SEA对人结肠癌SW480细胞周期进程及凋亡的影响

目的 体外观察葡萄球菌肠毒素A(SEA)对人结肠癌细胞株SW480的增殖抑制作用.方法 应用MTr比色法检测不同浓度的SEA对SW480细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期进程的变化及凋亡率,电子显微镜检测亚细胞水平变化.结果 不同浓度的SEA对SW480细胞增殖抑制率分别为18.5％、37.6％和41.5％,与对照组相比差异显著.流式细胞仪结果显示Go/G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,细胞凋亡率升高.电子显微镜可见,细胞线粒体肿胀、胞膜破裂、细胞核染色质趋边、凝集,可见凋亡小体.结论 SEA能显著抑制SW480细胞增殖,抑制SW480细胞周期G1期向S期转化进程,从而使G2/M期细胞相对增高,诱导SW480细胞凋亡及亚细胞结构改变.     

苯乙酸钠诱导SW480细胞凋亡及其对细胞周期各时相的影响

目的探讨苯乙酸钠(sodium phenylacetate,NaPA)诱导人结肠癌细胞株SW 480凋亡机制及对细胞周期各时相的影响。方法应用MTT比色法及流式细胞术检测NaPA对SW 480细胞的增殖抑制率及细胞周期各时相的变化,并通过电子显微镜观察SW 480细胞亚细胞结构改变。结果NaPA对SW 480细胞有明显的抑制作用,抑制率15.9%~41.7%,且呈剂量依赖性。流式细胞术结果表明,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,细胞凋亡率升高,电子显微镜下可见SW 480细胞线粒体肿胀,细胞核固缩。结论NaPA能够抑制SW 480细胞G1期向S期转化进程,诱导SW 480细胞凋亡。     

新霉素抑制促胃液素促人结肠癌细胞株SW480增殖的研究

目的观察新霉素（ＮＭ）对五肽促胃液素（ＰＧ）促人结肠癌细胞株ＳＷ４８０增殖的影响,探讨肌醇脂质信号通路可能参与的作用及临床意义．方法ＭＴＴ比色分析法检测活细胞数（ＶＣＣ）;［３Ｈ］肌醇标记细胞进行三磷酸肌醇（ＩＰ３）分析;Ｃａ２＋荧光测定技术检测细胞内Ｃａ２＋浓度;［γ３２Ｐ］ＡＴＰ掺入法测定蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性．结果ＰＧ＋ＮＭ组的ＳＷ４８０细胞活细胞数降低,与对照组相比Ｐ＜００１,与ＰＧ组相比Ｐ＜００１;ＰＧ＋ＮＭ组细胞内ＩＰ３,Ｃａ２＋浓度降低,与ＰＧ组相比Ｐ＜００１,与对照组相比Ｐ＞００５;ＰＧ＋ＮＭ组膜ＰＫＣ活性降低,与ＰＧ组相比Ｐ＜００５,与对照组相比Ｐ＞００５．结论ＮＭ可能通过肌醇质脂信号通路而抑制ＰＧ促人结肠癌细胞株ＳＷ４８０的增殖,这将为结肠癌的抗信息传导治疗提供实验依据．     

