白花丹醌对TGF-β1 刺激人肝星状细胞α-SMA表达的影响

目的:研究白花丹醌(plumbagin)对转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的体外培养人肝星状细胞HSC-LX2α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和蛋白表达的影响。方法:体外培养HSC-LX2,随机设立空白组,TGF-β1刺激的模型组,TGF-β1+白花丹醌2.0μmol·L-1高剂量组,TGF-β1+白花丹醌1.5μmol·L-1中剂量组和TGF-β1+白花丹醌1.0μmol·L-1低剂量组,各药物与细胞孵育72 h后,采用RT-PCR检测各组HSC-LX2α-SMA mRNA的表达,采用免疫细胞化学方法(ICC)检测HSCLX2中α-SMA蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组α-SMA mRNA及蛋白表达明显升高(P0.01);与模型组比较,白花丹醌作用72 h后,高、中剂量组HSC-LX2细胞中α-SMA mRNA的表达明显降低(P0.01);免疫细胞化学结果显示白花丹醌高、中剂量组对HSC-LX2细胞α-SMA蛋白的表达有显著地抑制作用(P0.05),尤以高剂量组更明显(P0.01)。结论:白花丹醌能抑制HSC-LX2的活化和增殖,其机制之一可能是从mRNA水平和蛋白水平抑制α-SMA的表达,从而发挥其抗肝纤维化作用。     

丹皮酚对氧应激致HSC-LX2细胞TGF-β1及Smad4表达的影响

目的:研究丹皮酚对氧应激致肝星状细胞HSC-LX2增殖及TGF-β1、Smad4和CollagenⅠmRNA表达的影响。方法:在建立体外过氧化氢(H2O2)致HSC-LX2细胞氧应激模型基础上,MTT法检测丹皮酚对HSC-LX2细胞增殖的影响,生化检测HSC-LX2细胞内MDA含量及SOD活性,荧光定量PCR检测丹皮酚对氧应激致HSC-LX2细胞TGF-β1、Smad4和CollagenⅠmRNA表达的影响。结果:与DMSO组比较,丹皮酚呈剂量依赖性抑制H2O2诱导HSC-LX2增殖,降低细胞MDA含量并提高SOD活性,以50μmol/L浓度时最为明显(P<0.01);丹皮酚各剂量作用24 h后,HSC-LX2细胞中TGF-β1、Smad4和CollagenⅠmRNA的水平降低(P<0.01),并作用呈剂量依赖性。结论:丹皮酚预处理可下调肝星状细胞TGF-β1、Smad4 mRNA的表达,进而抑制肝星状细胞CollagenⅠ的合成,发挥抗肝纤维化作用。     

柴竭抑肝纤对大鼠肝星状细胞增殖和TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的:研究保肝护肝中药复方柴竭抑肝纤(CJYGX)通过肝星状细胞治疗肝纤维化的作用机制。方法:培养肝星状细胞T6(hepatic stellate cell T6,HSC-T6),设空白组、秋水仙碱1.0 mg·L~(-1)组和200,100,50,25,12.5,6.25 mg·L~(-1)质量CJYGX组,作用24 h后通过细胞计数试剂(cell counting kit-8,CCK-8)检测HSC-T6细胞的增殖情况,筛选合适的CJYGX药物浓度;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测CJYGX(200,100,50 mg·L~(-1))作用HSC-T6细胞24 h后转化生长因子-β1(TGF-β1),信号转导蛋白Smad2,Smad3,Smad4,Smad7 mRNA表达变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CJYGX(200,100,50 mg·L~(-1))作用HSC-T6细胞24 h后TGF-β1,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达变化。结果:(1)与空白组比较,200,100,50 mg·L~(-1)CJYGX对HSC-T6细胞具有显著的抑制增殖作用(P0.05)。(2)200,100,50 mg·L~(-1)CJYGX显著下调TGF-β1,Smad2,Smad3 mRNA的表达(P0.05);200,100 mg·L~(-1)CJYGX显著下调Smad4 mRNA表达,并显著上调Smad7 mRNA表达(P0.05)。(3)200,100 mg·L~(-1)CJYGX显著下调HSC-T6细胞TGF-β1和α-SMA蛋白表达(P0.05)。结论:CJYGX能抑制HSC-T6细胞的增殖,其作用机制与TGF-β1/Smad通路有关。     

