miR-486-5p通过抑制端粒酶活性促进人骨髓间充质干细胞衰老

目的:研究年龄相关microRNA-486-5p(miR-486-5p)对人骨髓间充质干细胞(h MSCs)衰老的调控作用。方法:通过microRNA芯片和real-time PCR检测供体年龄对h MSCs中miR-486-5p表达的影响;通过转染miR-486-5p模拟物或抑制物,过表达miR-486-5p或抑制其表达;用β-半乳糖苷酶染色检测miR-486-5p对h MSCs衰老的影响;通过siRNA研究沉默信息调节因子1(SIRT1)对h MSCs端粒酶逆转录酶(TERT)、端粒酶活性及衰老的影响。结果:随供体年龄增加,h MSCs中miR-486-5p的表达增加。过表达miR-486-5p可促进h MSCs衰老。相反,抑制miR-486-5p的表达可减少h MSCs的衰老。SIRT1及TERT随供体年龄增加而表达下降,直接抑制SIRT1的表达可减少TERT表达,抑制端粒酶活性,促进细胞衰老。同时抑制miR-486-5p和SIRT1的表达,使miR-486-5p失去对h MSCs端粒酶活性及衰老的调控作用。结论:miR-486-5p通过抑制SIRT1,减少h MSCs端粒酶活性,促进h MSCs衰老。     

miR-708-5p通过抑制TMEM88表达促进人骨髓间充质干细胞迁移

目的:研究年龄相关microRNA-708-5p(miR-708-5p)对人骨髓间充质干细胞(h MSCs)迁移能力的调控作用。方法:通过microRNA芯片和real-time PCR检测供体年龄对h MSCs中miR-708-5p表达的影响;通过转染miR-708-5p模拟物或抑制物,过表达或抑制miR-708-5p表达;通过细胞划痕及Transwell实验检测h MSCs迁移能力。通过siRNA研究miR-708-5p靶基因跨膜蛋白88(TMEM88)对h MSCs中β链球蛋白(β-catenin)及h MSCs迁移功能的影响。结果:随供体年龄增加,h MSCs中miR-708-5p的表达下降。过表达miR-708-5p可促进h MSCs迁移。相反,抑制miR-708-5p的表达可减少h MSCs迁移。随供体年龄增加,TMEM88表达增加,而β-catenin表达下降,直接抑制TMEM88的表达可促进β-catenin表达,促进h MSCs迁移。同时抑制miR-708-5p和TMEM88,使miR-708-5p失去对h MSCs的调控作用。结论:miR-708-5p可通过抑制TMEM88表达,上调β-catenin,从而活化Wnt/β-catenin信号通路,促进h MSCs迁移。     

miR-17-5p对缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用及其对细胞外调节蛋白激酶1/2信号通路的影响

目的 ：观察miR-17-5p对缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用及其对胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)信号通路的影响。方法 ：将大鼠随机数字法分为模型组、miR-17-5p mimics组、miR-17-5p inhibitor组。建模后，模型组经尾静脉注射10 mL/kg生理盐水，miR-17-5p mimics组、miR-17-5p inhibitor组分别经尾静脉注射7μL miR-17-5p mimics、miR-17-5p inhibitor与RNAi脂质体转染试剂的混合溶液。各组大鼠苏醒后的24 h进行神经功能评分，测定脑梗死体积、大鼠脑组织含水量，检测缺血侧大脑皮质细胞凋亡率，caspase-3、Bax、Bcl-2和ERK1/2蛋白表达。结果 ：miR-17-5p mimics组的神经功能障碍评分、脑梗死体积、脑组织含水量、缺血侧大脑皮质细胞凋亡率明显低于模型组，miR-17-5p inhibitor组的神经功能障碍评分、脑梗死体积、脑组织含水量、缺血侧大脑皮质细胞凋亡率显著高于其他2组；miR-17-5p mimics组大鼠缺血脑组织中caspase-3、Bax蛋白...     

