胶质细胞源性神经营养因子对培养的背根神经节的影响

目的 探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)在体外促进正常胚胎大鼠背根神经节(DRGn)的存活及突起生长情况。方法 用原代分离培养法建立体外胚胎大鼠背根神经节单细胞培养体系，通过活体观察、MTT微量比色法、NSE免疫组织化学染色观察不同浓度GDNF对体外培养的正常感觉神经元的影响。结果 GDNF组培养的DRG神经元存活数量增加，神经元突起的长度比对照组明显增长。结论 GDNF能明显促进体外培养的正常大鼠胚胎背根神经节感觉神经元的存活及突起生长，表明GDNF对正常大鼠胚胎发育期感觉神经元具有神经营养作用。     

GDNF促进大鼠背根神经元的存活和突起生长

探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对正常胚胎大鼠背根神经节(DRGn)的存活及突起生长的作用。本实验采用神经组织原代分离培养的方法建立体外胚胎大鼠背根神经节单细胞培养体系，从细胞形态学及应用MTT。法观察1μg／L、10μg／L、50μg／L和100μg／L GDNF对体外培养的正常感觉神经元生长的影响。结果表明：GDNF能明显促进体外培养的正常大鼠背根神经节感觉神经元的存活及突起生长。提示GDNF对正常大鼠胚胎发育期感觉神经元具有神经营养作用。     

维甲酸、音猬因子对大鼠脊髓神经干细胞向运动神经元样细胞分化的影响

目的:分离大鼠胚胎的脊髓神经干细胞进行体外培养,探讨维甲酸(RA)、音猬因子(Shh)诱导其向运动神经元样细胞分化. 方法:应用无血清培养技术分离培养脊髓神经干细胞,通过5-溴-2-脱氧尿苷标记、免疫荧光显色检测细胞增殖、分化情况;培养液分组添加Shh、 RA或Shh+RA,观察神经干细胞向运动神经元样细胞的分化情况. 结果:大鼠胚胎脊髓可成功分离神经干细胞,分化后可表达神经元、星形胶质细胞的特异性抗原;诱导分化后结果显示Shh组未检测到胆碱乙酰转移酶阳性细胞,RA组为20.63%, Shh+RA组为66.84%,其差异具统计学意义.结论:从大鼠胚胎脊髓可成功分离神经干细胞,Shh、 RA可不同程度地诱导脊髓神经干细胞分化为运动神经元样细胞.     

GDNFR-〆在体外培养的大鼠脊髓和背根节神经元中分布的免疫组织化学研究

目的　观察胶质细胞源性神经营养因子受体 - α(GDNFR- α)在体外培养的大鼠脊髓和背根节神经元中的分布 ,探讨 GDNF对脊髓运动神经元和感觉神经元的作用。　方法　原代培养脊髓和背根节神经元 ,5 d后行抗 GDNFR- α多克隆抗体免疫组织化学 SP法染色。　结果　 GDNF免疫反应存在于体外培养的脊髓神经元、背根节神经元以及胶质细胞中。　结论　 GDNF可能对脊髓神经元、背根节神经元和胶质细胞的生理功能具有一定的调节作用     

GDNFR-α在体外培养的大鼠脊髓和背根节神经元中分布的免疫组织化学研究

目的观察胶质细胞源性神经营养因子受体-α(GDNFR-α)在体外培养的大鼠脊髓和背根节神经元中的分布,探讨GDNF对脊髓运动神经元和感觉神经元的作用. 方法原代培养脊髓和背根节神经元,5d后行抗GDNFR-α多克隆抗体免疫组织化学SP法染色. 结果 GDNF免疫反应存在于体外培养的脊髓神经元、背根节神经元以及胶质细胞中. 结论 GDNF可能对脊髓神经元、背根节神经元和胶质细胞的生理功能具有一定的调节作用.     

GDNF和HSV-GDNF对培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧后的Bcl-2表达的影响

目的:观察细胞胶质源性神经营养因子(Glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)和单纯疱疹病毒介导的GDNF(GDNF transformed by herpes simplex virus vector,HSV-GDNF)对体外培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧-复氧时的作用和Bcl-2表达的影响。方法:观察缺氧2h、4h和缺氧4h后恢复供氧24、72h时,脊髓运动神经元存活数,并用抗Bcl-2抗血清行免疫组织化学染色,对Bcl-2免疫反应阳性神经元作平均光密度分析。结果:经GDNf、HSV-GDNF孵育的脊髓运动神经元缺氧-复氧后Bcl-2表达较对照组明显增强,神经元损伤程度减轻,神经元存活数明显高于对照组,且HSV-GDNF组的效果更好。结论:GDNF、HSV-GDNF对缺氧-复氧的大鼠脊髓运动神经元有保护作用,HSV-GDNF比GDNF更能增强缺氧-复氧后脊髓运动神经元Bcl-2的表达,提高神经元存活数,抑制缺氧后神经元的死亡。     

