女性生殖道念珠菌病病原体检测方法探讨

目的比较不同检验方法在女性生殖道念珠菌病诊断中的价值。方法收集门诊高度怀疑女性生殖道念珠菌病就诊者的阴道分泌物标本640例,分别采用直接真菌涂片法、实时荧光PCR定性法和念珠菌显色培养法进行检测,并以显色培养法为金标准对试验数据进行统计分析。结果直接真菌涂片阳性198例,实时荧光PCR定性检测结果真菌阳性296例,其中白色念珠菌234例,光滑假丝酵母菌39例,热带假丝酵母菌23例,白色念珠菌合并热带假丝酵母菌5例;显色培养法检测结果阳性287例,其中白色念珠菌229例,光滑假丝酵母菌36例,热带假丝酵母菌22例,白色念珠菌合并热带假丝酵母菌3例。三种方法检出率比较,直接真菌涂片法低于显色培养法和实时荧光PCR定性法(P0.05),实时荧光PCR定性法与显色培养法比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论直接真菌涂片检测虽然操作简单、快速,但漏检率高;念珠菌显色培养检出率高,但耗时长;实时荧光PCR定性法简单快速,特异性强,灵敏度高,检出率高,是女性生殖道念珠菌病诊断值得推广应用的首选方法。     

阴道分泌物真菌检测300例结果分析

目的:比较常规门诊镜检与培养两种方法对阴道分泌物真菌检测结果的相关性,了解阴道分泌物中常见真菌的种类。方法:选择性收集门诊常规镜检阴道分泌物300份,同时用珂玛嘉显色鉴别培养基做真菌培养,并将两者的结果进行卡方分析,对培养出的真菌做进一步的菌种鉴定。结果:常规镜检与培养两种方法的阳性率分别为68.7%和63.3%,两种方法检测的结果相互关联(!2=109.61)但不相等(!2=4.74)。阴道分泌物常见真菌的种类占前几位的分别为白色假丝酵母菌(64.2%)、热带假丝酵母菌(13.7%),假热带假丝酵母菌(5.8%),克柔假丝酵母菌(4.7%)。结论:在门诊,真菌涂片镜检仍应为首选。镜检与培养两种方法可以互相补充,但一种方法检出的阴性结果不能代表另一种方法。阴道分泌物中常见真菌以白色假丝酵母菌为主。     

常见病原真菌鉴定基因芯片方法的建立

目的 建立临床常见的病原真菌的基因芯片检测体系.方法 选取8种临床常见真菌,包括白色假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌、土曲霉、黄曲霉、米根霉和烟曲霉.根据真菌ITS区设计引物和探针,进行扩增和芯片制备.通过将待检真菌的PCR产物变性后与点布探针的芯片杂交,观察并分析荧光信号强度,进行对真菌的快速检测.并选取临床真菌阳性标本和细菌阳性标本共25份进行验证.结果 25份临床阳性标本的芯片检测结果显示,10份细菌阳性的标本,经真菌基因芯片检测,全部为阴性,无荧光信号.其余15份真菌标本中,12份临床真菌阳性标本均鉴定出芯片中的某一种真菌的结果.另外采用克柔假丝酵母菌人为制备的3份待检样本,经检测,芯片中8种真菌位点无荧光信号,为阴性,仅有真菌通用探针得到荧光信号,表明该标本中有真菌存在,但无法确认是哪一种.结论 本研究建立的基因芯片可对常见病原真菌进行快速准确的鉴定,为基因芯片应用于临床奠定了基础.     

69例假丝酵母菌的检测及耐药分析

目的 通过对本院患者假丝酵母菌的检测,以了解该菌属的检出率及耐药特点,为临床合理用药提供依据.方法 用显色培养基及芽管形成试验鉴定真菌;用ATB FUNGUS 2 INT试条对5-氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑及伊曲康唑进行药敏试验.结果 2006年5～11月,共分离出假丝酵母菌69例,其中白假丝酵母菌59例(85.5%),光滑假丝酵母菌和克柔假丝酵母菌各检出4例(11.6%),热带假丝酵母菌2例(2.9%).该菌属的检出分别是痰标本48例(69.6%),尿标本12例(17.4%),分泌物标本6例(8.7%),血液标本3例(4.3%).结论 69例假丝酵母菌中,白假丝酵母菌检出率最高,痰标本最多.4种假丝酵母菌对氟康唑的耐药率最高,两性霉素B的耐药率最低.     