miR-214-5p靶向PAK4对缺血再灌注大鼠的心肌损伤和免疫反应的调节作用

目的:探讨微小RNA-214-5p(miR-214-5p)靶向p21活化蛋白激酶4(PAK4)对缺血再灌注(I/R)大鼠的心肌损伤和免疫反应的作用。方法:将健康雄性SD大鼠随机分为假手术(sham)组、I/R组、Ad-Scramble组和Ad-miR-214组(n=9)。在大鼠左心室前壁6个不同的位点注入腺病毒;4 d后,缝合左前部下行冠状动脉构建I/R模型。RT-qPCR检测miR-214的表达水平,HE染色观察心肌损伤,ELISA检测心肌损伤标志物(CK-MB、Mb和cTnI)和炎症因子(IL-6、IL-1β和TNF-α)的水平,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,试剂盒检测MDA含量和SOD活性,基因软件预测靶基因并通过双萤光素酶报告验证,Western blot检测caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax、PAK4、p-Akt和p-mTOR表达水平。结果:miR-214在I/R大鼠心肌细胞中低表达(P<0.01);miR-214-5p过表达减轻I/R大鼠心肌损伤程度,下调CK-MB、Mb和cTnI表达,降低心肌细胞凋亡率,上调Bcl-2表达,下调Bax、caspase-3和caspase-9表达,提高SOD活性,降低MDA、IL-6、IL-1β和TNF-α的含量(P<0.01);miR-214-5p与PAK4在3’-UTR存在结合位点,miR-214-5p过表达上调PAK4、p-Akt和p-mTOR表达(P<0.01)。结论:miR-214-5p过表达靶向PAK4减轻I/R大鼠的心肌损伤,并抑制心肌细胞凋亡、氧化应激反应和炎症反应,同时激活PI3K/Akt/mTOR通路。     

过氧化氢处理的脐静脉血管内皮细胞miR-125b-5p水平降低但Smad4表达增加

目的探讨miR-155、miR-125b-5p、miR-210及其靶基因蛋白在氧化应激血管内皮细胞中的表达和作用。方法分离人脐静脉内皮细胞(HUVEC)并通过免疫荧光染色法检测内皮细胞Ⅷ因子相关抗原、流式细胞术检测CD31的表达进行鉴定;将分离的HUVEC进行原代培养,采用子痫前期患者血清和H2O2建立氧化应激的血管内皮细胞的模型,实验分为正常妊娠血清组、子痫前期血清组、0μmol/L H2O2组、100μmol/L H2O2组;实时定量PCR检测造模后24 h细胞内miR-155、miR-125b-5p、miR-210的水平;Western blot法检测细胞内miR-125b-5p靶基因Smad4蛋白的水平;免疫荧光染色法检测细胞内Smad4蛋白的表达;异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果与0μmol/L H2O2组相比,100μmol/L H2O2处理的内皮细胞miR-125b-5p显著降低、Smad4蛋白显著增加、细胞凋亡率和坏死率显著增加。与正常孕妇血清组相比,子痫前期血清处理的内皮细胞凋亡率和坏死率显著增加,但miR-125b-5p及Smad4蛋白变化不明显。结论 H2O2处理的HUVEC miR-125b-5p降低,Smad4蛋白增加。     

低氧诱导神经干细胞凋亡和miR-26a低表达

目的:初步探讨氯化钴(cobalt chloride,Co Cl2)是否诱导神经干细胞(neural stem cells,NSCs)凋亡及其机制,探讨NSCs凋亡是否引起microRNA-26a(miR-26a)表达变化。方法:用不同剂量的Co Cl2处理NSCs,CCK-8检测细胞活力;TUNEL检测细胞凋亡;建立Co Cl2诱导NSCs凋亡的模型,将NSCs分为对照组和凋亡组,real-time PCR检测miR-26a-3p、miR-26a-5p、GSK-3β、Bcl-2、Bax和caspase-3的表达;Western blotting检测Bcl-2和Bax的蛋白水平。结果:CCK-8结果显示不同浓度(200、400和600μmol/L)Co Cl2作用24 h,NSCs活力呈剂量依赖性下降(P0.05)。TUNEL检测显示Co Cl2(200、400和600μmol/L)作用24 h后NSCs凋亡率呈剂量依赖性增加(P0.05)。Real-time PCR和Western blotting结果表明凋亡组miR-26a、GSK-3β、Bax和caspase-3表达增加,Bcl-2、Bcl-2/Bax蛋白水平下降(P0.05)。结论:Co Cl2(400μmol/L)作用24 h可建立NSCs凋亡模型,其机制可能与线粒体凋亡通路有关;NSCs凋亡时miR-26a表达减少。     