逍遥散提取物对瘦素诱导活化人肝星状细胞的影响

目的探讨逍遥散提取物对瘦素诱导人肝星状细胞活化相关细胞因子及细胞外基质表达的影响。方法以瘦素刺激体外培养人肝星状细胞(HSC-LX2)活化,用逍遥散提取物进行干预;24 h后,免疫细胞化学法检测α-SMA和TGF-β1蛋白表达,ELISA法检测COL-Ⅰ、COL-III和HA的含量。结果与空白对照组比较,瘦素刺激组α-SMA和TGF-β1的蛋白表达以及COL-Ⅰ、COL-III和HA的含量均明显增加(P0.05,P0.01)。与瘦素刺激组比较,逍遥散组α-SMA和TGF-β1的蛋白表达以及COL-Ⅰ、COL-III和HA的含量均明显降低(P0.05,P0.01)。结论逍遥散提取物抗肝纤维化的作用机制可能与调节肝细胞中α-SMA和TGF-β1蛋白的异常表达,降低胶原含量有关。     

丹皮酚对氧应激致HSC-LX2细胞TGF-β1及Smad4表达的影响

目的:研究丹皮酚对氧应激致人源肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)LX2增殖及TGF-β1、Smad4和Collagen I mR-NA表达的影响。方法:在建立体外过氧化氢(H2O2)致HSC-LX2细胞氧应激模型基础上,用MTT法检测丹皮酚对HSC-LX2细胞增殖的影响,生化检测HSC-LX2细胞内MDA及SOD,荧光定量PCR检测丹皮酚对氧应激致HSC-LX2细胞TGF-β1、Smad4和Collagen ImRNA表达的影响。结果:丹皮酚呈剂量依赖性抑制H2O2诱导HSC-LX2增殖,抑制细胞MDA含量及增加SOD活性,以50μmol/L浓度时最为明显,与DMSO组比较差异有显著性(P<0.01);丹皮酚各剂量组作用24 h后,HSC-LX2细胞中TGF-β1、Smad4和Collagen ImRNA的水平降低,与DMSO组比较(P<0.01),且作用呈剂量依赖性。结论:丹皮酚预处理肝星状细胞可下调TGF-β1、Smad4mRNA的表达,进而抑制肝星状细胞Collagen I的合成,发挥抗肝纤维化作用。     

绿原酸对TGF-β_1刺激人肝星形细胞凋亡的影响

目的:探讨绿原酸对TGF-β_1刺激人肝星形细胞凋亡的影响。方法:取指数生长期细胞,随机分为空白对照组、TGF-β_1组及绿原酸高、中、低浓度组,以MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时定量PCR检测α-SMA、Bax、Bcl-2 mRNA的表达,免疫细胞化学检测α-SMA蛋白的表达,Western-blot检测Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:10μg/L TGF-β_1刺激HSC细胞后,HSC-LX2细胞中α-SMA、Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著升高,Bax mRNA及蛋白表达显著降低(P0.05)。与模型组比较,绿原酸高、中剂量组细胞活力、α-SMA、Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、Bax mRNA及蛋白表达显著升高(P0.05或P0.01)。结论:绿原酸通过调控Bax、Bcl-2的表达,诱导活化的HSC-LX2凋亡,清除活化的肝星形细胞,抗肝纤维化。     

