人卵巢癌细胞HABP1的表达及其与侵袭转移能力的相关性

目的探讨透明质酸结合蛋白1（HABP1）在卵巢癌侵袭转移过程中的作用。方法分别用荧光实时定量RT—PCR和Western blot法检测HABP1 mRNA和HABP1蛋白在人卵巢癌细胞株HO-8910及高转移HO-8910PM细胞株中的表达,采用体外侵袭实验测定细胞侵袭能力。结果HO-8910PM中HABP1 mRNA和蛋白的表达水平均高于HO-8910,HO-8910PM的侵袭转移能力高于HO-8910。结论HABP1的高表达可能在人卵巢癌细胞的侵袭转移过程中发挥一定作用。     

大黄素对卵巢癌HO-8910PM细胞中PRL-3和NAG-1表达的影响

目的 研究大黄素对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞中促肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)和非类固醇抗炎药物激活基因(NAG-1)表达的影响.方法 采用Western blot法检测大黄素对HO-8910PM细胞中PRL-3和NAG-1蛋白表达的影响,荧光定量实时PCR分析大黄素对HO-8910PM细胞中PRL-3和NAG-1 mRNA表达的影响.结果 大黄素能明显下调HO-8910PM细胞中PRL-3的表达,强烈上调NAG-1表达.结论 大黄素影响高转移卵巢癌细胞转移能力可能与PRL-3和NAG-1表达有关.     

TRPV6对人卵巢癌细胞株HO-8910PM迁移的影响

目的探讨TRPV6对卵巢癌细胞株HO-8910PM迁移能力的影响。方法细胞株分别瞬时转染TRPV6的特异性siRNA干扰序列,然后分别通过RT-PCR和Western-blot检测HO-8910PM细胞干扰前后TRPV6基因和蛋白表达变化,通过划痕试验和Transwell小室试验检测TRPV6对HO-8910PM细胞迁移的影响。结果 RT-PCR和Western-blot证实了TRPV6在人卵巢癌高转移细胞株HO-8910PM中的表达以及TRPV6 RNA干扰序列的干扰效率;划痕试验和Transwell小室试验表明,与HO-8910PM阴性干扰对照细胞相比,HO-8910PM-TRPV6-siRNA1和siR-NA2的迁移能力均显著下降(P<0.01)。结论卵巢癌细胞HO-8910PM中TRPV6的表达水平高低与该细胞迁移能力高低呈正相关,TRPV6有可能成为卵巢癌转移预防和治疗的新靶点。     

18β-GA对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、黏附和侵袭能力的影响

目的观察18β-甘草次酸（18β-GA）对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、黏附和侵袭能力及黏附斑激酶（FAK）、基质金属蛋白酶（MMP）-9表达的影响。方法将18β-GA作用于HO-8910PM细胞,采用MTT法检测HO-8910PM细胞增殖抑制率;细胞黏附试验检测细胞黏附能力;Transwell chamber法检测细胞侵袭能力;Westernblot法检测细胞FAK、MMP-9蛋白表达水平。结果 18β-GA明显抑制高转移卵巢癌细胞HO-8910PM的生长增殖、黏附和侵袭能力;Western blot法检测表明药物能下调FAK、MMP-9蛋白的表达。结论 18β-GA可抑制HO-8910PM细胞黏附、侵袭,其机制可能是通过下调FAK、MMP-9蛋白表达而进行的。     

