17α羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症一家系CYP17A1基因突变分析

目的 对一儿童17α羟化酶/17,20碳链裂解酶缺陷症(17OHD)先证者及其主要家系成员进行CYP17A1基因突变分析,旨在提高认识和引起重视.方法分别获取先证者及其父母、双胎姐姐的基因组DNA,应用PCR和DNA直接测序方法,进行CYP17A1基因突变检测.结果 先证者存在CYP17A1基因复合型点突变,即Exl的nt186delC和Ex6的nt1085G>A,使17α羟化酶完全失活,从而导致170HD.并在其父Exl、其母和其双胎姐姐Ex6上均发现同类型基因突变.其中nt186delC为新发现突变位点,健康对照者未发现类似基因突变.结论 异卵双胎先证者分别在CYP17A1基因的Exl和Ex6存在复合点突变,其父母和双胎姐姐均为突变携带者.开展基因诊断有助于提高临床诊治水平.     

Wiskott-Aldrich综合征家系调查及基因突变分析

目的：对一个Wiskott-Aldrich综合征家系进行调查,并对候选突变基因WASP进行分析,探讨该病临床特点和发病机制。方法一例3代人Wiskott-Aldrich 综合征家系,调查家系14名成员病史,采集外周血样并提取DNA,采用PCR扩增、DNA直接测序技术进行WASP基因突变分析。结果 PCR-DNA直接测序证实先证者WASP基因2号外显子291号碱基G/A突变,导致该基因第86号氨基酸由精氨酸（R）变为组氨酸（H）,即WASP基因R86 H错义突变。家系中患者检出与先证者相同的突变,患者母亲均为突变携带者。结论 Wiskott-Aldrich综合征是X连锁隐性遗传病,X连锁血小板减少症是Wiskott-Aldrich综合征的一种轻型表现,WASP基因突变是该病的分子学发病机制。本研究发现的R86H突变是Wiskott-Aldrich综合征的热点突变位点。Wiskott-Aldrich综合征临床上缺乏特征性诊断依据,对该病认识的提高和基因诊断有助于早期识别和正确诊断。     

婴儿失盐综合征4例病因分析及基因诊断应用价值探讨

目的 探讨婴儿失盐综合征的病因及基因检测在病因诊断中的应用价值。方法　收集2010-2014年上海交通大学附属上海儿童医学中心收治的4例表现为低钠高钾血症的失盐综合征患儿的临床资料、治疗随访情况,并采集该4例患儿及其父母的DNA进行基因检测。结果　4例患儿存在不同程度的失盐。通过基因检测,明确了其存在不同的致病基因突变：分别为CYP21A2基因存在剪接位点变异c.293-13A＞G（杂合）,小的重复c. 923dupT,p.Leu308Phefs*6（杂合）; DAX1 基因存在小的缺失c.1334delC, p.Ala445Valfs*17（半合子）; SCNN1A基因存在小的缺失c.del1311G, p.Arg438Glyfs*43（杂合）, 剪接位点变异c.1439+1G＞C（杂合）; CYP11B2基因存在剪接位点变异c.240-1G＞A（杂合）, 无义变异c.1009C＞T, p.Gln337*（杂合）。结合临床表现, 分别诊断为： 先天性肾上腺皮质增生症（21-羟化酶缺乏症）; 先天性肾上腺发育不良; 假性醛固酮减少症I型; 醛固酮减少症。结论　婴儿失盐综合征病因复杂,容易误诊,基因检测有助于早期明确诊断,进行针对性治疗。     

