密骨颗粒含药血清对大鼠成骨样细胞增殖及Ca2+/CaM信使系统影响的研究

目的:通过观察补肾中药密骨颗粒含药血清对大鼠UMR106成骨样细胞增殖作用,胞内游离钙离子浓度及钙离子钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMPKⅡ)活性的影响,旨在从Ca2 /CaM信使转导系统阐明密骨颗粒防治骨质疏松症的机理.方法:以MTT法来测定密骨颗粒含药血清对UMR106成骨样细胞增殖的影响:用原子能吸收法测定胞内游离钙离子浓度;通过液体闪烁仪测定γ-32P-ATP掺入反应底物的cpm数,用被激活的钙调素激酶的百分比来表示CaMPKⅡ活性.结果:10%浓度、20%浓度的密骨颗粒防治组与骨疏康对照组的成骨样细胞增殖,胞内游离钙离子浓度及caMPKⅡ活性均明显高于正常组,且呈剂量依赖性.结论:密骨颗粒可能通过影响Ca2 /CaM信使系统对成骨样细胞增殖产生效应,从而达到防治骨质疏松症的目的.     

用血清药理学方法观察毛茛提取液对家兔主动脉平滑肌细胞内钙的影响

目的:观察毛茛提取液含药血清对培养家兔主动脉平滑肌细胞内游离钙浓度的影响.方法:体外培养家兔主动脉平滑肌细胞(VSMC),用荧光指示剂INDO-AM负载细胞,灌胃给予不同浓度药物,观察不同稀释浓度含药血清及不同时相药物血清对由NE诱导细胞内游离钙浓度([Ca2 ]i)增加的影响.结果:毛茛提取液各含药血清组均能降低由NE诱发的细胞内[Ca2 ]i的升高.结论:毛茛提取液含药血清能减少VSMC细胞内[Ca2 ]i.     

扶正通络解毒汤对急性心肌梗死大鼠心肌组织内游离钙离子浓度、MMP-9、MDA及SOD的影响

目的探讨扶正通络解毒汤对急性心肌梗死(AMI)大鼠模型血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、丙二醛(MDA)浓度、超氧化物歧化酶(SOD)活性及心肌组织内游离钙离子浓度的影响。方法选取60只健康雄性SD大鼠,采用随机数字表法分为造模组与假手术组,每组30只,造模组采用改良冠脉结扎手术法制作AMI大鼠模型,术中进行心电图监测,以大鼠左室前壁变白、心跳减弱、心电图Ⅱ导联ST段弓背向上抬高≥0.1 mV或病理性Q波作为手术成功的标志;假手术组仅开胸,不给予冠脉结扎,术后2 h抽取鼠尾静脉血测定血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性、心肌钙蛋白(cTnI)浓度,造模组大鼠血清CK-MB活性比值及c TnI浓度较假手术组升高,差异有统计学意义(P<0.05),证明造模成功。将30只AMI大鼠随机分为3组,每组10只,造模后笼养24 h灌胃给药,中药组给予8 g/kg扶正通络解毒汤,西药组给予2.6 mg/kg的硫氮酮,模型组给予等量0.9%氯化钠溶液。每日给药1次,给药第7日抽取鼠尾静脉血,采用酶联免疫吸附法在给药前后测定血清中MMP-9、MDA浓度和SOD活性。取血后处死大鼠,取出心脏组织,将梗死区剪成小块,采用比色法测定梗死区心肌细胞游离钙离子浓度。结果1)给药前,3组大鼠血清MMP-9、MDA浓度和SOD活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。给药7 d后,3组大鼠血清MMP-9、MDA浓度较给药前降低,血清SOD单位活性较给药前增加,差异有统计学意义(P<0.05)。且给药后3组血清MMP、MDA浓度、SOD活性差异有统计学意义(P<0.05)。MMP-9、MDA浓度:中药组<西药组<模型组;SOD活性:中药组>西药组>模型组。2)给药第7日,3组大鼠梗死区心肌组织内游离钙离子浓度比较,差异有统计学意义(P<0.05):中药组<西药组<模型组。结论扶正通络解毒汤可促进AMI模型大鼠的MMP-9、MDA浓度和SOD活性的改善,也能降低缺血心肌组织内游离钙离子浓度。     

