自然流产患者外周血与蜕膜NK细胞亚群数量变化的研究

目的：研究自然流产患者外周血与蜕膜组织自然杀伤细胞亚群数量的变化。方法：对36例自然流产患者及30例正常健康早孕者（对照）外周血及蜕膜组织中淋巴细胞进行单克隆抗体标记,应用流式细胞仪定性、定量分析技术对NK细胞（natural killer)亚群进行分析。结果：（1）流产组外周血及蜕膜组织NK细胞CD56＋CD16＋百分比较对照组明显升高。（P＜0．01）,而蜕膜组织中NK细胞CD56＋CD16－百分比明显低于对照组（P＜0．001）。（2）外周血与蜕膜组织NK细胞CD56＋CD16＋亚群存在相关性（γ＝0．516,P＜0．05）。结论：NK细胞亚群的数量变化可以引起蜕膜免疫微环境的失调,导致自然流产。外周血与蜕膜NK细胞CD56＋CD16＋亚群存在正相关关系。     

NK细胞受体研究进展

NK细胞受体是自然杀伤细胞功能发挥的分子基础，NK细胞抑制性及激活性受体的分子结构及其特异性配体是目前研究的热点。本文综述了该领域的最新进展。     

人早孕期蜕膜基质细胞下调蜕膜NK细胞杀伤活性

通过分析人早孕期蜕膜基质细胞(decidual stromal cell,DSC)对蜕膜NK细胞(dNK)表面趋化因子受体CXCR4与细胞内颗粒酶B表达水平的影响,研究早孕蜕膜基质细胞对局部NK细胞的训导作用。收集早孕蜕膜组织,分离DSC及蜕膜免疫活性细胞,进一步通过磁珠分选蜕膜CD3-CD56bright NK细胞,将分离的蜕膜NK细胞与DSC按1∶1比例共培养24h,收集蜕膜NK细胞,流式细胞仪检测其表面趋化因子受体CXCR4和细胞内颗粒酶B(granzyme B)的表达水平。结果显示,与对照组相比,在与DSC细胞共培养之后,趋化因子受体CXCR4+NK细胞的百分率明显上升,而蜕膜NK细胞内颗粒酶B阳性率显著下降(P<0.05)。结果表明,人早孕母-胎界面DSC细胞上调蜕膜NK细胞表面趋化因子受体CXCR4的表达,下调NK细胞内颗粒酶B的表达水平,可能抑制其杀伤活性。     

蜕膜NK细胞及其分泌的细胞因子与妊娠

蜕膜NK细胞是妊娠早期出现最多的淋巴细胞。它与外周血NK细胞表型存在差异,功能不尽相同。在母胎界面处,蜕膜NK细胞一般处于抑制状态,分泌多种细胞因子参与正常妊娠维持。本综述了蜕膜NK细胞的主要特征及其分泌的细胞因子,并主要阐述这些细胞因子在母胎界面处的免疫调控和正常妊娠维持中可能起到的作用。     

自然流产患者蜕膜组织TNF-α及TGF-β1mRNA的表达分析

目的研究自然流产患者子宫蜕膜组织中细胞因子TNF-α和TGF-β1mRNA的表达格局。方法采用实时荧光定量RT-PCR法检测了15例早期自然流产及20例同期正常早孕要求行人工流产者蜕膜组织的TNF-α和TGF-β1mRNA表达水平。结果流产组和对照组蜕膜组织TNF-αmRNA的表达水平分别为1.98±0.52和1.08±0.10;TGF-β1mRNA的表达水平分别为0.82±0.34和1.41±0.23。统计结果显示,与对照组相比,早期自然流产病人的蜕膜组织中TNF-αmRNA的表达水平明显增加(P<0.01),而TGF-β1mRNA的表达水平则显著降低(P<0.01)。结论早期自然流产的发生可能与母胎界面TNF-α和TGF-β1mRNA的异常表达有关。     

NK细胞受体的研究进展

ＮＫ细胞是一类重要的淋巴细胞，不仅在抗病毒及抗肿瘤免疫中发挥着重要的作用，而且可以产生一些细胞因子、在造血、炎症和免疫应答过程中发挥调节作用。本文就ＮＫ细胞受体的种类、结构特点、及其识别机理与功能等的研究进展作一综述。     