双向调控FABP-5表达对人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠移植瘤放射敏感性的影响

目的经过临床病理学标本检测人卵巢癌组织表皮型脂肪酸结合蛋白(FABP)-5蛋白异常高表达后,探讨上调和下调FABP-5基因表达对卵巢癌细胞株SKOV3细胞裸鼠移植瘤放射敏感性的影响。方法采用实时聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法检测30例卵巢癌及癌旁组织中FABP-5 mRNA和蛋白表达水平,通过电穿孔法分别将FABP-5 siRNA和重组表达载体pcDNA3.1-FABP-5转染卵巢癌SKOV3细胞后,G418筛选得到稳定转染细胞系。转染48 h后采用RT-PCR和Western印迹行细胞中FABP-5 mRNA和蛋白检测,细胞计数试剂盒(CCK)-8检测细胞增殖,克隆形成实验观察上调和下调FABP-5表达对卵巢癌细胞株SKOV3的放射敏感性的影响,末端脱氧核苷酸转移酶标记(TUNEL)法检测细胞凋亡;裸鼠移植瘤实验检测调节FABP-5表达联合X射线照射对卵巢癌细胞的影响。结果 FABP-5蛋白在人卵巢癌组织中的相对表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05),FABP-5下调组SKOV3细胞FABP-5基因水平明显降低(P<0.05),FABP-5上调组明显升高(P<0.05)。FABP-5下调组SKOV3细胞放射敏感性显著升高(P<0.05),FABP-5上调组SKOV3细胞放射敏感性显著降低(P<0.05)。FABP-5下调组SKOV3细胞增殖被显著抑制,细胞凋亡率显著升高(P<0.05);FABP-5上调组SKOV3细胞凋亡率显著降低(P<0.05),FABP-5下调组较对照组裸鼠移植瘤平均体积明显缩小(P<0.05);FABP-5上调组较对照组裸鼠移植瘤平均体积明显增大(P<0.05)。20 Gy X射线照射后FABP-5下调组瘤体平均体积较照射前明显减小(P<0.05);而上调组裸鼠种植瘤平均体积较照射前变化不大(P>0.05)。结论下调FABP-5表达能抑制人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠移植瘤的生长,增强瘤体的放射敏感性,上调FABP-5表达则使肿瘤辐射抗拒。     

白藜芦醇诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡的作用机制

目的 探讨白藜芦醇对人卵巢癌SKOV3细胞的诱导凋亡作用,并探讨该凋亡的发生机制.方法 对人卵巢癌SKOV3细胞采用不同浓度的白藜芦醇（400、200、100、50、25 μmol/L）处理24、48、72 h后,采用MTT法检测细胞存活率,透射电镜观察细胞形态变化,流式细胞仪分析细胞周期的改变,RT-PCR法、Western blot法检测细胞mRNA、蛋白表达.结果 白藜芦醇对人卵巢癌SKOV3细胞抑制作用明显,并且呈时间和浓度依赖性关系（P＜0.05或＜0.01）;白藜芦醇作用后SKOV3细胞出现典型的凋亡超微结构改变;SKOV3细胞凋亡并阻滞于S期;细胞中Bcl-2 mRNA、蛋白表达下调,Bax mRNA、蛋白表达上调.结论 白藜芦醇能有效地抑制SKOV3细胞生长,其机制可能与抑制抗凋亡因子Bcl-2的表达、增强凋亡促进因子Bax的表达有关.     

去氧鬼臼毒素对人卵巢癌细胞SKOV3增殖的抑制作用

目的研究去氧鬼臼毒素(DPPT)对人卵巢癌细胞SKOV3增殖的抑制作用。方法将人卵巢癌细胞SKOV3分为低、中、高浓度DPPT组(2.5μmol/L、5.0μmol/L、10.0μmol/L),在培养24 h和48 h后通过噻唑蓝(MTT)法检测SKOV3增殖率;培养48 h和72 h后通过蛋白质印迹法检测SKOV3中细胞外信号调节激酶(ERK)1/2蛋白的表达情况。结果低、中、高浓度DPPT组SKOV3细胞增殖率及48、72 h ERK1/2蛋白相对表达量均显著低于对照组(P0.05)。结论 DPPT可以有效抑制人卵巢癌细胞SKOV3的增殖,其作用机制与抑制ERK1/2蛋白的表达相关。     