密骨颗粒含药血清对大鼠成骨样细胞增殖及Ca^2＋／CaM信使系统影响的研究

目的：通过观察补肾中药密骨颗粒含药血清对大鼠UMR106成骨样细胞增殖作用，胞内游离钙离子浓度及钙离子钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMPKⅡ)活性的影响，旨在从Ca^2 ／CaM信使转导系统阐明密骨颗粒防治骨质疏松症的机理。方法：以MTT法来测定密骨颗粒含药血清对UMR106成骨样细胞增殖的影响：用原子能吸收法测定胞内游离钙离子浓度；通过液体闪烁仪测定γ-^32P-ATP掺入反应底物的cpm数．用被激活的钙调素激酶的百分比来表示CaMPKⅡ活性。结果：10％浓度、20％浓度的密骨颗粒防治组与骨疏康对照组的成骨样细胞增殖，胞内游离钙离子浓度及CaMPKⅡ活性均明显高于正常组，且呈剂量依赖性。结论：密骨颗粒可能通过影响Ca^2 ／CaM信使系统对成骨样细胞增殖产生效应，从而达到防治骨质疏松症的目的。     

虎杖提取物抗人肝癌细胞株HepG-2作用的实验研究

目的:观察虎杖提取物体外抗HepG-2细胞的作用.方法:用高效液相色谱法测定虎杖不同给药时间段大鼠血清中大黄素含量,通过3H-TdR掺入法药敏试验观察虎杖提取物及含药血清体外抗HepG-2肿瘤细胞的作用.结果:虎杖提取物及虎杖含药血清对HepG-2细胞均有很好的抑制作用,其抑制率随着药物浓度增加而相应增高.虎杖提取物灌胃1小时后血液中浓度可达高峰.结论:虎杖提取物体外具有较强的抗肿瘤作用.     

稳心草黄酮类化合物对肺动脉平滑肌细胞增殖及细胞内Ca2+浓度的影响

目的:观察稳心草黄酮类化合物对体外培养大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及细胞内钙离子浓度影响.方法:体外培养大鼠肺动脉平滑肌细胞,采用四氮唑蓝比色法(MTT法)测定细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期,检测细胞内钙离子浓度.结果:①稳心草黄酮类化合物对体外培养大鼠肺动脉平滑肌细胞有抑制增殖的作用,与空白对照组对比,差别有统计学意义(P＜0.05);②稳心草黄酮类化合物对体外培养大鼠肺动脉平滑肌细胞有增加G0/G1期细胞数目,减少G2/M期、S期细胞数目的作用.③稳心草黄酮类化合物能降低细胞内钙离子浓度,细胞内钙离子浓度降低的程度与药物剂量相关.结论:稳心草黄酮类化合物可能是通过增加肺动脉平滑肌细胞G0/G1期细胞数目,减少G2/M期、S期细胞数目,抑制其增殖.此外,稳心草黄酮类化合物可能会降低胞质内游离钙离子浓度,促进肺动脉平滑肌舒张.     

补中益气汤、党参、白术含药血清对脾虚大鼠壁细胞胞内Ca2+/CaM活性的影响

目的:检测脾虚大鼠壁细胞胞内Ca2 /CaM活性并探讨补脾方药血清对其的作用.方法:大鼠壁细胞的分离与纯化采用我室建立的常规方法,Ca2 /CaM活性检测采用环核苷酸磷酸二酯酶(PDE)法.结果:脾虚大鼠壁细胞胞内Ca2 /CaM活性明显高于正常大鼠;补脾方药血清作用后脾虚大鼠壁细胞胞内Ca2 /CaM活性均有不同程度的下降.结论:壁细胞胞内Ca2 /CaM活性的增高可能是脾虚大鼠的深层次病理机制之一;补脾方药血清可不同程度逆转和恢复脾虚大鼠这一微观病理趋势.     