夏枯草硫酸多糖对CCl4致大鼠肝纤维化及TGF-β1诱导的大鼠肝星状细胞活化的影响

目的:观察夏枯草硫酸多糖(PSSP)对四氯化碳(CCl4)所致的大鼠肝纤维化及转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导活化大鼠肝星状细胞-T6(HSC-T6)的影响,从而初步探讨PSSP抗纤维化的机制。方法:采用CCl4-橄榄油溶液腹腔注射诱导大鼠肝纤维化造模,随机分为5组,分别为正常组,模型组,秋水仙碱组(0.25 mg·kg-1),PSSP高剂量组(300 mg·kg-1)和PSSP低剂量组(100 mg·kg-1)。分别测定各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),层粘连蛋白(LN),透明质酸(HA),Ⅲ型前胶原(PCⅢ)和Ⅳ胶原(C-Ⅳ)的含量;采用苏木素-伊红(HE)及天狼猩红染色观察大鼠肝组织病理学改变;体外培养HSC-T6细胞;采用细胞增殖与活性法(CCK-8)测定PSSP对TGF-β1诱导的HSC-T6细胞增殖的影响;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HSC-T6细胞中Ⅰ型胶原(Col-I),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和蛋白的表达。结果:与模型组比较,PSSP可明显降低大鼠ALT,AST,HA,LN,PC-Ⅲ和C-Ⅳ的含量,并减轻大鼠肝纤维化程度(P0.01);PSSP可抑制TGF-β1诱导的HSC-T6细胞的增殖,减少HSC-T6细胞Col-I,α-SMA mRNA和蛋白的相对表达量(P0.01)。结论:PSSP具有很好的抗纤维化作用,其机制可能与抑制肝星状细胞活化及抑制胶原合成与沉积,减少细胞外基质(ECM)的生成并促进其降解有关。     

补骨脂酚对TGF-β诱导人肝星状细胞损伤的保护作用

目的:探讨补骨脂酚对转化生长因子-β(TGF-β)诱导人肝星状细胞损伤的保护作用及其机制。方法:通过噻唑蓝(MTT)比色法检测各组人肝星状细胞活性,筛选出补骨脂酚安全有效浓度;本实验分为空白组、模型组、补骨脂酚组(1×10-5mol·L-1)及雌二醇组(1×10-6mol·L-1),同样检测各组细胞的活性,除空白组外,其余各组均加入10μg·L-1TGF-β诱导人肝星状细胞损伤;分别采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),丙二醛(MDA)的水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞中基质金属蛋白酶-1(MMP-1),胶原蛋白-Ⅰ(Col-Ⅰ)mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中MMP-1,Col-Ⅰ蛋白的表达水平。结果:与模型组比较,1×10-5mol·L-1补骨脂酚显著提高TGF-β诱导人肝星状细胞及细胞中SOD,GSH-Px活性,显著降低细胞中MDA含量及Col-Ⅰ,MMP-1 mRNA和蛋白的表达(P0.01)。结论:补骨脂酚对TGF-α诱导人肝星状细胞损伤的保护作用,主要是通过提高细胞中抗氧化酶的活性、降低细胞中MMP-1,Col-ⅠmRNA和蛋白的含量。     

毛蕊异黄酮抗肝星状细胞活化的作用机制研究

目的观察毛蕊异黄酮对TGF-β1/Smads信号通路的影响,探讨毛蕊异黄酮抗肝星状细胞活化的作用机制。方法以人肝星状细胞株(LX-2)为研究对象,采用高内涵系统观察细胞增殖(Ed U)及细胞内F-actin骨架的聚合情况,RT-PCR法检测细胞I型胶原(Col-Ⅰ)、α-SMA、TGF-β1mRNA表达水平,Wstern-blot法检测细胞内p-Smad2、Smad2及Smad7蛋白表达水平。结果 TGF-β1可显著促进LX-2细胞增殖、活化,Ed U阳染细胞明显增加,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2及Col-ⅠmRNA或蛋白表达显著增加(P均0.05),Smad7表达显著下降;毛蕊异黄酮可显著降低TGF-β1诱导的LX-2中Ed U阳染细胞率以及α-SMA、p-Smad2与Col-Ⅰ的mRNA或蛋白表达(P均0.05),显著提高Smad7蛋白表达,且作用与TβRI激酶抑制剂SB-431542相当。结论毛蕊异黄酮可显著抑制肝星状细胞活化,其机制与抑制TGF-β1、p-Smad2的表达,提高Smad7蛋白表达,进而抑制TGF-β1/Smads信号转导有关。     