miR-142-3p通过调控Hmgb1抑制雨蛙素诱导的大鼠胰腺外分泌细胞系AR42J凋亡

目的 探讨miR-142-3p调控Hmgb1对大鼠胰腺外分泌细胞系AR42J凋亡的影响。方法 将AR42J细胞分为空白组(blank)、急性胰腺炎模型组(AP,100 nmol/L雨蛙素作用24 h),再分别用miR-142-3p mimics、 mimics NC、miR-142-3p inhibitor和inhibitor NC转染模型组细胞,记为miR-142-3p mimics组、 mimics NC组、miR-142-3p inhibitor组和inhibitor NC组。用RT-qPCR检测细胞中miR-142-3p表达;Western blot检测HMGB1、caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达;Hoechst染色测定细胞凋亡;流式细胞测量术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因实验明确miR-142-3p和Hmgb1的靶向关系。结果 与空白组相比,AP组中miR-142-3p表达水平显著下调(P<0.01),HMGB1、caspase-3蛋白表达量上调(P<0.05),Bax蛋白表达量显著上调(P<0.01),Bcl-2蛋白表达量显著降低(P&l...     

miR-150-5p靶向SIRT1提高肝癌细胞系HepG2放疗敏感性

目的探究miR-150-5p靶向SIRT1提高肝癌细胞放射敏感性的作用机制。方法用分次放疗放射递增法诱导建立放射抵抗型细胞株(RR-HepG2);RT-qPCR检测HepG2和RR-HepG2在不同放射剂量下miR-150-5p的表达水平;细胞克隆实验检测相同放射剂量下两种细胞的放疗敏感性;流式细胞计量术和Western blot检测过表达miR-150-5p对HepG2凋亡的影响;双荧光素酶报告基因法检测miR-150-5p与SIRT1的关联;细胞克隆实验和Western blot检测过表达SIRT1后,细胞的放疗敏感性和凋亡蛋白的变化。结果与亲代HepG2比较,相同放射剂量下,RRHepG2组miR-150-5p的表达量均显著降低(P<0. 05);放射处理后,与control、agomiR-NC组比较,agomiR-150-5p组的细胞存活分数显著降低,敏感性高(P<0. 05),Bax、caspase-9蛋白表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率显著升高;双荧光素酶报告基因法验证miR-150-5p靶向调控SIRT1。与agomiR-NC组比较,野生型(WT) agomiR-150-5p荧光素酶活性显著降低,SIRT1蛋白水平显著降低(P<0. 05);与anta-agomiR-NC比较,野生型(WT) anta-agomiR-150-5p荧光素酶活性显著升高,SIRT1蛋白水平显著升高(P<0. 05);放射处理后,与agomiR-NC组比较,agomiR-150-5p组的细胞存活分数显著降低,Bax、caspase-9蛋白表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0. 05);与agomiR-150-5p+vector组比较,agomiR-150-5p+SIRT1组的细胞存活分数显著升高,Bax、caspase-9蛋白表达水平显著降低,Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0. 05)。结论 miR-150-5p靶向SIRT1,下调其表达,提高肝癌细胞放射敏感性,可为临床肝癌放射治疗增敏提供靶点。     

