LncRNA CRNDE激活PI3K/Akt通路促进非小细胞肺癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的 通过检测非小细胞肺癌(NSCLC)组织中长链非编码RNA(LncRNA)CRNDE的表达水平,探讨其对NSCLC细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其分子机制.方法 选择2018年1月至2019年6月在孝昌县第一人民医院胸外科收治的30例行手术切除的NSCLC患者,其中男性17例,女性13例;年龄34～75岁,中位年龄5...     

GPC3通过PI3K/AKT通路参与肺鳞状细胞癌的发生发展

目的 通过生物信息学分析GPC3在肺鳞状细胞癌(LUSC)中的差异表达情况并探讨GPC3对LUSC细胞增殖的影响。方法 从GEO数据库下载LUSC的表达谱数据,采用R-studio分析差异表达基因,通过免疫组化方法检测GPC3在LUSC组织和癌旁正常组织的表达情况。构建稳定GPC3高表达及沉默的NCI-H226细胞系,CCK-8法和克隆形成实验检测GPC3对LUSC细胞增殖的影响;Western blot法检测GPC3变化对PI3K/AKT信号通路关键蛋白的影响。结果 GPC3在LUSC中存在差异表达(P<0.01);免疫组化结果发现GPC3在正常组织中不表达,在LUSC组织中表达率为70%。GPC3高表达可促进LUSC细胞的增殖,上调PI3K及pAkt表达。结论 GPC3可能通过调节PI3K/Akt信号通路促进LUSC的细胞增殖。     

鞘氨醇激酶1通过ERK1/2信号通路促进非小细胞肺癌细胞的侵袭和迁移

目的:探讨鞘氨醇激酶1(SphK1)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:选取31例外科手术切除并经常规组织学检查确诊为NSCLC的肿瘤组织标本和配对癌旁肺组织标本,应用免疫组织化学染色和RT-qPCR检测SphK1的表达。将pcDNA3. 1-SphK1载体(SphK1组)、空白pcDNA3. 1载体对照(NC组)、SphK1 siRNA(siSphK1组)和对照siRNA(siNC组)分别转染人肺腺癌A549细胞,Western blot法检测SphK1、E-cadherin、fibronectin和p-ERK1/2的表达;利用Transwell实验评估过表达SphK1和抑制ERK1/2对A549细胞迁移和侵袭的影响。结果:SphK1在NSCLC组织中高表达,并与肿瘤分期相关。SphK1过表达可显著促进A549细胞的迁移和侵袭,提高p-ERK1/2和fibronectin蛋白水平,减少E-cadherin蛋白表达(P<0. 05),而干扰SphK1则呈现相反的结果。ERK1/2抑制剂U0126可显著抑制SphK1过表达诱导的p-ERK1/2和fi...     

胡椒碱对卵巢癌细胞株SKOV-3侵袭与凋亡的影响及其机制

目的:观察胡椒碱对卵巢癌细胞株SKOV-3的侵袭与凋亡的影响并讨论其作用机制.方法:CCK-8法检测不同浓度的胡椒碱(0,5,10和20μmol/L)对SKOV-3细胞作用不同时间(12,24和36 h)后,SKOV-3细胞存活率的变化;Transwell小室法与TUNEL法分别检测SKOV-3细胞侵袭能力与凋亡能力的变化;Western印迹检测p-PI3K与p-Akt蛋白表达水平的变化.结果:CCK-8法结果显示胡椒碱随浓度增加与培养时间增长,对SKOV-3细胞存活率的抑制程度增强;采用10μmol/L胡椒碱培养SKOV-3细胞36 h后,SKOV-3细胞的细胞侵袭数明显降低,细胞凋亡数明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);p-PI3K与p-Akt蛋白表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论:胡椒碱能够抑制卵巢癌细胞SKOV-3的增殖与侵袭能力,其增加凋亡能力可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关.     