鳖甲提取物对抑制TGF-β诱导的大鼠肝星状细胞活化的影响

目的:研究鳖甲提取物相对分子质量6 k Da肽段(P6)对转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)诱导的大鼠肝星状细胞HSC-T6的活化增殖与肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)相关基因表达的影响,初步探究其抗肝纤维化的作用机制。方法:应用透析法得到P6;细胞增殖与活性检测(CCK8)法检测P6对HSC-T6细胞增殖的影响;实时荧光定量聚合酶反应(Real-time PCR)检测HSC-T6细胞内α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),I型胶原(collagen type I,Col I),基质金属蛋白酶抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)以及基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)分析HSC-T6细胞内α-SMA与Col I蛋白的表达。结果:与空白组比较,P6对HSC-T6细胞存活率无明显影响,但却能显著抑制TGF-β诱导的HSC-T6细胞的增殖(P0.05)。与TGF-β组比较,P6各浓度均能显著降低HSC-T6细胞中α-SMA,Col I,TIMP-1 mRNA的表达,增加MMP-2 mRNA的表达(P0.05,P0.01),明显降低α-SMA与Col I蛋白的表达。结论:P6能抑制TGF-β诱导的HSC-T6细胞的活化增殖,减少细胞外基质(extracellular matrix,ECM)生成,促进其降解,发挥抗肝纤维化作用。     

柔肝方含药血清对TGF-β1 诱导人肝星状细胞表达骨桥蛋白的影响及其机制

目的:研究柔肝方含药血清对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肝星状细胞表达骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的影响及其作用机制。方法:30只SD大鼠,随机分成正常组、柔肝方低剂量(9 g·kg-1)给药3 d及5 d组、柔肝方高剂量(18 g·kg-1)给药3 d及5 d组,每组6只,按10 m L·kg-1·d-1灌服饮用水或柔肝方药液,制备含药血清。用含10%正常血清或含药血清的DMEM培养基体外培养LX-2人肝星状细胞株,MTT法检测细胞增殖;LX-2细胞经含10%正常血清或含药血清的培养基预处理24 h,再予TGF-β1(终质量浓度10μg·L-1)刺激24 h,收集细胞,RT-PCR法检测OPN mRNA表达,Western blot法检测OPN及磷酸化蛋白激酶B(p-protein kinase B,p-PKB)蛋白表达。结果:与正常组比较,各含药血清组均能抑制LX-2细胞增殖(P0.05,P0.01);予含药血清预处理再经TGF-β1刺激的细胞,与正常组细胞比较,OPN mRNA,OPN和p-PKB蛋白表达明显下调(P0.05,P0.01)。结论:柔肝方含药血清对TGF-β1诱导的人肝星状细胞表达OPN具有抑制作用,其机制可能与抑制PI3K/PKB信号通路活化有关。     

大黄(*虫)虫丸对大鼠肝星状细胞表达TGF-β1的影响

目的:探讨大黄(*虫)虫丸对大鼠肝星状细胞表达转化生长因子β1(TGF-β1)的影响.方法:用CCl4复合因素致大鼠肝纤维化模型,同时分别给予3种剂量大黄(*虫)虫丸治疗,免疫组化方法观察TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的合成表达及纤维化程度分级.结果:经给予大黄(*虫)虫丸干预治疗常规剂量组大鼠TGF-β1、α-SMA表达与模型组比较差异无显著性(P＞0.05),但双倍剂量组和三倍剂量组TGF-β1、α-SMA在汇管区及不连续纤维间隔的表达明显减弱(P＜0.05,P＜0.01).结论:大黄(*虫)虫丸较大剂量能抑制肝星状细胞增殖和分泌TGF-β1,减少胶原生成,从而减弱肝星状细胞的自分泌放大效应,这可能是大黄(*虫)虫丸抗肝纤维化作用的主要机制之一.     