同型半胱氨酸上调miR-488-3p表达诱导MPC-5小鼠肾小球足细胞凋亡

目的 探讨微小RNA-488-3p(miR-488-3p)在同型半胱氨酸(Hcy)诱导足细胞凋亡中的作用。方法 体外培养足细胞分别采用0μmol/L Hcy(对照组)和80μmol/L Hcy (Hcy组)处理48 h,流式细胞术检测足细胞凋亡率,Western blot法检测B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、 Bcl2相关X蛋白(BAX)和胱天蛋白酶3(caspase-3)的蛋白表达,实时荧光定量PCR检测miR-488-3p的表达;用miR-488-3p抑制物(miR-488-3p inhibitor)转染足细胞,检测转染效率和足细胞凋亡水平。结果 与对照组相比,Hcy组中足细胞凋亡率、 BAX和caspase-3表达水平显著升高,而Bcl2表达则显著降低;且Hcy显著促进足细胞中miR-488-3p的表达。转染miR-488-3p inhibitor后,足细胞凋亡率、 BAX及caspase-3蛋白表达明显降低,而Bcl2表达显著升高。结论 Hcy通过上调miR-488-3p表达而促进足细胞凋亡。     

抗衰老Klotho蛋白减轻大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的:观察抗衰老Klotho蛋白对大鼠乳鼠原代心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的作用并探讨其作用机制。方法:建立大鼠乳鼠心肌细胞H/R模型,并将心肌细胞分为正常对照组、H/R模型组和不同浓度(0.1μmol/L、1μmol/L和10μmol/L)Klotho作用H/R组。观察各组心肌细胞H/R前后搏动频率变化,利用MTT方法检测细胞存活率;测定各组心肌细胞H/R后LDH、CK、AST的漏出量及MDA含量、SOD活性;流式细胞术检测各组心肌细胞的凋亡率;real-time PCR检测各组心肌细胞中内质网应激标记及凋亡相关分子GRP78、CRT和CHOP和caspase-12 mRNA的表达情况;Western blot法检测心肌细胞内内质网应激凋亡蛋白CHOP和caspase-12蛋白表达及Akt磷酸化水平。结果:与正常对照组相比,H/R模型组中心肌细胞搏动频率和细胞存活率显著下降,细胞凋亡率显著升高(P0.05);LDH、CK、AST和MDA含量升高而SOD活性显著降低(P0.05);GRP78、CRT、CHOP和caspase-12 mRNA表达显著增高(P0.05);CHOP和caspase-12蛋白表达随之增高而Akt的磷酸化水平显著降低(P0.05)。与H/R模型组相比,抗衰老Klotho蛋白作用H/R心肌细胞后,心肌细胞搏动频率和细胞存活率显著升高,细胞凋亡率逐渐降低(P0.05),LDH、CK、AST和MDA含量下降而SOD活性显著增高(P0.05),GRP78、CRT、CHOP和caspase-12 mRNA的表达逐渐降低(P0.05),CHOP和caspase-12蛋白表达也随之降低,而Akt磷酸化水平显著增加(P0.05)。结论:抗衰老Klotho蛋白能够提升H/R损伤后心肌细胞的存活率,抑制细胞凋亡,通过抵抗氧化应激和过度内质网应激反应发挥作用,并与激活Akt磷酸化有关。     

芳香新塔花总黄酮通过调控miR-874-3p对过氧化氢诱导的神经细胞氧化损伤和凋亡的影响

目的 探讨芳香新塔花总黄酮(Ziziphora clinopodioides flavonoids,ZCF)通过调控miR-874-3p表达影响过氧化氢(H2 O2)诱导的神经细胞氧化损伤和凋亡.方法 采用流式细胞术检测不同浓度ZCF对H2 O2诱导的SK-N-SH细胞凋亡的影响.试剂盒检测LDH、MDA和SOD水平....     

