抗癌药物诱导人B淋巴细胞白血病细胞的凋亡及周期特异性

目的探讨抗癌药物对人Ｂ淋巴细胞白血病细胞株Ｎａｌｍ－６细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）的影响及周期特异性。方法临床常用的抗癌药物与Ｎａｌｍ－６细胞相互作用８～２４小时后,利用低倍体ＤＮＡ－ＦＣＭ测定法和ＴｄＴ测定＋ＤＮＡ染色法进行检测。结果ＡＤＲ、ＶＰ１６、ＣＰＴ、ＭＴＸ和Ａｒａ－Ｃ能明显诱导细胞凋亡,主要作用于Ｓ期。ＣＰＭ、６ＭＰ和ＰＲＤ则有较低的凋亡细胞诱导率,ＣＰＭ在大剂量时主要引起细胞坏死。６ＭＰ诱导Ｇ１和Ｓ期细胞凋亡,ＰＲＤ诱导Ｇ１期细胞凋亡,ＣＰＭ诱导凋亡作用无明显的周期特异性。结论抗癌药物能诱导人Ｂ淋巴白血病细胞株Ｎａｌｍ－６细胞凋亡。低倍体ＤＮＡ－ＦＣＭ测定法能检测细胞的凋亡率,ＴｄＴ测定＋ＤＮＡ染色法能呈现凋亡细胞与细胞周期的关系。临床上可利用此两种方法检测肿瘤细胞的凋亡率,抗癌药物的疗效及其周期特异性。从而有助于化疗方案的设计及预后的评估。     

银环蛇毒素对白血病K562细胞株凋亡诱导作用的研究

目的 探讨银环蛇毒素及其若干组分在体外对白血病K562细胞株的凋亡诱导作用。方法 采用阳离子交换层析法分离纯化银环蛇粗毒，应用MTT法、荧光显微镜和流式细胞术等研究毒素对K562细胞株的凋亡作用。结果 除Ⅳ峰毒素外，银环蛇粗毒及分离的部分组分IV峰、Ⅶ峰和Ⅷ峰等毒素的荧光显微图末见特征性的凋亡小体，DNA含量分布组方图中的二倍体峰前末见Gl细胞群。结论 银环蛇毒对K562细胞具有杀伤作用，但并非是细胞凋亡作用，而是致细胞坏死，而粗毒中的某些组分可能具有促K562细胞凋亡作用。     

CIK细胞对乳腺癌细胞株抗增殖及诱导凋亡的作用

目的研究多种细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine-inducedkillcells,CIK)对ZK-75-1乳腺癌细胞株的抗增殖和诱导凋亡作用,并探讨其作用机制。方法应用MTT法检测CIK细胞对ZK-75-1乳腺癌细胞株的抗增殖作用的影响及细胞毒活性;通过倒置显微镜、HE染色、透射电镜观察凋亡细胞的形态学改变。结果MTT比色法表明随着CIK细胞与乳腺癌细胞效靶比增加及作用时间延长,抑制率明显增强(P<0.01)。CIK细胞作用于乳腺癌细胞24h后,形态学观察乳腺癌细胞发生凋亡或坏死。结论CIK细胞是一种新型高效具有较强杀伤体外乳腺癌细胞的免疫活性细胞。     

紫杉醇对人胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响

目的:研究紫杉醇(PTX)对人胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响,并与丝裂霉素(MMC)、阿霉素(ADM)、五氟尿嘧啶(5-FU)进行比较,阐明PTX对人胃癌细胞SGC-7901抑制作用及诱导凋亡的特点。方法:MTT比色法测定PTX、MMC ADM、5-FU对人胃癌细胞SGC-7901生长增殖的影响。流式细胞仪检测PTX、MMC ADM、5-FU诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡周期各期比例和凋亡率的影响。结果:PTX对人胃癌细胞SGC-7901抗增殖作用的强度随药物浓度增加而加强;随时间延长而加强;呈现时间和剂量双效应。在PTX、MMC、ADM、5-FU的Cmax浓度时,抑制率分别为(22.43%、20.53%、19.68%、16.32%),PTX与MMC抑制率相当(P>0.05),比ADM、5-FU高(P<0.05),在低浓度时(0.01 Cmax),抑制率分别为(7.32%、1.02%、1.34%、1.65%),PTX有较高抑制率,且明显高于其他三种药物(P<0.01)。人胃癌细胞SGC-7901在PTX作用后首先表现为G2/M期阻滞,并在G1峰前出现凋亡峰(AP峰),随着G2/M期细胞的减少,AP峰逐渐增多。PTX对人胃癌细胞SGC-7901的凋亡诱导作用呈剂量依赖性和时间依赖性,对不同浓度PTX、MMC、ADM、5-FU诱导的细胞凋亡率进行统计学分析,发现PTX、MMC、ADM、5-FU诱导的人胃癌细胞SGC-7901随浓度的增加而增加,低浓度时增加较快。结论:PTX能有效抑制体外肿瘤细胞增殖,并随药物浓度、时间增加而增强。PTX能诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡,并显示剂量、时间依赖效应。     