夏枯草提取物对自发性高血压大鼠血压及血管活性物质的影响

目的:观察夏枯草提取物对自发性高血压大鼠血压的控制情况及相关指标的变化。方法:对照组为10只WKY大鼠,并将筛选出的40只自发性高血压大鼠(SHR)随机分为:模型组、阳性药组、夏枯草提取物高剂量组、夏枯草提取物低剂量组,每组10只。从14周龄时起给药,1次/d,连续灌胃5周。每周测量大鼠体质量。同时收集大鼠收缩压和行为学指标,给药5周后取材。运用ELISA检测大鼠给药5周后血清ANGⅡ、NE、ET、CGRP、TXB2的水平。结果:与模型组相比,阳性药组、夏枯草提取物高剂量组、夏枯草提取物低剂量组对收缩压均有一定程度的降低(P0.05),其中,夏枯草提取物高剂量组的降压效果优于夏枯草提取物低剂量组,阳性药组无显著变化(P0.05);随给药时间的延长,旋转耐受时间、易激惹程度评分均有不同程度的改善(P0.05),阳性药组无显著变化(P0.05),进行夏枯草提取物干预5周后,与模型组相比,阳性药组、夏枯草提取物高剂量组血清ANGⅡ浓度低于模型组(P0.05);各组血清NE、ET、TXB2浓度均低于模型组(P0.05),CGRP浓度均高于模型组(P0.05)。结论:夏枯草提取物降压的作用机理可能与降低血清中、NE、ET含量,增加血清中CGRP含量相关,且存在量效关系。     

用血清药理学方法观察糖足方对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:用血清药理学与现代分子生物学相结合的方法,观察糖足方对糖尿病大鼠模型血管平滑肌细胞增殖的影响。方法:选择纯种新西兰家兔,灌服不同剂量的糖足方中药制剂,制备含有不同药物浓度的兔血清;用组织块种植法体外培养糖尿病大鼠模型的髂动脉平滑肌细胞并用不同浓度含药血清进行干预;用同位素液闪测定氚标记胸腺嘧啶脱氧核糖核苷(3H-TDR)掺入量,检测含药血清对平滑肌细胞增殖的影响,并用透射电镜观察细胞超微结构的改变。结果:糖足方含药血清诸组呈浓度依赖性地表现为3H-TDR掺入量显著减少,3个含药血清组3H-TDR掺入量均明显低于正常血清对照组(P<0.01);糖足方可以改善糖尿病大鼠模型的血管平滑肌细胞超微结构改变,使VSMC仍保持收缩型的特征。结论:糖足方含药血清抑制体外培养糖尿病大鼠VSMC增殖和结构改变。     

复方芳香植物提取物对营养型肥胖大鼠的减肥作用

目的:研究一种复方芳香植物提取物对营养型肥胖大鼠的减肥作用.方法:制备了复方芳香植物水提取物和营养型肥胖大鼠模型,用提取物连续ig给药5周,测量体重、体脂,计算肥胖指数和Lee's指数,ELISA检测血清瘦素(LEP),制作石蜡切片观察脂肪组织形态变化,测定血清超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC),初步分析药物作用机制.结果:与营养型肥胖大鼠模型组比较,复方芳香植物提取物各剂量组(4 000,2 000,500 mg· kg-1)大鼠体重和体脂均显著减轻(P＜0.05),肥胖指数和Lee's指数也均有所降低,高剂量组肥胖指数显著降低(P＜0.05);提取物各剂量组均显著降低大鼠血清LEP水平(P＜0.01或P＜0.05),呈现剂量依赖性;切片观察高剂量组脂肪细胞显著变小(P＜0.01),单位视野细胞数目显著增加(P＜0.01);各剂量组均显著增加大鼠血清SOD和T-AOC含量、降低MDA含量(P＜0.01),呈现剂量依耐性.结论:本复方芳香植物提取物对营养型肥胖大鼠具有明显的减肥功效和良好的抗氧化作用.     

补脾方药对脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体及细胞内[Ca2+]i作用的观察

目的:观察脾虚模型大鼠壁细胞胃泌素受体及受体后信号细胞内钙离子的变化,并观察补脾方药党参、白术、补中益气汤对其的影响。方法:大鼠壁细胞采用EDTA-Pronase酶法消化而来。胃泌素受体检测采用放射配基结合实验,壁细胞内[Ca2 ]i变化测定采用双波长荧光法。结果:大黄脾虚模型大鼠壁细胞胃泌素受体结合位点数有显著降低,经补脾方药治疗后有所恢复;同时脾虚模型壁细胞内静息钙离子浓度明显低于正常组,经胃泌素刺激后壁细胞内[Ca2 ]i有所升高,且脾虚模型升高幅度明显高于正常组,经治疗后此状态有所恢复,但无统计学意义。结论:脾虚证可能与胃泌素受体低表达相关,且壁细胞内钙离子处于低代谢状态,但对于胃泌素刺激的反应性增强,进而可能导致酸分泌敏感性相对增高,胃黏膜易损性增强。补脾方药对其有一定的调节作用。     