委陵菜酸对大鼠肝星状细胞的抑制作用及其机制分析

目的:研究委陵菜酸(tormentic acid,TA)对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)活化增殖及转化生长因子-β(TGF-β)/Smads信号通路的影响,探讨其抗纤维化的作用机制。方法:采用细胞活性毒性检测法(CCK-8)观察TA(0,50,60,70,80,90,100μmol·L-1)作用于HSC-T6细胞24 h时的增殖情况,计算半数抑制率(IC50)并筛选出最适浓度。取对数生长期的HSC-T6细胞,分为正常组,刺激组,TA高、中、低剂量(40,20,10μmol·L-1)组。利用姬姆萨染色液检测TA对细胞集落形成;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的变化;免疫组化法检测Ⅲ型胶原蛋白(Col-Ⅲ)的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Smad4,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。结果:TA能够抑制HSC-T6细胞的增殖,呈剂量依赖性,IC50为81.71μmol·L-1;与正常组比较,TA呈剂量依赖性地抑制HSC-T6细胞集落的生成,同时,TA能明显地促进细胞凋亡和将细胞阻滞在G2期(P0.05,P0.01);此外,还能降低Col-Ⅲ,α-SMA,Smad4蛋白表达(P0.05)。结论:委陵菜酸对肝星状细胞有明显的抑制作用,其机制可能与促进细胞凋亡、阻滞细胞周期,以及与阻断TGF-β/Smads通路有关。     

姜黄素对氧应激致大鼠肝星状细胞增殖 及TGF-β1表达的抑制作用

目的:探讨姜黄素体外对氧化应激致肝星状细胞(HSC-T6)增殖、表达转化生长因子-β1(TGF-β1)的抑制作用。方法:以100μmol.L-1过氧化氢(H2O2)致HSC氧应激,将细胞分成对照组、H2O2组和H2O2+姜素素干预组(终质量浓度分别为25,50,100μmol.L-1)5组,用四甲基偶氮唑(MTT)比色法检测HSC细胞增殖;用流式细胞术检测姜黄素对HSC细胞周期的影响;硫代巴比妥酸法、黄嘌呤氧化酶法和消化法分别检测细胞培养液丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和羟脯氨酸(HyP)的含量;用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测HSC表达TGF-β1的水平。结果:HSC经H2O2诱导后,细胞增殖显著(P<0.01),细胞培养液上清中MDA,Hyp含量明显上升,SOD活力下降(P<0.01);经姜黄素各剂量干预后,MDA,Hyp含量下降,SOD活力升高,以50,100μmol.L-1姜黄素浓度作用明显(P<0.01);H2O2刺激HSC后,TGF-β1 mRNA表达被上调(P<0.001),经姜黄素干预后,TGF-β1 mRNA表达水平下降(P<0.01)。结论:姜黄素可显著抑制氧化应激致HSC的增殖,该作用可能与其抗氧化、抑制TGF-β1的表达有关,表明姜黄素作为抗氧化剂在肝纤维化防治中具有重要价值。     

大黄虫丸对大鼠肝星状细胞表达TGF-β1的影响

目的：探讨大黄Zhe虫丸对大鼠肝星状细胞表达转化生长因子β1(TGF-β1)的影响。方法：用CCl4复合因素致大鼠肝纤维化模型,同时分别给予3种剂量大黄Zhe虫丸治疗,免疫组化方法观察TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的合成表达及纤维化程度分级。结果：经给予大黄Zhe虫丸干预治疗常规剂量组大鼠TGF-β1、α-SMA表达与模型组比较差异无显著性(P>0.05),但双倍剂量组和三倍剂量组TGF-β1、α-SMA在汇管区及不连续纤维间隔的表达明显减弱(P相似文献   

