肿瘤发生的催化分子--肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1

Pin1是一独特的肽基脯氨酰顺反异构酶,它专一性催化已磷酸化的丝/苏-脯氨酰顺/反异构,导致功能改变.这种构型转变是新发现的蛋白磷酸化后调节机制,主要关系到细胞增殖和转化.研究表明,Pin1在人类多种肿瘤中过表达,可加强和催化多种致癌信号,被称为肿瘤发生发展的催化分子.     

胡桃醌抑制宫颈鳞癌SiHa细胞增殖并诱导其凋亡

目的探讨胡桃醌对宫颈鳞癌Si Ha细胞增殖及凋亡的影响。方法选取对数生长期的Si Ha细胞将其分为空白对照组和(10、20、50、80、100)μmol/L胡桃醌组。采用MTT法观察胡桃醌对Si Ha细胞增殖的抑制作用,并计算出半数抑制浓度(IC50),依据IC50确定胡桃醌的有效浓度;annexin V-FITC/PI双染色结合流式细胞术测定20μmol/L胡桃醌对Si Ha细胞凋亡的影响,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达。结果 MTT试验显示,与对照组比较,各胡桃醌浓度对细胞增殖均有明显抑制作用,IC50为20.4μmol/L;流式细胞术检测表明,正常生长的Si Ha细胞早期凋亡率为(2.46±0.37)%,经20μmol/L的胡桃醌处理细胞12 h,早期凋亡率增加至(18.47±2.26)%;与正常对照组相比,Western blot法检测显示20μmol/L胡桃醌使细胞中Bcl-2表达明显降低而Bax表达明显增加。结论胡桃醌可以抑制Si Ha细胞的增殖,并诱导细胞凋亡。     

胡桃醌通过降低AKT活性抑制肺癌A549细胞增殖

目的 探讨肽酰脯氨酰顺反异构酶(PIN1)抑制剂胡桃醌(Juglone)对肺癌A549细胞增殖的影响及分子机制.方法 用胡桃醌(0、6.25、12.5、25和50μmol/L)处理A549细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡及周期,real-time PCR检测PIN1、AKT mRNA表达,Western blot检测PIN1、AKT及AKT-pS473蛋白表达.结果 胡桃醌能浓度依赖性抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡,将细胞周期阻滞在G2/M期和S期.与对照组相比,各处理组PIN1 mRNA水平随着胡桃醌浓度增加而降低(P＜0.05).不同浓度胡桃醌处理组PIN1蛋白表达为1.032±0.056、0.892±0.024、0.596±0.023和0.396±0.021,均显著低于对照组的1.280±0.046(P ＜0.05);AKT-pS473蛋白表达为0.554±0.023、0.464±0.018、0.362±0.015和0.228±0.020,均显著低于对照组的0.626±0.015(P ＜0.05);48 h处理组PIN1及AKT-pS473蛋白表达分别为0.575±0.036和0.338±0.014,显著低于24h的0.764±0.032和0.436 ±0.023(P ＜0.05).结论 PIN1抑制剂胡桃醌可以抑制肺癌A549细胞的增殖,其机制可能是通过降低AKT-pS473活性来实现的.     

慢病毒介导的shRNA对A549细胞Pin1表达的干扰作用

目的构建Pin shRNA慢病毒载体,建立稳定抑制肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)表达的A549细胞系。方法根据查阅文献获得Pin1shRNA干扰靶点序列并插入pLenR-GPH载体,构建pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒载体,随后转入人胚肾HEK293T细胞中,收集其上清进行病毒滴度测定,再行慢病毒的包装,将获得的慢病毒毒液感染A549细胞。通过实时定量PCR(qRT-PCR)及Western blot法检测Pin1在不同组的表达抑制情况。结果经限制性内切酶鉴定及测序分析,成功构建了pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒载体质粒,包装并得到高滴度的病毒颗粒。通过qRT-PCR和Western blot法检测显示,与对照组相比,pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒载体感染的A549细胞中Pin1的表达在mRNA和蛋白水平均有所下降。结论慢病毒介导的shRNA能够有效下调A549细胞中Pin 1的表达。     