家族性高胆固醇血症纯合表型患儿及家系致病基因突变分析

目的 对1例临床确诊为纯合型家族性高胆固醇血症(FH)患儿及其家系进行基因检测和系谱分析,探讨该家系可能存在的致病基因突变.方法 于先证者家中收集该家系3代共47例血标本及临床资料.对先证者及其家系成员进行血脂测定和心电图检查;酚氯仿法提取患者基因组DNA并鉴定,PCR扩增基因外显子和内含子,采用变性高效液相色谱(HPLC)法及扩增产物直接序列分析检测其低密度脂蛋白受体(LDL-R)基因的全部18个外显子和启动、载脂蛋白B(ApoB100)R3500Q位点、枯草溶菌素9(PCSK9)基因全部12个外显子有无点突变;用多重连接探针扩增法(MLPA)检测先证者有无LDL-R基因的长片段的缺失或插入突变;核苷酸序列分析结果与Gen Bank比对寻找突变.结果 先证者临床确诊为纯合子FH.根据血脂和临床表现,先证者家系47例中16例诊断为高胆固醇血症,其中临床确诊1例纯合子FH,6例杂合子FH;系谱分析该家系遗传方式符合常染色体显性遗传规律.先证者核苷酸序列分析排除LDL-R、ApoB100、PCSK9基因点突变;MLPA法排除了先证者LDL-R基因的长片段缺失.结论 该家系为遗传性高胆固醇血症家系,通过对该家系进行基因突变检测和家系分析排除了已知的致FH基因突变,认为先证者的FH样表型可能是一种未知的基因突变,尚需采用进一步的全基因扫描方法寻找其致病基因.     

成骨不全4个家系基因突变检测及表型与基因型的关系

目的对国内4个成骨不全(OI)家系进行临床调查分析和基因突变检测,探讨中国人群OI基因型与表型的关系。方法分别对4例来自不同家系的OI先证者进行体格检查及家系调查,收集临床资料及血液标本,绘制家系图谱,确定各家系成员患病个体的临床诊断分型。提取其血液标本基因组DNA,应用PCR扩增及DNA直接测序法对4例先证者Ⅰ型胶原基因进行基因突变检测,并应用生物信息学软件对测序结果与Genbank标准序列进行对比;根据先证者检测结果,分别对各家系成员进行COL1A1/COL1A2基因突变检测和分析。结果在先证者1及家系患病个体中检测到COL1A1基因第36外显子c.2473位点G>A突变,在先证者2COL1A1基因上第26内含子剪切位点处c.1821+1G>A突变,在先证者4及家系患病个体中检测到COL1A1基因第9内含子剪切位点处c.697-2A>T突变,先证者3及4个家系非患病成员均未检测到COL1A1/COL1A2基因突变。结论COL1A1基因突变是引起中国人群OI的原因之一,但还可能有其他的基因突变存在,临床表型不仅与基因型有关,还可能受遗传背景、环境及其他因素的影响。     

戈谢病三家系GBA基因突变分析

目的探讨GBA基因突变及基因检测在戈谢病诊断中的意义。方法分析3个无血缘关系的戈谢病家系先证者及其家庭成员的临床资料及基因检测结果。结果家系1先证者发现c.907CA与c.1448TC的复合杂合突变,分别遗传自父母;家系2先证者发现c.1174del C与c.1226AG的复合杂合突变,分别遗传自父母,经HGMD检索,变异c.1174del C的致病性目前未见有文献报道,为新发现突变;家系3先证者发现c.1342GC的纯合核苷酸变异与c.1263_1317del的杂合核苷酸变异,c.1263_1317del杂合突变遗传自父亲。结论 GBA基因突变为3个戈谢病家系的致病原因,临床上可通过分子遗传学手段进行戈谢病的基因诊断。     

两个A型尼曼-匹克病家系基因型和临床表型分析

目的 研究2个无关的A型尼曼-匹克病家系酸性神经鞘磷脂酶(ASM)基因SMPD1突变及遗传特征,分析基因型与表型关系.方法 收集2位先证者及其家庭成员的临床资料,采用基因组小剂量抽提试剂盒从2个家系共6名成员及100例健康对照者外周血中提取基因组DNA,根据人类基因组数据库中获得的基因序列(NM000543)设计4对引物,采用聚合酶链反应(PCR)进行扩增,并应用PCR产物回收试剂盒进行产物回收,采用DNA直接测序法进行基因突变检测,测序结果应用DNAman软件进行序列对比分析,确定基因突变位点,对测序异常的片段重新进行PCR扩增与测序,以验证结果的可靠性.结果 PCR扩增所得片段与预计扩增片段大小一致,无非特异扩增带,可以进行纯化与测序.将测序结果与正常序列进行对比分析后,在先证者1和2的SMPD1基因的第1号外显子均发现一个纯合突变T107C,遗传密码子由GTG变为GCG,从而导致36位缬氨酸被丙氨酸替代(p.V36A),最终致使ASM(E.C.3.1.4.12)活性缺陷,产生临床症状.先证者之父母为携带者,100例健康对照中未发现上述突变.结论 证实SMPD1基因是本研究中2个无关的A型尼曼-匹克病家系的致病基因.2个家系患儿均为SMPD1基因纯合突变致病,其父母为表型正常的基因突变携带者.     

