反义RNA技术的应用与进展

反义 RNA技术作为反义核酸技术之一 ,已在越来越广泛的领域得到应用。本文在与反义寡核苷酸技术进行比较的基础上 ,系统地介绍了反义 RNA技术方法及在各领域的应用。相信随着对基因功能研究的广泛开展及基因治疗研究的深入 ,反义 RNA技术必将成为一种有力的工具 ,在基因功能研究方面 ,特别是在后基因组研究中做出巨大贡献     

反义RNA技术的应用与进展

反义RNA技术作为反义核酸技术之一,已在越来越广泛的领域得到应用。本在与反义寡核苷酸技术进行比较的基础上,系统地介绍了反义RNA技术方法及在各领域的应用。相信随着对基因功能研究的广泛开展及基因治疗研究的深入,反义RNA技术必将成为一种有力的工具,在基础功能研究方面,特别是在后基因组研究中做出巨大贡献。     

抗体在靶向基因治疗中的应用

基因治疗是将人的正常基因或有疾病治疗作用的基因导入人体靶细胞,从而达到治疗目的的生物医学技术。基因治疗正处于持续发展的阶段,已成为重要的医药产业。综合来说,抗体在基因治疗中主要应用于两方面:1直接将抗体基因导入体内,表达出的蛋白产物作为治疗分子发挥治疗作用[1-2];2作为基因转移系统的靶向成分在基因治疗中发挥作用。本文将重点介绍第二方面的研究进展。将编码治疗分子的DNA,siRNA(small interfering RNA)或反义RNA(antisense oliognucleotides)高效、准确地转入体内靶组织和靶细胞是将基因治疗应用于临床的     

反义端粒酶RNA对SMMC7721细胞P16、P21表达的增强作用

目的 观察反义端粒酶RNA对SMMC7721细胞周期的影响,检测P16和P21的表达,探讨端粒酶与细胞期调控间的关系及反义端粒酶RNA在肝癌基因治疗中的意义。方法 经脂质体介导,将反义端粒RNA真核表达载体pBBS212－hTR导入SMMC7721细胞中。细胞克隆转移扩大培养后,采用流式细胞仪、TRAP－PCR－ELISA及免疫组化技术,结合图像分析,在检测SMMC7721／pBBS212－hTR细胞端粒酶活性的同时,检测P16和P21的表达。结果 与对照组相比较,反义端粒酶RNA在抑制SMMC7721／pBBS212－hTR细胞端粒酶活性的同时,检测P16和P21的表达。结果 与对照组相比较,反义端粒酶RNA在抑制SMMC7721细胞端粒酶活性的同时,P16和P21蛋白的表达水平显著增高。结论 转染反义端粒酶RNA在封闭细胞端粒活性表达的同时,伴发P21与P16表达水平的升高。本实验研究为探讨肝癌发病机制及治疗提供了一定的依据。     

尿激酶受体反义核糖核酸抑制肺癌细胞的侵袭转移

目的用反义核糖核酸(RNA)封闭尿激酶受体的表达,抑制人肺癌细胞株95D的侵袭转移能力,验证反义RNA技术在抗肿瘤中的作用.方法将尿激酶受体(uPAR)反义核糖核酸表达质粒转染具有高度侵袭转移能力的人肺癌细胞株95D,利用改良Bovden小室分析转染细胞的体外侵袭能力,并将转染细胞接种裸小鼠以观察其体内转移能力.结果G418筛选后,鉴定出2个表达uPAR反义RNA细胞克隆,uPAR蛋白质水平相应降低.表达uPAR反义RNA的细胞克隆的体外侵袭能力及在裸小鼠体内的肺转移能力较亲本细胞和空载体对照细胞均有显著性降低(P＜0.05).结论抑制尿激酶受体的表达,能够有效抑制肺癌的侵袭转移,反义RNA技术在抗肿瘤治疗中有良好的应用前景.     