人早孕滋养细胞与蜕膜基质细胞共培养对外周NK细胞的影响

为了分析人早孕母-胎界面功能细胞对外周NK细胞表型及功能的调节作用,我们模拟母-胎界面微环境,建立滋养细胞和蜕膜基质细胞共培养系统,并将此共培养体系与外周NK细胞共培养,采用流式细胞术分析NK细胞的表型和细胞因子的表达,用细胞毒检测试剂盒检测NK细胞的细胞毒活性。研究发现,母-胎界面滋养细胞与蜕膜基质细胞共培养体系能够显著上调外周NK细胞抑制型受体KIR2DL1的表达,下调外周NK细胞杀伤性受体NKp44的表达;显著上调Th2型细胞因子IL-10的表达水平,下调外周NK细胞穿孔素perforin表达及其细胞毒活性。结果表明,母-胎界面功能细胞能够诱导外周NK细胞的耐受表型及Th2型优势,下调外周及蜕膜NK细胞的细胞毒活性,从而有利于形成母-胎界面免疫耐受微环境。     

NK细胞的识别受体及作用

人ＮＫ细胞的识别受体基因组成Ｐ５８／ＮＫＡＴ基因家族，编码的蛋白是Ｉ型膜蛋白，属于Ｉｇ超家族成员。小鼠的ＮＫ细胞的识别受体基因组成Ｌｙ－４９基因家族。编码的蛋白质为Ⅱ型膜蛋白，属于Ｃ型凝集素超家族成员。ＮＫ细胞的识别受体能够识别自身细胞上的ＭＨＣＩ类分子和自身多肽形成的复合物，产生抑制性信号，使ＮＫ细胞的触发受体与细胞上的相应配体结合后杀伤性信号的产生被阻断，抑制了ＮＫ细胞的杀伤作用。否则，靶细胞     

人早孕期蜕膜基质细胞对蜕膜NK细胞分泌IL-22的调节作用

目的:探讨蜕膜基质细胞(Decidual stromal cells,DSCs)与蜕膜NK细胞(dNK)共培养后IL-22的分泌水平。方法:收集早孕蜕膜组织,分离蜕膜基质细胞(DSCs)及蜕膜免疫活性细胞(Decidual immunocytes,DICs),磁珠分选蜕膜CD56brightCD3-NK细胞,再与DSC按不同比例直接接触共培养(dNK∶DSC为1∶1、1∶2、1∶3)24小时,收集上清。ELISA检测上清中IL-22的表达。结果:与对照组相比,DSC能上调dNK分泌IL-22。结论:蜕膜基质细胞可以促进蜕膜NK细胞分泌IL-22。     

先兆子痫患者外周血、脐血及蜕膜NK细胞的相关研究

目的：对先兆子痫孕妇外周血、脐血及蜕膜NK细胞进行研究，以探讨先兆子痫的病因。方法：对42例先兆子痫患者及20例正常孕妇外周血、脐血NK细胞分离后记数。采用免疫组织化学法检测胎盘蜕膜NK表型后记数并检测其平均灰度。结果：①轻度及重度先兆子痫患者母血及脐血NK细胞数均显著高于正常孕妇（P〈0．05）；②重度先兆子痫患者蜕膜NK细胞数高于正常孕妇（P〈0．05）；③轻度及重度先兆子痫患者胎盘蜕膜NK细胞CD56组化染色平均灰度值高于正常孕妇（P〈0．05）。结论：先兆子痫患者外周血、脐血及蜕膜的NK细胞数量均高于正常孕妇，且呈激活状态的胎盘蜕膜NK细胞较多，可能与发病有关。     