Semaphorin 3A过表达对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的:探讨semaphorin 3A(Sema 3A)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的影响。方法:构建Sema 3A过表达载体,以脂质体转染法转染HUVECs,过表达效果以qPCR和Western blot法验证;待测细胞以200μmol/L H_2O_2处理4 h;qPCR法检测炎性细胞因子水平;乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平以相应比色法检测;细胞活力以MTT法检测;流式细胞术检测细胞凋亡,凋亡相关蛋白cleaved caspase-3及Bcl-2水平以Western blot法检测。结果:Sema 3A过表达能显著增加H_2O_2诱导的HUVECs凋亡、炎性细胞因子分泌以及LDH和MDA含量,同时显著抑制SOD活性和细胞活力;Sema 3A对未经H_2O_2处理的HUVECs没有损伤效应,即其对HUVECs的损伤具有H_2O_2依赖性。结论:Sema 3A能显著加重H_2O_2诱导的HUVECs损伤,在氧化应激所致的内皮细胞损伤过程中发挥促进作用。     

SIGNAL TRANSDUCTION OF NITRIC OXIDE DONOR-INDUCED PROTECTION IN HYDROGEN PEROXIDE-MEDIATED APOPTOSIS IN H9C2 CARDIOMYOBLASTS

Nitric oxide (NO) attenuates hydrogen peroxide (H₂O₂)-mediated injury to H9C2 cardiomyoblasts. To examine the role of nitric oxide, cultured H9C2 cardiomyoblasts were treated with H₂O₂ for 2 h in the presence or absence of the NO donor, diethylamine nitric oxide (DEANO). DEANO (30 μM) attenuated H₂O₂-induced apoptosis in H9C2 cells. H₂O₂-exposed H9C2 cells resulted in apoptosis in a time-dependent manner estimated by DNA fragmentation assay, nuclear morphology stained with fluorescent dye, Hoechst 33258 and Annexin V staining. Pretreatment with z-VAD-FMK, a pancaspase inhibitor, or z-DEVD-CHO, a specific caspase-3 inhibitor, completely suppressed the DNA ladder in response to H₂O₂. An increase in caspase-3-like protease (DEVDase) activity was observed during apoptosis, but no caspase-1 activity (YVADase) was detected. Treatment of H9C2 cells with 100 μM H₂O₂, resulted in a strong activation of JNK/SAPK. However, the activation of JNK/SAPK was clearly attenuated by 30 μM DEANO. Furthermore, the dominant negative JNK and SEK1-expressing cells displayed a marked decrease in a number of apoptotic cells. This inhibition of JNK1 in the system is involved in the protection of H₂O₂-induced apoptosis in H9C2 cardiomyoblasts.     

载脂蛋白A-I模拟肽L-4F减轻过氧化氢诱导的小鼠骨髓内皮祖细胞损伤

 目的: 研究载脂蛋白A-I模拟肽L-4F是否减轻过氧化氢(hydrogen peroxide,H₂O₂)诱导的小鼠骨髓来源内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)氧化应激损伤及其机制。方法: 通过密度梯度离心法分离小鼠骨髓单个核细胞,条件培养基EGM-2MV诱导分化培养EPCs。对培养EPCs先以PI3K/AKT抑制剂LY294002(30 μmol/L)干预2 h后加入L-4F(75 mg/L)4 h,再加入100 μmol/L H₂O₂ 24 h。MTT 法检测细胞活力,试剂盒检测各实验组培养基超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,以评价细胞氧化与抗氧化平衡及脂质过氧化程度;流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;免疫印迹法检测p-AKT蛋白水平。结果: L-4F预处理显著抑制了H₂O₂诱导的细胞活力降低、SOD活性下降、MDA含量增加及细胞凋亡。H₂O₂下调p-AKT的蛋白水平,L-4F呈浓度依赖性地上调p-AKT的蛋白水平。LY294002抑制了L-4F减轻EPCs损伤的作用。结论: 载脂蛋白A-I 模拟肽L-4F部分通过PI3K/AKT通路减轻H₂O₂诱导的EPCs氧化应激损伤。     

