高效液相色谱-串联质谱法检测人血浆中5-羟色胺

目的建立高效、准确的高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定人血浆中5-羟色胺(5-HT)的方法,并应用于临床及科研的生物样本检测。方法该方法采用奥卡西平作为内标,血浆样品经乙腈沉淀蛋白,用初始流动相稀释后经Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C8色谱柱进行分离,流动相为0.2%甲酸水-乙腈,梯度洗脱。采用电喷雾离子源(ESI),正离子、多反应监测模式(MRM)进行监测,用于定量分析的离子为质荷比(m/z)177→160。结果 5-HT在10～800ng/mL范围内线性良好(r0.999),定量下限为10.0ng/mL。待测物日内、日间相对标准偏差均小于15%。符合生物样品分析要求。结论本方法适合临床及科研的生物样本中5-HT的快速检测。     

液相色谱-串联质谱方法检测血清中极长链脂肪酸含量

目的 建立一种检测血清中极长链脂肪酸的LC-MS/MS方法.方法 收集2009年4-6月35份疑似ALD患者血清样本,采用LC-MS/MS方法检测血清中极长链脂肪酸含量.分析加样回收率、精密度及准确度,研究在常温放置和反复冻融条件下血清样本中极长链脂肪酸含量的稳定性.同时,用该方法测定101份健康人血清中极长链脂肪酸含量,统计测定值并进行分析.随机抽取35份血清,测定结果与德国柏林医学诊断检验中心(MDI)实验室测定数值进行比对.结果 血清样本中的极长链脂肪酸在梯度洗脱条件下分离良好,杂质干扰程度小.山萮酸(behenate,C22:0)的线性范围为2～64 mg/L,加样回收率为99.92%～102.05%,日内RSD≤6%,日间RSD≤9%;木焦油酸(tetracosanoicacid,C24:0)线性范围为2～64 mg/L,加样回收率为95.12%～100.44%,日内RSD≤6%,日间RSD≤7%;蜡酸(hexacosanoic acid,C26:0)线性范围为0～8 mg/L,加样回收率为92.21%～103.71%,日内RSD≤7%,日间RSD≤8%.山萮酸、木焦油酸和蜡酸的准确度均在85%～115%之间.样本在常温条件下放置12 h、反复冻融10次可以保持稳定.检测101份健康人血清中极长链脂肪酸含量服从正态分布,山萮酸含量为(19.43±4.43)mg/L,木焦油酸含量为(19.10±4.58)mg/L,蜡酸含量为(0.21±0.11)mg/L,计算木焦油酸/山萮酸和蜡酸/山箭酸比值分别为(0.99±0.13)和(0.01±0.01).统计结果显示,成年人血清中蜡酸(0.18±0.10)mg/L和木焦油酸/山萮酸比值(1.01±0.10)和未成年人血清中蜡酸(0.21±0.08)mg/L和木焦油酸/山萮酸比值(0.99±0.14)差异无统计学意义(t分别为1.439、0.806,P均＞0.05);男性健康人血清中木焦油酸/山萮酸比值(1.05±0.10)与女性健康人血清中木焦油酸/山萮酸比值(0.97±0.10)差异有统计学意义(t=3.394,P=0.001).与德国MDI实验室比对结果发现,本研究测定的山萮酸含量(16.93±4.30)mg/L和木焦油酸含量(19.57±6.40)mg/L与德国MDI实验室测定的山萮酸含量(13.85±3.17)mg/L和木焦油酸含量(16.10±5.84)mg/L差异有统计学意义(t分别为8.401和9.914,P均=0.000),而本研究测定的蜡酸含量(0.68±0.48)mg/L、木焦油酸/山萮酸比值(1.20±0.40)和蜡酸/山萮酸比值(0.04±0.04)与德国MDI实验室测定的蜡酸含量(0.65±0.67)mg/L、木焦油酸/山萮酸比值(1.19±0.43)和蜡酸/山萮酸比值(0.05±0.05)差异无统计学意义(t分别为0.372、0.317、0.945,P均＞0.05).结论 应用LC-MS/MS方法检测血清中极长链脂肪酸,具有较好的准确度和灵敏性,特异性强,稳定性好,能为临床诊断提供重要的生化依据.

