补骨脂素的植物雌激素作用及其机制探讨

目的:利用雌激素受体(ER)α,β阳性T47D细胞和子宫内膜癌Ishikawa细胞观察补骨脂素的雌激素样作用,并探讨其可能的作用机制。方法:以1×10^-8mol.L^-1雌二醇(E₂)为阳性对照药,利用MTT细胞增殖试验观察1×10^-5~1×10^-9mol.L^-1补骨脂素对T47D增殖的影响,同时观察1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素对Ishikawa细胞增殖的影响;以半定量RT-PCR法检测1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素对T47D细胞雌激素效应基因PR mRNA表达情况的影响;并以雌激素受体拮抗剂ICI 182,780为工具药进行干预。同时,通过流式细胞术检测1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素引起T47D细胞ER-α,ER-β含量的变化。结果:1×10^-5~1×10^-7mol.L^-1补骨脂素能够显著促进T47D细胞增殖;1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素对Ishikawa细胞增殖也有显著的促进作用;RT-PCR结果显示:1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素可使T47D细胞PR mRNA表达显著增加,表现出雌激素样作用,而且以上效应可被ICI 182,780拮抗。1×10^-6mol.L^-1和1×10^-7mol.L^-1补骨脂素还可诱导T47D细胞ER-α,ER-β表达明显增加。结论:补骨脂素具有植物雌激素作用,并且其作用是通过ER途径介导的。     

AngⅡ诱导的心肌肥大中c-fos,c-jun mRNA表达变化及丹参酮ⅡA的影响

目的:在原代培养的新生大鼠心肌细胞上,探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞c-fos,c-junmRNA表达变化及丹参酮ⅡA的影响。方法:取12只1 d龄新生Wistar乳鼠,进行心肌细胞培养,分为正常对照组,AngⅡ(10^-6mol.L^-1)组,AngⅡ(10^-6mol.L^-1)+丹参酮ⅡA(10^-8g.L^-1)组,AngⅡ(10^-6mol.L^-1)+缬沙坦(10^-6mol.L^-1)组,丹参酮ⅡA(10^-8g.L^-1)组,缬沙坦(10^-6mol.L^-1)组。相差显微镜测量心肌细胞大小,[³H]-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率;RT-PCR检测心肌细胞c-fos,c-jun mRNA的表达。结果:在培养液中加入AngⅡ作用30 min后,心肌细胞c-fos,c-jun mRNA的表达显著增强(P<0.01);AngⅡ作用24 h后,AngⅡ组心肌细胞蛋白质合成速率较对照组明显增加(P<0.01);AngⅡ持续作用7 d后,AngⅡ组心肌细胞直径较对照组显著增大(P<0.05)。采用丹参酮ⅡA或缬沙坦干预,二者可抑制AngⅡ诱导的c-fos,c-jun mRNA的表达增强(P<0.01)、心肌细胞蛋白质合成速率的增加(P<0.01)及心肌细胞直径增大(P<0.05)。结论:丹参酮ⅡA可通过抑制AngⅡ诱导的心肌细胞c-fos,c-jun的表达增强,减轻心肌肥大。     

小秦艽和秦艽核型的比较研究

 目的首次对小秦艽和秦艽的核型进行比较研究,为其遗传和进化提供了进一步的细胞学证据。方法根尖用0.002mol·L^-1的8-羟基喹啉溶液预处理5.7h,用2.5%混合酶液,于25℃下酶解1.6h,低渗处理3h(置于冰箱内),然后用空气干燥法制片。结果小秦艽的核型公式是K(2n)=26=2M+24m,属于"1A"型,染色体相对长度组成为2n=26=2L+10M₂+12M₁+2S;秦艽的核型公式是K(2n)=26=2M+20m+4sm,属于"2B"型,染色体相对长度组成为2n=26=6L+6M₂+8M₁+6S。结论小秦艽的核型与秦艽相比较,秦艽较为进化。     