Nectin-4在卵巢癌细胞株SKOV3中的表达及意义

目的探讨Nectin-4在卵巢癌细胞株SKOV3中的表达及其在体外侵袭和转移中的作用。方法构建Nectin-4真核表达载体,以脂质体介导转染卵巢癌细胞SKOV3,用RT-PCR和免疫组织化学法检测SKOV3 Nectin-4mRNA及蛋白表达水平。结果转染Nectin-4的实验组细胞与转染空载体的对照组细胞比较,Nectin-4 mRNA的表达量差异有统计学意义（0.84±0.09 vs 0.37±0.05,P〈0.01）;Nectin-4蛋白表达水平差异有统计学意义（0.67±0.10 vs 0.16±0.09,P〈0.01）。Boyden小室体外侵袭实验中实验组与对照组平均侵袭百分数分别为（46.0±6.07）%、（25.3±7.56）%,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论Nectin-4增强了卵巢癌细胞SKOV3体外侵袭和转移的能力,其机制与Nectin-4增强细胞的运动能力及增殖能力有关。     

67kD层粘连蛋白受体在三种卵巢癌细胞株中表达的研究

目的 检测三种不同来源卵巢癌细胞株中67kD层粘连蛋白受体（67k DLN-R）的表达,探讨其在卵巢癌侵袭转移中的作用。方法 体外培养腹水来源的人卵巢癌细胞株HRA、SKOV3及性实体瘤来源的人卵巢腺癌细胞株3AO。以免疫组化和逆转录-聚合酶链反应技术（RT-PCR）检测各细胞株中67kD LN-R蛋白表达及其mRNA水平。结果 三种细胞的胞膜及胞浆中67kD LN-R蛋白均呈阳性表达,但HRA、SKOV3明显强于3AO细胞,差异有显著性（P均〈0．05）;HRA、SKOV3均可见明显的474bp的67kD LN-R特异性条带,其mRNA分别为1．156、1．081;3AO特异性条带极弱,其mRNA为0．358;前两者与后者相比,差异有显著性（P均〈0．05）。结论 67kD LN-R在卵巢癌侵袭转移中发挥重要作用。     

CO2气腹对裸鼠卵巢癌腹腔内转移和扩散的影响

目的探讨CO2气腹对裸鼠卵巢癌腹腔内生长和扩散的影响。方法将180只裸鼠随机分成两组,腹腔内分别注射卵巢癌细胞HO-8910和SKOV3,两组分别于注射卵巢癌细胞后14、21 d按不同手术要求再次分组,对照组:仅实施麻醉;开腹组:开腹后将肠管等脏器取出搁置在无菌盐纱上1 h;气囊组:腹腔内置14号Forley导尿管1根,充气后持续膨腹1 h;CO2气腹组:剑突下气腹针穿刺进腹充入CO2,分别采用2、4、6 mmHg作用60 min及4mmHg作用30、60、90 min;He气腹组:手术步骤同CO2气腹,注入气体为He。术后4周处死动物观察结果。结果HO-8910组裸鼠肿瘤灶主要出现在腹壁和肠壁,而肝脏、膈肌和大网膜则很少发现,各组间比较无统计学差异;SKOV3组裸鼠肿瘤灶主要出现在腹壁和肠壁,各组间肿瘤灶的出现频率亦无统计学差异(P均>0.05)。HO-8910组各组肿瘤体积分别比较无统计学差异,SKOV3组各组肿瘤体积比较亦无统计学差异(P均>0.05)。增加CO2气腹压力和延长充气时间,HO-8910各组间肿瘤体积有统计学差异(P均<0.05),但SKOV3组各组间肿瘤体积无统计学差异(P均>0.05)。结论与开腹手术、He气腹相比,CO2标准气腹对卵巢癌的腹腔内生长和扩散无明显影响;CO2气腹压力增加和时间延长可能会促进卵巢癌在腹腔内生长和扩散。     

