脑缺血对AD模型大鼠脑组织Aβ1-40表达的影响

目的 探讨脑缺血与阿尔茨海默病（AD）的相关性。方法 将40只大鼠随机分为假手术组、AD模型组（AD组）、脑缺血组（CI组）、AD脑缺血组（AD＋CI组），每组10只。AD组、AD＋CI组行AD造模，其后CI组、AD＋CI组行脑缺氧造模。分别于实验前、AD造模后14、21d（即脑缺血后1周）行学习记忆功能测试，采用免疫组化法检测大鼠脑组织β-淀粉样肽（Aβ1-40）阳性细胞数。结果 AD＋CI组在21d时学习记忆功能较假手术组、CI组、AD组明显下降；脑内Aβ1-40阳性细胞数明显增加。结论 脑缺血可加重AD病情，其可能机制为增加AB的神经毒性作用。     

不同严重程度阿尔茨海默病患者血浆Aβ40和Aβ42水平的比较

目的探讨血浆β淀粉样蛋白(Aβ)浓度对于评价阿尔茨海默病(AD)患者严重程度的应用价值。方法选取2014~2015年南昌市某社区老年痴呆随访队列中全部确诊的AD患者134例,按总体衰退量表GDS评分分为轻、中、重三组,通过双抗体夹心酶联免疫吸附法检测各组血浆中Aβ40和Aβ42蛋白浓度。结果不同严重程度AD患者组间血浆Aβ40浓度差异无统计学意义(F=0.250,P=0.619),Aβ42蛋白浓度差异有统计学意义(F=24.651,P<0.01)。结论血浆Aβ42蛋白浓度的检测有助于AD患者严重程度的评价,低血浆Aβ42蛋白浓度可能与AD的认知功能减退有关。     

APP17肽对半乳糖老化小鼠海马神经元Aβ及其相关蛋白表达的影响

目的　观察 D-半乳糖老化小鼠海马神经元 β-淀粉样肽 (Aβ)及其相关蛋白表达水平的变化以及 APP1 7肽对其改变的影响。方法　采用免疫组织化学染色和免疫印迹方法 ,检测 D-半乳糖老化小鼠模型海马神经元 Aβ、β-分泌酶、内质网 Aβ结合蛋白和早老蛋白 - 1的表达水平 ,并观察应用 APP1 7肽的保护作用。结果　对照组小鼠海马神经元 Aβ及其相关蛋白表达量少 ,而 D-半乳糖老化小鼠海马神经元 Aβ及其相关蛋白表达水平明显增加 ,与对照组比较差异有高度显著性 (P<0 .0 1 ) ,APP1 7肽组上述各种蛋白的表达结果与对照组接近。结论　 D-半乳糖老化小鼠海马神经元存在着 Aβ及其相关蛋白表达的上调 ,APP1 7肽可使之恢复正常水平 ,对神经元具有营养和保护作用     

TO901317对海马神经元β-分泌酶表达及β-淀粉样肽生成的影响

目的研究肝X受体(LXR)配体TO901317对海马神经元淀粉样前体蛋白(APP)、α-分泌酶(ADAM10)和β-分泌酶(BACE1)mRNA表达的影响及与β-淀粉样肽(Aβ)生成的关系。方法大鼠海马神经元培养至第7天,在饲养液中加入2.0μmol/LTO901317,继续培养48h。应用RT-PCR方法研究海马神经元APP、ADAM10和BACE1等基因的mRNA的表达,放免法检测培养液Aβ含量的变化。结果TO901317降低海马神经元APP和BACE1 mRNA表达(P<0.01),减少培养液Aβ含量(P<0.01),但不影响ADAM10 mRNA表达(P>0.05)。结论TO901317激活LXR,能通过降低APP和BACE1的表达来减少海马神经元Aβ分泌。     