新疆阿魏树脂不同分离部位对结肠癌细胞HCT116的抑制作用

目的: 分析新疆阿魏树脂不同分离部位对结肠癌细胞HCT116抑制作用的活性,并确定其有效活性部位。 方法: 通过磺酰罗丹明B比色法（SRB）与流式细胞术以细胞密度1×10⁵个mL,药物质量浓度250,125,62.5,31.25,15.6 mg·L^-1（流式细胞术药物浓度为62.5 mg·L^-1）,检测新疆阿魏树脂不同分离部位（石油醚部位、乙酸乙酯部位,甲醇部位）对结肠癌细胞 HCT116药物作用24 h后的增殖抑制与凋亡作用,以IC₅₀和总凋亡率作为指标衡量其各分离部位抑制肿瘤的活性效能。 结果: 石油醚部位:对结肠癌细胞HCT116增殖抑制IC₅₀ 68.7 mg·L^-1,总凋亡率为（43.4±1.1）%;乙酸乙酯部位:IC₅₀43.7 mg·L^-1, 总凋亡率为（56.2±0.9）%;甲醇部位:IC₅₀59.6 mg·L^-1,总凋亡率为（46.7±3.1）%。 结论: 新疆阿魏树脂乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位对结肠癌细胞HCT116细胞毒性作用较强并能促进其大量凋亡,初步确定为新疆阿魏树脂抗肿瘤活性部位。     

3种姜黄色素干预ox-LDL促平滑肌细胞增殖与影响LDL-R表达的研究

目的:研究3种不同结构的姜黄色素单体对牛主动脉平滑肌细胞(VSMC)增殖及牛VSMC低密度脂蛋白受体(LDL-R)表达的影响,解析构效关系。方法:用MTT比色法和流式细胞仪观察3种不同结构的姜黄色素单体对ox-LDL促牛VSMC增殖及对VSMC LDL-R表达的影响。结果:ox-LDL在2.5,5,10 mg.L^-1时,对VSMC有明显的促增殖作用,P<0.05。姜黄素16.5,33,66μmol.L^-1,一脱甲氧基姜黄素(简称一脱)33,66μmol.L^-1和二脱甲氧基姜黄素(简称二脱)66μmol.L^-1对10 mg.L^-1ox-LDL培养的VSMC有明显的抑制作用,P<0.05。3种姜黄色素的抑制率为姜黄素>一脱>二脱。3种姜黄色素在66,33,16.5μmol.L^-1时对VSMC LDL-R的表达均有明显的上调作用,其中姜黄素16.5μmol.L^-1组与正常组比较,P<0.05,其他组与正常组比较P<0.01,上调作用二脱>一脱>姜黄素,经组间方差分析,P<0.01,与姜黄色素抑制牛VSMC增殖作用相反。结论:3种不同结构姜黄色素单体能明显抑制ox-LDL促牛VSMC增殖作用,上调牛VSMC LDL-R表达,从而有可能延缓动脉粥样硬化的发生发展过程。     

丹参、黄花鼠尾和雪山鼠尾染色体数目的研究

目的：研究我国7个省的药用植物丹参及云南省的黄花鼠尾和雪山鼠尾的体细胞染色体数目。方法：取根尖用冰水混合物处理,卡诺氏固定液固定,1 mol·L^-1盐酸解离,改良苯酚品红染色后,制片观察。结果：丹参体细胞染色体数目为2n=2x=16；黄花鼠尾为2n=2x=16；雪山鼠尾为2n=4x=32,染色体基数x=8。同时还发现山东省和四川省的丹参体细胞内存在四倍体细胞型。结论：丹参、黄花鼠尾及雪山鼠尾的染色体基数为8,染色体数目分别为16,16和32。染色体属于微小型及小型染色体,很难用于核型分析。     

两面针染色体的核型分析

目的 对两面针原变种Zanthoxylum nitidum (Roxb.) DC.var.nitidum,毛两面针变种Z.nitidum (Roxb.) DC.var.tomentosum Huang以及原变种的3个类型的染色体进行计数和核型分析.方法 根尖采用0.002 mol/L的8-羟基喹啉预处理2～4 h,卡诺固定液4℃下固定30 min,1 mol/L盐酸水解4～5 min,醋酸地衣红染色,然后制片.结果 两面针原变种各类型和毛两面针具有相同的染色体数目2n=2x=68.原变种类型二的核型公式为K(2n)=2x=2st+13sm+19m.结论 两面针染色体的核型属于2B型,这是一种较高级的类型.     