维甲酸对胃癌细胞生长抑制及凋亡的诱导作用

目的:研究9-顺-维甲酸(9-cis-RA)对人胃低分化黏液腺癌细胞(MGC80-3)的作用。方法:MTT比色法观察9-cis-RA对MGC80-3细胞株的生长抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态变化,Hoechst33342/PI双荧光染色和DNA凝胶电泳技术分析细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期的改变。结果:9-cis-RA可抑制MGC80-3细胞生长,半数抑制浓度(IC50)为8·07×10-6mol/L;显微镜观察可见细胞凋亡特征性改变;10-5mol/L浓度的9-cis-RA药物作用后96h可明显诱导MGC80-3细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳检测到DNA梯带;流式细胞仪检测肿瘤细胞出现典型亚二倍体凋亡小峰,G0/G1期细胞百分率明显升高,由对照组的(61·5±2·2)%增加到(74·3±4·7)%,F=149·795,P=0·000;同时处于S期的细胞数减少,由对照组的(26·3±1·3)%减少到(17·2±1·4)%,F=143·936,P=0·000。细胞周期出现G1期阻滞。结论:9-cis-RA对MGC80-3细胞有明显的生长抑制和诱导凋亡作用。     

三氧化二砷对人食管癌细胞株凋亡的诱导作用

目的研究三氧化二砷对人食管癌细胞株凋亡的诱导作用。方法癌细胞株Ｅ８７１２和ＥＣ１７１贴壁生长,在电镜观察的基础上,用碘化丙啶（ＰＩ）染色和ＴＵＮＥＬ将凋亡细胞反映在流式细胞仪（ＦＣＭ）上。结果经三氧化二砷２μｍｏｌ／Ｌ作用后,电镜下见部分细胞核染色质凝聚,呈半月形;ＦＣＭ细胞ＤＮＡ检得亚Ｇ１细胞峰;部分Ｇ１期细胞ＴＵＮＥＬ标记呈阳性。结论结果表明,三氧化二砷能诱人食管癌细胞株的凋亡,此药对食管癌等实体瘤的治疗有诱入的应用前景。同时表明,ＦＣＭ具有敏感、特异性强及定量等优点     

抗癌药物诱导Molt-4细胞凋亡的周期时相性分析

[目的]应用流式细胞术（FCM）分析抗肿瘤药物诱导细胞凋亡的周期特异性。[方法]将喜树碱、紫外线和愧耳清膏诱导的Molt-4细胞分别用Sub-G1法和PA法（FITC-Annexin V和PI标记法）检测细胞凋亡。[结果]Sub-G1法可简便地检测晚期凋亡细胞，PA法可检测早期凋亡细胞，并可较准确分析细胞凋亡的周期时相性。[结论]结合Sub-G1法和PA法可简便、有效筛选出细胞周期特异性抗肿瘤药物，为抗癌新药的开发和研制提供技术平台。     

鸦胆子油乳对Hep-2细胞增殖与凋亡诱导作用的研究

目的：探讨鸦胆子油乳注射液对喉癌Hep-2细胞的增殖抑制及调亡诱导作用。方法：利用MTT比色法检测5个不同药物浓度（0.1、0.2、0.4、0.6和0.8g/L）对细胞的抑制率;采用倒置显微镜观察细胞的形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测凋亡基因Bcl-2和Bax的表达。结果：MTT显示,鸦胆子油乳对Hep-2细胞的生长抑制作用呈剂量和时间依赖性。倒置显微镜下可见细胞凋亡的形态学改变,显示加药组细胞染色体固缩,聚集呈块状、新月状,出现凋亡小体。流式细胞仪检测显示,0.2、0.4和0.6g/L药物作用48h后凋亡率分别为（42.58±4.36）%、（57.71±3.07）%和（75.50±3.93）%,显著高于对照组（0.96±0.17）%,差异有统计学意义,F=8.82,P=0.003;实时荧光定量PCR结果显示,随着鸦胆子油乳注射液的浓度增加,Bcl-2mRNA的表达减少,Bax mRNA的表达量逐渐上升,与对照组比较差异有统计学意义,P〈0.01。结论：鸦胆子油乳能够抑制Hep-2细胞的增殖并诱导其凋亡,作用呈剂量和时间依赖性。     

