1,25-(OH)_2D_3通过NF-κB通路对小鼠溃疡性结肠炎的影响

目的研究1,25-(OH)2D3对小鼠溃疡性结肠炎中核转录因子κB(nulear factor-κB,NF-κB)家族的影响,探讨其在小鼠溃疡性结肠炎中的作用。方法 6w龄雌性C57BL/6小鼠36只,随机分为正常对照组,溃疡性结肠炎模型组,1,25-(OH)2D3低、高剂量干预4组,除对照组外其余三组分别用葡聚糖硫酸钠(DSS)对小鼠进行溃疡性结肠炎造模,9d后处死小鼠,取血清和结肠组织。根据小鼠一般情况进行疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分,观察小鼠结肠大体形态和病理学损伤情况,对其进行组织病理学评分。酶联免疫吸附法(ELISA)法检测小鼠血清TNF-α、IL-6含量,免疫组化测定结肠组织磷酸化IκB激酶β(phosphorylated inhibitor of nuclear factor kappa-B kinaseβ,p-IKKβ)、磷酸化核转录因子κB抑制蛋白α(phosphorylated inhibitor of NF-κB,p-IκB)、NF-κBp65蛋白表达情况。结果与DSS模型组比较,1,25-(OH)2D3干预组结肠组织IKKβ磷酸化减少,IκBα降解明显降低,NF-κB活化减少,小鼠血清TNF-α、IL-6含量下降,小鼠溃疡性结肠炎大体形态改善,组织学损伤较轻。结论 1,25-(OH)2D3可以通过抑制NF-κB通路,对小鼠溃疡性结肠炎起保护作用。     

1,25-(OH)_2D_3和全反式视黄酸联合应用对溃疡性结肠炎小鼠TREG细胞Foxp3表达的影响

目的探讨1,25-(OH)2D3和全反式视黄酸(all-trans retinoic acid,ATRA)联合应用对溃疡性结肠炎小鼠Treg细胞Foxp3蛋白及其相关细胞因子的表达和血钙、肌酐水平的影响。方法 6w龄雌性C57BL/6小鼠50只,随机分为正常对照组(CN),溃疡性结肠炎模型组(model,M),1,25-(OH)_2D_3干预,全反式视黄酸(ATRA)干预,1,25-(OH)_2D_3+ATRA联合干预共5组,除CN组外,其余4组随意饮3%糖酐酯(DSS)溶液建立溃疡性结肠炎模型,从造模D3开始干预,干预剂1,25-(OH)_2D_3和ATRA分别用花生油溶解(后者需在暗光下进行),干预剂量1,25-(OH)_2D_3100ng(d/capita),ATRA 0.2 mg(d/capita),1,25-(OH)_2D_3+ATRA(100ng/d+0.2mg/d)每天对应灌胃干预,9d后处死小鼠,取血清和结肠组织。按小鼠一般情况进行疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分;测量结肠长度;观察结肠大体形态和病理学损伤情况,并对其进行组织病理学评分;生物化学方法检测小鼠结肠髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性和血清钙、肌酐水平;免疫组化法测结肠组织Foxp3、TGF-β、IL-10蛋白表达情况。结果与M组比较,三个干预组小鼠溃疡性结肠炎大体形态改善,组织学损伤较轻,结肠长度缩短有所缓解,结肠组织MPO活性下降,Foxp3蛋白及其相关细胞因子TGF-β、IL-10表达水平上升,血钙和肌酐水平下降。且联合干预组相比单独干预组效果更明显,差异具有统计学意义(除血钙)。结论 1,25-(OH)_2D_3和全反式视黄酸(ATRA)联合应用能够增强Treg细胞Foxp3的表达,使Treg细胞更好地发挥抑制免疫应答的作用,并可能缓解1,25-(OH)_2D_3引起的血钙升高,改善肾功能。     