胡桃醌对卵巢癌SKOV3细胞氧化应激和凋亡的影响

 目的: 探讨胡桃醌对人卵巢癌SKOV3细胞的毒性作用及机制。方法: 采用MTT法检测胡桃醌对卵巢癌SKOV3细胞生长的作用;流式细胞术检测胡桃醌对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响;采用DCF-DA染色荧光显微镜观察细胞内的活性氧簇(ROS)水平;采用Western blot检测卵巢癌SKOV3细胞细胞色素C(Cyt C)和活化caspase-3的水平。结果: 与对照组比较,胡桃醌对SKOV3细胞的生长有明显抑制作用,且抑制作用随药物浓度和时间的增加而增强(P<0.05)。流式细胞术检测50 μmol/L胡桃醌作用细胞24 h和48 h后诱导细胞凋亡,早期凋亡率和晚期凋亡率均高于对照组(P<0.01)。胡桃醌显著提高细胞内的ROS水平,上调细胞Cyt C和活化caspase-3的蛋白水平。结论: 胡桃醌通过促进SKOV3细胞ROS的积累诱导细胞凋亡和抑制细胞生长。     

蜈蚣提取物诱导SiHa细胞凋亡及其作用机制

目的研究蜈蚣提取物对宫颈癌SiHa细胞生长的抑制及其作用机制。方法观察不同浓度的不同蜈蚣提取物对宫颈癌SiHa细胞的生长抑制情况:以不同浓度的蜈蚣提取物和顺铂作用于SiHa细胞48h,MTT法测定药物对细胞生长的影响,流式细胞术观察DNA含量和凋亡的改变,DNA片断化分析凋亡特有DNA梯形格局,Western blot测定bax、Caspase3蛋白水平的表达。结果SiHa细胞用8、16、32mg/mL的乙醚、乙醇蜈蚣提取物处理48h后,细胞生长显著受抑制;DNA周期改变明显,亚G1峰与对照组有显著性差异;DNA-Ladder显著;Western blot提示相关凋亡蛋白bax、Caspase3表达并显示活性,凋亡率增高明显。结论中药蜈蚣乙醚、乙醇提取物在体外对宫颈癌SiHa细胞的生长有明显地抑制作用,机制与改变细胞DNA周期,促进凋亡有关。     

Tortoside A对人宫颈癌SiHa细胞凋亡及细胞周期影响的初步研究

目的 考察Tortoside A(TOA)对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响及可能机制.方法 以CCK-8法、流式细胞术等检测TOA对人宫颈癌细胞增殖抑制作用、对细胞凋亡水平和细胞周期的影响,Western blot法检测TOA对SiHa细胞凋亡相关蛋白表达的影响.结果 TOA通过作用于Caspase、Bcl-2家...     

STAT3短发夹RNA表达载体的构建及对SiHa细胞增殖和凋亡的作用

目的:探讨信号转导子与转录激活子3短发夹RNA(shRNA)真核表达载体对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的作用.方法:根据siRNA设计原则, 结合pSilencer2.1-U6-neo质粒特点, 针对STAT3基因设计并合成两条寡聚DNA片段, 退火后克隆入pSilencer2.1-U6-neo质粒, 脂质体法将重组质粒转染人宫颈癌SiHa细胞.RT-PCR和Western blot检测SiHa细胞STAT3基因mRNA和蛋白表达水平;MTT法和流式细胞术(FCM)检测细胞的增殖和凋亡.结果:成功构建了STAT3基因shRNA真核表达载体, 转染人宫颈癌SiHa细胞.细胞STAT3蛋白及mRNA表达下降;同时SiHa细胞增殖能力下降, 细胞凋亡增加.结论:构建的STAT3基因shRNA真核表达载体能够通过下调STAT3基因表达, 抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖能力, 诱导细胞凋亡.     

虎杖苷对人宫颈癌SiHa和HCC94细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨虎杖苷在体外对人宫颈癌SiHa细胞和HCC94细胞增殖与凋亡的影响。方法分别将不同浓度的虎杖苷(25、50、100μmol/L)在体外作用于人宫颈癌SiHa细胞和HCC94细胞后,用MTT法检测其增殖,流式细胞术检测其凋亡及周期。结果虎杖苷在体外对人宫颈癌SiHa细胞和HCC94细胞增殖均具有明显的抑制作用;流式细胞术结果显示,随着给药浓度的增加,SiHa细胞和HCC94细胞凋亡率逐渐增大,同时虎杖苷能够抑制SiHa细胞和HCC94细胞DNA的复制。结论虎杖苷在体外对人宫颈癌SiHa细胞和HCC94细胞增殖具有明显的抑制作用,并能诱导其凋亡,显示出较好的抗宫颈癌潜能。     

膜联蛋白A5过表达对宫颈癌细胞系SiHa细胞凋亡的影响

目的:构建膜联蛋白A5的重组表达质粒,转染宫颈癌细胞使其过表达后检测宫颈癌细胞的凋亡情况.方法:PcR法从pJLA503膜联蛋白A5中获得膜联蛋白A5基因;磷酸钙共沉淀法转染宫颈癌细胞系SiHa细胞,免疫印迹法和免疫组织化学ABC法检测了细胞中膜联蛋白A5蛋白的过表达;对过表达膜联蛋白A5的细胞采用免疫荧光法检测其细胞凋亡情况.结果:重组质粒中膜联蛋白A5基因序列正确;转染重组质粒后的SiHa细胞过表达膜联蛋白A5蛋白;过表达膜联蛋白A5的SiHa细胞凋亡显著增多.结论:膜联蛋白A5可促进宫颈癌细胞系SiHa细胞的凋亡.     