跑台运动对APP/PS1转基因小鼠海马区Aβ含量的影响

目的探讨中等强度的跑台运动对转基因(Tg)淀粉样前体蛋白(APP)/γ-分泌酶(PS1)小鼠β-淀粉样蛋白(Aβ)生成和清除的影响。方法把Tg APP/PS1小鼠随机分为运动组(TE组)和安静组(TC组)各12只。TC组安静饲养,TE组给予12 w的运动干预。运动结束后检测各组海马区中低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)-1、晚期糖基化终末端产物受体(RAGE)、APP、脑啡肽酶(NEP)蛋白表达水平和Aβ40、Aβ42的浓度。结果与TC组相比较,TE组Aβ40浓度均显著下降(P0.05,P0.01),LRP-1、NEP蛋白表达水平显著升高(P0.01,P0.05),RAGE、APP、PS1蛋白相对表达水平显著下降(P0.01,P0.05)。结论 12 w中等强度的跑台运动可能通过提高LRP-1和NEP蛋白表达水平,下调APP、PS1和RAGE蛋白表达水平,减少Aβ生成、提高其降解和加速转运清除,从而降低Tg APP/PS1小鼠海马Aβ40和Aβ42浓度。     

人参皂苷Rg1对Aβ25-35诱导的Alzheimer''s病细胞模型作用的研究

目的 研究人参皂苷Rg1对β-淀粉样肽(Aβ25-35)诱导的神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH细胞)损伤的保护作用.方法 用Aβ25-35处理人SK-N-SH细胞,模拟Alzhermer's(AD)病人体内神经元病理损伤,并以人参皂苷Rg1拮抗其作用.采用MTT比色法检测细胞活力;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;DNA梯型观察凋亡细胞的DNA片段化;化学比色法测定细胞培养液和细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;RT-PCR检测细胞淀粉样肽蛋白前体(APP)基因、中性内肽酶(NEP)基因的表达情况;Western Blot检测细胞APP和NEP蛋白的表达情况.结果 20 μmol/L Aβ25-35诱导SK-N-SH细胞24 h细胞活力下降(均P＜0.01),细胞凋亡率为33.9%,DNA断裂呈片段状,细胞培养液及细胞内MDA含量增加,SOD活性降低.而人参皂苷Rg1能提高细胞的存活率,减少细胞损伤,使细胞培养液及细胞内MDA含量降低,SOD活性提高(P＜0.01),RT-PCR结果显示人参皂苷Rg1可降低APP基因的表达并提高NEP 基因的表达,同时Western Blot结果显示人参皂苷Rg1可降低APP蛋白的表达并提高NEP 蛋白的表达.结论 人参皂苷Rg1对Aβ25-35造成的细胞毒性具有一定的保护作用,其作用机理可能与人参皂苷Rg1能提高SK-N-SH细胞的抗氧化能力以及下调APP基因的表达,上调NEP基因的表达,从而抑制细胞凋亡有关.     

电针对阿尔茨海默病模型大鼠海马区蛋白激酶C和β-淀粉样蛋白表达的影响

目的 探讨电针对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力改善的机制.方法 将雄性SD大鼠60只随机分成正常组、模型对照组、模型组、西药组和电针组,每组12只.除正常组、模型对照组外,其余3组侧脑室注射链脲佐菌素(STZ)制备动物模型,模型对照组以同等剂量注射生理盐水.电针组治疗3个疗程.以Morris水迷宫评价大鼠学习记忆能力,用免疫组化法观测大鼠海马区蛋白激酶C(PKC)、β-淀粉样蛋白(Aβ)积分光密度值(IOD)和阳性细胞表达情况.结果 电针组大鼠海马区等神经元PKC光密度值、阳性细胞增多,Aβ光密度、阳性细胞数减少,与模型组比较有统计学意义(P＜0.05).结论 电针治疗显著改善AD模型大鼠学习记忆能力,其机制可能通过激活PKC减少脑内Aβ沉积.     