米诺环素通过调控PI3K/Akt通路抑制硝普钠诱导的PC12细胞凋亡

 目的： 探讨PI3K/Akt信号通路在米诺环素（minocycline,MC）抑制硝普钠(sodium nitoprusside,SNP)诱导的PC12细胞凋亡中的作用。方法：将体外培养的PC12细胞分为4组：空白对照组、SNP组、MC+SNP组和PI3K抑制剂LY294002+ MC+SNP组。用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting检测不同时点（0.5、1、2、3 h）各处理组PI3K/Akt通路蛋白p-Akt和Akt的表达。结果：SNP处理PC12细胞24 h能抑制细胞生长,加入10 μmol/L MC预处理30 min可明显提高细胞活力,降低细胞凋亡率（P<0.05）,抑制SNP诱导的PC12细胞凋亡。MC组的p-Akt表达高于其它组,而加入LY294002后可阻断MC的上述效应。结论：MC可通过调控PI3K/Akt通路抑制SNP诱导的PC12细胞凋亡。     

穿心莲内酯对卵巢癌细胞株SKOV-3侵袭与凋亡的影响

目的:观察穿心莲内酯对卵巢癌细胞株SKOV-3侵袭与凋亡的影响并探讨初步的作用机制。方法:CCK-8法检测不同浓度(0、5、10、20和40μmol/L)的穿心莲内酯对SKOV-3细胞作用不同时间(12、24、36和48h)后,SKOV-3细胞存活率的变化;Transwell法与TUNEL法分别检测SKOV-3细胞侵袭能力与凋亡能力的变化;Western blot法检测p-PI3K、p-Akt与p-mTOR蛋白水平的变化。结果:CCK-8法检测结果显示,随着浓度增加与培养时间延长,穿心莲内酯对SKOV-3细胞存活率的抑制程度增强;采用20μmol/L穿心莲内酯培养SKOV-3细胞36h后,SKOV-3细胞的侵袭数明显降低,凋亡数明显增加(P0.05),p-PI3K、p-Akt与p-mTOR的蛋白水平明显降低(P0.05)。结论:穿心莲内酯能够抑制卵巢癌细胞SKOV-3的活力与侵袭能力,增强凋亡能力,这可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

蛇床子素调节PI3K/Akt/mTOR信号通路对妊娠高血压大鼠氧化应激损伤的影响

目的 探讨蛇床子素（OST）调节磷脂酰肌醇3-激酶/苏氨酸蛋白激酶/雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR信号通路对妊娠高血压（HDCP）大鼠氧化应激损伤的影响。方法 通过灌胃左旋亚硝酸精氨酸甲酯（L-NAME）法建立HDCP大鼠模型。并将SPF级雌性大鼠随机分为：对照组（Control组）、模型组（Model组）、低剂量OST组（OST-L组,40 mg/kg）、高剂量OST组（OST-H组,80 mg/kg）、高剂量OST+PI3K抑制剂组（OST-H+LY294002组,80 mg/kg OST+5 mg/kg LY294002）,每组12只。于大鼠妊娠第12、16、17和21天检测大鼠尾动脉血压和24 h尿蛋白含量。RT-PCR法检测HDCP大鼠胎盘组织中Flt-1和PIGF mRNA的表达。取大鼠全血血清进行ELISA检测,检测可溶性Flt-1、PIGF、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）和谷胱甘肽（GSH）水平。Western blot检测HDCP大鼠胎盘组织中PI3K、Akt、mTOR蛋白表达。结果 与Control组相比,Mod...     

TRIP13促进子宫内膜癌增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制

目的:探讨甲状腺激素受体因子13(Thyroid hormone receptor interactor 13,TRIP13)对子宫内膜癌(Endometrial carcinoma,EC)增殖、迁移和侵袭的影响及调控机制.方法:分析TRIP13 在子宫内膜癌中的表达模式;通过慢病毒敲减和质粒过表达调控子宫内膜癌细胞中 TRIP13 的表达量;通过 CCK-8、Transwell 迁移及侵袭实验观察TRIP13 对子宫内膜癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响;通过Western blot技术检测TRIP13 表达水平的变化,并研究其对PI3K/Akt信号通路蛋白的影响.结果:癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)分析发现,子宫内膜癌组织中TRIP13 的表达水平显著高于正常子宫内膜组织(P＜0.05);TRIP13 的高表达与子宫内膜癌患者的低生存率呈显著正相关(P＜0.05).TRIP13 过表达可促进子宫内膜癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力(P＜0.05),并上调 p-PI3K、p-Akt 的表达(P＜0.05),而下调 TRIP13 后则可逆转上述结果.结论:TRIP13 通过调控PI3K/Akt信号通路促进子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭.     

