儿童短肢型遗传性骨代谢性疾病的临床分析及基因诊断

目的：分析软骨发育不全（ACH）、软骨发育低下（HCH）及假性软骨发育不全（PSACH）3种短肢型遗传性骨代谢性疾病的临床表现、骨骼X线表现及基因结果。方法：对基因确诊的10例短肢型遗传性骨代谢性疾病患儿（其中4例为ACH,3例为HCH,3例为PSACH）的临床特点、骨骼X线表现及基因结果进行分析。结果：10例患儿的平均身高为-3.69±1.79 SD,平均坐高/身高比值为0.65±0.03,平均指间距/身高比值为0.93±0.04。4例ACH患儿及3例PSACH患儿具有典型骨骼X线表现,3例HCH患儿中1例表现为坐骨大切迹变小,1例表现为椎弓根间距未增宽。4例ACH患儿中3例检测到FGFR3基因G380R突变,1例检测到Y278C突变;3例HCH患儿均检测到FGFR3基因N540K突变;3例PSACH患儿检测到COMP基因的杂合突变。结论：ACH及PSACH患儿的矮小程度及骨骼畸形程度较HCH患儿重,HCH患儿临床表现轻,不典型;骨骼X线及基因分析有助于3种疾病的诊断及鉴别诊断;3种疾病涉及2个基因,分别有各自的突变热点,有利于临床基因诊断。     

假性软骨发育不全一家系COMP基因突变分析

目的对一假性软骨发育不全(PSACH)家系进行软骨寡聚基质蛋白(COMP)基因突变分析。方法2008年10月于北京协和医院儿科遗传门诊采集该家系中患者及正常人血样,提取DNA,用聚合酶链反应扩增COMP基因外显子8-19,并对扩增产物进行直接测序,确定突变位点。结果家系中患病父子都存在COMP基因外显子8中c.815TC突变,为已知突变。结论该家系中患者发病是由COMP基因突变所致。     

X-连锁肾上腺脑白质营养不良ABCD1基因突变分析

目的对5例X-连锁肾上腺脑白质营养不良（X-ALD）患儿及其中2例的母亲进行ABCD1基因突变分析。方法聚合酶链反应（PCR）扩增5例X-ALD患儿ABCD1基因的10个外显子及其侧翼序列,直接进行测序。将测序结果与正常ABCD1基因序列比对,确定突变位点和突变形式。同时测定30例健康儿童ABCD1基因序列以明确突变位点是否为基因多态性。结果伴ABCD1基因突变3例,1例为外显子6上518位氨基酸的点突变,为Arg518Gly（CGG→GGG）;2例为外显子1上8个碱基缺失（134del8）。同时在外显子7上发现4个位点的基因多态性,分别为Gly551X（GGC→GGT）、Arg554His（CGT→CAT）、Gln567Arg（CAA→CGA）和Val582Ile（GTC→ATC）。2例患儿的母亲均未检测到突变。结论3例X-ALD患儿证实存在ABCD1基因突变,其中外显子1的8个碱基的缺失（134del8）为新发现的突变;新发现中国人外显子7的4个位点基因多态性,分别为Gly551X、Arg554His、Gln567Arg和Val582Ile。     

Allan-Herndon-Dudley综合征4例并文献复习

目的　探讨Allan-Herndon-Dudley综合征（AHDS）患儿临床特征及SLC16A2基因突变特点。方法　回顾性分析2017年2月至2019年12月南京医科大学附属儿童医院收治的4例AHDS患儿临床资料,并对患儿进行全外显子组测序,同时分析文献报道的AHDS患儿临床特点。结果　4例男性患儿均有智力低下、运动障碍、语言发育落后和血清甲状腺激素异常,全外显子测序发现2例患儿存在SLC16A2基因c.504_529del半合子突变,另2例分别存在SLC16A2基因c.1455delG、c.448G＞A半合子突变,4例患儿母亲均为携带者,最终确诊为AHDS。4例患儿均给予综合康复治疗并定期随访。结论　对于不明原因智力运动发育落后、脑白质髓鞘化落后的影像学特征和血清甲状腺激素异常的男性患儿应考虑AHDS诊断的可能,早期完善基因检测有助于确诊、治疗和预后评估。     