ARMCX1对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响

目的:通过RNA干扰技术敲减含Armadillo重复序列X连锁蛋白1(Armadillo repeat-containing X-linked protein 1,ARMCX1)的表达,观察ARMCX1对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡等生物学特性的影响,为研究ARMCX1在宫颈癌发病机制中的作用提供依据。方法:敲减ARMCX1表达后,通过流式细胞术检测SiHa细胞的周期分布和凋亡的变化,利用平板技术观察敲减10 d后宫颈癌SiHa细胞的集落形成情况。利用Western blot实验检测细胞增殖和凋亡相关蛋白水平的变化。结果:敲减ARMCX1表达后SiHa细胞的集落形成能力明显受抑制(P<0.05),细胞周期阻滞在S期,细胞中细胞周期蛋白E(cyclin E)和磷酸化细胞分裂周期蛋白25A(cell division cycle 25A,Cdc25A)的蛋白水平降低。同时,敲减ARMCX1表达促进SiHa细胞的凋亡,Bcl-2蛋白表达量显著减少,Bax和active caspase-3蛋白量显著增加(P<0.05)。结论:敲减ARMCX1的表达抑制SiHa细胞增殖,诱导细胞凋...     

African horse sickness virus induces apoptosis in cultured mammalian cells

Infection of mammalian cell cultures with African horse sickness virus (AHSV) is known to result in dramatic cytopathic effects (CPE), but no CPE is observed in infected insect cell cultures despite productive virus replication. The basis for this phenomenon has not yet been investigated, but is suggestive of apoptosis being induced following virus infection of the mammalian cells. To investigate whether AHSV can induce apoptosis in infected mammalian cells, Culicoides variipennis (KC) insect cells and BHK-21 mammalian cells were infected with AHSV-9 and analyzed for morphological and biochemical hallmarks of apoptosis. In contrast to KC cells, infection of BHK-21 cells with AHSV-9 resulted in ultrastructural changes and nuclear DNA fragmentation, both of which are associated with the induction of apoptosis. Results also indicated that AHSV-9 infection of BHK-21 cells resulted in activation of caspase-3, a key agent in apoptosis, and in mitochondrial membrane depolarization. Cumulatively, the data indicate that the intrinsic pathway is activated in AHSV-induced apoptosis.     

Hydrogen peroxide induces apoptosis through the mitochondrial pathway in rat Schwann cells

Oxidative stress is one of the several mechanisms that induces apoptosis in cells. It has been shown that hydrogen peroxide (H₂O₂) induces apoptosis in several kinds of cells; however, the role of H₂O₂ in the apoptosis of Schwann cells (SCs) is currently unclear. The objective of this study was to determine whether H₂O₂ is capable of inducing apoptosis in SCs and whether or not such an effect is associated with the activation of mitochondrial pathway. We demonstrated that H₂O₂ induces apoptosis in SCs, and is associated with increased release of cytochrome c from mitochondria and the activation of caspase-3 and -9 by up-regulation of Bax and down-regulation of Bcl-2. These results suggest a potential role for H₂O₂ in SC injury by triggering apoptosis via the mitochondrial pathway under oxidative stress.     

Paeonol induces apoptosis in human ovarian cancer cells

Paeonol is a broad-spectrum antitumor agent, which is widely used in the treatment of various tumors in Asia. However, the effect of paeonol on ovarian cancer remains unclear. The purpose of this study was to investigate the effect of paeonol on ovarian cancer cells and its possible mechanism. Results measured by MTT (methyl thiazoyltetrazolium) assay showed that cell viability was markedly reduced in a dosage-dependent manner, when treated with paeonol for 24 h. Flow cytometry and Hoechst staining results indicated that the rate of apoptosis in the paeonol pretreatment group was higher than the control group. After co-culture with paeonol, cleaved Caspase 3 protein levels increased while survivin protein levels decreased. In conclusion, our findings indicate that paeonol can induce apoptosis of ovarian cancer cells via activation of Caspase 3 and down-regulation of survivin, and therefore is potentially an effective chemotherapeutic agent for ovarian cancer.     