细胞周期调节蛋白在早期自然流产患者绒毛和蜕膜组织中的表达及其与自然流产发生的相关性研究

目的：探讨细胞周期调节蛋白在早期自然流产患者绒毛和蜕膜组织中的表达情况并研究其与自然流产发生的相关性。方法：选取符合研究要求的人工流产女性与自然流产女性各35例,分为人工流产组与自然流产组。利用Western blotting与免疫组织化学法分别检测两组患者绒毛与蜕膜组织中细胞周期调节蛋白的表达情况。结果：人工流产组绒毛与蜕膜组织的细胞周期调节蛋白的表达量为75%~85%,自然流产组的表达量为45%~55%。人工流产组与自然流产组比较有统计学意义(P<0.05)。结论：早期自然流产可能与细胞周期调节蛋白在绒毛与蜕膜组织中的含量相关。     

重度子痫前期蜕膜NK细胞Tim-3的表达及其相关作用

目的 探讨重度子痫前期Tim-3+CD56+CD16-NK细胞的表达及其对滋养细胞侵袭及血管内皮细胞成管能力的影响.方法 分离重度子痫前期患者(sPE组)及正常妊娠孕产妇(Normal组)的胎盘蜕膜组织中单个核细胞,细胞流式检测蜕膜NK细胞(decidual NK cell,dNK)细胞所占比例;免疫磁珠分选CD56+...     

杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性与不明原因复发性早期自然流产的关联性研究

目的探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体（killer cell immunoglobulin-like receptor，KIR）基因多态性与不明原因的复发性早期自然流产的关联性。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应（PCR-SSP）法，分析我院就诊的100例不明原因的复发性早期自然流产（unexplained recurrent spontaneous abortions，URSA）患者和112例无血缘关系的正常妇女KIR基因位点的多态性。结果URSA病例组KIR2DS1（P=0．003）、KIR2DS2（P=0．008）、KIR2DL5（P=0．003）基因的阳性率较随机对照组显著升高，URSA病例组活化性KIR基因数目较对照组显著增多（P=0．002）。具有3个或3个以下活化性KIR基因的个体在病例组中占40．00％，在对照组中占58．04％；而具有3个以上活化性KIR基因的个体在病例组中占60．00％，在对照组中占41．96％，两者差异具有统计学意义（P=0．009）。结论活化性KIR基因数目增多可能参与不明原因复发性早期自然流产的发病。KIR2DS1、KIR2DS2、KIR2DL5基因频率升高可能是不明原因复发性早期自然流产的原因之一。     

Maternal KIR repertoire is not associated with recurrent spontaneous abortion

BACKGROUND: In view of evidence suggesting an immunological cause of recurrent spontaneous abortions (RSA) and the large number of maternal natural killer (NK) cells present in the pregnant uterus, we investigated the genetic polymorphism of the killer cell immunoglobulin-like receptors (KIR) in women with RSA. METHODS: KIR gene repertoire and KIR2DL4 (a receptor for HLA-G) genotyping were determined by SSP and SSCP respectively, in women experiencing RSA and controls. RESULTS: The KIR repertoire did not differ between RSA patients and controls in terms of: (i) the number of inhibitory receptors; (ii) the number of activating receptors; (iii) the ratio of inhibitory to activating receptors. KIR2DL4, a receptor for HLA-G, has different transmembrane alleles, which produce functionally different phenotypes. The frequency of KIR2DL4 transmembrane genotypes differed significantly between RSA patients and controls (P=0.03). However, although homozygosity for a membrane-bound receptor was more frequent in patients (25%) than controls (10%), other genotypes that would produce the same phenotype were not more frequent in patients than controls. CONCLUSIONS: The data provide little evidence that KIR polymorphism plays a role in predisposition to RSA.     