天津市宝坻区医院酵母样真菌感染情况及药敏分析

目的研究该院患者酵母样真菌感染的种类分布及药敏情况,为临床选择抗真菌药物提供依据。方法分析该院2007~2008年间患者酵母样真菌培养阳性的种类分布及各自药敏情况。结果酵母样真菌阳性标本共342例,其中白色假丝酵母菌265例(77.49%),热带假丝酵母菌41例(11.99%),近平滑假丝酵母菌18例(5.26%),光滑假丝酵母菌15例(4.39%),季也蒙假丝酵母菌2例(0.58%),克柔假丝酵母菌1例(0.29%)。结论该院患者感染酵母样真菌以白色假丝酵母菌为首,痰标本阳性率最高,临床应给予关注,及时送检疑似真菌感染的标本,并合理使用抗真菌药。     

泌尿系患者真菌感染的病原学和耐药性研究

目的研究住院患者泌尿系真菌感染病原学特点及其耐药性,为泌尿系真菌感染的防治提供参考数据。方法通过对尿液标本细菌学检验和分离鉴定以及药敏试验,对该医院临床科室泌尿系感染患者尿液标本进行了检测与分析。结果该医院2010年度从28 804例住院患者的尿液标本中检出真菌492株,真菌检出率为1.71%;其中从4 042例中段尿中检出真菌484株,检出率为11.97%。尿液标本中真菌检出率最高的患者来自重症医学科,其次是泌尿科和神经外科。尿液标本检出的真菌中,以热带假丝酵母菌居首位,构成比为74.4%;其次为白色假丝酵母菌和光滑假丝酵母菌。居前3位的真菌中,以光滑假丝酵母菌耐药性最强。结论泌尿系感染患者采集中段尿真菌检出率最高,以热带假丝酵母菌为主,主要患者分布在重症医学科,以光滑假丝酵母菌耐药性最强。     

复发性外阴阴道假丝酵母菌病的病原菌鉴定与药敏分析

目的了解甘肃省民乐地区复发性外阴阴道假丝酵母菌病(RVVC)致病菌株的构成与常用抗真菌药物敏感情况。方法采集90例RVVC患者阴道分泌物标本接种假丝酵母菌显色培养基完成菌种培养鉴定,采用纸片扩散法进行真菌药敏试验。结果 90份分泌物标本培养阳性83份,阳性率为92.2%,共分离出86株假丝酵母菌,其中白假丝酵母菌62株(72.1%),光滑假丝酵母菌14株(16.3%),热带假丝酵母菌5株(5.8%),克柔假丝酵母菌3株(3.5%),其他假丝酵母菌2株(2.3%)。86株假丝酵母菌对伊曲康唑(95.3%)和制霉菌素(93.0%)的敏感率最高,其次为5-氟胞嘧啶(80.2%)和氟康唑(67.4%),对克霉唑(59.3%)和咪康唑(57.0%)较低。结论 RVVC病原菌以白假丝酵母菌为主,但优势明显下降,非白假丝酵母菌比率上升,尤以光滑假丝酵母菌明显。假丝酵母菌对临床常用抗真菌药物具有一定耐药性,特别是唑类药物。因此,在治疗RVVC前必须进行真菌培养和药敏试验,根据药敏试验结果选择合适的抗真菌药物治疗。     

检测阴道分泌物中β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶的临床应用评估

目的对化学法检测阴道分泌物中β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶的临床应用进行评估。方法在自动化仪器上用化学法检测200例患者阴道分泌物中β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶,同时对受检样本进行假丝酵母菌的培养鉴定。结果β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶阳性110例,阴性90例,培养出白色假丝酵母菌阳性69例。以培养法为标准,化学法检测阴道分泌物中白色假丝酵母菌的灵敏度、特异性、阳性预示值、阴性预示值分别为:62.3%、48.9%、39.0%、71.1%。结论化学法还不能作为检测阴道分泌物中白色假丝酵母菌阳性的过筛试验。     