胰岛素样生长因子1受体对卵巢癌细胞增殖及化疗敏感性的影响

目的 观察胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)对卵巢癌细胞增殖及化疗敏感性的影响。方法 将人卵巢癌HO8910PM细胞随机分为3组,A、B组分别转染IGF-1R siRNA及无义siRNA,C组不转染。采用实时PCR法检测IGF-1R mRNA,CCK-8法测定细胞增殖OD值,CCK-8法测定细胞对顺铂和卡铂半数有效抑制浓度(IC50)。结果转染48、72、96 h时,A组IGF-1R mRNA表达量均低于同时点B、C组(P均<0.05);转染72、96 h时,A组细胞增殖OD值低于同时点B、C组(P均<0.05);转染48 h时,A组细胞对顺铂和卡铂的IC50低于B、C组(P均<0.05);B、C组上述指标比较,P均>0.05。结论 IGF-1R可促进卵巢癌细胞增殖,降低卵巢癌细胞对顺铂、卡铂的化疗敏感性。     

卵巢癌CD90^＋肿瘤细胞的分离及其肿瘤干细胞生物学特性观察

目的：分离人卵巢癌细胞系SKOV3和原代卵巢癌细胞中的CD90^＋细胞,并观察其肿瘤干细胞的生物学特性。方法从卵巢癌患者腹水中分离原代卵巢癌细胞,采用流式细胞术检测人卵巢癌细胞系SKOV3和原代卵巢癌细胞的CD133、CD90阳性率。流式分选得到CD90^＋、CD90^-细胞后,采用RT-PCR法检测其干细胞及上皮间质化（EMT）相关基因mRNA相对表达,Transwell小室侵袭试验观察细胞侵袭力,克隆形成试验观察细胞增殖分化能力,悬浮成球试验观察干细胞潜能,免疫缺陷小鼠体内有限稀释成瘤试验观察成瘤时间和成瘤率。结果人卵巢癌细胞系SKOV3的CD133和CD90阳性率均低于原代卵巢癌细胞,P均＜0．05。在人卵巢癌细胞系SKOV3和原代卵巢癌细胞中,CD90^＋细胞干细胞相关基因（CD133、OCT4）和EMT间质标志相关基因（N-cadherin、Vimentine、MMP9）相对表达、穿到膜背面的细胞数、细胞克隆数、悬浮成球数均高于CD90^-细胞,EMT上皮标志相关基因E-cadherin相对表达均低于CD90^-细胞,P均＜0．05。随着接种细胞数目的增加,CD90^＋、CD90^-细胞的成瘤率和成瘤时间均升高,CD90^＋细胞升高更明显。结论卵巢癌细胞中,CD90^＋细胞高表达间质属性基因和干细胞相关基因,具备更高的侵袭力、增殖分化能力、体内成瘤能力和干细胞潜能,CD90^＋细胞分离可能成为卵巢癌干细胞分离的新方法。     

卵巢癌紫杉醇耐药细胞株的建立及其耐药机制探讨

目的 为探讨卵巢癌细胞多药耐药的发生机制,寻找克服卵巢癌耐药的方法而建立人卵巢癌紫杉醇(TAX)耐药细胞株SKOV3/TAX.方法 选用卵巢癌细胞株SKOV3,以浓度为300ug/ml的TAX反复大剂量冲击用药,培养8个月后建立TAX耐药细胞株,命名为SKOV3/TAX.该细胞已反复传代3个月以上.结果 SKOV3/TAX细胞耐药性稳定,耐药指数(RI)为10.57.除对紫杉醇耐药外,对环磷酰胺(CTX)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、足叶乙甙(VP-16)有明显的交叉耐药,与亲本细胞相比,细胞倍增时间明显缓慢(P<0.01),G2/M期明显高于亲本细胞,S期比例明显降低(P<0.05),细胞内P糖蛋白(P-gp)表达增加.产生耐药的机制可能与细胞周期改变、细胞凋亡及P-gp的表达增加,导致细胞内TAX聚集量减少有关.结论 SKOV3/TAX细胞耐药性稳定,具有典型的多药耐药表型.     