Abstract：

Objective To establish a method for very long chain fatty acids( VLCFA )with liquid chromatography-tandem mass spectrometry( LC-MS/MS ). Methods One hundred and one healthy cases and 35 suspected ALD patients collected from April to June in 2009 were enrolled into this study. Quantitative analyzed the concentrations of VLCFA in serum was performed using liquid chromatography-tandem mass spectrometry. The precision, accuracy and recovery were analyzed, and the stability of VLCFA concentration of sample under room temperature and repeated freeze-thawing were also investigated. Serum levels of VLCFA in 101 normal cases were determined and analyzed statistically. The results for the 35 randomly chosen serum samples were compared with those from MDI in Germany. Results Serum VLCFA were separated well under these gradient condition with small interference. The linear range of C22:0 was from 2 mg/L to 64 mg/L, the recovery was 99. 92% -102. 05%, and the relative standard deviation ( RSD ) of intra-day and inter-day was less than 6% and 9% respectively. For C24:0 they were 2-64 mg/L. 95. 12%-100. 44%. ≤6%, ≤7%,respectively. For C26:0, they were 0-8 mg/L, 92.21%-103.71%, ≤7%, ≤8%, respectively. The accuracy of C22: 0,C24:0 and C26:0 were among 85% to 115%. The samples could be stable within 12 h at room temperature and repeated 10 times freeze-thawing. The values of VLCFA in 101 normal cases followed a normal distribution and the measured values were C22:0 =( 19. 43 ±4.43 ) mg/L,C24:0 =( 19. 10 ±4. 58 )mg/L, C26:0 = ( 0. 21 ± 0. 11 ) mg/L, the ratio of C24: 0/C22:0 and C26:0/C22: 0 were ( 0. 99 ± 0. 13 )and ( 0. 01 ±0. 01 ) respectively. The statistical analysis showed the concentration of C26:0 in adults ( 0. 18±0. 10 ) mg/L and children ( 0. 21 ± 0. 08 ) mg/L, C24: 0/C22:0 in adults ( 1.01 ± 0. 10 ) and children ( 0. 99 ±0. 14 ) has no significant( t values were 1. 439,0. 806, respectively, all P ＞ 0. 05 ); the ratio of C24:0/C22:0 in male (1.05 ± 0. 10 ) and female (0.97 ± 0. 10 ) has significant difference ( t =3. 394,P =0. 001 ). Compared the values determined by MDI laboratory, the results of C22: 0( 16. 93 ±4. 30 ) mg/L,C24: 0( 19. 57 ± 6. 40 ) mg/L by this method and C22:0 ( 13.85 ± 3. 17 ) mg/L, C24:0( 16. 10 ±5.84 ) mg/L by MDI have significant differences( t = 8. 401 ,P =0. 000;t =9. 914,P =0. 000 ),but C26:0( 0.68 ±0.48 ) mg/L, C24:0/C22:0( 1.20 ±0.40 ), C26: 0/C22:0 ( 0.04 ±0.04 )by this method and C26: 0( 0. 65 ± 0. 67 ) mg/L, C24:0/C22: 0( 1.19 ± 0. 43 ), C26:0/C22: 0 ( 0. 05 ± 0. 05 )by MDI have no differences( t values were 0. 372,0. 317,0. 945 ,respectively ,all P ＞0. 05 ). Conclusions The quantitative analysis method for serum very long chain fatty acid using LC-MS/MS is accurate, sensitive,specific and stable. It could provide important biochemistry information for diagnosis in clinic.     

液相色谱-串联质谱技术的临床应用进展

液相色谱-串联质谱技术(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)与免疫学方法相比具有特异性高、灵敏度高、多组分检测能力等方面的优势,已经成为临床检验领域重要的新技术之一。目前LC-MS/MS主要在激素检测、新生儿筛查、治疗药物监测、维生素D代谢物检测、蛋白质与多肽定量等项目应用比较成熟。虽然LC-MS/MS技术凭借其独特的优势,已经在临床检验领域占得一席之地,但也存在自动化及标准化程度低、仪器操作复杂等不足。自动化、标准化、蛋白质定量、高分辨质谱等将是今后LC-MS/MS在临检应用的主要发展方向。     

医学检验中液相色谱-串联质谱的应用

质谱技术是近年来发展较为迅速的生物分析技术之一,已不再只是有经验的质谱学家才可以使用的工具。随着液质联用技术的迅速发展,特别是液相色谱-串联质谱(liquidchromatography-tandem mass spectrometry,LC-TMS)技术的出现,极大地推动了该技术在临床检验中的应用。1质谱(mass     

超高效液相色谱-串联质谱检测血浆咖啡因浓度方法的建立和临床应用

目的:建立超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）方法检测血浆咖啡因浓度,评价咖啡因药物浓度监控（TDM）在早产儿呼吸窘迫综合征（RDS）治疗中的临床应用价值。方法:取血浆样本于离心管中,加入咖啡因氘代同位素内标,再加入蛋白沉淀剂,充分涡旋混合后,离心取上层清液进入质谱分析。流动相为甲醇和水,梯度洗脱;柱温45...     