片仔癀对人结肠癌SW480细胞株的抑制作用研究

目的探究片仔癀对人结肠癌SW480细胞株的抑制效果。 方法通过对人结肠癌SW480细胞株常规体外培养,随机设定空白组、5-氟尿嘧啶（5-FU）组和不同浓度片仔癀组,分别采用对应药物干预24 h、48 h、72 h,并通过细胞增殖活力检测法（MTT法）和荧光显微镜观察其抑制效果。采用人结肠癌SW480细胞株建立结肠癌小鼠模型,把造模成功的150只小鼠随机分为模型组,5-FU组和片仔癀低、中、高剂量组,每组30只;分别以不同剂量药物外敷3 d,通过抑瘤率和原位凋亡检测（TUNEL法）解释抑制效果。 结果1 mg/mL、2 mg/mL、3 mg/mL浓度片仔癀对人结肠癌SW480细胞体外抑制率最高,为70.05%、71.39%、70.12%,与5-FU组比较差异具有统计学意义（χ²=4.49,4.97,4.52;均P<0.05）。4 mg/mL片仔癀抑制率为67.39%,与5-FU组比较差异无统计学意义（χ²=3.57,P>0.05）;荧光显微镜显示5-FU组与片仔癀各组人结肠癌SW480细胞株数量均显示不同程度的减少、体积变小、折光性差、细胞悬浮及脱落死亡。片仔癀高、中、低剂量组对人结肠癌SW480细胞的体内抑瘤率分别为51%、39%、23%,其中高、中剂量组与5-FU组比较差异无统计学意义（χ²=0.05,0.49;均P>0.05）,低剂量组与之比较差异有统计学意义（χ²=4.09,P<0.05）;荧光显微镜显示片仔癀各剂量组和5-FU组对人结肠癌SW480细胞均有不同程度的凋亡反应。 结论片仔癀外用对人结肠癌SW480细胞生长有明显的抑制作用,高、中剂量体内抑制作用与5-Fu相近,优于低剂量,临床可考虑采用高剂量可能取得更佳效果,体外抑制作用上显示则优于5-Fu,但剂量差异影响不大。     

DcR3-siRNA对SW480结肠癌细胞系放射治疗敏感性的增强作用

目的:观察DcR3对SWF480结肠癌细胞系放疗前疗效评估的价值,以及应用siRNA沉默DcR3基因对增强放疗敏感性的作用.方法:ELISA方法检测经不同剂量放射性137Cs照射的SW480结肠癌细胞中DcR3的含量.应用siRNA技术,构建小双链DNA,克隆入表达载体,转染入经放射性照射的SW480细胞及对照组细胞.应用图像分析系统进行记录细胞集落数量,流式细胞仪检测细胞凋亡状况.结果:与对照组相比,不同时间和不同剂量放射线照射后,SW480细胞DcR3含量均有增加(P<0.05),当照射10 G、48h后,其含量明显增加,经5 G137Cs照射后的DcR3-siRNA-SW480转染的细胞集落数量减少.DcR3-siRNA照射的SW480细胞M1期峰值明显增高,凋亡小体明显增加.结论:DcR3高表达可能对放射线抵抗性有一定预示作用,DcR3-siRNA可增强SW480结肠癌细胞对放射性照射的敏感性.     

NF-κB decoy寡核苷酸对结肠癌SW480细胞TLR4表达的影响

目的 探讨核转录子κB(NF-κB)decoy寡核苷酸(ODNs)对结肠癌SW480细胞Toll样受体4(TLR4)表达的影响. 方法 体外培养SW480细胞,LPS(10μL)刺激3 h后,用脂质体Lipofectin2000介导NF-κB decoy ODNs转染6 h,RT-PCR法检测细胞的TLR4 mRNA.设对照组、LPS组、SODN组、Lipofectin2000组. 结果 转染NF-κB decoy ODN的SW480细胞的TLR4 mRNA表达明显高于对照组(P<0.01),但明显低于其他组(P均<0.01). 结论 NF-κB decoy ODNs明显抑制SW480细胞TLR4的表达.     

C-FLIPsiRNA对大肠癌细胞株SW480凋亡的影响

目的探讨C-FLIP siRNA对大肠癌细胞株SW480凋亡的影响。方法常规方法培养大肠癌SW480细胞,待细胞处于对数生长期时,进行转染,分别转染C-FLIP siRNA重组体(观察组)和nonsilencing空载体(NC组),转染后24 h,将细胞传至96孔板中,两组转染细胞各传32孔,每8孔为一组平行孔,分别检测16 h、24 h、48 h、72 h细胞的增殖情况,并检测两种转染细胞中GHR受体mRNA和蛋白的表达情况。结果 C-FLIP siRNA重组体转染率达75%;大肠癌SW480培养后各时间点的吸光度值相比,差异有统计学意义(F=7.329,P=0.016),观察组的吸光度值均小于对照组,并且随着时间的延长,观察组吸光度值增加越来越慢,直至不增加;两组GHR受体蛋白水平相比,对照组高于观察组,差异有统计学意义(t=73.140,P=0.000);GHR mRNA表达观察组高于对照组,差异有统计学意义(t=12.685,P=0.000)。结论 C-FLIP siRNA重组体能够有效抑制大肠癌细胞株中SW480的增殖。     