大鼠骨骼肌植块诱导脊髓神经干细胞向运动神经元样细胞的分化

目的:分离大鼠胚胎的脊髓神经于细胞进行体外培养,探讨骨骼肌植块诱导其向运动神经元样细胞分化.方法:应用无血清培养技术分离培养脊髓神经干细胞,通过5-溴-2-脱氧尿苷标记、免疫荧光染色检测细胞增殖、分化情况;通过与骨骼肌植块共培养观察神经干细胞向运动神经无样细胞的分化情况.结果:大鼠胚胎脊髓可成功分离神经干细胞,分化后可表达神经元、星形胶质细胞的特异性抗原;诱导分化后结果显示.骨骼肌植块组有7.87%的细胞呈胆碱乙酰基转移酶阳性.与10%胎牛血清组(0.94%)比较具有统计学意义.结论:从大鼠胚胎脊髓可成功分离神经干细胞,骨骼肌植块可诱导脊髓神经干细胞分化为运动神经元样细胞.     

GDNF及HSV-GDNF对体外培养大鼠脊髓运动神经元受损后凋亡的影响

目的　观察胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)及单纯疱疹病毒载体介导的 GDNF(HSV- GDNF)对体外培养的胎鼠脊髓运动神经元在划痕损伤后凋亡的影响。　方法　对培养 12 d神经元行划痕损伤 ,并将其分成 4组 (无血清对照组、血清组、HSV- GDNF组和 GDNF组 ) ,给予不同培养液 ,定期观察各组的运动神经元存活数。分别于划痕损伤第 4d和第 7d时对神经元作 TU NEL 染色 ,检测运动神经元凋亡数 ,并在图像分析仪上对凋亡神经元作平均光密度的色谱分析。　结果　各组内运动神经元存活数与培养时间成反比。从对照组、HSV- GDNF组到 GDNF组 ,运动神经元凋亡数和凋亡神经元的平均光密度均依次减少 ,但对照组和血清组、GDNF组和 HSV-GDNF组间的运动神经元凋亡数以及凋亡神经元平均光密度均无显著差异。　结论　 GDNF和 HSV- GDNF能挽救生长发育过程中受损的脊髓运动神经元的凋亡 ,对体外培养的受损脊髓运动神经元具有一定的保护作用。     

细胞外基质对培养神经元细胞存活和轴突生长的影响

目的：探讨不同的细胞外基质对体外培养胚胎大鼠脊髓运动神经元和背根神经节感觉神经元生长的影响。方法：取大鼠胚胎脊髓腹侧组织和背根神经节体外分离培养，选取不同生长底物包括多聚赖氮酸(PLL)、Ⅰ型胶原(CoⅠ)、层粘连蛋白(LN)、PLL联合LN进行包被培养板，观察运动神经元和感觉神经元的体外生长状况。结果：PLL和LN联合包被时，神经元存活率高，细胞分散良好。CoⅠ包被时细胞聚集成团．突起粗长。结论：不同的细胞外基质影响神经元的生长方式，PLL联合LN包被是体外研究单一神经元胞体和突起的较好方法。     

胚胎大鼠脊髓运动神经元的体外培养及鉴定

本实验建立了体外胚胎大鼠脊髓运动神经元的分离培养,并进行鉴定。取孕15d SD大鼠胚胎的脊髓腹侧组织,用胰蛋白酶和胶原酶消化分离成单细胞悬液,进行原代细胞培养,应用神经元特异性的烯醇化酶(NSE)抗体和抗神经微丝抗体-SMI32单克隆抗体对培养细胞进行鉴定,同时行尼氏染色。结果分离培养的细胞鉴定为脊髓运动神经元(SMN),SMN在体外适宜的条件下可存活4周左右,可作为神经科学研究的一种手段。     

肌萎灵注射液对体外培养运动神经元的保护作用

目的：观察肌萎灵注射液(JWL)对体外培养运动神经元的保护作用。方法：应用密度离心法分离鼠胚脊髓运动神经元进行原代培养，加入合氨酸建立兴奋性氨基酸毒性损伤模型，评价不同浓度肌萎灵注射液对运动神经元的保护作用。MTT法检测细胞活力，NF-200免疫组化染色并进行图象分析，测定神经突起主干长度，生化分析仪检测培养上清中的乳酸脱氢酶(LDH)，TUNEL阳性神经元计数观察细胞凋亡。结果：(1)肌萎灵注射液能明显促进体外培养运动神经元的活力，促进神经突起的生长；(2)肌萎灵注射液可减少兴奋性氨基酸毒性损伤运动神经元LDH的漏出；(3)肌萎灵注射液能显著减少谷氨酸诱导的运动神经元凋亡。结论：肌萎灵注射液对正常运动神经元和兴奋性氨基酸毒性损伤运动神经元均具有保护作用．     