液相色谱串联质谱临床检测方法的开发与验证

液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)是近年来发展极为迅速的新技术。该技术结合了液相色谱的高分离性能和质谱的高敏感性、高特异性等优势,被广泛应用于化工、生物、医药、食品、临床医学、环境等领域。在临床检验和诊断领域,LC-MS/MS作为传统诊断技术的补充,可提供更为准确、可靠的依据,使许多疾病得到准确、快速的诊断。文章结合目前已公布的LC-MS/MS方法相关验证指南、文献及实际操作经验,系统介绍了LC-MS/MS方法开发的关键流程,并以25-羟基维生素D3 [25(OH)D3]为实例介绍方法验证的关键要素,为LC-MS/MS技术临床应用方法的建立、验证和实施提供参考。     

液相色谱串联质谱法检测人血清雌酮、雌二醇

目的建立同时测定人血清中雌酮(E1)及雌二醇(E2)水平的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法,并初步应用于临床血清样品的雌激素检测。方法血清样品经乙酸乙酯提取,丹磺酰氯衍生化后进行LC-MS/MS分析。用Agilent ZORBAX SBC18色谱柱进行线性梯度洗脱,流动相为乙腈(0.05%甲酸)-水(0.05%甲酸),流速为0.3 m L/min。用多重反应离子监测(MRM)正离子模式对血清中的E1、E2进行质谱检测,并根据"生物样品定量分析方法验证指导原则(中国药典,2015)"对该方法的特异性、线性范围、灵敏度、精密度、提取回收率和稳定性等进行评价。用本法对172例健康成年女性血清标本进行E1、E2检测,用百分位数法计算不同月经周期E1、E2的浓度区间。结果 LC-MS/MS法可同时检测人血清中E1、E2的含量,在0.05~10 nmol/L范围内线性关系良好。该法的定量限为0.05 nmol/L,日内与日间不精密度均小于15%,稳定性良好。初步临床应用显示,用LC-MS/MS法计算所得的E1、E2浓度区间符合女性月经周期生理性变化规律。结论 LC-MS/MS法能有效分离并定量检测人血清中E1、E2的浓度水平,其线性范围广、灵敏度高、精密度好,有望作为临床血清雌激素检测的参考方法。     

液相色谱-串联质谱在全谱氨基酸检测中的应用

全谱氨基酸检测是指利用液相色谱串联质谱技术、采用同位素内标的方法,精确测定人体内42种氨基酸含量。全谱氨基酸失衡是众多疾病的诱因或表现形式,涉及代谢、肿瘤、免疫、病毒、心脑血管、神经系统、肾病、糖尿病、亚健康、老年病等各类疾病和儿童生长发育、营养健康、肌肉骨骼生长、激素分泌、解毒功能等人体各种健康环节。     

串联质谱和高效液相色谱-串联质谱二次筛查联合应用于新生儿MMA筛查

目的探讨串联质谱和高效液相色谱-串联质谱二次筛查联合应用在甲基丙二酸血症(MMA)中的筛查价值。方法收集新生儿串联质谱初筛结果中C3、C3/C2、C3/C0单一或多个指标异常的新生儿干血滤纸片标本,用高效液相色谱-串联质谱的方法定量检测原始血片中甲基丙二酸、甲基枸橼酸和高半胱氨酸,对二次筛查后疑似阳性的新生儿进行召回复查,并进行尿气相色谱/质谱检测。临床诊断患儿进一步予以基因检测进行确诊。结果共收集423例C3、C3/C2、C3/C0单一或多个指标异常的新生儿筛查标本,初筛阳性率约为1%,行联合筛查检测结果发现8例标本中甲基丙二酸和同型半胱氨酸表达水平明显升高,召回复查尿气相色谱质谱提示甲基丙二酸轻度升高。结论串联质谱和高效液相色谱-串联质谱联合应用可以提高新生儿MMA筛查的阳性预测值、降低假阳性率,在新生儿遗传代谢病筛查中具有重要价值。     

