CEPO对6-OHDA诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨氨甲酰化促红细胞生成素(CEPO)对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导PC12细胞损伤及凋亡的保护作用及其可能机制。方法借助CCK8、流式细胞(Flow cytometry,FCM)、Western-blotting和逆转录PCR(RT-PCR)技术检测PC12模型细胞相关指标的变化,实验数据以SPSS15软件统计分析。结果 CCK8结果显示6-O-HDA处理能够显著降低PC12模型细胞的存活率,而CEPO处理对其变化显示抑制作用;FCM技术探察结果显示,6-OHDA处理能够明显诱导PC12模型细胞的损伤与凋亡,而CEPO预处理能够减轻PC12模型细胞的损伤与凋亡(P<0.05);借助Western-blotting技术探察显示6-OHDA+CEPO处理组的PC12细胞的Cleaved caspase-3蛋白表达量显著低于6-OHDA处理组(P<0.05);RT-PCR结果显示,6-OHDA处理明显降低PC12模型细胞的Bcl-2 mRNA的表达(P<0.05)以及上调PC12模型细胞的Bax mRNA的表达(P<0.01),而CEPO处理明显上调Bcl-2 mRNA的表达水平(P<0.05)以及抑制Bax mRNA的表达(P<0.05)。结论CEPO处理能够显著抑制6-OHDA所诱导的PC12细胞的损伤及凋亡,其作用机制可能与其上调Bcl-2,并下调Bax和Caspase-3的表达有关。     

骨髓间充质干细胞通过上调EPO表达减轻缺氧损伤引起的PC12细胞凋亡

 目的：观察骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）对氯化钴（CoCl2）诱导的PC12细胞缺氧损伤及凋亡的影响并探讨其作用机制。方法：将PC12细胞分为以下几组：空白对照组、CoCl2处理组、BM-MSCs-siCTL+CoCl2处理组和BM-MSCs-siEPO +CoCl2处理组。应用MTT、流式细胞术（FCM）及Hoechst  33258染色法检测BM-MSCs对CoCl2诱导的细胞活性下降及凋亡的影响。采用逆转录PCR（RT-PCR）和Western blotting检测BM-MSCs的促红细胞生成素（EPO）表达情况。同时通过RT-PCR法检测PC12细胞的Bcl-2与Bax表达情况。此外应用分光光度法检测caspase-9和-3活性。结果：MTT结果显示BM-MSCs共培养能够提高PC12细胞活力, 0.6 mmol/L CoCl2单独处理组24 h和48 h细胞存活率仅为（43.0±6.4）%和（33.8±5.7）%,1∶15细胞比BM-MSCs共培养24 h和48 h后细胞存活率明显上升,分别为（77.9±3.8）%和（75.2±9.7）%（P＜0.01）。RT-PCR 和Western blotting显示0.6 mmol/L CoCl2处理24 h和48 h明显诱导BM-MSCs的EPO表达上调,而EPO siRNA可完全抑制BM-MSCs的EPO表达（P＜0.01）。FCM及Hoechst 33258结果表明CoCl2处理能诱导PC12细胞损伤及凋亡,BM-MSCs-siCTL与PC12细胞共培养可有效抑制CoCl2的细胞毒性作用,减少细胞缺氧性损伤及凋亡,而EPO siRNA可明显阻断BM-MSCs的抗细胞凋亡作用（P＜0.01）。 RT-PCR结果显示BM-MSCs共培养组PC12细胞的Bcl-2表达较CoCl2处理组明显升高,而Bax表达较CoCl2处理组明显降低;EPO siRNA明显抑制BM-MSCs介导的Bcl-2表达升高和Bax表达降低（P＜0.01）。分光光度法结果显示BM-MSCs-siCTL共培养组的caspase-9和-3活性较CoCl2处理组明显降低,而BM-MSCs-siEPO共培养组的caspase-9和-3活性较BM-MSCs-siCTL共培养组明显增加（P＜0.01）。结论：BM-MSCs共培养能抑制CoCl2诱导的PC12细胞凋亡,其细胞保护作用的机制可能与其上调EPO的表达有关。     

