膜型B7-H1分子诱导产生的T抑制细胞及其免疫学特性的初步研究

为了探讨B7-H1分子诱导产生的T抑制细胞免疫生物学特性,我们首先构建了人B7-H1基因,筛选出细胞膜表面稳定表达B7-H1蛋白的人ECV304细胞系,并在体外建立了由这种非专职抗原提呈细胞系刺激诱导纯化的CD4+T细胞,并使其具有抑制功能的新方法。通过检测其增殖效应和上清细胞因子水平的变化,观察到这群细胞对同种异体混合淋巴细胞反应(MLC),具有明显抑制作用,该作用与大量产生IL-10、TGF-β细胞因子有关。实验表明,ECV304/B7-H1可有效诱导具有免疫抑制的功能T细胞,为其进一步应用于临床治疗打下基础。     

IL-7对杀伤性T淋巴细胞发育分化的调节

IL-7主要的生物学作用是促进B 前体细胞的增殖。此外,还能促进T 细胞的活化和增殖。本文作者应用rHuIL-7通过对同种异体抗原、病毒抗原和丝裂原诱导的人CTL 杀伤作用调节的研究,表明rHuIL-7不仅可在杀伤性T 细胞诱导过程中促进T 细胞增殖,使细胞数增加1.5～4倍,而且增加杀伤性细胞活性至80倍。进一步对丝裂原刺激纯化     

B7-H1/PD-1共刺激途径对慢性乙型肝炎患者HBV特异性T淋巴细胞功能的影响

目的研究B7-H1／PD-1共刺激信号途径对慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B，CHB）患者HBV特异性T淋巴细胞免疫功能的影响。方法流式细胞术检测CHB患者和健康人外周血髓样树突细胞（myeloid dendritic cells，mDC）上B7-H1及T淋巴细胞上PD-1的表达水平，并分析患者B7-H1和PD-1的表达水平与ALT水平的相关性；体外培养CHB患者单核细胞来源的树突细胞（monocyte-derived cells，MoDC），HBcAg负载后用“细胞因子鸡尾酒”（TNF-α、IL-6、IL-1β和PGE2）促成熟。MoDC和自体T淋巴细胞混合培养，并对B7-H1／PD-1途径进行阻断处理，^3H-TdR掺入法检测HBV特异性T淋巴细胞增殖的能力；ELISA法检测混合淋巴细胞培养上清中细胞因子的浓度；ELISPOT法检测分泌IFN-γ的T淋巴细胞频数。结果B7-H1及受体PD-1在CHB患者外周血mDC和T淋巴细胞上的表达水平明显升高，且B7-H1和PD-1的表达水平与患者的ALT水平呈明显的正相关；阻断B7-H1／PD-1共刺激途径，不但能够促进HBV特异性T淋巴细胞的增殖和Ⅰ型细胞因子分泌，同时可以提高分泌IFN-γ的抗原特异性T淋巴细胞的频数。结论CHB患者B7-H1和PD-1表达水平的升高，降低了HBV特异性T淋巴细胞免疫功能。     

自体角朊细胞引起Th1向Th2极化抑制同种异体免疫应答

我们已有的工作揭示 ,在混合皮肤移植的体外模型MELC中 ,自体角朊细胞可通过间接递呈同种异体抗原诱导免疫抑制。本文在此基础上 ,进一步分析其中Th1和Th2相关细胞因子含量的变化。结果发现 :(1)向MELC引入自体角朊细胞后约 32h ,原同种异体应答中出现的IFN γ和IL 2分泌格局开始让位于IL 4和IL 10 ,6 4h后IFN γ和IL 2完全消失 ,表明发生了淋巴细胞Th1向Th2亚群的极化 ;(2 )单抗封闭试验表明 ,IL 10在其中起关键作用 ;(3)经自体和异体角朊细胞调变过的淋巴细胞对MELR的作用相反 ,前者抑制 ,后者促进。这是首次从T亚群相互作用上探索并揭示混合皮肤移植引起局部免疫耐受的机制。     

TLSFJM在体内对同种异体抗原诱导的小鼠T细胞增殖和杀伤细胞分化的影响

目的：探讨JM急性T淋巴细胞白血病细胞分泌的抑制因子(TLSJM)对BALB／C小鼠胸腺发育的影响及其在体内对同种异体抗原诱导的小鼠辅助性T细胞(Th)增殖及杀伤性T细胞(CTL)分化的影响。方法：建立小鼠同种异基因型肿瘤排斥模型，实验小鼠腹腔注射含TLSFJM的JM细胞培养上清，对照小鼠注射RPMI1640。无菌取小鼠脾脏细胞，分别以^3H-TdR掺入法和^51Cr释放法检测T细胞增殖和CTL的分化。结果：①TLSFJM明显抑制多克隆刺激剂PHA联合IL-2诱导的小鼠胸腺细胞增殖；②体内注射TLSFJM明显抑制多克隆刺激剂PHA联合IL-2诱导的小鼠T细胞活化、增殖；③TLSFJM在体内能有效抑制同种异体抗原诱导的小鼠T细胞增殖；④TLSFJM在体内能有效抑制同种异体抗原诱导的小鼠CTL分化。结论：TLSFJM在体内能有效抑制同种异体抗原诱导的小鼠T细胞增殖和小鼠CTL分化。     