蜕皮甾酮减轻心肌细胞氧化应激损伤

目的:研究蜕皮甾酮对心肌细胞氧化损伤的作用。方法:H9c2细胞常规培养,经过氧化氢(H_2O_2)处理后建立损伤模型,分为:对照组,蜕皮甾酮高剂量(2μmol/L)、中剂量(1.5μmol/L)和低剂量(1μmol/L)组,H_2O_2组。CCK-8法检测蜕皮甾酮对H9c2细胞活力的影响;流式细胞术检测H9c2细胞的凋亡率;用分光光度法检测乳酸脱氢酶、肌酸激酶同工酶的活性以及丙二醛、超氧化物歧化酶含量;激光共聚焦联合流式细胞术观察细胞内活性氧簇(ROS)的产生和线粒体膜电位的变化;用Western blot法检测H9c2细胞内Bax、Bcl-2和cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:在所选浓度范围内,蜕皮甾酮对H9c2细胞的活力无明显影响。与对照组比较,H_2O_2组H9c2细胞的LDH、CK-MB、ROS、MDA及凋亡率明显增加,通过不同浓度的蜕皮甾酮作用后,H9c2细胞的LDH、CK-MB、ROS、MDA及凋亡率显著下降,与H_2O_2组比较差异有统计学显著性。与对照组比较,H_2O_2组H9c2细胞的SOD和线粒体膜电位明显下降;与H_2O_2组比较,蜕皮甾酮高、中、低剂量组H9c2细胞的SOD和线粒体膜电位明显提高。对比对照组,H_2O_2组中H9c2细胞Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平明显升高,Bcl-2的表达水平明显下降;与H_2O_2组比较,蜕皮甾酮高、中、低剂量组中H9c2心肌细胞表达Bcl-2蛋白上升,Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平下降。结论:蜕皮甾酮对氧化应激条件下的H9c2细胞具有保护功能,其机制可能和减少氧化应激产物,增强抗氧化酶功能,调节线粒体功能和抑制细胞凋亡相关。     

脂联素通过激活PP2A减轻H_2O_2诱导的SH-SY5Y细胞损伤及tau蛋白过度磷酸化

目的:观察脂联素(adiponectin)对H2O2诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞活力及tau蛋白磷酸化的影响并探讨其作用机制。方法:采用MTT法并观察细胞形态,检测脂联素对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞活力损伤的影响;应用Western blotting观察脂联素对tau蛋白磷酸化及蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)和糖原合酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)活性的影响。结果:脂联素减轻了H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤(P0.01)。脂联素上调了H2O2诱导的SH-SY5Y细胞的PP2A活性,明显减轻此时tau的异常过度磷酸化(P0.01)。PP2A抑制剂冈田酸阻断了脂联素的保护作用(P0.01)。脂联素同时使H2O2诱导的SH-SY5Y细胞的GSK-3β磷酸化水平上升(P0.01)。结论:脂联素减轻H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤及tau蛋白异常过度磷酸化,其机制可能与激活PP2A并抑制GSK-3β信号途径有关。     

血小板源性生长因子受体α影响过氧化氢诱导的黑素细胞凋亡

目的:探讨血小板源性生长因子受体α(PDGFRα)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的黑素细胞凋亡的影响。方法:以黑素细胞PIGI为研究对象,分别用不同浓度的H_2O_2作用后,用MTT法检测细胞活力,并计算半数抑制浓度。经H_2O_2处理的PIGI细胞转染空载体p CMV6或PDGFRα过表达载体p CMV6-PDGFRα,以不做转染的细胞为空白对照,RT-q PCR和Western blot检测转染效率。用半数抑制浓度的H_2O_2作用于过表达PDGFRα的PIGI细胞,MTT法检测细胞活力,绘制细胞生长曲线;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测细胞中p38、磷酸化p38(p-p38)和cleaved caspase-3的蛋白水平;二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCDHF-DA)法检测细胞中活性氧簇(ROS)水平。结果:H_2O_2作用后PIGI细胞生长减慢,细胞凋亡率升高,细胞中ROS水平、p-p38和cleaved caspase-3蛋白水平升高(P0.05),H_2O_2的半数抑制浓度为0.7 mmol/L。PDGFRα过表达载体能够成功上调PIGI细胞中PDGFRα的mRNA和蛋白水平(P0.05)。过表达PDGFRα后经过H_2O_2处理的PIGI细胞存活率升高(P0.05),细胞凋亡率下降(P0.05),细胞中的ROS水平下降(P0.05),p-p38和cleaved caspase-3蛋白水平降低(P0.05)。结论:PDGFRα能够抑制H_2O_2诱导的黑素细胞凋亡,部分逆转H_2O_2对黑素细胞增殖的抑制作用,降低细胞中的ROS水平,其作用机制可能与p-p38和cleaved caspase-3蛋白水平的变化有关。     