汉黄芩素对人口腔鳞状细胞癌细胞生长和侵袭的影响

目的:探讨汉黄芩素对人口腔鳞状细胞癌SCC-4细胞生长和侵袭的影响及其作用机制。方法:使用不同浓度(0、20、40、60、80和100 mg/L)的汉黄芩素处理SCC-4细胞不同时间,分别用MTT法检测细胞活力,流式细胞术及Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭能力,Western blot法检测Wnt/β-catenin信号通路的活化。结果:汉黄芩素呈剂量及时间依赖性地抑制细胞生长,同时诱导细胞大量凋亡,抑制细胞的侵袭。汉黄芩素明显抑制了细胞中β-catenin的活化,同时其下游靶分子细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9的表达水平降低,而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达增加。用Wnt/β-catenin通路激动剂Li Cl处理后,汉黄芩素抑制的Wnt/β-catenin通路分子活化明显增强,同时细胞生长能力明显增强,而凋亡能力降低,还明显减弱了汉黄芩素对细胞侵袭能力的抑制作用。结论:汉黄芩素主要通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来调控口腔鳞状细胞癌细胞的生长及侵袭进程,具有一定的抗口腔鳞状细胞癌发展的作用,可成为临床上口腔鳞状细胞癌防治的潜在药物。     

蛇床子素对膝骨关节炎大鼠的作用及对PI3K/Akt/NF-κB信号通路的影响

目的 观察蛇床子素对膝骨关节炎大鼠的治疗作用,探讨其对PI3K/Akt/NF-κB信号通路的影响.方法 SD大鼠(n=50),利用改良Hulth法建立膝骨关节炎大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、蛇床子素低剂量组(25 mg/kg)、蛇床子素高剂量组(50 mg/kg)及美洛昔康组(0.78 mg/kg),每组1...     

p21活化激酶6对人非小细胞肺癌A549细胞侵袭及迁移能力的影响

 目的：探讨p21活化激酶6（PAK6）对非小细胞肺癌侵袭及迁移能力的影响及机制研究。方法：实时荧光定量PCR检测人非小细胞肺癌A548细胞、人支气管上皮细胞、非小细胞肺癌组织及癌旁组织中PAK6 mRNA的表达。A549细胞分别转染siRNA-PAK6（siPAK6组）和阴性对照（对照组）,实时荧光定量PCR技术检测PAK6 mRNA,Western blotting检测PAK6表达量;并行体外迁移及侵袭实验,检测转染siRNA-PAK6对A549细胞侵袭及迁移能力的影响;共聚焦显微镜观察细胞骨架的改变。结果：A549细胞中PAK6 mRNA的表达量明显高于人支气管上皮细胞中PAK6 mRNA的表达量（3.50±1.16 vs 1.12±0.42,P<0.05）,非小细胞肺癌组织中PAK6 mRNA的表达量明显高于癌旁组织中PAK6 mRNA的表达量（5.13±1.33  vs 1.08±0.37,P<0.05）。A549细胞转染siPAK6后,PAK6蛋白表达量下降72%（P<0.05）,PAK6 mRNA水平明显下降（3.72±0.75 vs  0.69±0.21,P<0.05）。A549细胞转染siPAK6组侵袭及迁移出的细胞数量明显少于对照组(P<0.05)。siPAK6组A549细胞骨架应力纤维减少明显,肌动蛋白皱缩。结论：PAK6通过细胞骨架的重构影响非小细胞肺癌的侵袭及迁移能力。     