Cockayne 综合征 1 例临床及 ERCC8 基因突变特征

目的探讨Cockayne综合征患儿的临床、影像学和ERCC8基因突变特征。方法回顾分析1例经基因检测确诊的Cockayne综合征患儿的临床和影像学资料,应用目标序列捕获和第二代测序技术检测患儿相关基因,采用Sanger测序验证突变位点的结果,并对其父母、姐姐样本进行突变位点的序列分析。结果女性患儿,7岁,主要临床表现为精神运动发育迟滞、生长发育障碍、特殊面容、光敏性皮炎、痉挛性瘫痪、小脑共济失调。头颅磁共振显示双侧半卵圆中心、脑室旁白质对称脱髓鞘改变,小脑萎缩。二代测序结果显示患儿ERCC8基因外显子区域两处杂合突变点c.397CT和c.394_398del,分别引起氨基酸变化p.Q133X和p.L132fs;Sanger测序结果显示2个突变分别来源于母亲和父亲,为复合杂合突变。c.394_398del位点为已报道致病突变,c.397CT为首次报道。结论二代测序技术可准确检测Cockayne综合征的ERCC8基因突变。首次发现c.397CT突变位点,扩大了中国Cockayne综合征患者的基因突变谱。     

婴儿肝内胆汁淤积症SLC25A13基因突变分析

目的 探讨SLC25A13基因突变在中国婴儿肝内胆汁淤积症患儿中的检出率，初步了解突变患儿血生化及氨基酸谱特征，肝脏活组织病理变化。方法 2003年12月至2006年12月就诊于复旦大学附属儿科医院的婴儿肝内胆汁淤积症患儿，满足本研究入选条件者共115例进行了血氨基酸质谱分析，伴血浆瓜氨酸明显升高的患儿进行SLC25A13基因全部外显子及邻近序列测序，不伴血浆瓜氨酸明显升高的患儿进行SLC25A13基因常见突变851del4（突变Ⅰ）及突变1638ins23（突变Ⅲ）筛查，突变851del4采用实时荧光定量PCR双标记探针法检测，突变1638ins23采用PCR产物直接电泳法检测，对仅检出单个位点突变的筛查对象，继续进行其余已报道的10种突变位点检测。检测结果仍为单个杂合突变的对象进行SLC25A13基因所有外显子区及其邻近序列分析。对确诊突变患儿的临床表现、血生化及血氨基酸特征等进行分析。结果5例伴血瓜氨酸明显升高的患儿共检出突变4例，其中纯合突变851del4/851del4 1例，复合杂合突变851del4/1638ins23 1例，杂合突变851del4 2例；110例不伴血浆瓜氨酸明显升高患儿共检出突变6例，其中纯合突变851del4/851del4 1例，复合杂合突变851del4/1638ins23 1例，杂合突变851del4 4例。115例婴儿肝内胆汁淤积症患儿共检出SLC25A13基因突变10例，占8.7％。突变患儿血生化改变包括胆红素、γ-谷氨酰转移酶以及碱性磷酸酶等明显升高，AST升高较ALT明显。血串联质谱发现5例突变患儿有特征性氨基酸瓜氨酸、苏氨酸及蛋氨酸升高，另5例突变患儿并无血氨基酸改变。10例患儿中有7例行肝脏活组织病理学检查，4例有显著的脂肪变性。结论 SLC25A13基因突变是中国婴儿肝内胆汁淤积症的重要原因之一。肝脏活组织病理、血生化及氨基酸谱等检查对诊断SLC25A13基因突变患儿有重要意义，但最终仍需通过基因检测确诊。     

小儿Sjögren-Larsson综合征临床特征及基因突变分析

目的 分析4例 Sjögren-Larsson 综合征 （Sjögren-Larsson syndrome, SLS）患儿临床特征及ALDH3A2基因突变, 以明确诊断, 并为遗传咨询和产前诊断提供依据。方法 收集 2008—2013 年中国人民解放军总医院儿童医学中心收治的 4 例 Sjögren-Larsson 综合征患儿的临床资料。抽取外周静脉血各3 mL, 应用二氧化硅法提取基因组DNA。采用聚合酶链反应（PCR）扩增ALDH3A2基因的11个外显子及其与内含子的连接区。PCR产物直接测序法检测基因突变。结果 来自3个家系的4例患儿均存在先天性鱼鳞病、智力低下、痉挛性截瘫或四肢瘫等典型临床表现。3例患儿 ALDH3A2基因测序均检出基因突变。分别为：例1, IVS5-1del G, c.1157A＞G（p.Asn386Ser）; 例2和例3, c.1157A＞G （p.Asn386Ser）纯合突变; 例4基因检测未发现编码区致病突变。结论 明确了 4 例 Sjögren-Larsson综合征患儿的基因诊断, 发现 2个ALDH3A2基因突变位点,其中 IVS5-1del G为新发突变。     

