阿拉瑞林对GnRH受体阳性肝癌细胞Fas/FasL基因表达的影响

目的　探讨Fas Fasl系统在LHRH类似物抑制肝癌细胞增殖过程中的作用。方法　用免疫组织化学方法检测SMMC772 1肝癌细胞中GnRH受体的表达 ;用半定量RT PCR方法 (QRT PCR)观察LHRH类似物对SMMC772 1肝癌细胞中Fas FasL系统mRNA表达的变化。结果　SMMC772 1肝癌细胞呈GnRH及其受体免疫反应阳性。PCR反应产物均与预期长度相符合。Fas FasL mRNA水平随LHRH类似物浓度增加而增大 ,经方差分析各组间有显著性差异 (Fas ,F =16.5 18FasL ,F =111.5 83 ,P <0 .0 1)。结论　SMMC772 1肝癌细胞具有自分泌GnRH的功能 ;Fas FasL系统可能参与了LHRH类似物对肝癌细胞增殖的抑制作用     

尼美舒利对肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡的干预作用

目的 :研究尼美舒利对肝癌SMMC 772 1细胞增殖、凋亡的干预作用。方法 :研究对象为SMMC 772 1肝癌细胞系 ,细胞增殖采用MTT比色法检测 ,细胞凋亡采用电镜观察、流式细胞仪和TUNEL法检测。结果 :尼美舒利显著抑制体外培养的SMMC 772 1细胞增殖 ,随着药物剂量的增加和时间的延长 ,SMMC 772 1的生长、增殖明显抑制 ,呈剂量和时间依赖性。流式细胞术、TUNEL法检测示 ,使用不同浓度尼美舒利作用于SMMC 772 1细胞 72h后 ,可诱导SMMC 772 1细胞凋亡 ,随着药物浓度增加 ,凋亡率和凋亡指数均显著增加 ,差异有显著性。结论 :选择性COX 2抑制剂尼美舒利可以显著抑制SMMC 772 1细胞增殖 ,且呈明显的时间、剂量依赖关系 ,同时诱导SMMC 772 1细胞凋亡 ,且具有剂量依赖性     

β-榄香烯对肿瘤细胞内钙离子的影响

目的　通过观察 β-榄香烯对小鼠肝癌HcaF细胞内游离Ca2 水平的影响 ,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法　Fluo - 3/AM负载HcaF细胞后 ,通过激光共聚焦扫描显微镜实时观察 β -榄香烯对HcaF细胞内游离Ca2 水平的影响。结果　β -榄香烯可使HcaF细胞内游离Ca2 水平先升后降。结论　β -榄香烯诱导的肿瘤细胞凋亡可能是钙依赖性的。     

毛喉萜对人肝癌细胞增殖影响的实验研究

目的　探讨毛喉萜 (Forskolin)的抗肝癌作用。方法　采用克隆形成、MTT比色法观察毛喉萜对SMMC 772 1细胞的作用 ,并利用免疫细胞化学方法检测其对rasp2 1、p5 3蛋白表达的影响。结果　毛喉萜可明显抑制SMMC 772 1细胞的增殖 ,其抑制率与剂量呈正相关 (P <0 .0 1 ) ,经毛喉萜处理后 ,rasp2 1、p5 3蛋白表达均有明显下降。结论　毛喉萜能明显抑制肝癌SMMC 772 1细胞增殖 ,其作用可能与降低rasp2 1、p5 3蛋白表达有关。     

γ射线诱导人肝癌细胞表达B7-1共刺激分子的研究

目的　研究电离辐射与肿瘤细胞B7- 1分子表达之间的关系 ,探讨肿瘤细胞辐照后免疫原性增强的机制。方法　采用间接免疫荧光 -流式细胞仪分析技术 ,研究在用不同剂量γ射线照射SMMC - 772肝癌细胞后、培养不同时间内SMMC - 772细胞B7- 1共刺激分子的表达水平。并用3H -TdR释放法测定照射和未照射肿瘤细胞与淋巴细胞共反应后的细胞毒活性。结果　未照射和经 10、2 0、30Gy照射的人肝癌细胞不表达B7- 1分子。经 40、5 0、6 0Gy剂量照射后 ,SMMC - 772肝癌细胞表达B7- 1分子 ,最高达 6 6 .8± 1.3% ,与对照组比有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。表达时间的高峰在照射后培养 72h时 ,最低在照射后培养 2 4h时 (P <0 .0 5 )。细胞毒活性测定结果表明 ,表达B7- 1分子的SMMC - 72肝癌细胞与淋巴细胞共反应后 ,细胞毒活性明显高于未照射组 (P <0 .0 1)。结论　γ射线可诱导肝癌细胞表达B7- 1分子 ,从而增强肿瘤细胞的免疫性     