槲皮素对大鼠乳鼠心脏成纤维细胞炎症分泌的干预作用

该研究采用LPS 100 μg·L^-1联合ATP 5 mmol·L^-1建立大鼠乳鼠心脏成纤维细胞炎症分泌模型,考察槲皮素对心脏成纤维细胞炎症因子TNF-α,IL-6及IL-1β分泌的抑制作用,并进一步采用Western blot考察槲皮素对p-NF-κB p65（S276）及p-Akt（S473）蛋白表达的影响,探讨槲皮素抑制心脏成纤维细胞炎症分泌的作用机制。研究结果发现：①槲皮素51.74~827.81 μmol·L^-1对大鼠心脏成纤维细胞活力无明显影响;②槲皮素82.78,41.39,20.70 μmol·L^-1均可显著抑制LPS 100 μg·L^-1作用3 h而后ATP 5 mmol·L^-1作用36 h所致的TNF-α,IL-1β的水平升高（P<0.01或P<0.05）;槲皮素82.78,41.39 μmol·L^-1均可显著抑制LPS 100 μg·L^-1作用3 h而后ATP 5 mmol·L^-1作用36 h所致的IL-6的水平升高（P<0.05）,而槲皮素20.70 μmol·L^-1未见明显影响;③槲皮素82.78,41.39,20.70 μmol·L^-1均可显著抑制LPS 100 μg·L^-1作用3 h而后ATP 5 mmol·L^-1作用15 min所致的NF-κB p65（S276）激活,以20.70 μmol·L^-1最明显;槲皮素82.78,41.39,20.70 μmol·L^-1均可显著抑制LPS 100 μg·L^-1作用3 h而后ATP 5 mmol·L^-1作用240 min所致的p-Akt（473）表达增加（P<0.05）。因此,该研究认为槲皮素可通过抑制NF-κB p65（S276）和Akt（473）的激活而减少心脏成纤维细胞TNF-α,IL-6及IL-1β炎症因子的分泌。     

头花蓼重复片段多态性分析-多聚酶链式反应体系建立与正交优化

目的: 建立头花蓼ISSR的反应体系。 方法: 通过正交试验,研究了Mg²⁺浓度、dNTP 浓度、Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度这4个因素在3个水平上对ISSR-PCR的影响。 结果: 确立了适合于头花蓼ISSR PCR的优化体系:25 μL PCR反应体系中含有1×buffer 缓冲液(10 mmol ·L^-1 KC1,8 mmol ·L^-1 (NH₄)₂SO₄,10 mmol ·L^-1 Tris ·HC1,pH 8.0),3.0 mmol ·L^-1 MgC1₂,d NTP 200 μmol ·L^-1,2.0 U ·25 μL^-1 Taq酶,0.25 mmol ·L^-1引物,40 ng ·L^-1模板DNA。利用温度梯度PCR,确定了最适宜的退火温度为48 ℃。 结论: 该优化体系的建立为进一步对头花蓼进行种质资源的遗传多样性分析奠定了基础。     

抱茎苦荬菜的组织培养及植株再生

目的:探讨苦荬菜组织培养和植株再生条件。方法:以苦荬菜叶片为外植体,应用正交设计方法,对愈伤组织的诱导和分化培养基进行优化筛选。结果:最佳的愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D 1.5 mg.L^-1+6-BA1.5 mg.L^-1+NAA1.0 mg.L^-1+IBA1.5 mg.L^-1+KT1.5 mg.L^-1,最佳的不定芽诱导培养基为MS+2,4-D 0.2 mg.L^-1+6-BA0.5 mg.L^-1+NAA 0.5 mg.L^-1+IBA 0.5 mg.L^-1+KT0.5 mg.L^-1,不定芽经附加IBA0.1 mg.L-1的1/4 MS培养基生根后移栽成活,获得再生植株。结论:建立了一套有效的苦荬菜组织培养再生体系。     

七叶皂苷钠含量的测定

 目的：研究七叶皂苷钠原料含量测定。方法：用氢氧化钠水解七叶皂苷钠结构上的两个酯基，然后将过剩氢氧化钠用盐酸回滴定。结果：4 h水解完全，终点明显，回收率为99.4%，RSD=0.32%。结论：方法准确，专一，与药效平行。     