神经再生素对PC12细胞凋亡的影响

目的 研究神经再生素(NRF)对PC12细胞凋亡的影响并初步探讨其机制。方法 通过观察细胞形态的变化、MTT微量比色法、流式细胞仪AnnexinV和caspase-3活力检测等方法，了解NRF对低浓度血清培养下PC12细胞凋亡的影响。NGF、和RPMI1640作对照。结果 培养细胞的突起生长数量和长度、M1TT微量比色的A值、AnnexinV—PE／7AAD显示的凋亡细胞比例、caspase-3活力的检测等指标，在NRF组和NGF组问无明显差异；而与窄白对照组间差异有显著性意义。结论 神经再生素对低血清培养下PCI2细朐的凋亡有抑制作用。     

iPSC-MSCs对CoCl_2诱导的PC12细胞损伤时线粒体功能的影响

目的:观察诱导性多能干细胞来源的间充质干细胞(i PSC-MSCs)对氯化钴(Co Cl2)诱导的PC12细胞损伤的影响,并探讨其可能机制。方法:用Co Cl2处理PC12细胞建立化学损伤模型,加入i PSC-MSCs共培养。用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)比色法检测细胞存活率,Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡比率,JC-1染色流式细胞术检测细胞线粒体膜电位,免疫荧光观察i PSC-MSCs向PC12细胞转移线粒体的情况。结果:用Co Cl2(400μmol/L)处理PC12细胞24 h可使其凋亡明显增多,线粒体膜电位明显下降。与i PSC-MSCs共培养能减轻PC12细胞的凋亡,使其膜电位恢复。i PSC-MSCs可以与PC12细胞间形成隧道纳米管并向PC12细胞转移线粒体。结论:i PSC-MSCs可以减轻Co Cl2诱导的PC12细胞损伤,机制可能与其向PC12细胞转移线粒体有关。     

槲皮素抑制鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡

目的: 探讨槲皮素对鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡的影响及其作用机制。方法: 运用鱼藤酮诱导损伤PC12细胞,经300 μmol/L槲皮素预处理后,观察细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测Bax和Bcl-2蛋白的表达,JC-1染色检测细胞线粒体膜电位,比较各组的差异。结果: 与鱼藤酮组相比,槲皮素加鱼藤酮处理组细胞形态明显改善,凋亡率降至6.3%(P<0.01),Bcl-2表达增加(P<0.01),Bax表达降低(P<0.01),线粒体膜电位上升(P<0.01)。结论: 槲皮素对鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡具有抑制作用,上调Bcl-2和下调Bax蛋白的表达,维持线粒体膜电位可能是其作用的机制之一。     

奥氮平对鱼藤酮诱导PC12细胞凋亡的保护作用

探讨非典型抗精神病药物奥氮平对鱼藤酮诱导神经元凋亡的可能保护作用及其机制。以NGF诱导后的PC12细胞作为细胞模型,采用鱼藤酮诱导细胞凋亡。用不同浓度奥氮平、氟哌啶醇预处理后,观察鱼藤酮对PC12细胞的作用,分别用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性、流式细胞仪检测细胞凋亡率、Hoechst33342染色观察细胞形态学改变,并对二者的结果进行比较。鱼藤酮以剂量依赖的方式杀死PC12细胞。鱼藤酮(6μmol/L)作用后,奥氮平(50μmol/L)组预处理48h的细胞活力显著高于对照组(无药物预处理)(P<0.05);鱼藤酮(4、6、8μmol/L)作用后,氟哌啶醇组(20、40、60μmol/L)的细胞活力均低于对照组。流式细胞仪检测结果显示,对照组、氟哌啶醇(20μmol/L)组、奥氮平(50μmol/L)组、空白对照组(无药物预处理以及鱼藤酮处理)的细胞凋亡率依次为(32.2±1.3)%、(42.1±1.0)%、(14.0±1.0)%和(1.3±0.3)%。Hoechst33342染色结果显示,对照组每个视野多见凋亡细胞,细胞核裂解为碎块,氟哌啶醇组更明显;奥氮平组凋亡细胞数量较氟哌啶醇组及对照组为少。结果提示奥氮平对鱼藤酮诱导PC12细胞的凋亡具有保护作用,这可能是奥氮平和氟哌啶醇在精神分裂症病人应用中有不同的治疗效果和副作用的部分机制。     

N-乙酰半胱氨酸保护PC12细胞对抗化学性低氧诱导的损伤

目的 探讨活性氧( ROS)清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)能否保护PC12细胞对抗化学性缺氧引起的损伤.方法 应用化学性低氧模拟物氯化钴(CoCl2)处理PC12细胞,建立化学性缺氧损伤PC12细胞的实验模型.在CoCl2处理PC12细胞前60 min将NAC加入培养基中,作为预处理.应用CCK-8比色法检测细胞存活...     