膈下逐瘀汤对大鼠纤维化肝组织α-SMA和TGF-β1表达的影响

目的:观察膈下逐瘀汤抗猪血清诱导的大鼠肝纤维化作用及其可能的作用机制。方法:采用猪血清腹腔注射诱导大鼠免疫性肝纤维化模型,VG染色法检测肝组织病理学改变,ELISA检测肝组织TGF-β1含量,定量RT-PCR检测肝组织TGF-β1和α-SMA mRNA表达。结果:与模型组大鼠比较,膈下逐瘀汤可显著降低猪血清诱导的肝纤维化程度,减少肝组织TGF-β1蛋白和mRNA表达,降低肝组织α-SMA mRNA表达。结论:膈下逐瘀汤可有效地逆转实验性大鼠肝纤维化,其机制可能与抑制肝星状细胞活化有关。     

八味柔肝颗粒对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1, α-SMA及TIMP-1表达的影响

目的:探讨八味柔肝颗粒对大鼠实验性肝纤维化的治疗作用。方法:以四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化模型。将大鼠随机分为八味柔肝颗粒治疗组(0.75,1.5,3 g·kg-1)、模型组、秋水仙咸碱组(0.5 mg·kg-1)和空白对照组。均连续ig 6周,观察各组肝组织中转移生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)蛋白表达情况。结果:八味柔肝颗粒组TGF-β1,α-SMA,TIMP-1表达明显低于模型组(P<0.01)。结论:八味柔肝颗粒能抑制CCl4诱导实验性肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1,α-SMA,TIMP-1的表达,可能是其抗肝纤维化的主要作用机制。     

罗汉果甜苷对体外人肝星状细胞活化和凋亡的影响

目的研究罗汉果甜苷对体外培养人肝星状细胞LX-2活化及凋亡的影响。方法体外培养LX-2,将其分为空白对照组、不同质量浓度的罗汉果甜苷干预组(80、160、240、320μg/mL),每组8瓶细胞,药物与细胞共同孵育24 h后,采用CCK-8试剂检测细胞增殖状态,用酶联免疫吸附法测定转化生长因子-β1(TGF-β1)和Ⅰ型胶原的蛋白分泌,用RT-PCR法检测TGF-β1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA的表达。用流式细胞仪双染法检测细胞凋亡。结果 CCK8结果显示罗汉果甜苷各剂量组作用LX-2细胞24 h后,细胞增殖均明显降低(P<0.05);ELISA和RT-PCR结果表明,与空白对照组比较,罗汉果甜苷各剂量组可抑制LX-2中TGF-β1和Ⅰ型胶原的蛋白分泌;并能抑制TGF-β1和α-SMA的mRNA表达(P<0.05)。流式细胞检测结果显示罗汉果甜苷各剂量组亦可剂量依赖性显著增加LX-2凋亡率。结论罗汉果甜苷可通过抑制TGF-β1和I型胶原的蛋白及TGF-β1和α-SMA的mRNA的表达来抑制肝星状细胞活化,还能促进肝星状细胞凋亡,从而发挥抗肝纤维化的作用。     