全反式视黄酸与1,25-(OH)_2D_3联合应用对溃疡性结肠炎小鼠Th17相关细胞因子作用的实验研究

目的研究全反式视黄酸(all-trans retinoic aciol,ATRA)与1,25-(OH)_2D_3联合作用对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎小鼠辅助性T细胞17(Thelper17cells,Th17)细胞相关因子表达的影响。方法 50只6周龄雌性SPF级C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、ATRA组、1,25-(OH)_2D_3组与ATRA+1,25-(OH)_2D_3联合组。对照组饮用蒸馏水,其余组饮用3.0%DSS溶液造模。造模第3天起对3个干预组分别灌胃给予0.2mg/d/只ATRA或/和100ng/d/只1,25-(OH)_2D_3。第9天处死小鼠,取结肠组织,进行大体形态学评分;HE染色进行组织病理学评分;免疫组织化学法检测结肠IL-17、IL-23表达;ELISA测定结肠维甲酸相关核孤儿受体γt(retinoid acid receptor related orphan receptors,RORγt)、IL-6和TGF-β表达。采用单因素方差分析进行组间比较,采用析因设计方差分析判断两因素联合是否有交互作用。结果3个干预组与模型组比较,疾病活动指数(disease activity index,DAI)、大体形态和组织病理学评分均降低,IL-17、RORγt,IL-23及IL-6表达量下降,ATRA+1,25-(OH)_2D_3联合干预组效果更显著(P0.05)。结论联合应用ATRA和1,25-(OH)_2D_3能更有效地抑制Th17相关因子的表达,减轻炎症,缓解结肠炎症状。     

维生素C与维生素D_3联合应用对葡聚糖硫酸钠造模的豚鼠溃疡性结肠炎的改善作用

目的探讨补充维生素D_3(vitamin D_3,VD_3)的同时补充维生素C(vitamin C,VC)是否可以促进维生素D_3活性形式1,25-(OH)_2D_3的生成,从而改善豚鼠溃疡性结肠炎。方法雄性Dunkin-Hartley豚鼠56只,按体重随机分为对照组、低剂量VD_3低剂量VC组、低剂量VD_3中剂量VC组、低剂量VD_3高剂量VC组、高剂量VD_3低剂量VC组、高剂量VD_3中剂量VC组、高剂量VD_3高剂量VC组共7组。维生素D_3和维生素C干预7周后,除对照组外,其余6组自由饮用3%葡聚糖硫酸钠溶液3 d,建立溃疡性结肠炎的模型。造模期间进行疾病活动指数评分,造模结束后取豚鼠血清和结肠组织进行指标检测:ELISA方法检测豚鼠血清中25(OH)D_3、1,25-(OH)_2D_3、钙离子、血清碱性磷酸酶、肿瘤坏死因子α水平;生化法检测结肠组织中髓过氧化物酶活性。结果当维生素D_3水平一定时,豚鼠疾病活动指数评分、髓过氧化物酶活性和肿瘤坏死因子α水平随维生素C的增高明显降低,25(OH)D_3、1,25-(OH)_2D_3水平明显增高,血清碱性磷酸酶和血清钙增高。结论维生素C和维生素D_3联合应用可以改善豚鼠溃疡性结肠炎,可能的机制是维生素C促进维生素D_3活性形式的生成。     

维生素D_3联合抗坏血酸对豚鼠结肠炎的改善作用

目的探讨维生素D_3(VD_3)联合抗坏血酸(VC)对豚鼠溃疡性结肠炎的作用。方法将40只雄性豚鼠按体质量随机分为5组,每组8只:正常组[N,120mg VC+2.8μg VD_3/(kg·d)]、模型组[M,120mg VC+2.8μg VD_3/(kg·d)]、高VC低VD组[HCLD,240mg VC+1.4μg VD_3/(kg·d)]、中VC低VD组[MCLD,120mg VC+1.4μg VD_3/(kg·d)]和低VC低VD组[LCLD,8mg VC+1.4μg VD_3/(kg·d)]。每组均进食缺乏VD和VC的特殊饲料,采用改良的豚鼠灌胃方法给予各组相应剂量的VD_3和VC。灌胃7w后,N组继续饮用蒸馏水,其他4组饮用3%葡聚糖硫酸钠溶液3d,造模期间,灌胃情况同前。结果 N组体质量、粪便和精神状态正常,评分明显低于其他4组,血清中25-(OH)D_3、1,25-(OH)_2D_3显著升高,C反应蛋白(CRP)、白介素-6(IL-6)和核转录因子κB(NF-κB)明显降低;与LCLD组相比,HCLD组大体形态改善,组织学损伤较轻,疾病活动指数评分较低,血清中25-(OH)D_3、1,25-(OH)_2D_3显著升高,CRP、IL-6和NF-κB明显降低;M组评分显著低于LCLD组,其25-(OH)D_3、1,25-(OH)_2D_3显著高于LCLD组,CRP、IL-6和NF-κB较HCLD、MCLD和LCLD组明显降低,且均有统计学意义(P0.05)。结论维生素D_3缺乏时,较高剂量的VC对豚鼠溃疡性结肠炎的防治效果更明显。     