生物检材中利血平的高效液相色谱／质谱和高效液相色谱的检测

目的：建立生物检材中利血平的高效液相色谱／质谱（HPLC／MS）和高效液相色谱（HPLC）的检测。方法：采用C18（200mm×4．6mm,5mL）色谱柱,乙腈：水（40：60）用盐酸调节pH值至3．00±0．05为流动相,检测波长258nm。结果：HPLc／Ms分析利血平的选择离子m／z为608,195。心血中利血平HPLC检测的回归方程、线性检测范围、相关系数、回收率、最低检出浓度,分别为Y=56．576X＋0．3168（μg／mL）,（0．5～48）μg／mL,0．995,（96．50土3．O）％,0．5μg／mL;肝组织中利血平HPI。C检测的回归方程、线性检测范围、相关系数、回收率、最低检出浓度,分别为Y=38．567X＋0．054（μg／g）,（o．5～48）μg／g,0．984,（97．5±2．5）％,0．5μg／g。染毒大鼠心血、心、肝、脾、肺、肾和脑中利血平的含量依次为：（316．39±6．43）,（284．96±3．03）,（353．82±7．73）,（185．74±4．07）,（221．64±1．38）,（215．94±2．87）,（170．15±7．05）μg／g。结论：生物检材中HPLC／MS检测方法选择性好,定性准确,HPLC检测简便,快速,灵敏,定量结果准确,可用于利血平中毒的临床快速检验诊断和利血平中毒死亡案件的法医学鉴定。     

超高效液相色谱－串联质谱联用检测血清胆汁酸谱方法的建立及初步临床应用

目的 建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)联用方法检测血清中胆汁酸表达的方法,并初步探讨胆汁酸亚型与肥胖的关系.方法 采用固相萃取方法处理血清标本,经UPLCHSS T3色谱柱梯度洗脱后,用负离子多反应监测模式对血清中的胆汁酸组分进行质谱检测,并根据中国国家食品药品监督管理局(SFDA)的指导原则对该方法的特异性、线性范围、灵敏度、不精密度和相对回收率进行性能验证.利用UPLC-MS/MS方法检测10例单纯性肥胖者和10名健康对照者血清胆汁酸浓度,并采用秩和检验进行统计分析.结果 UPLC-MS/MS方法可同时检测人血清中14种胆汁酸亚组分,在10～20 000 nmol/L范围内线性相关良好.其对不同亚组分的最低检出限(LOD)为0.02～7.90 nmol/L,最低定量限(LOQ)为0.07～44.20 nmol/L;其日内不精密度为0.35％～12.41％;日间不精密度为1.11％ ～13.04％;相对回收率为89.8％～114.6％.初步临床应用显示,单纯性肥胖者及健康对照者血清胆汁酸谱色谱图有一定差异,单纯性肥胖者血清中游离胆汁酸和结合胆汁酸浓度分别为0.49(0.45 ～1.90)、1.44(0.84～3.72) μmol/L,均低于健康对照组的0.98(0.53～3.06)、1.99(0.67 ～2.88) μmol/L,但差异均无统计学意义(Z=-0.958、-0.801,P均＞0.05).结论 建立的UPLC-MS/MS方法可有效分离并定量检测血清中各种胆汁酸亚型,其线性范围广、灵敏度高、精密度好,可用于临床标本游离胆汁酸和结合胆汁酸的分析测定.     

液相色谱-串联质谱检测血浆3-甲氧酪胺方法的建立

目的建立一种稳定的检测血浆3-甲氧酪胺(3-MT)的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法。方法对LC-MS/MS的分离条件(色谱柱、柱温、p H值)进行优化,建立检测血浆3-MT的方法,并对该方法的线性范围、回收率、精密度、最低检测下限和稳定性进行评价。结果以同位素氘代作为内标,采用BEH HILIC色谱柱进行分离。流动相为100 mmol/L甲酸铵缓冲液(p H值为3)和纯乙腈,梯度洗脱;柱温为35℃。LC-MS/MS检测3-MT的线性范围为5~1 000 pg/mL,定量检出限为5 pg/mL,天间和批间变异系数(CV)分别为6%和7%,回收率为97.1%~109.3%。由于3-MT在室温中稳定性较差,因此需冰浴送检。结论建立了检测3-MT的LC-MS/MS方法,能够灵敏、准确地检测血浆3-MT水平。     