天麻素预处理对短暂性脑缺血大鼠脑组织S100β表达的影响

目的探讨天麻素对S100β表达的影响,明确天麻素的神经保护机制。方法采用线栓法阻断大脑中动脉(MCAO)2 h诱导建立暂时性局部脑缺血模型,术前连续3 d给予SD大鼠腹腔注射天麻素,免疫组织化染色观察缺血边缘区S100β阳性细胞数目变化;ELISA检测血清S100β的浓度。结果天麻素预处理组大鼠S100β阳性细胞数目增加较少,1、3 d与缺血组和生理盐水组比较均有显著差异(P<0.05)。ELISA测定结果显示MCAO后血清S100β含量1 d时迅速升高,3⁷ d成倍数下降。天麻素处理组1、3 d大鼠血清S100β浓度明显降低(P<0.05)。结论天麻素能明显抑制脑缺血再灌注后S100β的过度表达,减轻神经细胞损伤。     

以β-淀粉样肽为靶标治疗阿尔茨海默病

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是以进行性智能衰退为特征的中枢神经系统退行性疾病,其以细胞外老年斑(SP)、细胞内神经元纤维缠结(NFT)以及选择性神经元及突触丢失为主要病理特征。目前,其病因和发病机制尚未明确,因而缺乏     

褪黑素对Aβ诱导的大鼠脑组织GFAP和S100β蛋白表达的干预作用

目的观察褪黑素(MT)干预β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的大鼠脑组织胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和S100β蛋白的表达,探讨MT对老年痴呆症(AD)治疗的作用机制。方法 30只大鼠随机分为生理盐水对照组、β淀粉样蛋白(Aβ)诱导AD模型构建组(模型组)和AD模型+MT治疗组(MT组)。动物喂养40d时取大鼠脑组织,用HE染色观察脑组织病理变化,免疫组化染色法检测Aβ标记的脑组织部位以及Aβ对神经细胞毒性作用,同时检测胶质细胞的GFAP和S100-β蛋白的表达水平。结果 HE染色观察脑组织病变在MT组明显轻于模型组;免疫组化结果显示,Aβ的表达水平在模型组和MT组二者间无明显差异,但Aβ对海马CA3区神经元损伤作用在模型组要大于MT组。GFAP和S100β表达水平在模型组则显著高于MT组和正常组(P0.05)。结论用MT干预治疗,可降低AD模型鼠胶质细胞表达GFAP和S100β蛋白的水平,从而起到了减轻大脑神经元细胞的损伤作用。     

人参皂苷Rg1对Aβ_(25-35)诱导的Alzheime′rs病细胞模型作用的研究

目的研究人参皂苷Rg1对β-淀粉样肽(Aβ25-35)诱导的神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH细胞)损伤的保护作用。方法用Aβ25-35处理人SK-N-SH细胞,模拟Alzhermer′s(AD)病人体内神经元病理损伤,并以人参皂苷Rg1拮抗其作用。采用MTT比色法检测细胞活力;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;DNA梯型观察凋亡细胞的DNA片段化;化学比色法测定细胞培养液和细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;RT-PCR检测细胞淀粉样肽蛋白前体(APP)基因、中性内肽酶(NEP)基因的表达情况;Western Blot检测细胞APP和NEP蛋白的表达情况。结果20μmol/LAβ25-35诱导SK-N-SH细胞24 h细胞活力下降(均P<0.01),细胞凋亡率为33.9%,DNA断裂呈片段状,细胞培养液及细胞内MDA含量增加,SOD活性降低。而人参皂苷Rg1能提高细胞的存活率,减少细胞损伤,使细胞培养液及细胞内MDA含量降低,SOD活性提高(P<0.01),RT-PCR结果显示人参皂苷Rg1可降低APP基因的表达并提高NEP基因的表达,同时Western Blot结果显示人参皂苷Rg1可降低APP蛋白的表达并提高NEP蛋白的表达。结论人参皂苷Rg1对Aβ25-35造成的细胞毒性具有一定的保护作用,其作用机理可能与人参皂苷Rg1能提高SK-N-SH细胞的抗氧化能力以及下调APP基因的表达,上调NEP基因的表达,从而抑制细胞凋亡有关。     