儿童良性癫痫伴中央颞区棘波ELP4基因改变分析

目的　研究儿童良性癫痫伴中央颞区棘波（BECT）与ELP4基因的关系。方法　采用聚合酶链反应（PCR）对2015年1—12月自黑龙江省佳木斯市中心医院癫痫科就诊的明确诊断为BECT的患儿18例,进行ELP4基因检测,并分析临床特点与基因检测结果。结果　18例明确诊断为BECT的患儿中有15例患儿出现11p13上ELP4基因第1个外显子 -3 del A,比例高达83.3%。结论　11p13上ELP4基因第1个外显子 -3 del A可能与BECT的发生有关。     

儿童良性癫痫伴中央颞区棘波ELP4基因改变分析

目的　研究儿童良性癫痫伴中央颞区棘波（BECT）与ELP4基因的关系。方法　采用聚合酶链反应（PCR）对2015年1—12月自黑龙江省佳木斯市中心医院癫痫科就诊的明确诊断为BECT的患儿18例，进行ELP4基因检测，并分析临床特点与基因检测结果。结果　18例明确诊断为BECT的患儿中有15例患儿出现11p13上ELP4基因第1个外显子 -3 del A，比例高达83.3%。结论　11p13上ELP4基因第1个外显子 -3 del A可能与BECT的发生有关。     

中国人先天性肾病综合征NPHS1基因突变

目的分析并确定一个中国先天性肾病综合征（CNS）家系NPHSl基因突变及特征。方法对先证者及其家系成员采用聚合酶链反应（PCR）和DNA直接测序方法进行NPHSl基因突变检测,确定基因突变的位点。同时应用限制性内切酶酶切分析的方法,分析先证者及其家系成员和对照人群的基因组DNA,确定突变特征。结果在本家系的先证者发现同时存在NPHS1的G928A（D310N）、1893～1900del8（CGAAACCG）和G2869C（V957L）的3个杂合突变。具有相同表型的姐姐（Ⅲ：11）与先证者的测序结果完全一致,而在表型正常的先证者的同父异母的大姐及对照样本均未发现这些突变。患儿母亲尿检正常,基因检测显示仅有第8外显子G928A突变;患儿父亲尿检也正常,基因检测显示仅存在第14外显子的1893～1900del 8和第21外显子的G2869C突变,没有第8外显子G928A突变。同时还在先证者发现了4种碱基变异：E117K（rs3814995）、S1105S（rs2071327）、IVS27＋45c〉t和IVS8＋68a〉g,经比对前3种均为单核苷酸多态性,位于内含子内的变异（IVS8＋68a〉g）意义有待进一步研究。结论首次发现中国人CNS存在NPHS1基因突变,并证实致病突变为国际首次报道的3个杂合突变。     

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??To perform mutation analysis in a pseudoachondroplasia ??PSACH?? family. Methods??Mutation screening was carried out by DNA-PCR and direct sequencing the exons 8 to 19 of COMP gene. Results??A c.815C > T substitution was identified in exon 8 of COMP gene in the proband and his affected father and brother. Conclusion??The disease in the family is caused by mutation of COMP gene.     

