孕妇外周血中分离胎儿细胞及应用

在每年出生的新生儿中，大约有2％的带有严重的身体、智力障碍，而其中遗传因素所致的占25％(基因因素20％、染色体因素5％)。目前，由于高龄孕妇比例的不断增加和环境污染引起的胎儿畸形的发生率不断升高。产前诊断有利于降低非正常胎儿的发生率，因此受到广泛的关注。特别是近年来发展起来的用母血中的胎儿细胞进行的产前诊断因其非侵人性、对胎儿损伤小等特点成为研究的热点。     

从孕妇外周血富集胎儿细胞技术的进展

目前 ,应用胎儿细胞进行产前基因诊断的主要方法有羊膜腔穿刺、绒毛活检和脐静脉穿刺术。这些有创性检查导致的孕妇流产率均为 1 %左右 ,且与操作者技能密切相关。虽然可结合孕龄、血清生化及超声技术等指标进行产前筛查(阳性预测值 2 3 % ) ,有选择性的进行上述产前检查 ,仍造成许多健康胎儿的夭折 ,对孕妇和家庭造成严重不良影响。另一方面 ,在新生儿中染色体异常的发病率占 0 65 % ,包括 2 1三体综合征 (0 1 2 % )。故迫切需要一种对胎儿无风险性对孕妇无创伤性且能对检测出染色体异常和单基因遗传病等先天性疾病的产前诊断新技术。近…     

孕妇外周血中分离胎儿细胞及应用

在每年出生的新生儿中,大约有2%的带有严重的身体、智力障碍,而其中遗传因素所致的占25%(基因因素20%、染色体因素5%)。目前,由于高龄孕妇比例的不断增加和环境污染引起的胎儿畸形的发生率不断升高。产前诊断有利于降低非正常胎儿的发生率,因此受到广泛的关注。特别是近年来发展起来的用母血中的胎儿细胞进行的产前诊断因其非侵入性、对胎儿损伤小等特点成为研究的热点。     

孕妇外周血中胎儿有核红细胞的富集及鉴定

目的：建立富集分离孕妇外周血胎儿有核红细胞的方法,并证实其为胎儿来源。方法;以血型糖蛋白Ａ（ＧＰＡ）为识别标志,对５例厚１２￣４０周的孕妇外周血进行密度离心富集胎儿有核红细胞,并经流式细胞分析及ＰＣＲ技术扩增Ｙ特异性序列以鉴定富集效果。结果：５例孕妇外周血富集后流式细胞分析结果,ＧＰＡ＾＋细胞含量平均为上层２．３８％,下层１８．１８％,富集后下层ＧＰＡ＾＋细胞含量是上层的７．６倍;ＰＣＲ扩增结果,     

鼠外周血中转基因胎儿细胞的检测及意义

目的 探讨仔鼠出生前后小鼠胎儿细胞在母鼠体内存在的情况，为应用循环于母血中的胎儿细胞进行基因诊断提供科学依据。方法 将非转基因的正常母鼠和以HS2、HS3元件、β-珠蛋白基因启动子指导的红系特异表达绿色荧光蛋白（GFP）基因的转基因公鼠交配，仔鼠出生前后采集母鼠的外周血用流式细胞仪检测其中表达GFP细胞的比例，并用PCR对母鼠和仔鼠的鼠尾DNA及母鼠的外周血进行检测。结果 在仔鼠出生前母体外周血中未检出表达GFP的细胞，而分娩后1～3周此类细胞含量达到峰值，4～5周后将逐步消失。PCR检测证实母鼠体内没有外源GFP基因的DNA片断，但分娩后其外周血中则存在GFP基因阳性片断，这与荧光激活细胞分选仪（FACS）的检测结果一致。结论 转基因细胞是一种良好的标记物，可以用来观察胎儿细胞在母体中存在的规律，为使用母体外周血进行基因诊断提供了依据。     

孕妇外周血中胎儿游离DNA的研究进展

<正>在很长的一段时间里,人们认为人类血浆中不可能存在基因物质。直到1948年,Mandel等[1]报道了在健康人群和患者的血浆中都含有核苷酸之后,人们才认识到,除了有核细胞外,血浆中也含有基因物质。之后,研究人员发现癌症     

利用孕妇外周血胎儿有核红细胞进行产前诊断的研究

产前诊断即出生前诊断,它通过对胚胎或胎儿在出生前是否患有某种遗传病或先天畸形作出准确的判断,指导进行选择性流产,以防患儿出生,从而使生育健康后代的理想成为现实,目前常规使用的产前诊断方法有:羊膜腔穿刺(Amniocentesis,AC)、绒毛取样(Chorionic Villus Sampling,CVS)、脐带穿刺(Cord Vessel Centesis,CVC)、胎儿镜(Fetal Mirror)等,这些方法因有不同程度伤及胎儿及干扰胎儿健康发育的可能。故已很难为广大孕妇所接受;而利用孕妇外周血中胎儿细胞进行的产前诊断是一种非侵入性产前诊断方法,代表了当前产前诊断的最新发展方向。     