Aβ1～42寡聚体与纤维体的制备及鉴定

目的 探讨Aβ1～42寡聚体和纤维体的制备及其鉴定方法,进而比较两者的细胞毒性.方法 设定不同的环境条件将Aβ1～42单体分别聚集成寡聚体和纤维体两种状态,利用原子力显微镜观察Aβ1 ～42的不同聚集状态.CCK-8法比较Aβ1～42寡聚体与纤维体对BV-2细胞存活率的影响.结果 原子力显微镜下观察Aβ1～42寡聚体呈球状或椭圆球状颗粒,高度为5 nm左右,Aβ1～42纤维体在镜下呈现长条纤维状聚集,高度约为3 nm左右,长度＞1 000 nm.CCK-8法显示Aβ1～42寡聚体和纤维体均对BV-2细胞具有损伤作用,并成剂量-效应关系.在同一浓度水平条件下,Aβ1～42寡聚体组的BV-2细胞存活率显著低于纤维体组(P值＜0.05).结论 原子力显微镜可直观地观察到Aβ1-42的不同聚集状态,Aβ1～42寡聚体比纤维体更具细胞毒性.     

转染PHGPx基因对Aβ及H2O2诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的　观察转染磷脂过氧化氢谷胱甘肽过氧化物酶 (PHGPx)基因对神经毒物质Aβ及H2 O2 诱导细胞凋亡的保护作用。方法　通过基因转染和筛选得到稳定高表达PHGPx基因的PC1 2 细胞 ,加入神经毒物质Aβ及H2 O2 ,采用电镜、DNA片段化测定、MTT比色微量分析及流式细胞凋亡率分析等方法观察转基因后抗逆变致凋亡的能力。结果　加入神经毒物质Aβ或H2 O2 后 ,未转染PHGPx基因的PC1 2 细胞出现凋亡的特征性形态学改变 ,电泳可见断裂的DNA片段 ,流式细胞仪检测细胞凋亡率较转染组明显增加。MTT比色微量分析显示细胞活力下降 (均P <0 0 1 )。结论　Aβ及H2 O2 能够诱导神经细胞凋亡。转染PHGPx基因能对抗Aβ、H2 O2 的神经毒性 ,保护Aβ、H2 O2 所致的神经细胞损伤凋亡 ,是AD等有活性氧参与的神经退行性疾病的一种新的基因干预治疗思路     

β淀粉样肽和谷氨酸能神经元的相互影响在阿尔茨海默病中的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer,s disease,AD,老年痴呆),是世界范围内最常见的痴呆类型.据《2018年全球阿尔茨海默报告》显示,2018年全球每3秒就会新发一例痴呆病例,全世界有5000万人患有痴呆,预计到2030年发病人数将达到8200万,治疗和护理费用达2万亿美元.我国作为一个人口大国,形势同样十分严...     

Aβ25～35诱导阿尔茨海默病模型大鼠海马神经元HSP70的表达

目的利用β-淀粉样蛋白(Aβ25～35)毒性作用诱导大鼠阿尔茨海默病(AD)模型,研究热休克蛋白70(HSP70)在海马神经元损伤中的表达.方法将大鼠随机分为2组:AD模型组、溶媒体组,在双侧海马分别注射2 μl(10 μg)Aβ25～35 、2 μl生理盐水;于海马注射第1,7,14,21天采用免疫组织化学、积分光密度分析等手段对各组大鼠脑HSP70的表达进行观察.结果 AD模型组手术第7天大鼠记忆明显减退(P<0.05),且HSP70在海马神经元内表达第1天时最高,第1～21天呈递减趋势,其中第14天锐减.结论 Aβ25～35通过氧化应激和损伤海马神经元等过程使HSP70的表达明显降低,HSP70表达是AD大鼠脑内神经元存活的重要标志.     