HMGB1/TLR2/NF-κB在溃疡性结肠炎小鼠结肠组织中的表达及意义

目的 探讨HMGB1/TLR2/NF-κB在溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠组织中的表达及作用机制.方法 BALB/C小鼠随机分为正常对照组及模型组,每组12只;正常对照组不造模,模型组用恶唑酮(OXZ)灌肠复制UC模型.观察两组实验小鼠体质量变化、大体及组织病理学改变;RT-PCR检测结肠组织HMGB1mRNA的表达变化;免疫组织化学和流式细胞术检测结肠组织中HMGB1、TLR2、NF-κB蛋白的表达变化.结果 与正常对照组小鼠相比,模型组小鼠出现不同程度的腹泻和便血,结肠黏膜明显充血、水肿,可见较大溃疡病灶;模型组小鼠结肠组织中HMGB1mRNA及蛋白表达升高,主要位于细胞浆和细胞外;模型组小鼠结肠组织TLR2和NF-κB蛋白表达亦明显升高;HMGB1蛋白与TLR2蛋白表达呈显著正相关(r=0.81,P＜0.01);TLR2蛋白与NF-κB蛋白表达呈显著正相关(r=0.78,P＜0.01).结论 HMGB1在小鼠溃疡性结肠炎中的致炎作用可能部分通过结合其受体TLR2,激活NF-κB信号途径而实现的.     

抗坏血酸联合维生素D_3对豚鼠体内1,25-(OH)_2D_3水平和溃疡性结肠炎影响

目的探讨抗坏血酸(AA)联合维生素D_3(VD_3)对豚鼠体内1,25-(OH)_2D_3水平和溃疡性结肠炎(UC)的影响。方法随机将32只豚鼠按体重分为4组,每组8只,对照组(120 mg AA+2.8μg VD_3/kg)、模型组(120 mg AA+2.8μg VD_3/kg)、高、低剂量AA组(240 mg AA+2.8μg VD_3/kg、8 mg AA+2.8μg VD_3/kg);每组豚鼠均进食不含AA和VD的特殊饲料,7W后,对照组豚鼠继续饮用蒸馏水,其他3组豚鼠自由饮用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液,3 d后处死豚鼠,检测相关指标。结果与对照组比较,模型组豚鼠结肠DAI评分、大体形态评分和组织病理学评分升高,血清25-(OH)D_3、1,25-(OH)_2D_3水平降低,肝脏CYP2R1和肾脏CYP27B1表达下降,血清IL-6和TNF-α水平[分别为(80.21±6.22)、(174.08±11.04)ng/m L]升高;与模型组比较,低剂量AA组结肠DAI评分和大体形态评分升高,血清25-(OH)D_3水平降低,血清IL-6和TNF-α水平[分别为(93.23±4.76)、(208.46±14.15)ng/m L]升高;与低剂量AA组比较,高剂量AA组结肠DAI评分和大体形态评分下降,血清25-(OH)D_3、1,25-(OH)_2D_3水平升高,肝脏CYP2R1和肾脏CYP27B1表达升高,血清IL-6和TNF-α水平[分别为(75.20±3.85)、(167.83±11.85)ng/m L]降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 AA在适宜范围内能够促进VD_3更充分地羟化为活性形式1,25-(OH)_2D_3,AA联合VD_3对DSS诱导的豚鼠UC具有一定干预作用。     