黄芩素对大鼠离体胸主动脉的舒张作用及其机制

目的:研究黄芩素(BAI)对去甲肾上腺素(NE,1×10-6mol· L-1)和氯化钾(KCl,6×10-2 mol·L-1)预收缩健康成年雄性大鼠胸主动脉环的舒张作用,并探讨其作用机制.方法:应用离体血管环技术观察BAI对大鼠胸主动脉环张力的作用,记录NE预收缩的离体大鼠胸主动脉环张力变化.采用一氧化氮合酶(eNOS)抑制剂L-硝基精氨酸甲酯(L-NAME,1×10-4mol·L-1)、环氧合酶抑制剂吲哚美辛(INDO,1×10-5mol· L-1)和鸟苷酸环化酶抑制剂亚甲蓝(MB,1×10-5mol· L-1)和不同的钾通道阻滞剂预孵后观察BAI对血管环张力改变的影响,并观察对NE诱发的内钙释放和CaCl2引起的外钙内流的影响.结果:BAI对NE或KCl预收缩的内皮完整和去内皮大鼠离体胸主动脉环均产生明显的舒张作用,与溶剂组相比差异有统计学意义.预先用L-NAME,MB,KV通道阻断剂四氨基吡啶(4-AP,1×10-4mol· L-1),KC.通道阻断剂四乙胺(TEA,1×10-3mol· L-1),Kir通道阻断剂氯化钡(BaCl2,1×10-4mol·L-1)孵育后,BAI对预收缩的血管张力的改变与无阻断药时比较,差异均无统计学意义;预先用KATP通道阻断剂格列苯脲(Gli,1×10-5mol·L-1)和INDO孵育后,BAI的舒张血管作用减弱,与无阻断药比较差异有统计学意义(P＜0.05);且BAI对NE外钙内流引起的收缩有明显的抑制作用.结论:黄芩素可明显降低由NE诱发的血管环张力的升高,且其作用具有浓度依赖性,此作用有内皮依赖性和非内皮依赖性的特点.内皮依赖性收缩可能与前列环素(PGI2)途径有关,非内皮依赖机制与KATP通道和钙离子通道有关.     

补骨脂素对HL60/HT耐药细胞逆转及对细胞内Ca2+浓度影响研究

 目的研究补骨脂素对HL60/HT耐药细胞逆转作用及对耐药细胞内Ca²⁺浓度影响,探讨其可能作用机制。方法采用MTT法测定补骨脂素对细胞增殖抑制作用,高效液相色谱法检测细胞内HT的浓度,激光共聚焦显微镜测定细胞内不同时段和不同时间点的Ca²⁺浓度。结果补骨脂素在1～20μmol·L^-1能不同程度降低HT对HL60/HT细胞的IC50,并不同程度提高细胞内HT浓度;1～20μmol·L^-1补骨脂素在不同作用时段(24,48,96 h)对HL60/HT细胞内Ca2+浓度与作用时间成负相关,10～20μmol·L^-1补骨脂素在作用HL60/HT不同时间点(5,10,15,20,25 min)细胞内Ca2+浓度与作用时间成负相关性。结论补骨脂素能逆转HL60/HT细胞的MDR,其作用机制与影响耐药细胞内Ca²⁺浓度,故而增加细胞内HT浓度有关。     

天麻素对离体大鼠胸主动脉环的舒张作用及其机制

目的:研究天麻素对离体大鼠胸主动脉环的舒张作用并探讨其可能的机制。方法:记录去甲肾上腺素(NE)和KCl预收缩的离体大鼠主动脉环张力变化,观察天麻素的舒血管作用及不同工具药对其作用的影响。结果:天麻素对去甲肾上腺素(NE,1×10-6mol.L-1)和KCl(6×10-2mol.L-1)引起的去内皮和内皮完整胸主动脉环的收缩均有舒张作用,二者没有显著差别;L-硝基精氨酸甲酯(L-NAME,1×10-4mol.L-1)、亚甲蓝(MB,1×10-5mol.L-1)、吲哚美辛(INDO,1×10-5mol.L-1)并不能抑制天麻素对胸主动脉环的舒张作用;钾离子通道阻断剂4-氨基吡啶(4-AP,1×10-4mol.L-1)、四乙基胺(TEA,1×10-3 mol.L-1)、格列苯脲(glibenclamide,1×10-5mol.L-1)、BaCl2(1×10-4mol.L-1)均能抑制天麻素对血管环的舒张作用;在无钙环境下,预孵育天麻素对去甲肾上腺素收缩有明显抑制作用。结论:天麻素有浓度依赖性的血管舒张作用,此作用不依赖血管内皮,与钾离子通道及抑制血管平滑肌细胞内质网储存钙的释放和外钙内流有关系。     

一种提高高半胱氨酸液相色谱检测灵敏度的方法

 目的:建立一种用高效液相色谱测定微量高半胱氨酸的新方法?方法:反应条件研究采用分子荧光光谱法,高半胱氨酸测定采用反相高效液相色谱法?结果:使用邻苯二甲醛作荧光衍生试剂,在温度为50℃,pH8.4,反应4min时,衍生物相对荧光强度最大?在5×10^-9～2.7×10^-7mol·L^-1浓度范围内,荧光强度与浓度之间呈线性关系,检测限为4.2×10^-10mol·L^-1?结论:经过氧化氢处理后,HCY与OPA的衍生物荧光强度可提高5倍?     