SRD5A2基因新型复合杂合突变致类固醇5-α还原酶2型缺乏症的遗传变异分析

该文报道1例类固醇5-α还原酶2型缺乏症患儿的临床特征及SRD5A2基因突变特点。患儿男性,2月龄,生后即出现尿道下裂及阴茎短小。提取患儿及父母外周血DNA,通过高通量测序技术对患儿DNA样本进行内分泌疾病相关基因的捕获测序,并对家系DNA样本进行Sanger测序验证。结果显示患儿SRD5A2基因存在c.680G > A（p.R227Q）和c.608G > A（p.G203D）复合杂合突变,其中c.680G > A来源于其父亲,为已知致病性突变,c.608G > A来源于其母亲,为新发现的突变。该研究为患儿病因诊断及该家系的遗传咨询提供了分子依据,并扩展了SRD5A2基因突变谱。     

ANK1和SPTB基因突变致遗传性球形红细胞增多症的临床特点及遗传学分析

该研究对5例遗传性球形红细胞增多症（HS）患儿的临床特点及ANK1和SPTB基因突变特征进行分析。5例患儿均通过外周血基因检测确诊。5例患儿均表现为贫血、黄疸、脾肿大。红细胞渗透脆性试验显示3例增高;Coombs试验、葡萄糖6磷酸脱氢酶测定、蔗糖溶血试验、酸化血清溶血试验、地中海贫血基因检测均为阴性;外周血涂片球形红细胞计数仅1例增加。高通量测序发现病例1~3存在ANK1基因突变,分别为c.3398（exon29）delA、c.4306C > T以及c.957（exon9）_c.961（exon9）delAATCT,其中c.3398（exon29）delA未见报道;病例4的SPTB基因存在C.318delGExon3突变;病例5存在SPTB基因合并SLC4A1基因突变,其中SPTB基因c.3484delC为自发突变,SLCA4A1基因的突变位点来自父亲,为非致病基因。该研究提示,贫血、黄疸、脾肿大是HS患儿主要的临床表现;多数HS患儿外周血球形红细胞计数无明显异常;基因检测有助于HS的精准诊断。     

全外显子测序技术在危重症新生儿遗传病中的应用价值

目的 探讨全外显子组测序（WES）技术在危重新生儿遗传病中的应用价值。方法 选取于该院新生儿重症监护室治疗的66例疑似遗传病或诊断不明的危重新生儿为研究对象。收集患儿临床资料,采集患儿及其父母静脉血行WES检测,完成遗传病因诊断。结合患儿的临床表现寻找相关的致病基因变异。结果 66例疑似遗传病或诊断不明的危重新生儿中,男34例,女32例,其中通过WES检测出有基因变异14例（21%）;1例患儿经WES检测未见有基因变异,但因临床表现高度怀疑为色素失禁症,联合多重连接酶探针依赖扩增技术,检测到IKBKG基因4~10号外显子的杂合缺失变异。15例检测出基因变异的患儿中,致病性基因变异10例（67%）;可疑致病性基因变异1例（7%）;基因变异意义未明4例（27%）。15例患儿中有13例行染色体检查,只有1例染色体异常。结论 染色体检查不能作为遗传病的确诊手段,WES检测技术是寻找疑似或诊断不明的危重新生儿遗传病的重要工具,然而WES技术有一定的局限性,可联合其他测序方法进行检测。     

多种酰基辅酶A脱氢酶缺乏症患儿ETFDH基因新突变研究

本文报道了1例多种酰基辅酶A脱氢酶缺乏症患儿串联质谱筛查结果及ETFDH基因突变特点。该患儿串联质谱筛查结果显示C14：1升高,C8升高,同时还有C6、C10、C12均升高。对患儿及其父母行外显子测序,结果发现患儿ETFDH基因存在双杂合突变,分别是c.992A > T和c.1450T > C,前者遗传于母亲,后者遗传于父亲。c.1450T > C在HGMD数据库中显示为致病性突变。Polyphen-2、Provean等软件均预测c.992A > T这个新突变可能致病,突变的氨基酸在不同物种间高度保守。该研究拓展了ETFDH基因突变谱,为多种酰基辅酶A脱氢酶缺乏症患儿病因诊断及其家系的遗传咨询和产前诊断提供了分子依据。     