苦参碱诱导人结肠癌SW1116细胞凋亡及机制探讨

目的观察苦参碱（Ma）诱导结肠癌SW1116细胞凋亡的作用，并探讨其机制。方法采用不同浓度的Ma处理SW1116细胞48h，并设正常对照组，MTT法检测细胞增殖抑制率，流式细胞仪检测细胞凋亡率，半定量RT-PCR检测Fas和Bax mRNA表达水平。结果与正常对照组相比，不同浓度Ma处理的SW1116细胞抑制率、胞凋亡率显著升高（P均〈0.01），Fas和Bax mRNA表达上调（P〈0.05，P〈0.01）。结论Ma可诱导SW1116细胞凋亡，其作用机制可能与上调Fas和Bax mRNA表达有关。     

异硫氰酸苯乙酯对结肠癌SW480细胞PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的探讨异硫氰酸苯乙酯(PEITC)对结肠癌SW480细胞PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响。方法选择6~8周龄的SPF级BALB/c(nu/nu)雄性裸鼠24只,将其随机分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,各6只。体外培养结肠癌细胞系SW480,对照组加入等体积的二甲基亚砜(DMSO),低剂量组、中剂量组和高剂量组分别给予10、30和50μmol/L PEITC作用24 h,Western blot检测PI3K和PTEN的表达和Akt、mTOR磷酸化情况。最后,建立裸鼠异种移植瘤动物模型,观察PEITC对异种移植瘤生长的抑制作用。结果 PEITC能抑制PI3K的表达以及Akt和mTOR磷酸化。肿瘤质量:高剂量组中剂量组低剂量组对照组,抑瘤率:高剂量组中剂量组低剂量组(P0.05)。结论 PEITC可能通过影响PI3K/Akt/mTOR通路发挥抗肿瘤作用。     

RNAi对结肠癌SW480细胞Nucleostemin基因表达的影响

目的:探求RNA技术干扰人结肠癌SW480细胞Nucleostemin(NS)基因后,结肠癌SW480细胞NucleosteminmRNA和蛋白水平的表达,及细胞增殖情况变化.方法:构建Nucleostemin特异性真核表达载体,和脂质体共同转染SW480细胞后,采用Real-timePCR和Westernblot方法检测NS基因mRNA和蛋白变化,MTT法检测细胞的增殖情况.结果:与对照组相比较,RNAi干扰细胞后NSmRNA表达明显下降;NS蛋白表达亦明显下降(1.069±0.368,1.003±0.313,1.901±0.817,P<0.05;1.069±0.368,1.003±0.313,2.035±0.665,P<0.05),空白对照组(仅加入脂质体)和阴性对照组(RNAi错义序列)间无显著差异(2.035±0.665,1.9001±0.817,P>0.05).MTT显示RNA干扰后细胞增殖明显受到抑制.结论:通过特异性RNA干扰NS基因后,结肠癌SW480细胞增殖受到抑制.     

Identification of proteins of human colorectal carcinoma cell line SW480 by two-dimensional electrophoresis and MALDI-TOF mass spectrometry

AIM: To conduct the proteomic analysis of human colorectal carcinoma cell line, SW480 by using two-dimensional electrophoresis (2-DE) and matrix-assisted laser desorption /ionization-time of flight mass spectrometry (MALDI-TOFMS). METHODS: The total proteins of human colorectal carcinoma cell line, SW480 were separated with 2-DE by using immobilized pH gradient strips and visualized by staining with silver nitrate. The gel images were acquired by scanner and 2-DE analysis software, Image Master 2D Elite. Nineteen distinct protein spots were excised from gel randomly and digested in gel by TPCK-trypsin. Mass analysis of the tryptic digest peptides mixture was performed by using MALDI-TOF MS. Peptide mass fingerprints (PMFs) obtained by the MALDI-TOF analysis were used to search NCBI, SWISS-PROT and MSDB databases by using Mascot software. RESULTS: PMF maps of all spots were obtained by MALDI-TOF MS and thirteen proteins were preliminarily identified. CONCLUSION: The methods of analysis and identification of protein spots of tumor cells in 2-DE gel with silver staining by MALDI-TOF MS derived PMF have been established. Protein expression profile of SW480 has been obtained. It is demonstrated that a combination of proteomics and cell culture is a useful approach to comprehend the process of colon carcinogenesis.     