GDNF及dvHSV-GDNF对坐骨神经损伤大鼠脊髓前角运动神经元的影响

为了探讨胶质细胞源性神经营养因子及单纯疱疹病毒载体介导的胶质细胞源性神经营养因子 (dv HSV-GDNF)对坐骨神经损伤大鼠脊髓前角运动神经元的作用 ,本实验对成年大鼠造成双侧坐骨神经损伤后 ,于右侧损伤处分别施加胶质细胞源性神经营养因子和 dv HSV-GDNF;左侧损伤处施加生理盐水作为对照。分别取损伤后 4、7、14和 2 8d大鼠的脊髓 L4 ～ L6 节段 ,经石蜡包埋切片后行 Nissl染色 ,计数前角运动神经元数量并进行统计学分析。结果发现 :坐骨神经损伤后 4、7、14和 2 8d,右侧脊髓前角运动神经元的数量明显高于左侧。提示 :胶质细胞源性神经营养因子和 dv HSV-GDNF可减少坐骨神经损伤大鼠脊髓前角运动神经元的死亡     

Glial cell line-derived neurotrophic factor protects dopaminergic neurons from 6-hydroxydopamine toxicity in vitro.

Glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF) is a potent and specific neurotrophic factor for dopaminergic neurons. GDNF has been previously shown to protect dopaminergic neurons from lesion-induced degeneration in vivo. In this study we investigated the effect of GDNF on 6-hydroxydopamine (6-OHDA)-treated dopaminergic neurons in vitro. In dissociated cultures of embryonic rat mesencephalon, 6-OHDA exhibited a dose-dependent cytotoxicity on tyrosine hydroxylase (TH)-immunoreactive neurons. After pre-treatment with GDNF, however, 6-OHDA-induced loss of dopaminergic neurons was effectively reduced. It has been shown recently that GDNF signals through the receptor tyrosine kinase Ret and the GDNF receptor-alpha (GFR-alpha). By RT-PCR, we found both Ret- and GFR-alpha-genes to be expressed in the cultured mesencephalic cells. We propose that the neuroprotective effect of GDNF on 6-OHDA-treated dopaminergic neurons in vitro is most likely mediated by functional Ret receptor signaling pathways.     

GDNFR-α在成年大鼠脊髓和背根节的分布的免疫组织化学研究

为了探讨胶质细胞源性神经营养因子对脊髓运动神经元和感觉神经元的作用 ,本实验采用抗胶质细胞源性神经营养因子受体 -α多克隆抗体免疫组织化学方法 ,观察了胶质细胞源性神经营养因子受体 -α在成年大鼠腰段脊髓和背根节的分布。结果发现 :胶质细胞源性神经营养因子受体 -α免疫反应出现于成年大鼠腰段脊髓神经元和背根节神经元中。提示 :胶质细胞源性神经营养因子受体 -α可能对脊髓运动神经元、背根节神经元具有一定的调节作用     

Stimulation of production of glial cell line-derived neurotrophic factor and nitric oxide by lipopolysaccharide with different dose-responsiveness in cultured rat macrophages

To understand the molecular basis of inflammation-induced neurotrophic influences, we investigated the effects of lipopolysaccharide (LPS) on production of glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF) in the injured rat spinal cord or in cultured rat macrophages in comparison with the effects on synthesis/secretion of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and nitric oxide (NO). We found that GDNF mRNA expression lasted longer than that of iNOS mRNA in the injured spinal cord after injection of the high-dose LPS that had improved locomotor function, suggesting that the GDNF expression and its balance with NO generation were critical for injury regeneration. Therefore, we next investigated the effects of LPS on cultured macrophages. Levels of iNOS mRNA and secreted NO were enhanced by LPS at lower concentrations (10 ng/mL and above), whereas mRNA expression and secretion of GDNF were elevated only at higher concentrations (100 ng/mL and above). The culture medium of macrophages treated with 10 ng/mL of LPS was actually neurotoxic against cultured cortical neurons, whereas that conditioned at 1000 ng/mL was not. These observations suggest that neurotoxicity partly based on NO is induced by a lower degree of inflammation, whereas neurotrophic effects based on GDNF are manifested at a higher degree of inflammatory activity.