血友病乙患儿一家系基因突变分析

目的探讨凝血因子Ⅸ(FⅨ)基因突变致血友病乙的分子机制。方法回顾分析1例确诊血友病乙并经家系基因检测患儿的临床资料。结果先证者男,2岁4个月,反复皮肤瘀斑、鼻衄。查活化部分凝血活酶时间118. 3 s,凝血酶原时间15 s,血小板287×10~9/L,FⅨ2. 3%。明确诊断血友病乙型。收集其家系临床资料,提取家系DNA,运用PCR扩增及Sanger双脱氧链终止法对其FⅨ基因8个外显子及其侧翼序列进行测序,先证者FⅨ基因突变为c. 129 delGp.Pro 44 Glnfs*60,突变位于2号外显子,家系中5例女性为该位点的杂合突变,先证者大姨的胎儿经产前诊断提示未携带该致病基因。结论 c.129delG p.Pro44Glnfs*60是该家系FⅨ基因突变类型,基因检测有助于产前诊断。     

河南地区 21- 羟化酶缺乏症患儿 CYP21A2 基因突变谱分析

目的探讨河南地区21羟化酶缺乏症(21-OHD)遗传特征。方法回顾分析2009—2016年,祖籍河南,汉族,临床诊断为21-OHD患儿及其家系的基因检测结果。应用Sanger测序和MLPA方法进行21羟化酶基因CYP21A2检测,对于CYP21A2基因突变呈阴性的患儿,再进行二代测序以明确诊断。结果共54个家系55例患儿,病程1个月～8年,其中临床诊断失盐型49例(男37例、女12例),单纯男性化型6例(女3例、男3例)。46例患儿检测到CYP21A2基因突变,突变频率依次为c.293-13A/CG(I2G)、全基因缺失或大片段缺失、C.955GT(p.Q319X)、C.515TA (p.I172N)、c.1069GT(p.R357W)。9例CYP21A2检测阴性者,二代测序检测到NROB1(DAX1)7例,更正诊断为先天性肾上腺发育不良。结论河南地区临床诊断21-OHD患儿CYP21A2最常见热点突变类型是c.293-13A/CG(I2G),其次为基因大片段缺失。     

常染色体显性遗传Emery-Dreifuss肌营养不良一家系研究并文献复习

目的 分析一个常染色体显性遗传Emery-Dreifuss肌营养不良(AD-EDMD)家系的临床、肌活检组织病理特征,探讨其致病基因突变.方法 收集AD-EDMD家系先证者及其父母的临床资料,对先证者进行腓肠肌活检;提取先证者及其父母外周血基因组DNA,PCR扩增LMNA基因的12个外显子,以琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物,PCR产物纯化后DNA直接测序,确定基因突变的类型,并综合文献进行分析.结果 先证者,女,现4岁5个月,自幼四肢无力,以近端为著,轻度漏斗胸,肌酶水平升高,肌电图提示肌源性损害,腓肠肌活检病理学检查提示肌肉病样改变.其父亲具有相同症状,随病程进展表现为早期出现肘关节挛缩,颈部僵硬,脊柱侧弯,跟腱紧,四肢缓慢进行性肌无力,窦性心动过缓等.LMNA基因突变分析发现先证者及其父亲LMNA基因第9外显子发生杂合错义突变c.1580G＞ C(p.Arg527Pro),此为已报道致病突变.结论 对早期出现肘关节挛缩、屈颈受限、脊柱强直、双上肢近端和双下肢远端肌无力明显、心律失常的患者应分析LMNA基因,有助于早期诊断EDMD,判断预后;及时有效监测心律失常的变化,适时干预,从而改善生活质量,延长寿命.基因分析是确诊EDMD最可靠的方法.     