补脾方药对脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体及细胞内钙离子浓度的影响

目的：观察补脾方药对脾虚模型大鼠壁细胞胃泌素受体及细胞内钙离子浓度的影响。方法：采用EDTA—Pronase酶法消化大鼠壁细胞，放射配基结合实验检测胃泌素受体，双波长荧光法测定壁细胞内钙离子浓度（[Ca^2＋]i）变化。结果：模型组大鼠壁细胞胃泌素受体结合位点数显著降低（P〈0．05），经补脾方药治疗后有所升高；同时模型组大鼠壁细胞内静息[Ca^2＋]i明显低于正常对照组（P〈0．01），经胃泌素刺激后壁细胞内[Ca^2＋]i有所升高，且模型组与党参组升高幅度明显高于正常对照组（P〈0．05），经治疗后此状态有所恢复，但差异无显著性。结论：脾虚证可能与胃泌素受体低表达相关，且壁细胞内钙离子处于低代谢状态，但对于胃泌素刺激的反应性增强，进而可能导致酸分泌敏感性相对增高，胃黏膜易损性增强，而补脾方药对其有一定的调节作用。     

电针对失血性低血压家兔心肌细胞游离钙镁浓度的影响

用ＡＲ－ＣＭ－ＣＯＭ阳离子测定系统和离子探针Ｆｕｒａ－２－ＡＭ及Ｆｕｒａｐｔｒａ－ＡＭ,观察了电针在治疗家兔实验性低血压时心肌细胞内游离钙离子浓度（［Ｃａ~（２＋）］ｉ）和游离镁离子浓度（［Ｍｇ~（２＋）］ｉ）的变化情况。股动脉放血造成家免失血性低血压,心肌细胞［Ｃａ~（２＋）］ｉ随血压降低而降低,［Ｍｇ~（２＋）］ｉ则升高,［ Ｃａ~（２＋）］ ｉ／［ Ｍｇ~（２＋）］ ｉ比值减小;电针拟“人中”、“承浆”穴位后,治疗组家兔血压及［ Ｃａ~（２＋）］ ｉ均明显高于低血压对照组,［Ｃａ~（２＋）］ｉ／［ Ｍｇ~（２＋）］ ｉ比值相应增大;电针对正常家兔心肌细胞［Ｃａ~（２＋）］ｉ和［Ｍｇ~（２＋）］ｉ均无明显影响。结果提示心肌细胞内游离Ｃａ~（２＋）、Ｍｇ~（２＋）在针刺调整血压的过程中起着一定的作用。     

水蛭提取液对视网膜色素上皮细胞内游离钙离子的影响

目的观察水蛭提取液对视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)内游离钙离子(Intracellular liber calcium ion,[Ca2 ]i)浓度的影响。方法利用体外培养的视网膜色素上皮细胞,采用双波长荧光分光光度计测量法测定视网膜色素上皮细胞内[Ca2 ]i浓度。结果空白组(A)133.4517±13.17789、凝血酶组(A1)192.2037±4.54292、水蛭组(A2)96.9935±8.80148、水蛭和凝血酶同时加组(A3)142.0867±26.47195、先加水蛭后加凝血酶组(A4)162.7284±29.13950、先加凝血酶后加水蛭组(A5)130.4810±20.48673。结论水蛭提取液能使RPE细胞内游离Ca2 浓度下降,为进一步深入研究水蛭提取液抑制RPE细胞增殖的作用机制,防治增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreo-retinopathy,PVR)提供了实验室依据。     

补中益气汤、党参、白术含药血清对离体脾虚大鼠壁细胞胞内[Ca~(2+)]i的影响

目的:探讨脾虚大鼠的微观病理状态及补脾方药血清对其的调节作用。方法:采用血清药理学方法,以第三代荧光指示剂Fluo-3/AM负载细胞,用共聚焦显微镜观察大鼠单个壁细胞胃泌素刺激后[Ca2+]i的动态变化。结果:睥虚大鼠壁细胞胃泌素刺激后[Ca2+]i升高幅度明显高于正常大鼠,达峰时间也有缩短趋势;补脾方药血清治疗后各组中的各项指标介于两者之间。结论:壁细胞胞内[Ca2+]i的异常变化可能是脾虚证的微观病理机制之一,Ca2+的异常介导可能参与了脾虚证的病理形成;补脾方药血清可不同程度恢复和逆转睥虚状态下的微观病理变化。     