C-反应蛋白诱导人肾小管上皮细胞凋亡

目的:探讨与微炎症状态相应的C-反应蛋白(CRP)水平是否诱导肾小管上皮细胞凋亡。方法:以微炎症状态相应的CRP浓度刺激HK-2细胞。采用AnnexinⅤ-FITC、PI染色和流式细胞术检测凋亡细胞的百分率。采用Hoechst 33258染色观察肾小管上皮细胞凋亡的形态学改变。比色法检测细胞caspase-3活性。Real-time PCR检测促凋亡基因bax、抗凋亡基因bcl-2的mRNA表达。结果:CRP呈剂量和时间依赖性地诱导HK-2细胞凋亡,细胞凋亡在CRP浓度为10 mg/L时达高峰,在20 mg/L时则以晚期凋亡和坏死为主。Hoechst 33258细胞核染色显示CRP作用的HK-2细胞呈现染色质浓缩、碎裂或染色质边集等细胞凋亡的特点。CRP增高细胞caspase-3的酶活性、上调促凋亡基因bax的表达和下调抗凋亡基因bcl-2的表达。结论:CRP轻度增高可诱导肾小管上皮细胞凋亡。     

PI3K/mTOR双重抑制剂PF-04691502诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡

 目的：检测PI3K/mTOR双重抑制剂PF-04691502对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响及可能的分子机制。方法：MTT法检测细胞活力;流式细胞术分析细胞周期变化;Annexin V-FITC/PI双标法测定细胞凋亡;免疫印迹分析细胞内蛋白表达的变化。结果：PF-04691502处理SGC-7901细胞后,降低细胞的活力并促进细胞阻滞于G1期,同时抑制cyclin D1的表达并上调p21的蛋白水平。PF-04691502可明显诱导SGC-7901细胞凋亡,其机制与其促进caspase家族成员的活化并切割聚（腺苷二磷酸核糖）聚合酶［poly(ADP-ribose)polymerase, PARP］ 底物密切相关。结论：PI3K/mTOR 双重抑制剂PF-04691502能够通过阻滞细胞周期来抑制SGC-7901细胞的增殖,同时能够激活细胞内caspase,使PARP发生剪切而诱导细胞凋亡。     

STMN1在宫颈癌中表达的临床意义及抑制其表达对宫颈鳞癌SiHa细胞活力和凋亡的影响

目的:探讨微管解聚蛋白1(STMN1)在宫颈癌中表达的临床意义及抑制其表达对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:Western blot法检测宫颈癌组织中STMN1的蛋白表达,并分析其表达与宫颈癌临床指标的关系;将靶向STMN1基因的小干扰RNA(siRNA)转染宫颈鳞癌Si Ha细胞,转染48 h后通过Western blot法检测各组细胞中STMN1及信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路中STAT3、p-STAT3和survivin的蛋白水平;MTT法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)探针检测细胞活性氧簇(ROS)的水平。结果:STMN1在宫颈癌组织中表达显著高于癌旁组织(P0.01),其表达水平与宫颈癌患者年龄和组织学分型无关,而与临床分期、组织学分化程度及淋巴结转移相关(P0.01);STMN1-siRNA转染可显著降低宫颈鳞癌Si Ha细胞中STMN1的表达;与未经处理细胞比较,STMN1-siRNA转染的细胞活力显著降低,凋亡率增加,ROS含量升高,p-ATAT3和survivin蛋白水平均下调(P0.01),STAT3的蛋白水平与未经处理细胞的差异无统计学显著性。结论:STMN1在宫颈癌中高表达,其表达与临床分期、组织学分化程度及淋巴结转移相关,抑制其表达可通过下调STAT3信号通路降低肿瘤细胞的活力及诱导凋亡。     

塞来昔布诱导不表达环氧合酶-2的胃癌细胞凋亡研究

目的： 探讨选择性COX-2抑制剂celecoxib诱导COX-2不表达胃癌细胞MGC-803凋亡。 方法： 应用MTT法研究celecoxib对细胞存活率的影响；Hoechst33258染色，DNA 琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术分别检测celecoxib处理后细胞形态学改变，DNA断裂情况和DNA含量的变化。 结果： COX-2高表达于AGS胃癌细胞株，而MGC-803中未检测到COX-2表达; 选择性COX-2抑制剂 celecoxib呈浓度和时间依赖性诱导MGC-803细胞凋亡。 结论： Celecoxib 可诱导不表达COX-2的胃癌细胞MGC-803凋亡。