医院内假丝酵母菌感染的菌种构成和耐药性分析

目的 分析医院内感染假丝酵母菌菌种构成和耐药性。 方法 对临床标本分离的酵母样真菌,用VITEK-Ⅱ(生物梅里埃公司)生化鉴定仪、API20c生化鉴定试纸条和念珠菌显色琼脂以及聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)方法进行酵母样真菌菌种的鉴定,应用ATB Fungus3 进行药敏试验。 结果 96株酵母样真菌,可分为6个种,包括白色念珠菌40株 (41.7%)、热带念珠菌36株 (37.5%)、光滑念珠菌13株 (13.54%)、近平滑念珠菌5株 (5.21%)、克柔念珠菌1株 (1.04%)、挪威念珠菌 1株(1.04%)。各种假丝酵母菌对5种抗真菌药呈现不同的敏感性,对两性霉素B和5-氟胞嘧啶的敏感率为100%,而对氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑则表现出一定的耐药性。 结论 基因间隔转录区分子生物学分析结合传统培养和生化方法,可有效提高假丝酵母菌鉴定的准确性。本研究结果提示医院内非白假丝酵母菌感染有增多趋势。重症监护病房(intensive care unit, ICU)是重要的假丝酵母菌来源科室。60岁以上的老龄患者是医院内真菌感染的高危人群。体外药敏试验提示部分假丝酵母菌出现了唑类药物(氟康唑和伊曲康唑)的耐药性。     

白色念珠菌感染分布及敏感性分析

目的分析引起医院感染常见白色念珠菌的临床分布及其药敏特点,为临床抗真菌药物的合理使用提供依据。方法从某三甲医院2007年9月至2008年12月各种标本中分离到497株真菌,用ATB Expression仪器和其配套使用的板条进行细菌鉴定及药敏测试,并对结果进行分析。结果 497株酵母菌以假丝酵母菌为主,占前3位比例分别为白色念珠菌54.3%(270/497)、热带念珠菌18.5%(92/497)、光滑念珠菌6.2%(31/497);假丝酵母菌对5-氟胞嘧啶、两性霉素B、伊曲康唑、氟康唑、伏立康唑的敏感率分别为96.7%、94.4%、93.8%、86.8%、84.6%。结论真菌感染患者主要集中分布在呼吸内科、消化内科、重症监护病房、肿瘤科、心内科等;引起真菌感染的真菌以白色假丝酵母菌均为主,其次是热带假丝酵母菌和光滑假丝酵母菌,假丝酵母菌对5-氟胞嘧啶、两性霉素B敏感率较高,对氟康唑、伊曲康唑产生了较强的耐药性。     

纸片法在检测念珠菌药物敏感性中的应用

目的探讨纸片法在临床念珠菌药敏检测中的应用价值。方法采用法国科玛嘉念珠菌显色培养基和生物梅里埃公司Vitec 32进行念珠菌菌种鉴定,用纸片法进行药物敏感性测定。结果临床感染念珠菌菌种分别为白色念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、克柔假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌和急落假丝酵母菌,对两性霉素B、酮康唑、氟康唑、伊曲康唑和氟胞嘧啶5种抗霉菌药,上述念珠菌的耐药率分别为:白色念珠菌:0、0、0、0、1.8%,光滑念珠菌和热带念珠菌均无耐药菌株,克柔假丝酵母菌:33.3%、33.3%、66.7%、33.3%和66.7%,近平滑假丝酵母菌无耐药菌株,皱落假丝酵母菌:100%、0、0、0、0。结论显色培养基鉴定念珠菌具有快速、准确的优点,纸片法具有操作简单、成本较低、结果可靠的优点,在临床念珠菌的鉴定和药敏试验中具有良好的应用前景。     