脾虚大鼠胃壁细胞胞浆游离钙离子浓度及黄芪对其调节作用的研究

目的：检测脾虚模型大鼠胃壁细胞胞内[Ca^2 ]i及黄芪对[Ca^2 ]i的调节作用。方法：SD大鼠用大鼠造成脾虚模型,并用黄芪注射液治疗4日,用Fura-2/AM荧光分光光度法检测壁细胞静息状态下和胃泌素刺激下[Ca^2 ]i。结果：脾虚模型大鼠壁细胞静息状态下[Ca^2 ]i明显低于正常大鼠,胃泌素刺激后[Ca^2 ]i升高幅度亦明显低于正常组;脾虚黄芪治疗组大鼠静息状态下[Ca^2 ]i有一定升高,胃泌素刺激下黄芪治疗组壁细胞[C^2 ]i升高幅度明显高于模型组并与正常组比较无明显差异。结论：脾虚大鼠胃壁细胞静息状态下和胃泌素刺激下[C^2 ]i明显低于正常大鼠,说明脾虚证时壁细胞功能处于一种低代谢状态,推测胞内钙库容量可能降低,而且壁细胞表面胃泌素受体数下调或／和功能下降,不能正常介导胞外信号。黄芪能够使低下的胞内代谢水平有一定程度恢复,胞内钙库容量有一定增大,并能使胃泌素受体数上调和／或功能加强,这可能是黄芪健脾益气作用的一个细胞水平的新机制。     

补中益气汤药物血清对脾虚大鼠离体胃壁细胞胃泌素受体结合容量的影响

目的:观察补中益气汤等药物血清对离体脾虚大鼠胃壁细胞胃泌素受体结合容量的影响.方法:放射配基受体结合测定方法.结果:脾虚大鼠胃泌素受体结合容量减少,经补中益气汤含药血清作用后结合位点数上升.结论:补中益气汤药物血清对脾虚大鼠的结合位点数下降具有上调作用.     

独一味对蟾蜍离体心脏功能的影响

目的 研究独一味对蟾蜍离体心脏的作用及其相关机制.方法 采用离体蛙心灌流法观察独一味提取物对离体心脏的收缩力、心输出量和心率的影响.结果 ①独一味提取物使蟾蜍离体心脏的收缩力减弱,心输出量减少,心率略有减慢.在0.01～2.0 mg·ml~(-1)浓度范围内,独一味提取物抑制心肌收缩力的作用与剂量之间呈现明显的量效关系,最大效应可使心肌收缩力降低36.4%.②随灌流液中钙离子浓度增加,独一味对心脏的抑制作用增强;另外,独一味的心脏抑制作用可部分被阿托品拮抗.结论 独一味可抑制蟾蜍离体心脏的功能,其作用可能与抑制细胞外的钙离子内流,减少细胞内钙有关,而与心肌细胞受体的关系有待进一步研究.     

N-甲基-N-顺式-苯乙烯基-桂皮酰胺对青霉素诱发惊厥大鼠神经细胞内钙离子含量的影响

目的:检测黄皮核提取物N-甲基-N-顺式-苯乙烯基-桂皮酰胺(N-methyl-N-cis-styryl-cinnamamide,s-MSC)对皮层定位注射青霉素(Penicillin,PNC)诱发惊厥大鼠脑神经细胞内钙离子含量的影响,初步探讨其抗惊机理。方法:20只大鼠分为5组:正常对照组(20 ml/L吐温80+生理盐水)、模型对照组(20 ml/L吐温80+PNC)、丙戊酸钠120 mg/kg+PNC7、5 mg/kg s-MSC组(s-MSC 75 mg/kg+PNC)、150 mg/kg s-MSC组(s-MSC 150 mg/kg+PNC)。建立皮层定位注射PNC诱发大鼠癫痫模型,流式细胞术检测各组大鼠左侧大脑初级、次级躯体运动皮层及左侧海马神经细胞内钙离子含量。结果:皮层定位注射PNC后大鼠脑神经元内钙离子含量增加(P<0.01),丙戊酸钠及150 mg/kg的s-MSC均可使致癫大鼠脑神经元内钙离子含量降低(P<0.01)7,5 mg/kg s-MSC对于细胞内钙离子的降低无统计学意义。结论:黄皮核提取物N-甲基-N-顺式-苯乙烯基-桂皮酰胺对抗大鼠皮层定位注射PNC诱发的惊厥可能与其降低神经元内钙离子含量有关。