液相色谱-串联质谱法检测人血浆中碘帕醇

目的建立一种稳定的检测人血浆碘帕醇的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS),并对该方法进行性能评价。方法以氘代同位素作为内标,人血浆样品经直接沉淀法前处理后进样,用XSelect^TM HSS PFP色谱柱进行分离,用含0.1%甲酸-5mmol/L九氟戊酸-10%乙腈的水溶液等度洗脱;正离子电喷雾离子化扫描检测,多反应监测(MRM)扫描分析,建立检测血浆碘帕醇的LC-MS/MS方法。根据CLSI EP10-A和CLSI C62-A,评价该方法的线性范围、正确度、精密度、选择性、基质效应、稳定性。结果 LC-MS/MS检测血浆碘帕醇的线性范围为1～1 000μgI/mL(以含碘量计算);低、中、高浓度(3、50、800μgI/mL)血浆质控品检测结果与理论靶值的偏移为-6.1%～7.5%,重复性以不精密度表示,CV<6.6%(4.6%～6.6%),期间精密度CV<8.5%(6.6%～8.5%),方法回收率为92.5%～95.9%,基质效应为88.8%～95.2%;方法选择性良好,溶血和脂血因素均不影响检测结果。血浆样品在室温下放置最好不要超过48 h,在-80℃下反复冻融不超过2次,经前处理后的血浆样品4℃自动进样器中放置不超过72 h,碘帕醇可稳定检测。结论建立并评价了一种可靠的检测人血浆碘帕醇的LC-MS/MS方法。     

同位素稀释超高效液相色谱-串联质谱法检测人血清中维生素K1含量

目的建立同位素稀释超高效液相色谱-串联质谱法测定人血清中维生素K_1含量。方法采用AB Sciex API 4000三重四级杆质谱仪,以稳定同位素标记的2H7-维生素K_1为内标,利用甲醇沉淀血清中的蛋白质,然后加入正己烷进行液液萃取,离心后上清液经氮气吹干,用乙腈复溶。用电喷雾离子源(ESI)在正离子模式下,以MRM模式采集数据。结果该方法的定量下限为0.1 ng/m L,线性范围为0.1~20 ng/m L,r=0.999 2,日内、日间精密度的CV≤7.78%,回收率在92.23%~99.32%;样品室温放置4 h,处理后自动进样器放置24 h,于-80℃环境中反复冻融3次,稳定性均良好;检测1 108份血清样品结果显示90.61%在参考区间内。结论建立了测定人血清中维生素K_1含量的同位素稀释超高效液相色谱-串联质谱法,该法准确度高、检测限低,分析时问题,适合批量处理样品。     

基于液相色谱串联质谱技术对血清同型半胱氨酸常规检测系统的正确度评价

目的以同位素稀释液相色谱串联质谱(ID-LC/MS/MS)为比对方法,评价酶循环法测定血清同型半胱氨酸(Hcy)的正确度。方法采用ID-LC/MS/MS和酶循环法同时检测20份新鲜单人份血清中的Hcy浓度,对测定结果进行方法学比对和评价。采用ID-LC/MS/MS和酶循环法同时测定5个水平的工作校准品,根据比对结果调整酶循环法校准品值,直至酶循环法的测定结果与比对方法的测定结果一致。结果采用ID-LC/MS/MS检测SRM 1950标准物质,测定结果与证书标示值一致,相对偏移1.0%。酶循环法与ID-LC/MS/MS的线性拟合方程为Y=1.204 1X+0.364 6(r~2=0.987 9),平均偏移为24.0%。调整后的酶循环法与ID-LC/MS/MS的线性拟合方程为Y=0.988 6X+0.260 3(r~2=0.999 7),平均偏移为-0.09%。结论 ID-LC/MS/MS能准确测定血清Hcy水平,或许可作为Hcy常规检测系统正确度评价的比对方法。     