PAK4-LIMK1-Cofilin信号通路对非小细胞肺癌迁移及侵袭能力的影响

 目的: 探讨p21活化激酶4(PAK4)对非小细胞肺癌(NSCLC)侵袭和迁移能力的影响及相关机制。方法: PAK4-siRNA或阴性对照转染A549和NCI-H520细胞株,实时荧光定量PCR和Western blot分别检测细胞PAK4 mRNA和蛋白表达水平,Transwell小室法检测其对细胞侵袭和迁移能力的影响;Western blot检测其LIMK1、cofilin及其磷酸化水平;免疫共沉淀检测PAK4和LIMK1蛋白是否直接绑定;体外激酶分析实验检测LIMK1是否是PAK4的激酶底物;Western blot检测10例非小细胞肺癌组织中PAK4和磷酸化LIMK1的相关性;PAK4-siRNA和LIMK1质粒共转染A549和NCI-H520细胞后观察细胞迁移和侵袭能力变化。结果: 沉默PAK4后A549和NCI-H520细胞迁移和侵袭能力明显减弱(P<0.05);LIMK1和cofilin蛋白水平无显著变化,而磷酸化LIMK1和磷酸化cofilin水平显著下调;免疫共沉淀结果示PAK4与LIMK1相互绑定;激酶分析实验结果显示,激酶缺陷型PAK4(K350M)使LIMK1磷酸化的作用显著低于野生型PAK4或活化型PAK4(S445N)(P<0.05)。Western blot检测结果示非小细胞肺癌组织中PAK4表达上调的程度与磷酸化LIMK1含量呈正相关(P<0.05);PAK4-siRNA和LIMK1质粒共转染A549和NCI-H520细胞后,迁移和侵袭细胞数均高于PAK4-siRNA转染组(P<0.05)。结论: PAK4通过直接磷酸化LIMK1而促进非小细胞肺癌的迁移及侵袭能力。     

MicroRNA-133b inhibits proliferation and invasion of ovarian cancer cells through Akt and Erk1/2 inactivation by targeting epidermal growth factor receptor

Aberrant expression of microRNA-133b (miR-133b) has been frequently reported in some cancers excluding ovarian cancer (OC). The role and its molecular mechanism of miR-133b in OC have not been reported. In this study, we explored the effects of miR-133b overexpression on proliferation and invasion in OC cells. The mRNA level of miR-133b in OC cell lines was determined by real-time PCR. The miR-133b mimic was transiently transfected into OC cells using Lipofectamine™ 2000 reagent. Subsequently, cell proliferation and invasion were assessed by MTT, Brdu-ELISA and Transwell assays. Moreover, the effects of miR-133b overexpression on the MAPK and PI3K/Akt signaling pathways were determined by Western blot. Protein level of EGFR was also measured by Western blotting. Meanwhile, luciferase assays were performed to validate EGFR as miR-133b target in OC cells. Our results showed that the mRNA level of miR-133b was remarkably decreased in OC cell lines compared with normal colon epithelium cells, whereas the protein expression of EGFR was significantly increased. Up-regulation of miR-133b inhibited the proliferation and invasion of OC cells. We also found that miR-133b overexpression evidently decreased the phosphorylation of Erk1/2 and Akt. Bioinformatics analysis predicted that the EGFR was a potential target gene of miR-133b. Luciferase reporter assay demonstrated that miR-133b could directly target EGFR. Altogether, our results indicated that miR-133b overexpression was shown to inhibit proliferation and invasion of OC cells through suppression of the MAPK and PI3K/Akt signaling pathways by targeting EGFR.     

Rip2诱导人胰腺癌细胞自噬及其机制研究

目的:研究受体相互作用蛋白2(Rip2)是否诱导人胰腺癌细胞株Panc-1发生自噬及其作用机制。方法:用jet PRIME转染试剂将空质粒pEGFP-C2和重组质粒pEGFP-Rip2分别转染入Panc-1细胞,不做处理的细胞为对照组。转染后培养细胞48 h,采用Western blot检测Rip2、自噬相关蛋白[beclin-1和微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)]及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白的表达;透射电子显微镜观察自噬体的数量。结果:转染pEGFP-Rip2的细胞Rip2蛋白表达显著增加。与对照组和pEGFP-C2组相比,pEGFP-Rip2组细胞的beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著升高(均P0.01);在透射电子显微镜下观察发现,pEGFP-Rip2组细胞内自噬体的数量明显多于对照组和pEGFP-C2组。pEGFP-Rip2组细胞的p-Akt和p-mTOR蛋白水平明显低于对照组和pEGFP-C2组(均P0.01),而总Akt和mTOR的蛋白水平变化不明显。结论:过表达Rip2可诱导Panc-1细胞发生自噬,其作用机制可能与Rip2抑制PI3K/Akt/mTOR通路的活化有关。     