哮喘小鼠肺内HMGB1及TLR2的表达及1,25-(OH)_2D_3的干预作用

目的观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)及Toll样受体2(TLR2)在哮喘小鼠肺内的表达,及1,25-二羟基维生素D3(1,25-(OH)_2D_3)对二者表达的影响。方法将30只BALB/c小鼠随机分为3组:对照组、哮喘组和干预组,应用HE染色方法观察各组小鼠肺组织形态学改变,并测定相同级别支气管气道壁厚度,免疫组化法观察HMGB1、TLR2的表达,RT-PCR方法测定各组小鼠肺内HMGB1mRNA及TLR2mRNA的表达。结果哮喘组小鼠肺内HMGB1及TLR2的表达均高于对照组,干预组二者的表达明显低于哮喘组,差异均有统计学意义(P0.05);哮喘组气道壁厚度高于对照组及干预组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 HMGB1和TLR2参与了哮喘的发病过程;1,25-(OH)_2D_3能抑制HMGB1及TLR2在哮喘小鼠肺内的表达,且在具有抑制哮喘小鼠气道重塑的作用。     

健康及溃疡性结肠炎模型豚鼠维生素D和维生素C的交互作用

目的探讨不同维生素D(vitamin D,VD)和维生素C(vitamin C,VC)干预水平在健康及溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型豚鼠VD羟化产物(25(OH)D_3、1,25(OH)_2D_3)和相关羟化酶mRNA水平上是否存在交互作用。方法将雄性Dunkin-Hartley豚鼠72只,随机分为健康组和UC模型组各36只,2组又按照VC干预3个水平[10、100、200 mg/(kg·d)]×VD干预2个水平[0.25、5μg/(kg·d)]随机分为6小组。各小组给予不同水平VD和VC灌胃干预5周后,UC模型组给予2%葡聚糖硫酸钠(DSS)自由饮用4 d进行造模,处死豚鼠,取血清和肝肾组织。检测血清25(OH)D_3、1,25 (OH)_2D_3、肝脏CYP2R1、CYP27A1及肾脏CYP27B1、CYP24A1 mRNA的表达水平。结果健康豚鼠中,血清1,25(OH)_2D_3和肾脏CYP24A1 mRNA在不同VD和VC干预水平之间存在交互作用(P0.05);UC模型豚鼠中,在肝脏CYP27A1和肾脏CYP24A1 mRNA方面,不同VD和VC干预水平之间存在交互作用(P0.05)。结论 VC和VD的交互作用主要影响健康豚鼠VD在肾脏的第二次羟化。     

1,25(OH)_2D_3调控内质网稳态改善自发性糖尿病大鼠心肌损伤

目的探讨1, 25(OH)_2D_3补充改善ZDF大鼠心肌损伤的潜在机制。方法健康雄性5～6 w龄Zucker瘦型鼠为正常对照组(C),胖型鼠按照体质量随机分为模型组(DM)、1, 25(OH)_2D_3低(DM+VD(L))、VD中(DM+VD(M))、高(DM+VD(H))剂量干预共4组。各组大鼠喂养至12 w龄,检测血糖血脂、心脏损伤及心肌细胞内质网应激相关指标。结果 DM组血脂、血糖显著升高,心肌出现严重损伤,内质网应激/未折叠蛋白反应标志蛋白GPR78显著降低,IRE1α-XBP1通路受阻;不同剂量1, 25(OH)_2D_3干预对ZDF大鼠血脂血糖及心肌损伤均有改善,其中、高剂量改善作用更为显著。1,25(OH)_2D_3低剂量干预未能显著改善ZDF大鼠未折叠蛋白反应的失活,1,25(OH)_2D_3中高剂量干预激活IRE1α-XBP1通路恢复内质网的稳态调节,中剂量的改善作用优于高剂量。结论适量的1,25(OH)_2D_3可通过IRE1α-XBP1通路调节内质网稳态,从而减轻糖尿病心肌损伤。[营养学报,2019,41(1):58-62]