先天性肾上腺皮质增生症21-羟化酶缺陷的产前诊断一例

目的　探讨先天性肾上腺皮质增生症 2 1 羟化酶缺陷的产前诊断方法。方法　运用Southern杂交、单链构象多态性分析和人工酶切位点分析的方法检测突变 ,对先天性肾上腺皮质增生症 2 1 羟化酶缺陷先证者 (男 ,3岁 )及其父母进行DNA诊断 ,并于其母亲第 5次妊娠 16周时抽取其羊水进行羊水细胞诊断。结果　先证者存在缺失突变与内含子 2第 6 5 6剪切突变 ,父母各携带其一。羊水细胞未检出两种突变 ,判断胎儿正常。胎儿娩出后发育良好 ,实验室检查正常 ,证实了产前诊断结果。结论　羊水细胞DNA分析是先天性肾上腺皮质增生症 2 1 羟化酶缺陷的产前诊断的可靠方法。     

SRD5A2基因新型复合杂合突变致类固醇5-α还原酶2型缺乏症的遗传变异分析

该文报道1例类固醇5-α还原酶2型缺乏症患儿的临床特征及SRD5A2基因突变特点。患儿男性,2月龄,生后即出现尿道下裂及阴茎短小。提取患儿及父母外周血DNA,通过高通量测序技术对患儿DNA样本进行内分泌疾病相关基因的捕获测序,并对家系DNA样本进行Sanger测序验证。结果显示患儿SRD5A2基因存在c.680G > A（p.R227Q）和c.608G > A（p.G203D）复合杂合突变,其中c.680G > A来源于其父亲,为已知致病性突变,c.608G > A来源于其母亲,为新发现的突变。该研究为患儿病因诊断及该家系的遗传咨询提供了分子依据,并扩展了SRD5A2基因突变谱。     

Steroid 11-beta hydroxylase deficiency caused by compound heterozygosity for a novel mutation in intron 7 (IVS 7 DS+4A to G) in one CYP11B1 allele and R448H in exon 8 in the other

Congenital adrenal hyperplasia (CAH) due to steroid 11-beta hydroxylase deficiency (11β-OHD) is a rare genetic disorder of steroidogenesis transmitted as an autosomal recessive trait. We describe a new case of 11β-OHD CAH caused by compound heterozygosity for a novel mutation in intron 7 and previously described mutation in exon 8 of CYP 11B1 gene. A 2.5-year-old boy of Croatian descent presented with accelerated growth and bone age, borderline hypertension, and pseudoprecocious puberty. Hormonal studies established diagnosis of 11β-OHD: elevated plasma levels of 11-deoxycortisol, 17-hydroxyprogesterone, androstenedione and testosterone, low levels of cortisol and aldosterone, and suppressed plasma renin activity. Sequencing of the CYP11B1 gene identified compound heterozygous mutation consisting of a novel splicing mutation in intron 7 (IVS 7DS+4A to G) and R448H mutation in exon 8 previously reported mostly in Moroccan Jews. This is the first patient with CAH due to 11β-OHD in Croatia (and Slavic population in general) in whom molecular diagnosis of CYP11B1 gene was performed.     

肉碱棕榈酰转移酶Ⅱ缺乏症家系CPT2基因突变分析及产前诊断

分析肉碱棕榈酰转移酶Ⅱ（CPTⅡ）缺乏症患儿及其父母CPT2基因突变类型,为家系成员提供遗传咨询及产前诊断。先证者,女,于3个月时发烧8 h入院,血液酯酰肉碱谱分析显示棕榈酰肉碱显著增高,提示CPTⅡ缺乏症。收集患儿临床资料,采集患儿和父母外周血,提取基因组DNA,应用直接测序法进行CPT2基因5个外显子编码区及与外显子交界的部分内含子区域进行测序。患儿母亲于妊娠中期采取羊水,分取羊水细胞进行CPT2基因突变分析。Sanger测序发现先证者CPT2基因存在两个已知致病突变c.886C > T（p.R296X）和c.1148T > A（p.F383Y）,突变来自父母双方。母亲第二胎羊水细胞CPT2基因存在c.886C > T（p.R296X）,为致病基因携带者。胎儿出生后血液酯酰肉碱谱正常,发育正常。通过家系CPT2基因分析,证实了先证者死因为CPTⅡ缺乏症,在突变明确的前提下,成功地进行了下一胎同胞的产前诊断,为该家庭提供帮助。     