DDX3表达上调在人宫颈癌细胞增殖中的作用分析

目的:探讨DDX3表达上调在人宫颈癌细胞增殖中的作用。方法:采用免疫组织化学方法检测2012年4月至2013年3月河南省人民医院59例宫颈癌组织及癌旁非肿瘤组织标本中的DDX3表达情况。同时,以宫颈癌细胞HeLa为研究对象,通过慢病毒介导的宫颈癌细胞过度表达来检测DDX3的功能。采用细胞增殖与活性检测试剂盒评估细胞存活...     

吡咯烷螺二吲哚对非小细胞肺癌A549细胞活力及凋亡的影响

目的:探讨吡咯烷螺二吲哚对人非小细胞肺癌A549细胞活力及凋亡的影响。方法:用不同浓度(25、50和100 mg/L)的吡咯烷螺二吲哚处理A549细胞24 h,通过CCK-8法测定吡咯烷螺二吲哚对细胞活力的影响,流式细胞术分析细胞凋亡情况,Western blot法检测吡咯烷螺二吲哚对p53和PARP表达及m TOR磷酸化的影响。结果:不同浓度的吡咯烷螺二吲哚处理A549细胞后,细胞的活力较DMSO对照组明显下降(P 0.01),细胞的凋亡率较DMSO对照组明显升高(P 0.01)。与DMSO对照组相比,吡咯烷螺二吲哚可以诱导p53的表达并诱导PARP切割,抑制m TOR的磷酸化水平(P 0.01)。结论:吡咯烷螺二吲哚诱导A549细胞凋亡,其作用机制可能与抑制m TOR的磷酸化有关。     

20(S)-人参皂苷Rg3抑制人急性单核细胞白血病THP-1细胞迁移和侵袭

目的：观察低极性20(S)-人参皂苷Rg₃(S-Rg₃)体外抑制人急性单核细胞白血病THP-1细胞迁移和侵袭的作用。方法：将不同浓度(0、20、40和80 mg/L)的S-Rg₃加入THP-1细胞培养体系,Transwell小室检测S-Rg₃抑制细胞迁移的作用。采用免疫细胞化学、免疫荧光、Western blot和RT-qPCR等多种方法,检测S-Rg₃对THP1细胞黏附、迁移和侵袭相关蛋白表达的影响及其相关机制。结果：S-Rg₃能有效地抑制THP-1细胞迁移,下调黏附相关蛋白N-cadherin,迁移相关蛋白C-X-C趋化因子受体4(CXCR4)和基质细胞衍生因子1(SDF-1),以及侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达,但上调抑制迁移侵袭相关蛋白E-cadherin、金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP1)和TIMP3表达,同时下调CXCR4 mRNA表达,上调E-cadherin和TIMP1 mRNA表达,呈剂量依赖性。此外,S-Rg_...     

黄岑苷对宫颈癌细胞株HeLa的放射增敏作用

 目的: 探讨黄岑苷对宫颈癌细胞株HeLa的放射增敏作用及机制。方法: MTT法检测不同浓度黄岑苷对HeLa细胞的活力抑制能力,并计算IC₅₀筛选实验药物浓度;克隆形成实验检测放射组与联合组在不同照射剂量下细胞的放射增敏作用;流式细胞术检测单药组、放射组与联合组的细胞周期变化;Western blot检测不同组细胞中Akt、p-Akt、Bad和p-Bad的蛋白水平。结果: 黄岑苷呈浓度依赖性抑制HeLa细胞的活力,IC₅₀为43.65 mg/L,采用20% IC₅₀浓度8 mg/L进行放射增敏实验。克隆形成实验结果显示8 mg/L黄岑苷联合放射治疗可使生存曲线左移,D0、Dq值显著小于放射组(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示黄岑苷阻滞HeLa细胞于G₂/M期。联合组细胞中p-Akt和p-Bad的蛋白水平均显著高于其它各组(P<0.05)。结论: 黄岑苷对HeLa细胞具有放射增敏作用,其机制可能与其阻滞细胞于G₂/M期和活化PI3K/Akt信号通路有关。