桩蛋白表达下调对结直肠癌细胞SW480侵袭力的影响

目的:探讨下调桩蛋白(paxillin)的表达对结直肠癌细胞SW480体外侵袭的影响.方法:筛选常见结直肠癌细胞株中paxillin 的表达,发现SW480中表达最多.构建干扰paxillin表达的特异性短发夹RNA(shRNA),转染结直肠癌细胞SW480.将SW480细胞分为3组:正常SW480组、阴性对照组及pa...     

刚地弓形虫细胞培养上清对人结肠癌细胞sw480增殖与凋亡的影响

目的观察刚地弓形虫RH株速殖子与人结肠癌sw480细胞系共培养上清对人结肠癌sw480细胞增殖的影响和诱导其凋亡与坏死的情况。方法取对数生长期的人结肠癌sw480细胞(1×106),建立弓形虫RH株速殖子数目分别为2×106、4×106、8×106、16×106的共培养模型,观察弓形虫速殖子在sw480细胞中的寄生,提取共同孵育72h后的培养上清,以新鲜培养基稀释为半量,体外作用人结肠癌sw480细胞12h、24h、48h、72h,CKK-8法检测吸光度(A450值)并计算抑制率;Annexin-v-FITC/PI染色细胞后上流式细胞仪检测细胞凋亡与坏死率;琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡DNA条带;透射电镜和荧光显微镜观察细胞形态学改变。结果弓形虫RH株速殖子可在人结肠癌sw480细胞内寄生和增殖。CKK-8法检测结果显示上述共培养上清对sw480细胞增殖抑制率随上清作用时间延长均明显增大,48h最大抑制率达44.55%。流式细胞仪检测显示实验组sw480细胞早期凋亡率和晚期凋亡与坏死率随上清作用时间延长均明显增加,48h早期凋亡率达最高值(11.54%),48h以后早期凋亡率下降,晚期凋亡和坏死率显著上升,72h总死亡率可达46.11%,细胞杀伤效果明显;琼脂糖凝胶电泳显示典型的DNA云梯状条带;荧光显微镜和透射电镜观察到细胞凋亡和坏死典型形态。结论弓形虫RH株速殖子与人结肠癌sw480细胞共培养上清对体外培养的sw480细胞增殖有明显的抑制作用,并可诱导sw480细胞凋亡与坏死。     

EGCG对LoVo和SW480结肠癌细胞株的作用及对Notch1与Notch2基因表达的影响

目的:探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对结肠癌细胞株LoVo细胞和SW480细胞增殖的抑制作用,研究其对Notch1与Notch2的基因表达的影响,方法:体外培养LoVo细胞和SW480细胞,采用不同浓度的EGCG(10、20、35 mg/L)对其进行干预,MTT法检测EGCG对LoVo细胞和SW48...     

ALA-PDT诱导SW480细胞凋亡和胞内Ca2+浓度变化的关系

目的:探讨ALA-PDT诱导人结肠癌细胞SW480凋亡和游离钙浓度变化关系.方法:将SW480细胞分为四组:空白对照组、激光照射照组、ALA组和ALA-PDT组,用DNA片段分析和TUNEL法检测细胞凋亡;用激光共聚焦显微镜观测各组细胞内游离钙离子浓度的变化.结果:ALA-PDT组的人结肠癌细胞在1、2h有大量的DNA片段,TUNEL法显示ALA-PDT组的人结肠癌细胞在PDT后30minAI为25.26±5.04%,PDT后60minAI为50.45%±7.85%,均高于其他3组(AI均<10%,P<0.01);激光共聚焦结果为ALA-PDT组细胞内游离钙离子浓度在20min达高峰(荧光强度:185.40±18.90),与10min(荧光强度:100.00±19.83)相比有显著差异(P<0.01),之后又逐渐下降.结论:细胞内Ca2 浓度的逐渐增加在PDT诱导的细胞凋亡过程中可能起着重要作用.