红景天苷对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的:探讨红景天苷对MPP+诱导的PC12细胞凋亡是否具有保护作用.方法:采用MPP+诱导的具有多巴胺能神经元特性的PC12细胞凋亡作为PD的体外模型.实验分对照组、 500 μmoL/L MPP+诱导组、红景天苷(10、 50、 100 μmol/L)3个浓度预处理组.用MTT法测定细胞活性, 流式细胞术检测细胞凋亡, TUNEL法检测细胞凋亡断裂的DNA片段.结果:10、 50、 100 μmoL/L红景天苷对MPP+诱导的PC12细胞具有一定的保护作用.与MPP+组(50.2±1.8)%相比, 10、 50、 100 μmoL/L红景天苷预处理细胞活力分别上升为(65.1±1.0)%、 (69.5±2.3)%、 (80.9±2.0)%(P<0.05).流式细胞术检测提示正常组、 MPP+组、红景天苷预处理组(10、 50、 100 μmoL/L)凋亡百分率分别为0.9%、 34.5%、 26.9%、 20.1%、 14.2%.经红景天苷预处理后, 与MPP+组相比较细胞断裂的DNA片段明显减少.结论:红景天苷对MPP+诱导的细胞凋亡具有浓度依赖性的保护作用.     

PC12细胞缺糖损伤过程中凋亡相关基因的表达

目的探讨PC12细胞缺糖损伤时凋亡相关基因bcl-2、bcl-xl、c-myc的表达变化.方法无葡萄糖培养基培养PC12细胞建立细胞缺糖损伤细胞模型,用RT-PCR法分析PC12细胞有糖和无糖条件下bcl-2、bcl-xl、c-myc的表达情况.结果细胞缺糖损伤6-16hbcl-2基因、bcl-xl基因、c-myc基因表达量显著增高,此后表达量逐渐下降.结论缺糖损伤早期,凋亡抑制基因bcl-2、bcl-xl、c-myc上调表达产生细胞应激保护效应.     

同型半胱氨酸诱导PC12细胞凋亡的研究

目的：研究同型半胱氨酸（Hcy）在生理浓度铜离子（10 μmol/L Cu²⁺）作用下能否诱导PC12细胞凋亡及对bcl-2、bax基因表达的影响。 方法: 将细胞随机分成对照组和处理组，采用MTT法检测细胞活力；倒置相差显微镜、荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞凋亡；半定量RT-PCR分析bcl-2和bax mRNA的表达水平。 结果: 0.125-1.0 mmol/L Hcy在Cu²⁺的作用下可以导致PC12细胞凋亡，具有明显的剂量-效应关系；bcl-2 mRNA表达降低，bax mRNA表达升高，且效应与Hcy浓度相关。 结论: 高浓度Hcy在生理浓度Cu²⁺作用下可诱导PC12细胞凋亡，且凋亡作用与Hcy浓度相关。其机制可能是通过调节bcl-2和bax mRNA的比值起作用的。     

p38 MAPK-iNOS-NO通路介导化学性缺氧对PC12细胞的损伤作用

目的:探讨诱导型一氧化氮合酶/一氧化氮(iNOS/NO)是否介导了氯化钴(CoCl2)引起的PC12细胞损伤及p38 MAPK对其调节作用。方法:应用化学性低氧模拟剂CoCl2处理PC12细胞建立化学性缺氧损伤模型。应用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)比色法检测细胞存活率;Hochest33258核染色法观察细胞凋亡的形态学改变;Western blotting法检测iNOS蛋白的表达水平;Griess试剂盒检测细胞培养基中亚硝酸盐(NO的代谢物)的浓度。结果:应用600μmol/L CoCl2处理PC12细胞24 h可使iNOS表达明显增多;应用600μmol/L CoCl2处理PC12细胞24 h和48 h可使细胞培养基里NO增多;在CoCl2损伤PC12细胞前60 min应用iNOS抑制剂L-canavanine(10μmol/L)预处理能保护PC12细胞对抗600μmol/L CoCl2引起的损伤,使细胞存活率升高,凋亡细胞数目减少;SB203580(p38 MAPK选择性抑制剂)预处理60 min可下调CoCl2引起的iNOS高表达。结论:p38 MAPK-iNOS-NO通路介导CoCl2引起PC12细胞的损伤作用。     