126株获得性感染假丝酵母菌分布特点及耐药分析

目的研究医院内获得性假丝酵母菌感染特点,观察临床分离的假丝酵母菌分布及其耐药性。方法通过对临床标本分离培养和菌种鉴定方法,对医院内获得真菌感染患者的标本进行了检测。结果共分离出126株假丝酵母菌均来自病人血液标本,其中白色假丝酵母菌74株(58.70%),其余分别为光滑假丝酵母菌24株、热带假丝酵母菌13株、近平滑假丝酵母菌12株和其它假丝酵母菌6株。临床分离的假丝酵母菌除对氟康唑耐药率达到58.90%之外,对其他抗真菌药物耐药率较低。结论医院内获得性假丝酵母菌感染主要是白假丝酵母菌,均分离自血液标本,提示需要监测真菌耐药性发展趋势。     

胶体金法联合涂片镜检法在诊断外阴阴道假丝酵母菌病中的应用

目的探讨胶体金法联合涂片镜检法检测假丝酵母菌的临床诊断价值。方法对280例外阴阴道假丝酵母菌病患者的白带标本同时进行真菌培养、胶体金法和涂片镜检法检测,以真菌培养作为诊断金标准对胶体金法和涂片镜检法的阳性检出率进行比较研究。结果 280例真菌培养阳性标本中,胶体金法和涂片镜检阳性检出率分别为68.93%和56.07%,胶体金法显著高于涂片法(P0.005),两种方法联合检测阳性率可达到79.96%。结论胶体金法的阳性检出率高于涂片镜检法,两法联合使用可明显提高检出率,能为临床提供便捷、可靠的诊断依据。     

Sysmex UF-1000i尿流式分析仪检测住院患者尿标本类酵母菌的临床评价

目的评价Sysmex UF-1000i尿流式分析仪检测尿标本类酵母菌的分析性能。方法应用尿流式分析仪检测我院住院患者尿标本,对仪器检测类酵母菌阳性尿标本进行镜检、培养鉴定;同时随机选择同期仪器检测阴性标本作对照。结合临床,判断患者尿路类酵母菌定植或感染。结果 2010年10月-2010年12月间共检测6019份尿标本,尿流式分析仪检测类酵母菌阳性127份,经培养证实82份为真阳性。同期仪器检测阴性标本121份中有12份培养阳性。以培养作为金标准,尿流式分析仪分析尿中类酵母菌试验敏感性为87.23%、特异性为70.78%、准确度为77.02%、阳性预测值为64.57%,阴性预测值为90.08%。菌种前三位的是以光滑念珠菌(43.40%)、白念珠菌(21.69%)、热带念珠菌(14.15%)。阿萨希毛孢子菌也存在一定比例(5.66%)。尿中类酵母菌真阳性患者多数患有多种基础疾病,以2型糖尿病(25.61%)、慢性泌尿系统疾病(18.29%)和颅脑脊髓损伤(17.07%)为主;实施的医疗措施以抗细菌药物(52.44%)、留置导尿管(35.37%)多见(P<0.05)。尿流式分析仪检测阴性而培养阳性12例患者均为尿路念珠菌定植。尿流式分析仪检测阳性并且培养阳性82例患者中,69例(84.15%)为类酵母菌尿路定植;13例(15.85%)为尿路感染,其中1(1.22%)例发展为热带念珠菌血症。结论 Sysmex UF-1000i尿流式分析仪对尿标本类酵母菌有较强的筛查价值。实验室应对仪器类酵母菌检测阳性标本进行镜检后确认。临床医师应对类酵母菌检测阳性患者结合其临床表现,采取不同的治疗措施。     