Pim-3慢病毒质粒构建及其表达鉴定

目的 构建Pim-3慢病毒质粒,鉴定其在卵巢癌SKOV3细胞中基因及蛋白水平的表达.方法 RT-PCR法提取Pim-3 cDNA,经T-A克隆及双酶切将其与慢病毒表达载体pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP重组;酶切鉴定及基因测序后,将阳性重组质粒导入病毒包装细胞293T中;收集病毒上清液转染SKOV3细胞,荧光显微镜下观察转染情况,应用RT-PCR及Western blot法分别检测Pim-3 mRNA及其蛋白.结果 RT-PCR法获得Pim-3基因,重组质粒酶切后片段大小及基因测序结果显示pCDH/Pim-3重组质粒构建成功.将感染重组质粒及空载体的293T细胞生产的病毒上清分别感染SKOV3细胞,感染重组质粒的SKOV3细胞中Pim-3 mRNA及蛋白表达水平均高于空载体细胞.结论 成功构建了pCDH/Pim-3重组慢病毒质粒,建立了Pim-3高表达SKOV3瞬转细胞模型,为探讨Pim-3在卵巢癌发生、发展中的作用及机制奠定实验基础.     

熊果酸对卵巢癌细胞黏附、运动和侵袭的影响

目的探讨熊果酸(UA)对人高转移卵巢癌细胞HO-8910黏附、运动和侵袭的影响。方法以不同浓度的UA处理高转移卵巢癌细胞HO-8910,采用MTT法及细胞黏附人工重组基底膜实验检测UA对HO-8910细胞的细胞毒作用及黏附能力的影响;Transwell小室法检测UA对HO-8910细胞侵袭能力和趋化运动能力的影响。结果不同浓度UA处理后,随着UA浓度从10μmol/L增加到30μmol/L,与对照组比较,对细胞黏附抑制率增强(P0.01),能显著降低HO-8910运动能力和侵袭能力(P0.01)。结论 UA能抑制卵巢癌细胞HO-8910黏附、运动和侵袭能力。     

槲皮素对卵巢癌细胞HO-8910增殖的抑制作用及机制

目的观察槲皮素体外对卵巢癌HO-8910细胞增殖的抑制作用,并探讨其机制。方法将体外培养卵巢癌HO-8910细胞用0、10、20、40、80、160μmol／L的槲皮素处理。用MTF法测定细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡率,细胞免疫化学染色法检测细胞内Fas及HSP70的表达,分光光度计法检测细胞内Caspase-3和Csapase-8的活性。结果浓度10～160μmol／L的槲皮素均能抑制人卵巢癌HO-8910细胞的增殖,并有明显的时间和剂量依赖性（P〈0．05）。不同浓度的槲皮素作用48h后各组细胞凋亡率随槲皮素浓度增高,HSP70表达下调,FAS表达增强,Caspase-3、8活性上调,均呈剂量依赖性（P均〈0．05）。结论槲皮素能抑制卵巢癌细胞的增殖。其机制可能与槲皮素通过提高细胞内Fas的表达,降低HSP70的表达及诱导Caspase-3、8的活化及诱导卵巢癌细胞凋亡有关。     

吉西他滨对人SKOV3卵巢癌细胞株细胞增殖和Skp2的影响

目的探讨不同浓度吉西他滨对体外培养人SKOV3卵巢癌细胞株细胞增殖和S期激酶相关蛋白2（Skp2）表达的影响。方法不同浓度（0、10、20、40和60μmol/L）吉西他滨作用于人SKOV3卵巢癌细胞株后72h,通过细胞计数试剂盒CCK-8检测各组卵巢癌细胞增殖情况,采用免疫细胞化学染色法和RealTime PCR技术检测各组Skp2蛋白及其mRNA水平。结果不同浓度吉西他滨作用于人SKOV3卵巢癌细胞株72 h后,随着浓度增加细胞增殖明显受限,Skp2蛋白及其mRNA水平降低,并且上述结果与吉西他滨浓度均呈负相关。结论吉西他滨能够抑制SKOV3卵巢癌细胞株的增殖,机制可能与抑制Skp2表达有关。     

