml^-1对细菌内毒素的检测无干扰作用,所测样品的头孢雷特细菌内毒素含量均小于0.5EU.mg-1。结论：所建立方法检查注射用头孢雷特中的细菌内毒素可行。     

用细菌内毒素法对氯霉素注射液的热原检查

目的 氯霉素注射液的研究。方法 采用细菌内毒素检查法和家兔升温法两种方法进行对比分析。结果 氯霉素沐射液对人体不会产生热原反应。结论在药品检测中，用细菌内毒素检查法可代替家兔升温法对氯霉素注射液做热原检查。     

动态比浊法测定^13N—氨水的细菌内毒素含量

目的：建立快速准确测定PET示踪剂^13N-氨水中的细菌内毒素含量的方法。评估动态比浊法在半衰期短的PET临床用药中的实用价值。方法：通过制备5．0Eu/ml、0．5Eu/ml、0．05Eu/ml的标准内毒素溶液进行测定，制出LogT-LogC标准曲线图，根据样品的反应时间代入曲线方程得出^13N－氨水中细菌内毒素的含量。结果：标准曲线在标准内毒素浓度范围为0．05Eu/ml-5.0Eu/ml时线性关系良好（γ＝0．99969),精密度和样品阳性对照的回收率都比较满意。样品阳性对照的回收率一般为75％－120％，阳性样品回收率越接近100％，则表明此次检验的准确性越高。此方法最低检测范围为0．05Eu/ml。结论：与传统内毒素检测方法凝胶法相比，动态比浊法具有快速、准确、有效、定量地测定^13N－氨水中的细菌内毒素含量的优势。     

细菌内毒素定量检测的影响因素分析及对策

细菌内毒素检查法(简称鲎试验)是利用鲎血变形细胞制成的鲎试剂与微量内毒素产生凝集反应的现象,作为判断样品中细菌内毒素含量是否符合规定的一种方法。其基本原理是利用微量内毒素激活、活化鲎试剂中的C因子和B因子,使凝固酶原转化为凝固酶,成为凝胶样的凝固蛋白,具有简便、迅速、特异性高及灵敏度高等优点。中国药典1995年板已收载,并对鲎试剂、内毒素标准、试验程序、判断标准等作了规定。 我科引进的EDS-99细菌内毒素检测系统可进行动态比浊法和显色基质法检测内毒素,分别利用细菌内毒素与鲎试剂形成凝胶过程中的浊度变化以及反应过程中产生的凝固酶使特     

醒脑静注射液对内毒素休克家兔血浆细胞因子含量的影响

目的:探讨醒脑静注射液治疗内毒素休克的可能机制。方法:日本大耳白兔18只,随机分为正常对照组、LPS组、LPS+XNJ组,每组各6只。采用耳缘静脉注射LPS复制兔内毒素休克模型,分别进行治疗,于治疗后0、1、2、3h观察各组平均动脉压(MAP)、心率(HR)、存活率,并取血用ELISA双抗体夹心法检测血浆TNF-α及IL-10的含量。结果:LPS组平均动脉压在0h后迅速下降,心率明显加快,2h后又迅速减慢;PLS+XNJ组平均动脉压在0h后平缓下降,心率先加快后平缓减慢。LPS组存活率为0,PLS+XNJ组存活率为100%。TNF-α的变化:LPS组TNF-α0h开始增高,3h达到顶峰;LPS+XNJ组TNF-α在0h达到顶峰,1h明显下降,3h降至最低。IL-10的变化:LPS组IL-10在3h达到顶峰,PLS+XNJ组在2h达到顶峰,3h开始下降。结论:醒脑静注射液能治疗内毒素休克,其机制可能与调节促炎因子和抗炎因子的平衡有关。     

急性肝功能衰竭小鼠肠屏障功能障碍的实验研究

目的探讨急性肝功能衰竭时肠屏障功能的变化。方法腹腔注射D-氨基半乳糖（D-GalN,700mg/kg）/内毒素（LPS,10μg/kg）建立小鼠急性肝功能衰竭模型,造模6h后测定小鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）的活性,取肠内容物及肝组织进行细菌培养,同时检测肠组织二胺氧化酶（DAO）的活性。结果腹腔注射D-GalN/LPS6h后,小鼠血清中ALT、AST活性显著提高（P〈0.01）;肠道内肠杆菌、肠球菌数量明显上升（P〈0.01）,乳酸杆菌、双歧杆菌数量明显下降（P〈0.05）;肠组织DAO活性明显降低（P〈0.01）;肝脏细菌培养阳性率达100%。结论急性肝功能衰竭时肠屏障明显受损,并发生菌群失调及细菌易位。     

子痫前期患者胎盘中人表皮生长因子受体1的表达研究

目的通过检测子痫前期患者胎盘滋养细胞人表皮生长因子受体1（ErbB1）的表达情况,探讨胎盘滋养细胞ErbB1表达与子痫前期的关系。方法采用RT-PCR法及免疫组织化学法检测20例正常妊娠妇女（正常妊娠组）与34例子痫前期患者（子痫前期组）胎盘ErbB1的表达。结果在子痫前期患者胎盘中,ErbB1表达明显高于正常妊娠组,两者相比差异有统计学意义（P〈0.05）。结论胎盘中ErbB1表达的升高与子痫前期的发生密切相关。     