重组人穿孔素肽段的体外杀伤肝癌细胞活性

目的 :以肝癌细胞系SMMC 772 1作为靶细胞 ,观察重组人穿孔素 (PFP)N端肽段 (rhPFP N)及C端肽段 (rh PFP C)体外杀伤肿瘤细胞的活性。　方法 :用大肠杆菌表达PFP N和PFP C与谷胱甘肽转移酶 (GST)的融合蛋白 ,对表达产物进行纯化 ,将不同浓度的GST rhPFP C或GST rhPFP N加入体外培养的人肝癌细胞SMMC 772 1,2 4h后用镜检和MTT法检测细胞存活情况。　结果 :用GST rhPFP N或GST rhPFP C处理后 ,可见SMMC 772 1细胞膜溶解和细胞破裂。用MTT法检测 ,实验组A值显著低于对照组 (P <0 .0 0 1)。GST rhPFP C和GST rhPFP N浓度为 2 .5ml L时 ,其杀伤活性分别为 33.38%和 5 .90 %。　结论 :rhPFP C和rhPFP N对人肝癌细胞SMMC 772 1均有明显的杀伤活性 ,rhPFP C对SMMC 772 1的杀伤活性显著高于rhPFP N。     

siRNA介导的新趋化因子VCC-1沉默对人SMMC7721肝癌细胞生长的影响

 目的 探讨siRNA靶向抑制VCC-1表达对人肝癌细胞株SMMC27721生长的影响。方法 采用脂质体法将siRNA质粒导入SMMC7721细胞,建立VEGF相关的趋化因子1（(VEGF correlated chemokine 1,VCC-1）)VCC-1基因表达沉默的肝癌细胞系,用Western blot检测细胞中VCC-1的表达水平,用MTT法、软琼脂克隆形成实验等研究siRNA靶向抑制VCC-1表达对SMMC7721细胞生长的影响。结果 Western blot 结果显示RNA干扰组（shVCC1-1组）细胞VCC-1蛋白表达水平明显低于对照组（P<0.01）; ,MTT法结果显示shVCC1-1组细胞增殖速度、克隆形成率均低于对照组（P<0.05）。结论 siRNA靶向抑制 VCC-1表达可以抑制人SMMC7721肝癌细胞增殖能力及克隆形成能力。     

5—Fu，HCPT诱导人肝癌细胞凋亡的对比性实验研究（摘要）

用不同浓度的传统的化疗药物 5 -氟尿嘧啶 ( 5 -Fu)、羟基喜树碱 (HCPT)作用人肝癌SMMC - 772 1细胞 ,于不同时间 ,用定性的方法观察有无细胞凋亡的产生 ,用定量的方法对两药物诱导人肝癌细胞凋亡的效果进行比较 .结果 :5 -Fu ,HCPT均能诱导人肝癌SMMC - 772 1细胞产生凋亡 ,两药物诱导人肝癌细胞产生的最高凋亡率的作用时间为 48h ,最佳浓度为 7 5 μg/mL ,1mg/mL ,最高凋亡率分别为 3 8 7% ,42 6% .经统计学处理 ,两药物诱导人肝癌细胞凋亡的效果相当 ,而与对照组有显著性差异 .结论 :小剂量的 5 -Fu ,HCPT均可作为凋亡诱导剂…     

多重人肝癌多药耐药细胞模型的建立

目的　研究肝癌多药耐药 (MDR)机制。　方法　采用阿霉素 丝裂霉素通过药物间断 /持续接触诱导法诱导 SMMC 772 1细胞株建立一组多重人肝癌 MDR细胞模型 SMMC 772 1/ M细胞亚系。　结果　多重人肝癌MDR亚系 SMMC 772 1/ M的耐药涉及 mdr1 、MRP、L RP、Topo α和 GSTP1 基因。　结论　 SMMC 772 1/ M亚株是目前肝癌 MDR研究的较适合的模型     

Nrf3基因对肝癌SMMC7721细胞系的体外研究

目的在体外检测Nrf3基因对肝癌SMMC7721的生长影响作用。方法构建其融合蛋白真核表达载体,脂质体介导该真核表达载体转染肝癌SMMC7721细胞系,FCM观察其在体外对肝癌SMMC7721细胞系细胞周期和凋亡的影响;荧光显微镜观察候选基因亚细胞定位。结果Nrf3在肝癌SMMC7721细胞中表达,荧光显微镜下观察Nrf3定位于细胞核内。FCM分析显示Nrf3影响下肝癌SMMC7721G2/M＋S期细胞所占比例较对照组明显减少,G0/G1细胞所占比例明显增加。证实Nrf3可抑制肝癌SMMC7721的DNA合成和有丝分裂,促使细胞阻滞于G0/G1期,抑制肝癌SMMC7721细胞的体外生长。FCM分析,未观察到明显的＂亚G1＂峰（即凋亡峰）,提示Nrf3在体外对肝癌SMMC7721细胞的凋亡无影响。结论Nrf3在体外具有抑制肝癌细胞增殖的功能,对肝癌细胞的凋亡无影响,为肿瘤抑制基因。     