反相高效液相色谱紫外法检测人血清尿酸

目的探讨日本临床化学会(JSCC)推荐的检测人血清尿酸(UA)的反相高效液相色谱紫外(HPLC-UV)法是否可作为候选参考方法来验证同位素稀释质谱法、评价常规方法。方法对反相HPLC-UV法进行复现并进行方法学评价。观察尿酸酶处理人血清样本后的色谱以评价其特异性;检测系列标准液的UA水平并绘制标准曲线,观察线性范围;用朗道公司质控品评价精密度;用UA标准液评价回收率;分别用有证参考物SRM 909b(Ⅰ和Ⅱ)、国家一级标准物质GBW 09176、GBW 09175、GBW 09174评价正确度,并与2008年国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)参考实验室RELA(ring trials for reference labora-tories)结果进行比对;用改良Bland-Altman图评价5种常规检测系统与反相HPLC-UV法间的偏差。结果尿酸酶处理后UA色谱峰消失;本法的线性范围为2.08～1 785μmol/L;批内变异系数(CV)均<0.3%,批间CV均<0.4%,日间CV均<2.3%,总CV均<2.7%;平均相对回收率为96.0%～100.6%;与SRM909bⅠ和Ⅱ靶值的偏移分别为-2.5%、-2.3%;与GBW09176、GBW 09174、GBW 09175靶值的偏移分别为0.29%,-0.74%和0.06%;与参加RELA比对的另3家实验室的平均值进行比较,水平1偏移为0.35%,水平2为-0.69%;Hitachi、Beckman Coulter、Roche、Dade、Vitros常规检测系统检测人血清UA与反相HPLC-UA法的相关系数分别为0.998 9、0.996 5、0.999 2、0.999 2和0.998 7,与反相HPLC-UA法的偏差均小于5%的生物学变异。结论本法特异、简便、快速,精密度好,正确度高,与具有良好溯源的常规测定系统具有良好的相关性和一致性,可推荐作为人血清UA测定的候选参考方法。     

液相色谱-串联质谱法检测血清皮质醇方法的建立及性能评价

目的建立同位素稀释液相色谱-串联质谱法(ID-LC-MS/MS)检测血清皮质醇的方法并对其进行性能评价。方法采用ABSCIEX TRIPLE QUAD 5500液相色谱-串联质谱联用系统定量检测皮质醇,参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)相关文件对建立的方法进行线性、精密度、提取回收率和准确性等基本性能验证。结果内标平衡时间为室温下1 h。ID-LC-MS/MS检测皮质醇的线性回归方程为Y=0.018 7X+0.043 4,r=0.999 8;线性范围为25~500 ng/mL。检出限为0.05 ng/mL。批内、批间变异系数(CV)分别为4%、6%。提取回收率为84.5%~90.4%。国际临床化学和检验医学联合会参考实验室外部质量评价计划(RELA)-A和RELA-B样本测定结果的偏移分别为3.19%和2.84%。结论建立的ID-LC-MS/MS方法的精密度、准确度、重现性均较好,结果准确,可用于临床实验室检测血清皮质醇。     

高效液相色谱-串联质谱法检测血清油酸及其在胰岛素抵抗中的应用

目的建立高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)检测血清油酸(OA),初步评估OA在2型糖尿病(T2DM)胰岛素抵抗(IR)中的作用。方法用OA-[~(13)C_5]作为同位素内标物,OA和OA-[~(13)C_5]的离子对分别为281.3/281.3和286.3/286.3。ZORBAX SB-Aq C18反相色谱柱,流动相A为超纯水,流动相B为甲醇乙腈(1∶1,v/v),梯度洗脱,流速0.3 mL/min。根据EP15-A3文件,考察精密度和正确度、线性范围、稳定性、携带污染率等性能以评价该方法的可靠性。选取临床确诊T2DM患者109例及体检健康者100例,用HPLC-MS/MS检测血清OA,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)评价IR,进一步分析OA与IR的关系。结果建立的检测OA的HPLC-MS/MS特异性好,在10～1 000μmol/L范围内线性关系良好,y=0.007 55x+0.004 83,r=0.997 7,定量限(LLOQ)为10μmol/L,批内不精密度(以变异系数CV表示)≤1.62%,实验室内CV≤1.73%,方法精密度较好,适合临床血清样品的测定。与健康人对照组血清OA水平(113.20±58.00)μmol/L比较,T2DM组血清OA水平(425.58±220.17)μmol/L升高,且对照组和T2DM组OA与HOMA-IR均呈正相关。以OA诊断IR的AUC为0.689,当根据约登指数确定cut-off值为235.8μmol/L时,敏感性为70.4%,特异性为63%;当OA联合FPG诊断IR时,AUC增至0.806,且与OA诊断IR的AUC比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论建立了科学、高效定量检测血清OA浓度水平的HPLC-MS/MS,为动态监测代谢性疾病人群OA含量的变化提供了可靠的方法。