不明原因自然流产与蜕膜NK细胞表面活化性受体表达的相关性研究

探讨不明原因自然流产患者蜕膜NK细胞杀伤活性与其细胞表面活化性受体NKp46、NKp44、NKp30和NKG2D表达的相关性。选取21例早孕不明原因自然流产患者为病例组,25例正常早孕人流妇女为对照组,收集两组的蜕膜组织,Ficoll密度梯度离心分离淋巴细胞,MACS磁珠分选CD3-CD56+NK细胞。以K562细胞为靶细胞,用细胞染色及流式细胞技术检测两组蜕膜NK细胞杀伤活性,用流式细胞技术检测两组蜕膜CD56brightCD16-NK和CD56dimCD16+NK细胞上活化性受体NKp46、NKp44、NKp30和NKG2D的表达,并与NK细胞杀伤活性进行相关性分析。结果:(1)早孕蜕膜NK细胞具有杀伤活性;(2)病例组蜕膜NK细胞的杀伤活性较正常对照组显著增强(P=0.014);(3)病例组蜕膜CD56brightCD16-NK细胞中NKp44的表达比正常对照组显著升高(P=0.021);病例组蜕膜CD56dimCD16+NK细胞中NKp46和NKp44的表达比正常对照组显著升高(分别P=0.026,P=0.041);其余活化性受体的表达两组未见明显差异;(4)蜕膜NK细胞杀伤功能与蜕膜CD56brightCD16-NK细胞中NKp44的表达呈显著正相关(r=0.677,P<0.05),和蜕膜CD56dimCD16+NK细胞中NKp46的表达呈显著正相关(r=0.634,P<0.05)。蜕膜NK细胞活化性受体NKp46和NKp44表达增加,从而使蜕膜NK细胞的杀伤功能增强可能在不明原因自然流产的发病中起重要作用。     

T辅助细胞、NK细胞与原因不明复发性自然流产关系的研究进展

目前母-胎界面的免疫耐受机制是国内外的研究热点之一,URSA所表现的母-胎界面免疫耐受异常与T辅助细胞及NK细胞有密切的关系。本文首先对T辅助细胞和NK细胞的免疫状态、免疫耐受机制以及它们与URSA之间的关系进行了阐述,最后对目前与二者有关的URSA的主动免疫治疗研究进展作一综述。     

High NK cell activity in early pregnancy correlates with subsequent abortion with normal chromosomes in women with recurrent abortion

PROBLEM: The aim of this study was to assess the role of natural killer (NK) cells in pregnant women with a history of recurrent spontaneous abortion (RSA). METHOD OF STUDY: Consecutive 66 pregnant women with a history of RSA were prospectively assessed for peripheral NK cell activity, percentage of the NK cell subsets, and subsequent pregnancy outcome. RESULTS: NK cell activity in women with subsequent live birth (group I) at 4-5 gestational weeks (GW) (mean +/- SD, 32.5 +/- 12.31%) significantly decreased at 6-7 GW (28.1 +/- 12.1%) and at 8 9 GW (28.0 +/- 11.8%). NK cell activity in women with subsequent abortion with normal chromosomes (group II) at 6 7 GW (41.2 +/- 19.0%) was significantly higher than that in group I women, while NK cell activity at 6-7 GW in women with subsequent abortion with abnormal chromosomes (group III) was the same as the level in group I women. CONCLUSIONS: High NK cell activity at 6-7 GW correlates with subsequent abortion with normal chromosomes.     

Natural killer (NK) cell receptors' repertoire in couples with recurrent spontaneous abortions

PROBLEM: Natural killer (NK) cell receptors (NKRs) have been suggested to protect trophoblast, but their function at the fetomaternal interface remains unknown. To investigate if the outcome of pregnancy depends on women's NKRs, we studied the NKR repertoire in couples with recurrent spontaneous abortions (RSA). METHODS: Twenty-six childless couples with > or = 2 abortions, characterized by alloimmune abnormalities, and 26 control couples were genotyped for five killer immunoglobulin-like receptors (KIR) and two CD94/NKG receptors, known to have as ligands human leukocyte antigen (HLA) class I molecules with trophoblastic expression: inhibitory 2DL1,2,3 and activating 2DS1,4 KIRs, inhibitory NKG2A and activating NKG2C. Detected repertoires of women and partners were compared between the two groups. RESULTS: Less aborters than controls were found to have all three inhibitory KIRs (30.77% versus 69.23%, P = 0.01), some of them had only one inhibitory KIR (19.23% versus 3.85%, P = 0.08) and most of them were lacking inhibitory KIRs possessed by their husbands (57.69% versus 15.38%, P = 0.001). CONCLUSIONS: Women with alloimmune abortions have a limited inhibiting KIR repertoire and such miscarriages may occur because trophoblastic HLA class I molecules are recognized by decidual NK cells lacking the appropriate inhibitory KIRs.