丙酮酸脱氢酶缺乏症PDHA1基因的一个新突变及其致病性鉴定

目的研究丙酮酸脱氢酶缺乏症发病分子遗传学机制,从基因水平诊断丙酮酸脱氢酶缺乏症,为遗传咨询和产前基因诊断提供依据。方法对临床表现及实验室检查符合丙酮酸脱氢酶缺乏症的1例患儿采用PCR法对PDHA1基因的11个外显子及外显子交界区进行扩增,并通过对扩增产物直接测序检测突变。采用生物信息学方法对新突变进行氨基酸保守型分析,预测蛋白二、三级结构,鉴定其致病性。结果先症者PDHA1基因第11外显子出现小片段重复突变,即c.1111_1158dup48bp,为新发突变。50例正常对照直接测序均未检测到c.1111_1158dup48bp突变。蛋白质二级、三级结构预测结果显示:新突变c.1111_1158dup48bp引起Ser371_Phe386的16个氨基酸重复,导致蛋白质二、三级结构发生明显变化,而正常对照无此变化。结论 PDHA1基因c.1111_1158dup48bp重复突变不是多态性变异,可能是一种新的致病性突变,导致丙酮酸脱氢酶缺乏症的发病。     

1例肢带型肌营养不良1B型的临床和遗传学特点

本文报道1例LMNA基因新发剪接杂合突变所致的肢带型肌营养不良1B型（LGMD1B）。患儿表现为进行性加重的行走乏力,肩胛带肌和下肢近端肌肉无萎缩,四肢肌张力正常,上肢肌力4级、下肢肌力4级,Gower征（+）;CK 779 U/L;肌肉病理HE染色提示肌营养不良表现,免疫组化显示Lamin A蛋白表达无明显减少;二代基因测序显示患儿LMNA基因存在新发的c.810+2T > C剪接位点杂合突变,其父母LMNA基因该位点正常。GERP++RS软件预测该突变位点具有高度保守性;Human Splice Finder和Spliceman软件预测该突变可能为致病性突变;ExPASy预测新的剪接变体氨基酸序列变短。转录组测序提示患者肌肉的mRNA存在两种序列：一种为正常序列,占92.2%;另一种为部分4号内含子保留,占7.8%,即异常剪接变体。LGMD1B是由位于常染色体1q22的LMNA基因突变所致的常染色体显性遗传性肌病,本研究的发现扩展了LMNA基因突变谱,为LGMD1B诊断提供了帮助。     

男性幼儿体检发现转氨酶升高——发现肝豆状核变性两处新的错义突变

1 例3 岁男性患儿因体检发现肝功能异常5 个月入院。患儿无厌食、纳差、黄疸等症状,生长发育正常,肝脾无肿大,实验室检查常规筛查铜蓝蛋白水平(35 mg/L)明显降低,其余嗜肝病毒及巨细胞病毒、EB病毒均为阴性。肌酶正常,血糖、血氨及代谢筛查正常,自身免疫肝病抗体阴性。进一步行眼科检查示K-F 环阴性,24 h 尿铜水平0.56 μmol/L(正常)。对患儿、患儿父母及其妹妹进行ATP7B 基因检测,明确患儿和其妹妹具有两处新发现错义突变,为Exon7 杂合突变c.2075T>C, p.L692P 和Exon13 杂合突变c.3044T>C, p.L1015P,各来自父母双方,符合复合杂合突变,基因诊断肝豆状核变性(Wilson)病成立。患儿及其妹妹确诊Wilson 病后被嘱低铜饮食,患儿给予青霉胺驱铜治疗及锌剂拮抗铜吸收,其妹妹因尚无临床症状,故给予锌剂治疗。患儿经上述治疗3 个月后复查肝功能完全正常。     

宁夏苯丙酮尿症患儿苯丙氨酸羟化酶基因外显子7突变分析

目的 探讨宁夏地区苯丙酮尿症（PKU）患儿苯丙氨酸羟化酶（PAH）基因外显子7 突变类型及频率,为该地区PKU 的基因诊断和产前诊断提供依据。方法 应用PCR 产物直接测序方法,对宁夏73 例经典型PKU 患儿（回族39 例,汉族34 例）的146 个PAH 等位基因外显子7 及其旁侧内含子区域进行序列分析。结果 共检测出6 种突变基因型,分别是R243Q（14.4%）、R241C（6.8%）、IVS7+2T → A（2.7%）、L255S（0.7%）、G247V（0.7%）和G247R（0.7%）。外显子7 突变基因总频率为26.0%（38/146）,包括错义突变和剪接位点突变两种。回族患儿R241C 等位基因突变检出率高于汉族（10% vs 3%,P<0.05）。结论 宁夏地区PKU 患儿PAH 基因外显子7 突变频率最高的是R243Q,其次为R241C;回族和汉族PKU 患儿R241C 等位基因突变率不同。