Duchenne肌营养不良家系临床表型及遗传学分析

目的 分析Duchenne肌营养不良（DMD）患儿家系临床表型与遗传学特点。方法 选择基因检测明确诊断为DMD的7例患儿（6个家系）为研究对象，总结家系临床特征、遗传学特点。结果 6个家系中新发突变2个，母源遗传性4个。家系1先证者同时存在DMD基因1处点突变和1处插入突变，均为新发突变；3个家系为DMD基因点突变，1个家系为DMD基因外显子大片段缺失，1个家系DMD基因外显子大片段重复。所有先证者均具有骨骼肌运动障碍和肌酶改变，最小发病年龄为6个月，临床表型轻重不一；所有先证者心脏彩超检查结果均正常；3例先证者伴有轻度智力障碍。仅家系6先证者母亲具有轻度临床表型。结论 基因检测可作为DMD确诊方法，智力障碍亦是DMD较多伴发的临床表型，早期心肌受累症状不显著，女性携带者可有轻度临床症状。     

Prenatal DNA analysis in four embryos/fetuses at risk of 21-hydroxylase deficiency

Prentatal diagnosis of 21-hydroxylase deficiency (21-OHD) in two unrelated embryos and two fetuses was attempted with the Southern hybridization method using the 21-hydroxylase (21-OHase) complementary DNA as a probe. The two embryos whose genomic DNA was extracted from their chorionic vili both had four TaqI fragments (3.7 kb, 3.2 kb, 2.4 kb and 2.3 kb) identical to those of their respective parents and normal controls, while the DNA from each proband of these two families lacked with the 3.7 kb and the 2.3 kb fragments corresponding to the functional 21-OHase gene (21-OHase B gene). These findings indicated that none of the embryos examined were deletion homozygotes for the 21-OHase B gene. In the two fetuses, only amniotic fluid cells were available for prenatal diagnosis. The results of Southern hybridization analysis were uninformative since all family members, including the probands and fetuses, had all four TaqI fragments. Linkage studies between 21-OHD and human leukocyte antigen (HLA) haplotypes and those between the disease and restriction fragment length polymorphisms of the 4th complement gene revealed that the fetus of one family was normal. The other fetus could not be diagnosed because a recombination between the class I HLA and the 21-OHD loci had occurred in this family.Abbreviations CAH congenital adrenal hyperplasia - cDNA complementary DNA - C4 fourth compoment of complement - HLA human leucocyte antigen - MHC major histocompatibility complex - 21-OHase 21-hydroxylase - 21-OHD 21-hydroxylase deficiency - 17-OHP 17-hydroxyprogesterone - RFLP restriction fragment length polymorphism     

13例早发型腓骨肌萎缩症的基因分型研究

目的 探讨早发型腓骨肌萎缩症（CMT）的临床特征及遗传变异分析。方法 以临床诊断为早发型CMT的患儿为研究对象，收集相关临床资料，进行肌电图及CMT相关基因检测并分析。结果 早发型CMT病例共13例，男9例（69%），女4例（31%），平均就诊年龄4.0±2.1岁，其中12例（92%）患儿起病年龄 < 2岁。9例（69%）诊断为CMT1型（其中Dejerine-Sottas综合征6人），1例（8%）为中间型，3例（23%）为CMT2型。13例患儿的基因检测结果显示6例（46%）患儿存在外周髓鞘蛋白22（PMP22）基因重复突变、3例（23%）髓鞘蛋白零（MPZ）基因插入突变及点突变、3例（23%）线粒体融合蛋白2（MFN2）基因点突变、1例（8%）人轻肽神经丝蛋白（NEFL）基因点突变，其中11例（85%）为已知致病突变，2例（15%）为新变异。MPZ基因新变异c.394C > G（p.P132A）评级为"可能致病的"及MFN2基因新变异c.326A > G（p.K109R）评级为"致病的"。结论 早发型CMT以PMP22基因重复突变及MPZ基因突变为主，临床分型以CMT1型为主，其中Dejerine-Sottas综合征占有相当比例。     