舒普深、哌拉西林钠的胶束电动毛细管色谱分析

 目的 建立精密、快速简便地测定舒普深 (内含头孢哌酮和舒巴坦)及注射用哌拉西林含量的方法。方法 采用胶束电动毛细管色谱法（MECC）,测定运行液采用pH=7.5的0. 02 mol·L^-1磷酸盐缓冲液,其中含十二烷基硫酸钠(SDS)11 g·L^-1, 正丁醇22 mL·L^-1,正庚烷4 mL·L^-1。分离电压18 kV(运行电流85～95 μA)。结果 3种成分在10～20 min内得到完全分离,选择苯巴比妥作内标,各组分浓度在0.1～2 g·L^-1范围内浓度对内标峰面积之比呈良好线性关系。可准确测定3种成分的含量,批内RSD均小于1%(n=8),3种成分的加样回收率均在94.92%～105.3%之间,RSD均小于3.4%(n=8)。结论 用MECC同时测定头孢哌酮、舒巴坦、哌拉西林钠的含量,方便易行,结果准确可靠。     

注射用水飞蓟宾脂质纳米乳中水飞蓟宾含量测定

 目的建立直接紫外分光光度法，测定最新研制的注射用水飞蓟宾脂质纳米乳中水飞蓟宾含量的方法。方法选用1 mol·L^-1的NaOH碱溶液破乳，弃去以氯仿为萃取剂提取的纳米乳油相，水相层由纳米乳中释放出的水飞蓟宾以无水乙醇溶解，HCl中和，于288 nm处直接测定吸光度，计算水飞蓟宾的含量。结果水飞蓟宾在0.297 0～1.784 mg·mL^-1浓度范围内呈线性，r=0.999 9；高、中、低3种浓度的萃取回收率和方法回收率分别为96.08%～98.95%和99.72%～100.5%，n=3；日内和日间RSD分别为0.37%和3.6%,n=5。结论建立的方法准确度高，重现性好，本实验为水飞蓟宾脂质纳米乳新剂型质量标准的制定提供了方法学依据。     

山豆根多糖的性质和化学组成

 目的研究山豆根中各种水溶性多糖的性质、组成和类型。方法山豆根脱脂后,用热水,1mol·L^-1NaOH,2.5 mol·L^-1NaOH依次进行提取,分离纯化,进行组成分析和性质测定。结果共分离得到8种均一的多糖：山豆根水提多糖Ssa^-1,Ssa^-2,Ssa^-3,Ssa^-4,山豆根碱提多糖SSb-1FA, SSb^-2,SSb^-3和SSc^-1,根据组成和性质,它们分属于5种结构类型。结论山豆根中的可溶性多糖包括：淀粉、类淀粉、半纤维素、果胶,其中淀粉的含量最多,其次为果胶类多糖。     

促红细胞生成素对脑缺氧的保护作用

 目的在细胞水平探讨促红细胞生成素(EPO)对缺氧诱发的神经元损伤的改善作用及缺糖缺氧诱发的脑片损伤的改善作用。方法　采用原代新生大鼠皮层培养和小鼠脑片的方法,分别以形态学和二苯基四氮唑溴盐(MTT)及2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色为指标观察神经元及脑片的损伤和药物的改善作用。结果EPO在10^-11,10^-12mol·L^-1能显著改善缺氧24 h引起的培养神经元死亡,其在10^-9mol·L^-1能改善缺氧45min或缺糖缺氧15min引起的脑片梗死。结论EPO对缺氧诱发的神经元死亡和缺糖缺氧诱发的脑片梗死具有保护作用。     

高效液相色谱法测定血清中富马酸奎的平浓度

 目的：建立用高效液相色谱法(HPLC)测定血清中富马酸奎的平浓度的方法。方法：HPLC测定，流动相为甲醇-水-1 mol·L^-1醋酸铵-5 mol·L^-1氨水(400∶100∶5∶1)的混合液体，pH9.7,流速1 mL·min^-1,C₁₈柱，紫外检测波长254 nm，以外标法定量。结果：线性范围10～300 μg·L^-1，最低检测限5 μg·L^-1，平均提取回收率93.10%，日内与日间精密度平均分别为3.41%和4.16%。结论：用HPLC可以较好的对血清中富马酸奎的平进行定性和定量。