转录因子SNAI1与卵巢癌组织恶性表型之间的关系

目的通过比较SNAI1在卵巢囊腺瘤和卵巢癌组织中的表达情况,探讨SNAI1表达对卵巢癌患者的意义。方法免疫组织化学检测卵巢囊腺瘤和卵巢癌组织中SNAI1和E-cadherin的表达情况。利用重组腺病毒载体pAdEasy-SNAI1感染HO8910卵巢癌细胞株,诱导外源性SNAI1蛋白过表达,以空载腺病毒pAdEasy-GFP作为对照,用Western印迹法检测转染后HO8910细胞SNAI1、N-cadherin的蛋白表达水平。划痕实验检测HO8910细胞转染目的基因后运动能力的改变。结果 SNAI1在卵巢癌组织中的表达显著高于卵巢囊腺瘤(P=0.000),且与分化程度相关(P=0.014);E-cadherin在卵巢癌组织中的表达低于卵巢囊腺瘤组织(P=0.000),且与分化程度有关(P=0.029);SNAI1与E-cadherin负相关(r=-0.342,P=0.000);实验组HO8910细胞SNAI1蛋白的表达明显上调(P<0.01),而N-cadherin的蛋白表达水平明显受抑制(P<0.01);实验组迁移能力高于对照组(P<0.01)。结论 SNAI1可作为卵巢癌恶性程度评价指标;SNAI1可能通过诱导EMT的发生而协同促进卵巢癌的浸润转移。     

甲基莲心碱对人卵巢癌顺铂耐药逆转的体外研究

目的研究甲基莲心碱（Nef）在人卵巢癌耐药细胞SKOV3／顺铂（DDP）对DDP敏感性中的作用,初步探讨其化疗增敏的作用机制。方法采用MTT比色法筛选Nef对细胞株的无毒剂量,并测定Nef干预后SKOV3／DDP对DDP耐药性的变化;免疫细胞化学法检测Nef对SKOV3／DDP细胞GST-π竹蛋白表达的影响;RT—PCR法分析Nef作用SKOV3／DDP细胞株不同时间GST-π mRNA水平表达的差异。结果不同浓度DDP与Nef联合应用使DDP对SKOV3／DDP细胞IC50明显下降,且逆转倍数随药物作用时间延长而增大,24h、48h、72h分别为1．15、1．91、2．28倍（P〈0．01）;镜下SKOV3／DDP细胞较SKOV3细胞高表达GST-π,经Nef作用72h后其GST-IT表达明显下降（P〈0．01）;无毒剂量Nef作用1、3、5d后SKOV3／DDP细胞内GST-π mRNA转录水平随作用时间延长而降低（P〈0．01）。结论Nef能有效逆转SKOV3／DDP细胞的耐药性,其逆转机制可能与下调GST-π基因高表达有关。     

COX-2基因在紫杉醇/卡铂致卵巢癌细胞凋亡中的作用及机制研究

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)在紫杉醇/卡铂致卵巢癌细胞凋亡中的作用及机制。方法以卵巢癌CAOV-3细胞系,卵巢癌组织及其相应的癌旁正常组织为材料,采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法分别检测COX-2基因mRNA和蛋白质表达;流式细胞术检测CAOV-3细胞的凋亡情况,同时采用透射电镜观察细胞的超微结构变化。结果 COX-2基因在卵巢癌组织中的表达明显高于其对应的癌旁正常组织(P0.01);与紫杉醇/卡铂组比较,转染紫杉醇/卡铂+p CMV-COX-2组卵巢癌细胞凋亡率明显减少(P0.01),且细胞超微结构未发生显著改变。结论 COX-2基因在紫杉醇/卡铂治疗卵巢癌中发挥重要作用,其有望成为卵巢癌治疗的分子新靶标。