孕妇外周血中胎儿有核细胞及其临床应用研究进展

分子生物学技术已经明确证实了母体血循环中存在胎儿有核细胞。分离检测这些细胞，为非创伤性产前诊断开辟了崭新的途径，随着特异单克隆抗体的应用，使用流式细胞术已能分选出胎儿有核细胞，并成功地进行了非整倍体病的产前诊断。     

孕妇外周血胎儿细胞PCR扩增技术在产前基因诊断的应用

DNA体外扩增技术是近年来创立和发展起来的高效DNA技术．它通过聚合酶链反应Polymerase Chain Reaction．PCR)。能够快速特异地扩增任何所希望的基因或DNA片段，因此它广泛应用于基因分离，克隆、DNA序列分析．DNA突变和重组。基因的表达和多态分析．被誉为基因工程技术上的一个新的里程碑，目前此项技术     

母血中胎儿有核红细胞的分离及无创性产前基因诊断研究

目的 从母血循环中分离、富集、鉴定和提取胎儿有核红细胞,建立遗传病无创性产前基因诊断方法。方法 取２５名妊娠８～３６周的孕妇静脉血,加载在细胞分离液Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ１．０７７上分离单个核细胞（ＭＮＣ）;用包被ＣＤ７１抗体的ＤｙｎａｂｅａｄｓＭ－４５０ＣＤ２１免疫磁珠或包被ＣＤ４５抗体的ＤｙｎａｂｅａｄｓＭ－４５０ＣＤ４５免疫磁珠富集ＭＮＣ中的胎儿有核红细胞：ａｎｔｉ－ξ－ｂｉｏｔｉｎ或ａｎｔｉ     

从孕妇血浆中提取胎儿DNA鉴定胎儿RhCcEe血型

目的探讨利用孕妇血浆中游离胎儿DNA进行非创伤性产前诊断胎儿RhCcEe血型的方法。方法采用QIAamp DNA Kit抽提孕妇血浆DNA，利用SRY基因确认胎儿DNA的存在，通过PCR方法扩增30例孕妇血浆中胎儿DNA以检测胎儿RhCcEe基因，并对产前孕妇外周血和产后婴儿外周血进行RhCcEe血清学表型分析，回顾性评价胎儿基因分型结果的准确性。结果30例样本中，13例母子表型完全相同，17例存在区别。当母亲表型为RhCC、cc、EE、ee纯合子时，均成功扩增出母亲所缺少的c、C、e、E基因。结论本研究建立的非创伤性产前诊断胎儿RhCcEe基因型的方法是可行的，当母亲为纯合子时，血浆中胎儿RhCcEe基因分型具有临床意义，可用于新生儿溶血病的预防和诊断。     

经母腹脐静脉穿刺术在产前诊断中的应用——附40例分析

目的:探讨经母腹脐静脉穿刺术在产前诊断中的应用价值及安全性.方法:选择40例有产前诊断指征的妊娠妇女,在B超引导下行经母腹脐静脉穿刺术.结果:1次穿刺成功率为95%(38/40),最终取血成功率为98%(39/40).脐血检查结果为:9号染色体臂间倒位3例,1号染色体多态性2例,21-三体(47,XX, 21)1例,18-三体(47,XY, 18)1例,胎儿巨细胞病毒感染1例.术中3例发生胎心过缓.该组孕妇术后均无出现并发症,亦无发生穿刺并发症相关的胎儿死亡.结论:在B超引导下行经母腹脐静脉穿刺术具有较高成功率,是比较安全、有效的产前诊断方法.     

母体血循环中胎儿游离DNA的检测

目的寻找一种无创性产前基因检测孕妇血浆中胎儿游离DNA的新方法。方法提取32名健康孕妇血浆标本中胎儿游离DNA，经套式聚合酶链反应（PCR）扩增其性别决定基因（sex-determiningregion Y，SRY），并引入内参照基因序列ArrLl；并采用16个短串联重复序列（shorttandemrepeat，STR）多态性位点的多重荧光PCR方法对血浆标本中DNA进行STR等位基因扩增。同时，检测孕妇及其丈夫的外周血白细胞DNA，进行基因扫描及对照分析。结果经SRY-PCR检测发现，17名妊娠男胎孕妇血浆中均出现基因扩增带，其余15名妊娠女胎孕妇中有2名出现假阳性，性别总符合率为94％（30／32）。经STR-PCR检测发现，均从孕妇血浆中检测出父源性胎儿DNA的存在。结论应用孕妇血浆中胎儿DNA作产前诊断准确性较高，是一种无创性产前基因诊断方法，具有广泛的临床应用前景。     