Hs-CRP酶免疫分析与免疫比浊法灵敏度比较

利用我国首获批准文号的hs-CRP酶免疫分析试剂盒与hs-CRP免疫比浊法检测了80名正常人,比较两种方法的灵敏度。结果显示：酶免疫分析的检测下限为0.01mg/L,免疫比浊法为0.5mg/L。酶免疫分析法测得50岁以下组CRP值在1mg/L以下者占60%,用免疫比浊法检测,本组全部CRP测定值都大于1mg/L;酶免疫分析法测得50岁以上组CRP值在1mg/L以下者占35%,用免疫比浊法测得该组CRP值全部都大于1mg/L。对比两种方法的x±s,酶免疫分析法在50岁以下组为1.05±1.24mg/L,免疫比浊法为2.52±1.85mg/L;酶免疫分析法在50岁以上组为1.95±1.29mg/L,免疫比浊法为3.00±1.25mg/L。免疫比浊法测定的正常人群CRP值偏高（P〈0.01）。本文结果表明,免疫比浊法对80名正常人的CRP测定值全部大于1mg/L,说明其灵敏度不能满足国际上心血管事件风险评估新标准规定的1mg/L以下为低风险区的检测需要。     

丹红注射液对冠状动脉慢血流现象的疗效观察

目的:观察丹红注射液治疗冠状动脉慢血流现象(CSFP)的临床疗效,探讨丹红注射液改善冠脉微循环障碍的可能机制。方法:64例冠脉造影有CSFP及运动负荷试验阳性患者,随机分为观察组(n=32)和对照组(n=32)进行治疗,对照组给予常规药物,观察组在对照组治疗基础上加用丹红注射液。治疗10天后,观察两组临床疗效及血清内皮素-1(ET-1)、血栓调节蛋白(TM)及超敏C-反应蛋白(hs-CRP)水平变化。结果:治疗前,两组各项观察指标差异无统计学意义(P0.05)。治疗10天后,观察组心绞痛缓解总有效率、心电图改善总有效率及运动负荷试验的运动总时间及运动至ST段压低0.1mV的时间均明显高于对照组(90.62%vs 68.75%、84.37%vs 59.37%、441.06±50.61svs 405.03±49.25s、304.53±43.24svs 260.53±49.02s)(P0.01);两组患者治疗后的血清ET-1、TM、hs-CRP水平均较同组治疗前显著降低(P0.01),观察组各项指标较对照组下降更明显(P0.01)。结论:丹红注射液可通过改善血管内皮功能及减轻炎症反应,有效治疗CSFP。     

急性细菌感染性疾病患者血清α1酸性糖蛋白水平测定的临床探讨

目的 探讨血清α1酸性糖蛋白（α1-AG）水平对急性细菌感染疾病患者的临床意义.方法 用透射免疫比浊法对185例细菌感染性疾病患者和75例健康人血清α1-AG进行测定,并进行比较分析.结果 感染患者血清α1-AG水平明显高于对照组（P＜0.05）.结论 血清α1-AG水平检测对急性细菌感染疾病具有临床意义.     

rAAV2-BF增强两品系小鼠抗致死剂量细菌感染

 目的 通过观测rAAV2-BPI1-199-Fc 1重组病毒（rAAV-BF）感染对不同品系小鼠的抗细菌感染保护作用。方法 采用Dot-blot、Western blot、免疫组化、改良ELISA方法和内毒素检测试剂盒,检测重组BPI1-199-Fc 1（rBF）蛋白在CHO细胞和小鼠骨骼肌细胞中的表达及血清中内毒素含量的变化;建立最小致死量(MLD)E.coli致死模型,检测rBF基因转染小鼠对MLD E.coli感染的抵抗作用。结果（1）rBF蛋白在CHO细胞和两品系小鼠骨骼肌细胞中成功表达,血清中rBF蛋白具有中和内毒素和杀伤E.coli 的作用;（2）在MLD E.coli腹腔感染后,两品系小鼠rAAV-BF感染组存活率均显著高于空载体对照组小鼠;基因转染组小鼠血清内毒素含量明显低于空载体对照组;rAAV-BF感染与头孢呋辛钠联合应用具有协同抗菌作用,两品系小鼠存活率明显高于单纯rAAV-BF感染组。结论rAAV-BF感染组小鼠对致死性E.coli感染具有抵抗作用。     

D,L-聚乳酸基形状记忆聚合物的生物安全性和细胞相容性

背景：课题组前期实验研制了输卵管避孕器材料D, L-聚乳酸基形状记忆聚合物,依据国内《生物材料和医疗器材生物学评价技术要求》规定,植入体内的组织工程材料必须进行生物安全评价和细胞相容性实验。 目的：观察D, L-聚乳酸基形状记忆聚合物的生物安全性。 方法：①内毒素实验：在鲎试剂中分别加入聚合物浸提液、内毒素工作标准品溶液和细菌内毒素检查用水。②致敏实验：在昆明小鼠肩胛骨内侧分别注射聚合物浸提液+弗氏完全佐剂+生理盐水、弗氏完全佐剂+生理盐水,通过皮内诱导、局部诱导和激发阶段,观察动物激发部位皮肤红斑和水肿反应程度。③急性毒性实验：分别在昆明小鼠腹腔注射100%,50%,25%聚合物浸提液及生理盐水。④细胞增殖MTT实验：直接法为将人脐静脉内皮细胞分别接种于聚合物膜、聚乳酸与玻璃片上;间接法为将人脐静脉内皮细胞分别接种于聚合物浸提液、丙烯酰胺溶液及1640培养液。 结果与结论：D, L-聚乳酸基形状记忆聚合物材料无细菌污染状况,符合生物安全标准,无致敏性及毒性,并且具有较好的细胞相容性。