扶脾柔肝方对肝纤维化大鼠转化生长因子-β1/Smad信号通路的影响

目的探讨扶脾柔肝方对肝纤维化(HF)大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路的干预作用。方法将SD大鼠随机分为7组:正常对照组,模型组,秋水仙碱组(0.2 mg·kg~(-1)),扶正化瘀组(0.415 g·kg~(-1)),扶脾柔肝方低、中、高剂量组(20,40,80 g·kg~(-1))。采用大鼠背部皮下注射(sc)50%四氯化碳和灌胃(ig)30%乙醇的方法诱导HF,造模10周,成功建立大鼠HF模型,其后给予相应药物10 m L·kg~(-1),每日1次,连续4周,正常对照组、模型组给予等量生理盐水。检测大鼠血清TGF-β1;HE染色和Masson染色观察肝组织病理学变化;免疫组化法检测肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;同时,采用荧光定量PCR方法及免疫印迹法(Western blot)检测肝组织中TGF-β1、Smad 3、Smad 4、Smad7 mRNA及蛋白的表达。结果模型组的HF程度较其余组明显严重,与正常对照组比较,模型组大鼠血清TGF-β1明显升高(P0.01),肝组织α-SMA蛋白及TGF-β1、Smad3、Smad4 mRNA及蛋白表达升高Smad 7表达降低(P0.01);与模型组比较,扶脾柔肝方各组大鼠血清TGF-β1明显降低(P0.05,P0.01),肝组织α-SMA蛋白及TGF-β1、Smad3、Smad4 mRNA及蛋白表达下调(P0.01),Smad 7 mRNA及蛋白表达升高(P0.05,P0.01)。结论扶脾柔肝方下调HF肝组织α-SMA蛋白及TGF-β1、Smad3、Smad4 mRNA及蛋白表达水平,上调Smad7 mRNA及蛋白表达水平,可能是其抗HF作用机制之一。     

补肺益肾方对TGF-β1/BMP-4诱导的肺血管平滑肌细胞TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的:探讨补肺益肾方对转化生长因子-β1(TGF-β1)/骨形成蛋白-4(BMP-4)诱导的肺血管平滑肌细胞增殖及TGF-β1/Smad信号传导的影响,并探讨其相关的作用机制。方法:应用TGF-β1/BMP-4诱导人肺动脉平滑肌细胞增殖。细胞分为正常组(10%正常大鼠血清),诱导增殖组(含7.5μg·L-1TGF-β1与5.0μg·L-1BMP-4的10%正常大鼠血清),4%补肺益肾方含药血清(含7.5μg·L-1TGF-β1与5.0μg·L-1BMP-4,6%正常大鼠血清及4%补肺益肾大鼠血清),6%补肺益肾方含药血清(含7.5μg·L-1TGF-β1与5.0μg·L-1BMP-4,4%正常大鼠血清及6%补肺益肾大鼠血清)及8%补肺益肾方含药血清组(含7.5μg·L-1TGF-β1与5.0μg·L-1BMP-4,2%正常大鼠血清及8%补肺益肾大鼠血清)。24 h后,显微镜下观察细胞的密度,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine,Brd U)法检测细胞增殖,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Smad1,2,3和5以及p-Smad2/3蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1),结缔组织生长因子(CTGF),分化抑制因子-1(ID-1)和ID-2 mRNA的表达。结果:TGF-β1/BMP-4作用24 h后,细胞密度增加、细胞增殖率显著增加(P0.05),补肺益肾方抑制TGF-β1/BMP-4诱导的细胞增殖,显示出浓度依赖性,其中8%浓度显著抑制细胞增殖(P0.01)。TGF-β1/BMP-4及补肺益肾方均不影响Smad1,2,3和5蛋白的表达;但TGF-β1/BMP-4诱导p-Smad2/3的表达(P0.05),8%补肺益肾方显著抑制TGF-β1/BMP-4诱导的p-Smad2/3表达(P0.05)。TGF-β1/Smad2通路的下游效应基因的检测发现,TGF-β1/BMP-4及补肺益肾方均不影响PAI-1,ID-1和ID-2 mRNA的表达;但TGF-β1/BMP-4诱导后,CTGF mRNA表达水平的显著增加(P0.01),8%补肺益肾方抑制TGF-β1/BMP-4诱导的CTGF mRNA的表达(P0.05)。结论:补肺益肾方抑制TGF-β1与BMP-4合用诱导的肺动脉平滑肌细胞的增殖,抑制p-Smad2/3/CTGF通路的活化是可能的作用途径。