引物延伸预扩增后STR分型在鉴定母血中胎儿有核红细胞的应用

目的 探讨一种鉴定母血中胎儿有核红细胞（NRBC）的方法，为无创性产前基因诊断创造必要条件。方法 联苯胺染色识别孕妇外周血中NRBC，经显微操作获取，并以引物延伸预扩增（PEP）对单个NRBC进行全基凶组扩增后，用短串联重复序列（STR）分析其基因型，与父母基因型比对，确定该细胞的来源。结果 28例轻型β地中海贫血孕妇外周血样本中每例发现NRBC4～13个／5ml，经鉴定每例有胎儿NRBC2～8个／5ml，约43．6％的NRBC来源于胎儿。结论 PEP后STR基因型分析能有效鉴定孕妇外周血中NRBC的来源，使应用单个胎儿NRBC进行产前基因诊断成为可能。     

荧光定量PCR检测Rh阴性孕妇外周血浆游离DNA中胎儿RhD血型

目的 探讨荧光定量PCR(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)技术对Rh阴性孕妇血浆中游离胎儿DNA进行非创性产前诊断胎儿RhD血型的可行性.方法 选取78份妊娠11～40周、B超确诊为单胎的Rh阴性孕妇血浆.采用9个短串联重复序列(short tandem repeat,STR)多态性位点及Y染色体性别决定区基因(sex-determining region Y chromosome,SRY)确定胎儿DNA的存在;运用FQ-PCR技术对血浆中游离胎儿DNA进行RHD基因外显子5、7、10和内含子4定量分析,以确定胎儿RhD血型的基因型;其基因型结果与产后新生儿脐血血清学检测结果进行对比分析,回顾性评价胎儿基因定型结果的准确性.结果 78份标本中,41份检测到SRY基因,平均浓度为(214.7±120.9)拷贝/ml,产后证实皆为男性.70份FQ-PCR基因定型结果与血清学结果相符,另有5份确定为假阳性,3份基因定型结果不可确定,检测结果总符合率为90%(70/78).5份假阳性标本通过检测RHD1227A等位基因鉴定了4份RhD放散型,FQ-PCR最终结果准确率达到95%(74/78).结论应用FQ-PCR方法进行非创性胎儿RhD血型检测可用于新生儿溶血病的预防和诊断.     

孕妇血浆中游离胎儿DNA在产前诊断中的初步应用

目的探讨孕妇血浆中游离胎儿DNA在非创伤性产前诊断中的可行性。方法用柱分离法提取46例孕妇血浆中胎儿DNA,用巢式聚合酶链反应(PCR)技术扩增其胎儿SRY基因,并引入内参照基因ATL1特异序列。结果 28例孕男胎的孕妇血浆中有26例经巢式PCR扩增出SRY基因,18例孕女胎的孕妇血浆中有17例经巢式PCR只扩增出ATL1基因。灵敏度和特异度分别为92.9%(26/28)和94.4%(17/18),总符合率为93.5%(43/46)。结论应用孕妇血浆中胎儿DNA作产前诊断灵敏度和特异度较高,是一种非创伤性产前诊断方法,具有广泛的临床应用前景。     

孕妇外周血中游离DNA分级分离方法的应用研究

目的探讨DNA片段差异性分级分离法对孕妇血浆中胎儿游离DNA富集的效果。方法取孕中期孕妇静脉血5 ml，分别提取血浆中游离DNA和白细胞DNA，用琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段，回收〈400、400—1 000、1 000—3 000 bp部分凝胶中的DNA，扩增16个短串联重复序列（STR）遗传标志位点，同时扩增和检测孕妇白细胞基因组DNA和胎儿羊水细胞基因组DNA作对照，然后，用ABI 310基因分析仪检测。结果共检测3例孕妇外周血标本48个STR位点，其中有意义位点（即胎儿父源性等位基因可与孕妇等位基因区分的STR位点）31个。从血浆总DNA、〈400、400—1 000和1 000—3 000 bp DNA组中成功检测到胎儿等位基因的位点数占有意义位点数的百分比分别为6．45％、29．03％、38．71％和9．68％，各组检出成功率的差异有统计学意义（r=13．432，P=0．004），而〈400和400—1 000 bp DNA组成功率较高。结论孕妇血浆DNA中短片段组分（〈1 000bp）胎儿DNA含量相对较高，有望应用于无创性胎儿产前诊断。     

733例患者巨细胞病毒感染的分析

目的为了解人类巨细胞病毒(CMV)感染与流产、死(畸)胎、婴儿黄疸、肾炎、红斑狼疮、冠心病、糖尿病、诊断不明发热(无名热)和脑炎的关系,对以上733例患者和60例健康对照者CMV感染状态进行了调查分析。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测CMV-IgM抗体。结果CMV-IgM抗体阳性率病人组24.97%(183/683),对照组1.67%(1/60),两组阳性率比较,差异非常显著(x2=16.895 P<0.001)。结论CMV感染与流产、死(畸)胎、婴儿黄疸、肾炎、红斑狼疮、冠心病、糖尿病、无名热和脑炎等疾病的部分患者的发病有关。