Protective effect of bone marrow mesenchymal stem cells on PC12 cells apoptosis mediated by TAG1

Objective: This study aims to explore the protection effect of bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) on PC12 cells apoptosis mediated by transient axonal glycoprotein 1 (TAG1). Methods: PC12 cells were divided into control group, Aβ_25-35 group and BMSCs + Aβ_25-35 group. The effects of BMSCs on PC12 cells treated by Aβ_25-35 were detected using MTT, Hoechst 33258 and Annexin V-FITC/PI staining methods. The expression levels of TAG1, β-amyloid precursor protein (APP), AICD and p53 were determined by RT-PCR and Western blotting methods. The expression levels of Bax and Bcl-2 were determined by Western blotting method. The activity of Caspase 3 was detected by spectrophotometric method. Results: MTT results showed that cell activity decreased after the treatment of 20 μM Aβ_25-35 for 48 h (P<0.01) while it increased in BMSCs + Aβ_25-35 group (P<0.01). Hoechst 33258 and Annexin V-FITC/PI staining results showed that Aβ_25-35 could induce the apoptosis of PC12 cells while the apoptosis of PC12 cells was inhibited in BMSCs + Aβ_25-35 group. RT-PCR and Western blotting methods showed that 20 μM Aβ_25-35 could increase the expression levels of TAG1, APP, AICD and p53 (P<0.01) while they decreased in BMSCs + Aβ_25-35 group (P<0.01). 20 μM Aβ_25-35 could increase the expression levels of Bax and decrease the expression levels of Bcl-2 (P<0.01), while the expression levels of Bax decreased and the expression levels of Bcl-2 increase in BMSCs + Aβ_25-35 group (P<0.01). 20 μM Aβ_25-35 could enhance Caspase 3 activity while it decreased in BMSCs + Aβ_25-35 group (P<0.01). Conclusions BMSCs with Aβ_25-35 could inhibit the apoptosis of PC12 cells, which maybe related with TAG1/APP/AICD signal pathway.     

Roscovitine促进增殖期PC12细胞凋亡

目的探讨细胞周期蛋白依赖激酶（CDK）抑制剂Roscovitine导致增殖期PC12细胞死亡的性质和CDK调控的细胞周期与细胞凋亡的关系。方法利用培养的增殖期PC12细胞模型，进行MTT细胞活性检测、Hoechst 33342胞核荧光染色和倒置显微镜观察。结果分别用5、10、20、50和100μmol／L浓度的Roscovitine溶液处理细胞12h，细胞存活率呈剂量依赖性下降；另外，50μmol／L浓度的Roscovitine分别处理细胞4、12、24和48h，细胞死亡也呈现时间依赖性。细胞死亡的形态学表现是细胞皱缩、核染色体固缩和核碎片形成。结论Roscotivine导致的增殖期PC12细胞凋亡与CDK调控的细胞周期蛋白有关。     

缺氧缺糖/复氧复糖PC12细胞自噬的形态学变化与细胞凋亡的关系

目的:观察缺氧缺糖/复氧复糖PC12细胞自噬的形态学变化及其与细胞凋亡的关系,探讨自噬对PC12细胞的保护作用。方法:取对数生长期的PC12细胞,随机分为正常对照组、缺氧缺糖/复氧复糖组、自噬抑制剂组和自噬激活剂组。其中缺氧缺糖/复氧复糖组、自噬抑制剂组和自噬激活剂组进行缺氧缺糖3 h后再复氧复糖12 h,自噬抑制剂组和自噬激活剂组于复氧复糖的同时分别给予自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤和自噬激活剂雷帕霉素。用透射电子显微镜和单丹磺酰尸胺荧光染色检测自噬小体的变化,Annexin V-FITC/PI流式细胞术和TUNEL染色检测细胞凋亡的情况。结果:与正常对照组相比,缺氧缺糖/复氧复糖组的自噬小体增多(P0.05),细胞凋亡率和凋亡指数升高(P0.05)。与缺氧缺糖/复氧复糖组相比,自噬抑制剂组的自噬小体明显减少(P0.05),细胞凋亡率和凋亡指数显著升高(P0.05),而自噬激活剂组自噬小体变大,数量明显增多(P0.05),并偶见自噬溶酶体,细胞凋亡率和凋亡指数显著下降(P0.05)。结论:缺氧缺糖/复氧复糖可以诱导PC12细胞发生自噬,且细胞自噬可以抑制细胞凋亡,发挥神经保护作用。     

ATP敏感性钾通道开放剂通过PI3K/Akt信号通路对缺血缺氧诱导PC12细胞凋亡发挥保护作用

目的 研究ATP敏感性钾通道(KATP)开放剂对缺血缺氧诱导PC12细胞凋亡及Akt蛋白和mRNA表达的影响.探讨KATP开放剂的保护作用机制.方法 取传代后3d Pc12细胞,分为对照组,缺血缺氧组,KATP通道开放剂组,KATP通道开放剂+阻断剂组.采用Annexin-v FITC/PI双染流式细胞分析仪检测凋亡率...     