HBV S基因修饰树突状细胞疫苗诱导特异性CTL反应的探讨

目的分析腺病毒载体介导HBVS基因修饰树突状细胞（DCs）能否诱导抗HBV特异性CTL反应。方法制备携带HBVS基因的重组腺病毒，分别转染外周血诱导培养的DCs，观察腺病毒转染DCs效率和DCs中HBV抗原的表达；混合淋巴细胞反应测定HBV抗原基因修饰DCs刺激同种异体T淋巴细胞增殖能力；乳酸脱氢酶释放法检测特异性CTL细胞对HepG2 22．1．5靶细胞的杀伤能力。结果腺病毒载体能够高效介导HBVS基因在DCs中表达，且DC细胞形态完整；HBVS基因修饰DCs具有刺激同种异体T细胞增殖能力，同时能诱导抗HBV特异性CTL反应。结论HBVS基因修饰DCs疫苗具有增强抗HBV特异性CTL效应的能力，可能发展为一种新型抗病毒疫苗。     

共刺激分子B7-H1转染角朊细胞对T细胞增殖、细胞因子分泌和表面标记的作用

分析B7 H1共刺激分子阳性细胞激活的T细胞亚群表面标志和细胞因子分泌格局的变化 ,初步鉴定所诱导具有调节功能的人体T细胞亚群生物学特性。用抗CD3、CD2 8抗体分别作为第一和第二信号的来源 ,建立了T细胞体外增殖体系 ,引入B7 H1阳性A4 31细胞。结果表明B7 H1阳性A4 31细胞提供第二信号并加入抗CD3分子时 ,引起纯化的T细胞中等程度增殖 ,IL 10和TGF β升高 ,CD4 5RBlowT细胞亚群比例增加。而在阳性对照组 (同时加抗CD3和抗CD2 8抗体 )可见T细胞高度增殖 ,此时再加入B7 H1阳性A4 31细胞 ,增殖反应受到抑制 ,加入B7 H1封闭型单抗 ,抑制缓解。认为B7 H1阳性A4 31细胞具有双向效应 :当CD2 8不参与共刺激时 ,由B7 H1发挥共刺激作用 ,协同抗CD3抗体引起T细胞增殖 ;一旦T细胞从抗CD3和抗CD2 8抗体获得第一和第二信号出现高度增殖时 ,B7 H1阳性A4 31细胞发挥抑制作用。B7 H1阳性A4 31细胞提供第二信号的T细胞增殖 ,含有呈现典型Tr1细胞表型。针对增殖性T细胞应答 (如移植排斥 ) ,表达B7 H1的非专职性抗原递呈细胞KC ,可选择性诱导人体调节性T细胞 (Tr1)的分化 ,发挥负向调节作用。     

天花粉蛋白合成肽通过激活抑制性CD8~+ T细胞诱导免疫抑制

为了探讨天花粉蛋白合成肽(M-Tk)诱导免疫抑制的机制,应用小鼠针对可溶性抗原OVA的增殖系统,检测M-Tk处理后对淋巴细胞增殖的抑制作用和细胞因子格局的变化,以及M-Tk激活的T淋巴细胞亚群的表型及功能。结果表明,M-Tk可诱导一群CD8+ T抑制性细胞,其表型为CD8+CD28-CTLA4+,采用双层非接触共培养系统发现,该群抑制性细胞主要依赖于细胞因子IL-10、IL-4和细胞间接触发挥免疫抑制作用。     

B细胞在移植免疫中的调节作用

传统认为,在移植免疫中B细胞作为抗原提呈细胞可加重T淋巴细胞介导的同种异体反应.但近期研究发现,某些B细胞亚群,如调节性B细胞(Bregs)具有免疫耐受性,在移植排斥反应中发挥负向调控作用,进而延缓同种异体移植排斥进程.因而研究B细胞在移植免疫中的调节作用,阐述B细胞发挥负向免疫调节机制及以B细胞为靶细胞的诱导移植耐受新策略具有重大意义.     

自体角朊细胞抑制混合表皮淋巴细胞反应的研究

本文应用混合表皮淋巴细胞反应实验体系, 在体外模拟混合皮肤移植中的自体皮岛效应。结果发现： 自体表皮细胞能以剂量依赖形式抑制自体淋巴细胞对异体表皮细胞的同种异体增殖反应。抗原递呈抑制物氯喹可恢复由自体表皮细胞诱发的抑制。提示后者参与对同种异体抗原的间接递呈。进一步分析表皮中两种抗原递呈细胞的作用, 发现真正参与诱导抑制的是角朊细胞而不是表皮中的朗罕细胞。