Anti-tumor effect of human endostatin mediated by retroviral gene transfer in nude mice

目的　探讨逆转录病毒介导人血管内皮抑制素基因 (endostatin)对人肝癌细胞的生长抑制作用。方法　利用逆转录病毒载体pLncx构建含有人endostatin基因及信号肽的重组逆转录病毒质粒 ,并将其导入PA317细胞制备重组病毒。用重组病毒感染人肝癌细胞SMMC772 1获得稳定转人endostatin基因细胞株 (SMMC endo)。同样用空白病毒质粒制备对照细胞株SMMC pLncx。免疫组化及Westernblot检测人endostatin基因在转染细胞株中的表达和分泌。应用血管内皮细胞生长抑制试验验证转染细胞株表达的人endostatin的生物学活性。同时对转染细胞株在体内外的生长情况进行观察。结果　免疫组化及Westernblot印迹分析证实转染人endostatin基因的肝癌细胞能表达并分泌人endostatin。与转染空白对照组 (SMMC pLncx)相比 ,表达人endostatin的SMMC772 1浓缩上清可显著抑制人脐静脉血管内皮细胞生长 ,抑制率达 4 8% ,明显高于对照组 10 2 % (P <0 0 1)。体外生长实验显示 ,SMMC endo细胞与对照细胞SMMC pLncx体外生长速率无明显差别。而在转染细胞接种裸鼠 2 2d后 ,转染人endostatin基因的肿瘤细胞生长明显受到抑制 ,仅在部分裸鼠 (3/ 5只 )体内长出肿瘤 ,并且产生的腹侧肿瘤体积较对照组肿瘤缩小 94 5 % (P <0 0 0 1)。结论　逆转     

单纯疱疹病毒Ⅱ型胸苷激酶基因旁观者效应的实验研究

目的 :研究单纯疱疹病毒Ⅱ型胸苷激酶基因 (HSV -Ⅱtk)对人原发性肝细胞癌SMMC - 772 1的旁观者效应 .方法 :HSV -Ⅱtk基因通过阳离子脂质体Lipofectin介导 ,体外转染人原发性肝细胞癌SMMC -772 1,孵育 18h .取出细胞及上清液 ,对倍稀释 ( 2× ,4× ,8× ,16× ,3 2× )后分别加入另一 2 4孔板 .结果 :正常SMMC - 772 1细胞的浓度升高 ,亲本细胞的存活率随之降低 ,两者呈明显的负向相关关系 ;细胞组的OD值明显低于上清液组及空白对照组 (P <0 0 1) ;细胞组可见凋亡峰出现 ,而上清液组则无凋亡峰出现 .结论 :HSV -Ⅱtk基因对人原发性肝细胞癌SMMC - 772 1细胞具有旁观者效应 ,其作用机制可能与细胞紧密连接及细胞凋亡有关     

干扰素-α对肝癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究干扰素-α对人肝癌SMMC7721细胞的增殖及迁移的抑制作用,探讨其抗肿瘤作用的机制。方法:常规培养的人肝癌SMMC7721细胞,加入干扰素-α孵育24 h后,以MTT法检测干扰素-α对肿瘤细胞增殖的影响;Boyden小室法检测肝癌细胞侵袭能力的变化,通过Annexin V-FITC检测干扰素-α诱导SMMC7721细胞组的凋亡情况。结果:干扰素-α可以明显抑制体外SMMC7721细胞的增殖,诱导细胞凋亡,导致Boyden小室穿膜的肿瘤细胞数明显下降。结论:干扰素-α可以直接抑制体外肝癌细胞SMMC7721的增殖和迁移并诱导细胞凋亡。     

Wnt信号通路调控肠癌细胞GRP78表达与细胞膜转位

 目的 本研究旨在探讨Wnt/β catenin信号通路和葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)两者在肠癌细胞中的调控关系。方法 本研究采用氯化锂(LiCl)处理肠癌HT 29和DLD1细胞,激活其Wnt/β catenin信号通路。通过Western blot和荧光定量PCR,检测Wnt信号活化对GRP78表达的影响;通过对细胞组分的分离和免疫荧光染色技术分析Wnt信号活化对GRP78细胞膜转运的影响。结果 LiCl处理能够显著激活HT 29和DLD1细胞中的Wnt/β catenin信号通路,GRP78蛋白在HT 29细胞膜表面呈独特的“簇状”分布,LiCl处理明显提高了细胞中GRP78的转录和翻译水平,且GRP78在细胞表面的分布水平也有明显增加。结论 肠癌细胞中GRP78的表达和细胞膜转位受Wnt/β catenin信号通路活性的调控。     