枸杞多糖减轻过氧化氢诱导的人内皮样细胞EA.hy926氧化损伤

目的:研究枸杞多糖(LBP)对过氧化氢(H_2O_2)诱导人内皮样细胞EA.hy926氧化损伤的作用及机制。方法:用H_2O_2建立EA.hy926细胞氧化损伤模型,细胞共分为5个组:正常对照(control)组、模型(damage)组(H_2O_2,50 mmol/L)、LBP(100 mg/L)组、抗损伤(anti-damage)组(50 mg/L、100 mg/L和200 mg/L LBP+50 mmol/L H_2O_2)和LY294002(20μmol/L)组。采用CCK-8法检测细胞的活力;用Annexin V/PI双染法流式细胞术检测不同处理后EA.hy926细胞的凋亡;吖啶橙(AO)/溴乙啶(EB)染色法观察细胞凋亡的形态特征;划痕法测定细胞的迁移能力;一氧化氮(NO)试剂盒检测细胞培养上清中NO的水平;用ELISA法测定血管内皮生长因子(VEGF)的水平;Western blot检测cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、内皮型NO合酶(eNOS)、p-eNOS和p-Akt的蛋白水平。结果:量效结果显示浓度为100 mg/L的LBP预处理EA.hy926细胞1 h,然后加入H_2O_2(50 mmol/L)处理24 h对减轻H_2O_2诱导的EA.hy926细胞损伤的作用最显著。与damage组比较,LBP预处理可提高EA.hy926细胞的活力(P0.05),减少细胞凋亡(P0.05),并促进细胞迁移;上清液中VEGF和NO水平升高;Bcl-2/Bax比率明显升高,下调cleaved caspase-3蛋白水平,并上调eNOS和p-eNOS蛋白水平。此外,加入PI3K抑制剂LY294002后,LBP对H_2O_2损伤的EA.hy926细胞的保护作用减弱,表现为NO水平和p-Akt蛋白水平降低。结论:LBP能减轻H_2O_2对EA.hy926细胞的损伤作用,缓解H_2O_2诱导的凋亡,其机制与激活PI3K/Akt/eNOS信号通路密切相关。     

肝细胞生长因子对过氧化氢诱导肝细胞凋亡的影响

背景：肝细胞生长因子对多种细胞具有保护作用。 目的：观察肝细胞生长因子对过氧化氢诱导肝细胞凋亡的保护作用及其机制。 方法：采用人LO2肝细胞系,随机分成3组：正常对照组为正常培养的LO2细胞;模型组加入100 mmol/L过氧化氢作用LO2细胞4 h;肝细胞生长因子组加入50 mg/L 肝细胞生长因子预处理LO2细胞24 h,再加入100 mmol/L过氧化氢继续培养4 h后处理细胞。 结果与结论：体外培养的LO2细胞经100 mmol/L过氧化氢作用4 h后,LO2细胞可出现明显的凋亡现象,表现为细胞存活率降低(P < 0.01),Caspase-3蛋白表达增加(P < 0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P < 0.01)。给予质量浓度50 mg/L 肝细胞生长因子预处理24 h后再加入100 mmol/L过氧化氢继续培养4 h,LO2细胞的凋亡被显著抑制(P < 0.01),说明肝细胞生长因子可通过增加LO2细胞Bcl-2的表达来抑制过氧化氢诱导的LO2细胞凋亡。