In Vitro Enzyme Assay of CYP21A2 Mutation (R483Q) by A Novel Method Using Liquid Chromatography-Electrospray Ionization Tandem Mass Spectrometry (LC-ESI-MS/MS)

Congenital adrenal hyperplasia (CAH) is one of the most common autosomal recessive disorders in humans, and 21-hydroxylase deficiency (21-OHD) accounts for 90 to 95% of all cases of CAH. Approximately 95% mutations are a consequence of recombination between the CYP21A2 and its highly homologous pseudogene CYP21A1P. Recently, other rare mutations have been identified, increasing the number of reported mutations to more than eighty. The in vitro enzyme assay for the detection of mutated 21-hydroxylase is a well-established method. In this study, we report the characterization of the R483Q mutation using a novel in vitro enzyme assay, liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS). With this system, we evaluated the activity of the R483Q mutation. The enzyme activities of 21-hydroxylase in the convertion of progesterone to deoxycorticosterone (DOC), and 17-hydroxyprogesterone (17-OHP) to 11-deoxycortisol (11-DOF), were measured as 2.00 ± 0.25% and 1.89 ± 0.30% of the wild type, respectively. This result was in agreement with that of a previous report, which measured the activities using the ³H labeled steroid assay. Our results suggest that the R483Q mutation is compatible with the simple virilizing form of 21-OHD and that the LC-ESI-MS/MS assay using picolinoyl derivatives is an alternative to the existing ³H-labeled steroid assay for the characterization of the CYP21A2 mutation.     

3例Mowat-Wilson综合征患儿的临床特点及遗传学分析

Mowat-Wilson综合征（MWS）是一种由E盒结合锌指蛋白2（ZEB2）基因突变导致的罕见常染色体显性遗传病,临床表现多样,主要表现为智力障碍/全面发育迟缓、面容特殊,并伴有多种先天畸形。该文报道3例经ZEB2基因分析确诊为MWS患儿的临床特点和基因突变结果。3例均有先天性巨结肠及面容异常,其中病例1于4月龄死于重型心衰和肺炎,因年龄小,家长未能发现其全面发育迟缓,另2例均有重度全面发育迟缓。3例患儿均为ZEB2基因新生杂合无义突变携带者,其中c.756C > A （p.Y252X）为未见报道的新发突变,该类突变可产生截短蛋白,具有明确致病性。MWS临床和遗传异质性大,若患儿面容与MWS高度符合,且存在智力障碍/全面发育迟缓,合并多种先天畸形,临床医生应警惕MWS,基因检测有助于确立诊断。     

全外显子测序技术在危重症新生儿遗传病中的应用价值

目的 探讨全外显子组测序（WES）技术在危重新生儿遗传病中的应用价值。方法 选取于该院新生儿重症监护室治疗的66例疑似遗传病或诊断不明的危重新生儿为研究对象。收集患儿临床资料,采集患儿及其父母静脉血行WES检测,完成遗传病因诊断。结合患儿的临床表现寻找相关的致病基因变异。结果 66例疑似遗传病或诊断不明的危重新生儿中,男34例,女32例,其中通过WES检测出有基因变异14例（21%）;1例患儿经WES检测未见有基因变异,但因临床表现高度怀疑为色素失禁症,联合多重连接酶探针依赖扩增技术,检测到IKBKG基因4~10号外显子的杂合缺失变异。15例检测出基因变异的患儿中,致病性基因变异10例（67%）;可疑致病性基因变异1例（7%）;基因变异意义未明4例（27%）。15例患儿中有13例行染色体检查,只有1例染色体异常。结论 染色体检查不能作为遗传病的确诊手段,WES检测技术是寻找疑似或诊断不明的危重新生儿遗传病的重要工具,然而WES技术有一定的局限性,可联合其他测序方法进行检测。