肝再生增强因子在β-淀粉样肽(25-35)诱导PC12细胞中的表达

目的观察肝再生增强因子(ALR)在β-淀粉样肽(25-35)(Aβ25-35)诱导PC12细胞阿尔茨海默病(AD)体外模型中的表达。方法体外培养大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞,分为实验组和空白对照组,实验组用终浓度为25μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞建立AD细胞模型,MTT法测细胞活力,TUNEL法检测细胞凋亡,应用RT-PCR检测ALR mRNA表达变化、Western印迹法检测ALR蛋白表达变化。结果 Aβ25-35组中PC12细胞的存活率较对照组明显降低(P<0.05),细胞凋亡率也明显增高(P<0.05),ALR mRNA在Aβ25-35组中表达较对照组明显降低(P<0.05),W estern印迹法检测其蛋白表达也较对照组下降(P<0.05)。结论 ALR在Aβ25-35诱导PC12细胞致AD模型中表达减少,可能与AD的发生发展有关。     

Aβ聚集的影响因素和Aβ寡聚体的生理功能

阿尔茨海默病(AD)俗称老年痴呆症,分为家族型AD和年龄依赖型AD,以后者为主,主要发病年龄在60～65岁以上.我国具有庞大的人口基数,随着老龄化社会的到来,明确AD的生理病理机制变化越来越重要.多年的研究表明大脑内的淀粉样β肽(Aβ)在AD的发生发展中起重要作用.     

溶酶体蛋白酶cathepsin L在阿尔茨海默病模型大鼠海马组织中的表达及意义

目的 观察阿尔茨海默病(AD)大鼠海马组织中溶酶体蛋白酶cathepsin L的表达.方法 采用Aβ-淀粉样肽(Aβ)大鼠海马注射制作AD动物模型.用免疫荧光染色和Western印迹法检测大鼠海马组织cathepsin L的表达.结果 Aβ海马内灌注造成Aβ沉积的AD模型在行为学和病理改变上一定程度地模拟了AD.AD大鼠海马区cathepsin L蛋白表达与正常组大鼠相比显著升高,cathepsin L蛋白荧光检测发现AD大鼠海马区cathepsin L阳性神经元数量明显增加.结论 在AD大鼠海马组织中cathepsin L表达升高.     

人参皂苷Rg1对Aβ25-35诱导的Alzheimer's病细胞模型作用的研究

目的研究人参皂苷Rg1对β-淀粉样肽（Aβ25-35）诱导的神经母细胞瘤细胞（SK-N-SH细胞）损伤的保护作用。方法用Aβ25-35处理人SK-N-SH细胞，模拟Alzhermer’s（AD）病人体内神经元病理损伤，并以人参皂苷Rg1拮抗其作用。采用MTT比色法检测细胞活力；应用流式细胞仪检测细胞凋亡率；DNA梯型观察凋亡细胞的DNA片段化；化学比色法测定细胞培养液和细胞内丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性；RT-PCR检测细胞淀粉样肽蛋白前体（APP）基因、中性内肽酶（NEP）基因的表达情况；Western Blot检测细胞APP和NEP蛋白的表达情况。结果20μmol／LAβ25-35诱导SK-N-SH细胞24h细胞活力下降（均P〈0．01），细胞凋亡率为33．9％，DNA断裂呈片段状，细胞培养液及细胞内MDA含量增加，SOD活性降低。而人参皂苷Rg1能提高细胞的存活率，减少细胞损伤，使细胞培养液及细胞内MDA含量降低，SOD活性提高（P〈0．01），RT—PCR结果显示人参皂苷Rg1可降低APP基因的表达并提高NEP基因的表达，同时Western Blot结果显示人参皂苷Rg1可降低APP蛋白的表达并提高NEP蛋白的表达。结论人参皂苷Rg1对Aβ25-35造成的细胞毒性具有一定的保护作用，其作用机理可能与人参皂苷Rg1能提高SK—N—SH细胞的抗氧化能力以及下调APP基因的表达，上调NEP基因的表达，从而抑制细胞凋亡有关。