重组内皮抑素联合靶向性preS2反义RNA对肝癌细胞的体内抑制作用

单纯抗血管生成治疗肿瘤 ,仅使肿瘤处于休眠状态 ,容易出现复发。如何将抗血管生成与其他肿瘤治疗方法有效结合 ,是目前肿瘤基因治疗中的研究热点。本研究首次提出重组内皮抑素联合靶向性preS2反义RNA抑制肝癌细胞的策略 ,并进行体内实验研究。构建肝癌细胞特异性HBVpreS2反义RNA表达载体 ,并将其与针对表皮生长因子受体(EGFR)的 16肽配体寡肽和流感病毒血凝素HA2 0寡肽混合 ,制备肝癌靶向性HBV反义RNA转移系统 ,即AFP增强型四元复合体。同时 ,以自行构建的毕赤酵母菌表达重组人内皮抑素蛋白 ,纯化后 ,进行动物实验。培养整合有…     

腺病毒相关病毒载体的研究进展

实现基因治疗的关键在于目的基因的高效转移并适度表达 ,这将直接影响其治疗的效率和安全性。因此 ,探寻理想的基因转移载体显得尤为重要。腺病毒相关病毒 (adeno- associated virus,AAV)是一种缺陷型的单链DNA病毒 ,既可以转染分裂细胞又可以转染非分裂细胞。 AAV在宿主体内以定向整合的方式存在。 AAV重组体在细胞内能长期稳定地表达 ,且在体内不引起明显的病理变化 ,表明 AAV作为基因治疗的载体是安全、有效和可行的     

反义技术的原理及应用

本文介绍了反义技术的研究现状,一方面旨在阐明原核和真核生物基因表达和调控方式的多样性,另一方面也着眼于设计一类能特异封闭靶基因表达的反义RNA分子,不仅作为一种有效的实验室研究方法,而且终将作为基因治疗的途径之一应用于工、农、医领域,造福于人类。     

U1 snRNA及其在基因治疗中的应用

U1sn RNA是一种富含尿苷酸的具有酶活性的小分子量 RNA,其主要特点是剪接核内非均一性 RNA成为成熟 RNA;只存在于真核细胞核质中 ,具有在核内定位的特性。有人利用这些特性对 U1sn RNA进行人工点突变来纠正某些基因缺陷病 ,或是构建 U1sn RNA-核酶及 U1sn RNA-反义核酸的嵌合体来进行基因治疗研究并获得了一定成绩     

Midkine与恶性肿瘤

中期因子(midkine,MK)作为肝素结合生长因子家族的一员,通过促有丝分裂和细胞增殖、促血管生成、诱导细胞恶性转化、抗凋亡等功能影响肿瘤细胞的增殖、分化及凋亡。MK在多种恶性肿瘤中呈过表达,且血清MK水平与预后不良呈正相关,因此MK有望成为一种新的肿瘤标志物;随着反义核苷酸、RNA干涉及特异性启动子参与基因治疗技术的发展,MK可能成为肿瘤基因治疗的新靶点。     

RNA干扰技术在生物医学领域中的应用

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA(dsRNA)启动的序列特异的转录后基因沉默过程。在这一过程中,dsRNA被核酸内切酶切割成小干扰RNA(siRNA),siRNA与相关的蛋白结合成RNA诱导沉默复合体,这一复合体可识别并降解mRNA,导致基因沉默。它是一种比反义寡聚核苷酸技术更为有效的方法,具有更高的特异性,在生物医学领域有广阔的应用前景。文章就RNAi技术在功能基因组学、基因治疗(如人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒、肿瘤)、神经性疾病及其药物设计等领域的实验及其应用研究及存在问题作一综述。     

依赖于DNA的RNA聚合酶Ⅲ与基因表达和基因治疗

依赖于DNA的RNA聚合酶Ⅲ (polⅢ )能催化 5SrRNA、tRNA、U6SnRNA等一些小的、稳定的RNA的合成。文章综述了依赖于DNA的RNA聚合酶Ⅲ的启动子和转录复合物 ,并介绍了RNA聚合酶Ⅲ的转录在基因表达和基因治疗 (核酶、反义核酸、RNA干扰技术等 )研究中的应用价值。     

RNAi干涉技术与神经生物学的实验研究

RNA干涉是双链RNA在细胞内介导的同源序列的mRNA转录后表达抑制,导致基因沉默。它是一种比反义技术更为有效的方法,具有更高的特异性。自从其问世以来,在肿瘤研究,遗传性疾病,基因诊断,基因治疗以及药物设计等领域得到快速发展和广泛应用。在神经生物学及神经性疾病的应用研究方面,RNA干涉技术也显示了独特的优势,如神经的发生发育过程研究及神经退行性疾病的治疗等。本文就RNA干涉技术在神经生物学领域的实验及应用研究做一综述。     

RNAi实验技术研究进展

过去在对生物体基因功能研究时,通常利用反义寡核苷酸、核酶[1]等抑制目的基因表达,而近年来发现了一种新的诱导基因沉默的技术,即RNA干扰(RNA interference,RNAi).与其它关闭基因工具不同,RNAi是一种由双链RNA介导的特异性抑制同源基因表达的技术.由于它具有高特异性和高效性,已经广泛应用于植物、真菌、蠕虫和低等脊椎动物以及哺乳动物的基因功能研究,并且在人类基因组功能研究和基因药物研制及基因治疗等方面,有很好的应用前景.     