荧光染色在鼻窦真菌快速诊断中的应用评价

目的评价荧光染色在快速诊断真菌性鼻-鼻窦炎中的应用效果。方法对96例2017年7月至2018年4月首都医科大学附属北京同仁医院临床诊断为真菌性鼻-鼻窦炎的患者术中留取少量真菌团块组织,拉片制成薄层涂片,滴适量荧光染料,加盖玻片,室温放置5 min,在荧光显微镜下从低倍至高倍观察真菌结构。常规进行乳酸酚棉蓝染色及1.79 mol/L KOH湿片处理,以真菌培养结果作为金标准。真菌培养阴性、镜检阳性的样本提取核酸通过ITS序列扩增,进行真菌成分的分子检测。结果荧光染色、乳酸酚棉蓝染色、1.79 mol/L KOH湿片标本一次镜检阳性率分别为95.83%(92/96),93.75%(90/96)及91.67%(88/96),差异无统计学意义;涂片阴性标本再次涂片染色镜检,除1.79 mol/L KOH漏检2例外,荧光及乳酸酚棉蓝染色均可捕捉到真菌结构。培养阳性的65例标本,荧光着色理想,可见清晰的真菌结构,尤其对曲霉菌属与暗色真菌属菌丝区分良好,直接荧光染色拟诊与培养结果一致。有3例经乳酸酚棉蓝染色及1.79 mol/L KOH湿片观察到特征性顶囊结构及分生孢子判断为烟曲霉及链格孢属,结果与培养一致,而荧光染色此类结构着色不清。31例镜检阳性、培养阴性的样本分子检测结果显示,黄曲霉9例、烟曲霉3例、杂色曲霉1例、产黄青霉1例、链格孢霉属2例、尖端赛多孢1例、近平滑假丝酵母菌1例,13例样本为阴性结果。结论荧光染色法可用于鼻窦真菌的快速拟诊,但在观察真菌特征性产孢及产色素结构上,与常规方法相比并无显著优势。     

荧光定量PCR定量检测5种假丝酵母菌方法的建立

目的建立并评价从血液标本中检测5种假丝酵母菌的荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法。方法以5种假丝酵母菌共有的高度保守序列为靶序列,设计特异引物和探针进行检测,优化定量PCR体系,并进行方法学评价。结果建立的荧光定量PCR方法,其线性范围为101~109CFU/m L;灵敏度为5 CFU/m L;批内和批间CV值均5%;对19份模拟血液标本进行检测,其中分别含有5种假丝酵母菌的标本均为阳性,而分别含有常见血液感染曲霉菌和细菌的检测结果均为阴性。结论建立的检测血中假丝酵母菌荧光定量PCR方法快速、准确,结果可靠,可对常见的临床血液感染假丝酵母菌进行定量检测。     

痰真菌培养与涂片镜检在下呼吸道感染实验诊断中的应用

目的通过对呼吸道标本真菌培养与涂片镜检结果的比较分析,评价其在下呼吸道真菌感染实验诊断中的应用价值。方法常规收集临床送检呼吸道标本620例进行真菌培养及鉴定与涂片镜检,比较其结果并结合患者临床资料进行分析。结果620例呼吸道标本中,真菌培养阳性201例,阳性率为32．4％,其中白色念珠菌164例,占培养阳性的81．6％,其次是光滑念珠菌及热带念珠菌;曲霉菌4例,占培养阳性的2．2％。涂片镜检阳性133例,其中,查见真菌孢子及菌丝81例,占镜检阳性的60．9％,查见真菌孢子未见菌丝49例,占镜检阳性的36．8％,仅查见菌丝3例。结论真菌培养及鉴定有助于确定其种类,但耗时较长,且容易受到上呼吸道定植真菌的干扰。真菌涂片镜检操作简便、快速,尤其是查见大量孢子及菌丝时对临床快速确定下呼吸道真菌感染具有重要意义,提示临床送检呼吸道标本作真菌培养及鉴定时应同时作真菌涂片镜检。     

深部标本真菌检查结果回顾性分析

目的了解近三年的深部标本真菌病原谱及流行性特征。方法收集2016年1月至2019年12月深部标本真菌检查2703例,从真菌阳性的标本类型、科室分布、菌种分布等方面进行回顾性分析。结果呼吸内科为院内深部标本真菌检查阳性最多的科室,其次为干部病房、心内科。直接镜检阳性标本904例(33.44%),真菌培养阳性标本1424例(52.68%);标本类型以痰标本占比最多,尿液、咽拭子和粪便次之;菌种分布以念珠菌属为主,其次为曲霉属,其中白念珠菌占比最高(70.44%),热带念珠菌(9.48%)和光滑念珠菌(7.23%)次之,烟曲霉占比5.27%。结论白念珠菌为深部真菌检查的主要病原菌,呼吸内科为深部真菌感染防治的重点科室,直接镜检在深部标本真菌检查中尤为重要。     