丁酸钠对结肠癌细胞凋亡活性的影响

目的观察丁酸钠对结肠癌细胞凋亡活性的影响。方法采用流式细胞术(FCM)和DNA末端原位标记染色法(TUNEL)检测细胞凋亡。结果实验48小时检测,对照组和2.5mM、5mM和10mM各浓度丁酸钠作用后的Lovo细胞凋亡率分别为11.71%、21.62%、34.40%和47.83%,各组之间有显著性差异(P<0.01);对照组和5mM丁酸钠组的HT-29细胞,培养24、48、72小时,其凋亡率分别为6.22%、12.00%、14.31%和30.68%、34.60%、41.88%,差异有显著性(P<0.01);本研究中用二倍体的人胚肾293细胞作了对照研究,未发现丁酸钠对293细胞的生长抑制和凋亡有影响。结论一定浓度的丁酸钠可以选择性抑制两种结肠癌细胞增生,诱导凋亡,显示出浓度、时间依赖性。在预防肿瘤发生的过程中发挥重要的作用。     

紫杉醇对人胰腺癌细胞株BxPC-3增殖抑制作用的研究

目的:通过体外实验探讨紫杉醇(paclitaxel,TAX)对人胰腺癌细胞株Bx-PC-3的增殖抑制作用。方法:人胰腺癌细胞株BxPC-3经过不同浓度的TAX作用不同时间后,在倒置显微镜下观察细胞形态学改变;用甲基噻唑基四唑试验(MTT)检测细胞抑制率;用流式细胞仪分析细胞周期变化。结果:TAX对人胰腺癌细胞株BxPC-3有明显的生长抑制作用,且呈剂量、时间依赖关系。流式细胞仪分析结果显示,BxPC-3细胞经过1000nmol/LTAX分别作用24和48h后,G2～M期细胞比例分别为(66.39±0.23)%和(48.49±1.47)%,明显高于对照组(8.67±2.32)%和(10.85±2.43)%,t值分别为49.41和26.49,P值均为0.000,提示存在G2～M期阻滞。结论:TAX可使人胰腺癌细胞株BxPC-3的生长受到抑制,BxPC-3细胞经过TAX作用后被阻滞于G2～M期。     

牛鞭酒的诱变性试验研究

目的与方法:采用Ames 试验,小鼠骨髓细胞微核试验,小鼠精子畸形试验对牛鞭酒进行了诱变性研究。结果与结论:小鼠体细胞,生殖细胞及多种微生物检测系统的各项诱变试验均为阴性结果。该产品在本试验条件下无诱变作用。     

肿瘤分子流行病学———肿瘤易感性、风险评价与预防(续)

多种途径如引起基因表达异常、氧化剂的形成和促进细胞增殖等,直接、间接地增加关键基因发生可遗传改变及其积累的速度,而最终导致细胞癌变. 癌变过程的中心事件是癌基因的活化和抑癌基因的失活.暴露导致这些遗传改变的机制有:点突变、基因扩增或缺失、体细胞重组、基因转换以及DNA甲基化和去甲基化等.这些遗传学改变的结果使癌相关癌基因编码蛋白结构、功能和数量上的异常,最终导致了细胞生长、分化和凋亡的失衡而癌变.然而,从致癌物能否进入人体内,及其活化、解毒的程度,遗传学改变的发生及其积累速度,癌细胞的形成、转移及其被清除,在整个癌变过程中的每一阶段都受到个体遗传和后天易感因素的影响,而这些易感性在个体间有着千差万别.这样,综合考虑上述因素,癌变的多阶段过程将是一个更为复杂的多因素(病因)、多基因和多途径的过程.     