EGCG通过mTOR通路拮抗低氧诱导的PC12细胞的凋亡与自噬

 目的:氯化钴（cobalt chloride, CoCl2）诱导的低氧具有神经毒性,可以诱导神经细胞的凋亡和自噬。茶多酚活性成分表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin gallate, EGCG）具有一定的抗细胞凋亡和自噬的作用,但作用机理尚未完全阐明。近年来有研究报道,雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）通路参与了多种神经功能的调节,如神经细胞的分化成熟、抗氧化应激等。为此,我们用CoCl2诱导低氧引起细胞的凋亡与自噬,从mTOR通路探讨EGCG拮抗CoCl2诱导低氧引起细胞凋亡与自噬的作用机制。方法:研究使用Wes-tern blotting方法测定CoCl2以及EGCG处理后mTOR和自噬蛋白beclin-1的表达,使用ELISA法检测细胞caspase-3表达,CCK-8检测细胞活力,免疫荧光法观察LC-3在胞核内的表达。结果:CoCl2诱导低氧引起了细胞凋亡与自噬,而EGCG通过mTOR通路拮抗了CoCl2诱导低氧引起的细胞凋亡与自噬,阻断mTOR通路则逆转了EGCG对神经细胞的保护作用。结论: EGCG通过mTOR通路拮抗了CoCl2诱导的低氧引起的PC12细胞的凋亡与自噬。     

二苯乙烯苷通过抑制氧化应激对MPP~+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

为了探讨2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-ο-β-D-葡萄糖苷(2,3,5,4’-tetrahydroxystibene-2-ο-β-D-glucoside,TSG)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)诱导PC12细胞凋亡的影响及其可能机制,本实验分为对照组,MPP+处理组和TSG(1、5和10μmol/L)预处理组。用Hoechst33258染色法和流式细胞术测定细胞凋亡,对活性氧(reactive oxygen species,ROS)敏感的荧光探针2,7-dichlorofluorescin dictate(DCF-DA),丙二醛(malondialdehyde,MDA)和总抗氧化能力(total anti-oxida-tion competence,T-AOC)检测试剂盒测定细胞的氧化应激的变化。结果显示:TSG三个浓度预处理后,对比MPP+处理组,观察到TSG在一定范围内以剂量依赖方式,使细胞核凝聚明显减少,细胞凋亡率降低。另外,TSG预处理后,PC12细胞中增高的ROS和MDA水平较MPP+处理组明显有所减低,T-AOC有所增强。以上结果提示,TSG可抑制MPP+诱导的PC12细胞的凋亡,其机制可能与TSG抑制氧化应激有关。     

Effect of scoparone on neurite outgrowth in PC12 cells

The neurite outgrowth-promoting effects of scoparone isolated from the stem bark of Liriodendron tulipifera were investigated in PC12 cells. At a concentration of 200 microM, scoparone markedly induced neurite outgrowth from PC12 cells. Scoparone at 200 microM also enhanced the outgrowth of neurites from cells in the presence of nerve growth factor (NGF, 2 ng/ml). The levels of intracellular cyclic AMP and concentration of Ca2+ were also increased by 200 microM scoparone. In addition, scoparone at 200 microM increased the activities of extracellular signal-regulated protein kinase (ERK), cyclic AMP-dependent protein kinase (PKA), protein kinase C (PKC) and Ca2+/calmodulin kinase II (CaMK II). However, scoparone-induced neurite outgrowth was blocked by a mitogen-activated protein kinase inhibitor (U0126), a PKA inhibitor (H89), a PKC inhibitor (GF109203X) and a CaMK II inhibitor (KN62). These kinase inhibitors also reduced the scoparone-induced neurite outgrowth associated with NGF. These results suggest that scoparone can induce neurite outgrowth by stimulating the upstream steps of ERK, PKA, PKC and CaMK II in PC12 cells.