癌症基因治疗新进展

随着癌症分子机理研究的深入和基因转移技术的快速发展,一种癌症治疗的新方法——基因治疗,已开始从理论研究向临床试验过渡。本文着重介绍通过体细胞基因转移治疗癌症的各种可能性,包括反义核酸等信息药物,基因替换,基因免疫调节,自杀基因及正常细胞保护等。     

RNA干扰技术在胰腺癌基因治疗中的研究进展

RNA干扰（RNAi）是生物体内由具有同源性的双链RNA（dsRNA）引发的序列特异的转录后基因沉默。该技术能够快速、高效、特异地抑制靶基因的表达。从1998年发现RNA干扰现象至今,该技术得到了广泛的应用。胰腺癌是一种恶性度高的肿瘤,但是由于各种原因,至今尚无有效的治疗方法。RNA干扰技术是一种十分有前途的基因治疗方法,已广泛应用到胰腺癌的基因治疗研究之中,包括采用RNA干扰技术抑制癌基因、抗凋亡因子;利用RNA干扰技术抑制胰腺癌侵袭、转移蛋白来探讨治疗胰腺癌;利用RNA干扰技术提高胰腺癌对化疗的敏感性等。     

趋化因子受体CCR5反义RNA在真核细胞中的表达

目的 构建趋化因子受体CCR5反义RNA真核表达载体并获取重组假病毒颗粒以用于抗HIV-1研究，方法 用RT-PCR法从健康人外周血单个核细胞（PBMCs)中获得趋化因子受体CCR5翻译起始区的基因片段，并以正、反两个方面定向插入到真核表达载体pLXSN上，重组载体用脂质体转染剂（lipofectAMINE)转染PA317包装细胞，抗-G418克隆的细胞上清经逆转录后用荧光定量PCR（FQ-PCR）测定假病毒滴度，进一步感染NIH/3T3细胞。结果 CCR5正、反义RNA的真核表达载体。经PA317细胞包装形成的假病毒颗粒已成功地感染NIH/3T3细胞，目的基因在该细胞中得到整合与表达。结论 从PBMCs中获得的趋化因子受体CCR5基因片段通过逆转录病毒载体可转移至真核细胞中并得到表达，为进一步研究CCR5反义RNA的抗HIV-1作用奠定了基础。     

互补于hTERT关键区段的反义RNA抑制肝癌细胞

目的研究针对人类端粒酶催化亚单位(hTERT)调控区C-MYC结合位点的反义RNA抑制肝癌细胞生长。方法细菌内同源重组构建反义RNA腺病毒(rAd-asmycb),转染HepG2.2.15肝癌细胞,流式细胞术检测细胞凋亡,透射电镜下观察凋亡细胞形态,聚合酶链反应-酶联免疫分析(PCR-ELISA)、逆转录-PCR(RT-PCR)分别检测细胞端粒酶活性及mRNA水平上hTERT表达。结果反义RNA抑制肝癌细胞生长,细胞凋亡率为40.7%,显示特征性凋亡细胞形态,能够显著降低细胞端粒酶活性,在mRNA水平上抑制hTERT表达。结论hTERT调控区C-MYC结合位点可能是肝癌基因治疗的有效靶位。     

慢性病毒性肝炎的基因治疗:核酶反义寡核苷酸和显性负相突变

病毒感染可被认为是获得性的遗传病，抗病毒治疗已成为基因治疗的一个主要的、潜在的应用领域，为了治疗乙型肝炎病毒（HBV）或丙型肝炎病毒（HCV）的感染，研究了一些针对阻断病毒基因的表达或功能的抗病毒策略。核酶、反义寡核苷酸和显性负相突变（DominantNegativemutation，DN突变）都在体外的实验系统和一些体内模型中强烈地抑制病毒复制和基因表达，尽管最近的发展令人鼓舞，但基因治疗在用于完善现有的乙型或丙型肝炎的基因治疗方案和作为预防策略之前，象基因转移、稳定性、毒性、抗性和安全性等一些问题需要解决。分子生物学和…