鼻咽癌放疗患者细胞微核分析

微核试验作为细胞遗传学损伤的生物标志之一, 是公认的检测染色体异常的简便方法, 在医学领域中正得到越来越广泛的应用。X2射线放疗是鼻咽癌患者最主要的治疗方法。本文采用微核试验方法观察鼻咽癌放疗患者口腔颊粘膜脱落细胞及人外周血淋巴细胞微核率的变化, 以探讨微核作为正常细胞损害和受照剂量生物标志物的可能性。检测对象为10 例接受X2射线放疗的鼻咽癌患者, 均来自第三军医大学附属西南医院放疗中心, 患者平均年龄37 岁, 男女各5 例, 照射总剂量平均为68 GY。本次实验采用病人为自身对照。分别于放疗前, 照射2、5、14、24、34 次后(每次限射剂量为2 GY) , 各采血一次用于实验。口腔颊粘膜脱落细胞微核试验: 取口腔颊粘膜脱落细胞直接涂片, 固定后用吖啶橙染色, 荧光显微镜下观察1 000 个脱落细胞中的微核细胞数。人外周血淋巴细胞微核试验采用胞质分裂阻滞法微核试验, 取0. 5 m l 静脉血于4. 5 m l RPM I 1640 培养基中37℃培养44 h 加入6 mg·L - 1的松胞素B, 继续培养至72 h 收获细胞, 常规制片。微核判断标准: 在淋巴细胞胞质中, 与主核分开, 呈圆形或椭圆形, 边缘光滑, 折光性与主核一致或稍浅, 大小为主核的1ö3～ 1ö的小核。每例记数1 000 个细胞, 结果用千分率表示。结果: 口腔颊粘膜脱落细胞微核率放疗前后未观察到明显变化。外周血淋巴细胞第一次放疗后微核率即有显著升高, 以后随剂量的增加几乎成线性升高。结论: 一定剂量的X2射线照射后, 对鼻咽癌患者口腔颊粘膜无明显损伤作用, 而外周血淋巴细胞微核检出率则非常敏感, 并呈正相关的剂量-反应关系, 有可能作为受照剂量的一个备选生物标志物。     

黄芪注射液治疗前后患者外周血淋巴细胞SCE的观察

本文以Budr-Giemsa 技术检测研究了接受黄芪注射液治疗的33 例病人的外周血淋巴细胞姐妹染色单体互换(SCE) 频率,结果表明,治疗后比治疗前病人的SCE 率有显著的增加,有统计学差异( P < 0. 01) ,说明黄芪注射液能诱发DNA 损伤。     

我国紫露草生物分析方法的研究与应用概况

我国紫露草生物分析方法的研究与应用概况（上接第２期封三）４马德修,方宗熙,林光恒,等山东紫露草对诱变剂的敏感性山东海洋学院学报,１９８１;１１（４）：４７５马德修,等用紫露草微核技术对青岛某工业区空气和污水及常用农药滴滴畏（ＤＤＶ）的生物测定?..     

锂离子照射人气管上皮细胞诱发的染色体畸变初步观察

本研究用中国原子能科学院物理研究所的HI－13 串列加速器产生的Li (Z = 3 ,L ET = 100keV/μm) 离子束以0. 5 - 6.0Gy 剂量照射人支气管上皮细胞系(BEAS - 2B) ,来观察重离子辐射诱发的细胞染色体畸变。分析经Li 离子照射细胞的染色体,除了如同对照组那样的发现5 号、15 号、22 号的X 染色体丢失、出现4 条标记染色体及染色体数目仍以46 条为主以外,在早期细胞中有非稳定性畸变,对照组细胞丢失的21 号染色体重新出现以及X 染色体丢失。     

虫草菌多糖粉经口急性毒性及致突变性研究

目的与方法:采用小鼠经口急性毒性、小鼠骨髓染色体畸变、小鼠睾丸染色体畸变及Ames 试验,对人工合成的虫草菌多糖粉进行毒理学安全性评价。结果:受试物对小鼠的急性毒性LD50大于10 g/ kg·bw。在小鼠骨髓染色体畸变试验,各剂量组骨髓染色体畸变率与阴性对照组相比差异无显著性( P > 0. 05) 。在小鼠睾丸染色体畸变试验,各剂量组常染色体早分离、性染色体早分离和睾丸细胞结构变化畸变率与阴性对照组比较差异均无显著性( P > 0. 05) 。在Ames 试验,加S9 与不加S9 混合液各剂量组的回复突变菌落数与自发回变组菌落数相比,MR 值均小于2 ,并且各剂量组之间菌落数增加无剂量反应关系( r在- 0. 13～0. 18 之间, P > 0. 05) 。结论:在本实验条件下,受试物未见有致突变作用。     

癌症患者及其一级亲属微核率观察

应用胞质阻断法对癌症患者,患者一级亲属外周血淋巴细胞的微核测定。结果表明:癌症患者(喉、肺、食、道、胃、肝、白血病) 微核率显著增高;一级亲属微核率比正常健康人对照亦高。癌症患者平均微核率1518 ±2125 ‰,分布在1016 - 30148 ‰,一级亲属微核率714 ±2. 5 ‰,分布在0. 8 - 14. 5 ‰,对照组微核率4. 8±111 ‰,分布在0. 5 - 8. 5 ‰。提示:癌症患者及其一级亲属是一组癌瘤的易发人群,具有一定的遗传易感性,发病与生活习惯及环境因素有关。