急诊病房下呼吸道感染患者各类标本细菌培养及药敏分析

目的:了解我院急诊病房收治的下呼吸道感染患者的病原菌及耐药状况。方法:回顾性分析2015-01—2018-12期间我院急诊病房收治的316例下呼吸道感染患者,痰、血、尿、创面分泌物、中心静脉导管等标本培养的591株细菌及药敏状况。结果:①细菌谱以革兰氏阴性菌为主(65.65%),其次是革兰氏阳性菌(24.70%)和念珠菌(热带假丝酵母菌、白色假丝酵母菌、光滑念珠菌和近平滑假丝酵母菌)(9.65%)。②痰标本培养细菌主要有鲍曼不动杆菌106株、铜绿假单胞菌67株、MRSA65株、肺炎克雷伯菌34株和嗜麦芽窄食单胞菌22株;血标本培养细菌主要有大肠埃希菌31株、肺炎克雷伯菌4株、屎肠球菌3株、鲍曼不动杆菌2株、铜绿假单胞菌2株、MRSA2株和奇异变形杆菌2株;尿标本培养细菌主要有热带假丝酵母菌23株、大肠埃希菌22株、白色假丝酵母菌17株、屎肠球菌12株和铜绿假单胞菌10株;创面分泌物标本细菌培养主要有奇异变形杆菌6株、铜绿假单胞菌4株、大肠埃希菌4株、鲍曼不动杆菌3株和粪肠球菌3株;中心静脉导管标本细菌培养仅有洋葱伯克霍尔德菌1株。③24例住院日超过30 d病例痰、血、尿、创面分泌物等标本培养细菌83株,其中革兰氏阳性菌20株,革兰氏阴性菌53株,念珠菌(热带假丝酵母菌、白色假丝酵母菌、光滑念珠菌和近平滑假丝酵母菌)10株;63例死亡病例痰、血、尿、创面分泌物等标本培养细菌131株,其中革兰氏阳性菌30株,革兰氏阴性菌89株,念珠菌(热带假丝酵母菌、白色假丝酵母菌、光滑念珠菌)12株;44例使用有创呼吸机病例痰标本培养细菌93株,其中革兰氏阳性菌19株,革兰氏阴性菌73株,白色假丝酵母菌1株。④主要革兰氏阴性菌中鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌等对亚胺培南、美罗培南、头孢他啶、头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦、环丙沙星、左氧氟沙星耐药率较高;主要革兰氏阳性菌中MRSA、屎肠球菌、粪肠球菌均未见万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺耐药株。结论:急诊病房下呼吸道感染患者的病原菌以革兰氏阴性菌为主,多重耐药菌占比高。临床医师应注意重点分析痰标本培养的细菌是定植菌还是致病菌,规范抗菌药物使用,加强耐药监测。     

实验室检查对阴道假丝酵母菌病的诊断价值

目的探讨实验室检查在阴道假丝酵母菌病中的诊断价值。方法对318例女性患者阴道分泌物进行了湿片法检查和革兰染色显微镜检查,并对阴道分泌物、宫颈分泌物及粪便分别进行了假丝酵母菌培养。结果其中89例患者阴道分泌物假丝酵母菌阳性。89例阴道假丝酵母菌阳性者,几乎全部存在肠道菌群失调。革兰染色镜检阴道分泌物的阳性率与培养法阳性率相比无统计学意义(P>0.05),但个别标本间两法阳性率存在差异。结论阴道分泌物革兰染色镜检与培养法联合检查,可大大提高假丝酵母菌的检出率。研究结果提示合理地应用和选择抗生素,能降低阴道假丝酵母菌的感染。