探讨EGCG对人肝癌细胞体外增殖和凋亡的影响及机制

目的探讨茶多酚主要成分没石子儿茶素没石子酸酯（EGCG）诱导人肝癌细胞株SMMC27721体外增殖和凋亡过程中的影响,预测其对人肝癌的抗癌作用及机制。方法体外培养人肝癌SMMC27721细胞,采用不同浓度的EGCG对其进行干预,用MTT法观测其对肝癌细胞增殖能力的影响;用流式细胞仪检测其对肝癌细胞凋亡的影响;用免疫细胞化学法检测肝癌细胞中p-Akt（sel473）蛋白的的表达变化;用流式细胞仪检测其对肝癌细胞凋亡的影响。结果在EGCG的作用下,SMMC27721细胞增殖能力明显受到抑制（P〈0.05）,p-Akt（sel473）细胞凋亡明显增加（P〈0.05）。结论 EGCG可通过抑制Akt信号通路而诱导肝癌细胞凋亡。     

β-环连蛋白及其mRNA在肾癌中的表达

目的　探讨β -环连蛋白在肾癌发生发展过程中的作用及其变化机制。方法　我们采用免疫组织化学、Westernblot、RT -PCR等方法对本院收治的 2 6例肾癌患者手术标本进行了研究。结果　 2 6例患者中有 2 5例癌组织中细胞胞浆内β 环连蛋白表达明显高于正常组织内 ,而且肿瘤分期越高 ,癌细胞内β 环连蛋白的表达也越强 ,pT3和pT4期的肿瘤内的表达明显高于pT1和pT2期的肿瘤 ,P <0 .0 1,而其β -环连蛋白mRNA的表达水平并无明显变化。结论　细胞内 β -环连蛋白表达的增加与肾癌的发生发展有关 ,而且可能是肾癌形成和发展的重要机制之一。     

siRNA介导的NF-κB P65沉默诱导肝癌细胞SMMC7721凋亡

目的 研究siRNA介导的NF-κBP65沉默诱导肝癌细胞凋亡相关机制。方法实验以肝癌SMMC772l细胞株为材料,分为空白对照（Con）、脂质体对照（LP）以及siRNA干扰实验（siRNA）3组。以体外转录法合成dsRNA,并用脂质体转染SMMC7721细胞株;Westernblotting检测NF．KBP65表达水平,MTT检测细胞增殖情况,Annexin V-PI法检测细胞凋亡,免疫组化检测Bcl-2和Bax表达。结果与Con和LP组相比,siRNA具有抑制SMMC7721细胞NF-κBP65表达的作用,NF-κBP65表达抑制率分别达到64．74％和34．52％。siRNA明显抑制SMMC．7721细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,晚期凋亡细胞分别是Con组和LP组的8倍和7倍。siRNA引起Bcl-2表达下调,而Bax表达上调。结论siRNA可以有效抑制NF-κBP65蛋白表达,并通过调节Bcl-2和Bax诱导SMMC7721细胞的凋亡。     

外源性p16基因对人原发性肝癌细胞生物学行为的影响及其机制

目的:探讨导入外源性p16cDNA真核表达载体对人原发性肝癌细胞系SMMC- 772 1生物学行为的影响及其分子机制。方法:构建外源性p16基因真核表达载体并转染SMMC- 772 1细胞,经G4 18抗性筛选和扩增,得到稳定的表达株,并经RT -PCR及免疫细胞化学鉴定。通过生长曲线,流式细胞术,免疫细胞化学及Western -Blot等实验方法,对转基因后肿瘤细胞生物学行为及细胞周期调控因子CDK4 ,CyclinD1及pRb进行观察。结果:转染外源性p16基因的SMMC- 772 1细胞有外源性p16基因的整合及表达,细胞生长速度明显减慢,倍增时间明显延长,G1期细胞明显多于转基因前(P <0 .0 5 ) ;免疫细胞化学显示外源性p16表达可下调CDK4及cylinD1的表达(P <0 .0 5 ) ,Western -Blot提示转染外源性p16基因后细胞中磷酸化pRb表达明显降低。结论:外源性p16基因导入人肝癌细胞株SMMC -772 1中可稳定表达并使细胞停滞在G1期,抑制细胞生长,其机制可能为下调CDK4、cyclinD1的表达和抑制pRb磷酸化有关。     

抗肿瘤药羟喜树碱对Wnt通路抑制剂FrpHE的表达作用

目的研究加入羟喜树碱后Wnt通路抑制因子FrpHE(frizzled relatd protein)在人肿瘤细胞株中的表达调控作用。方法选择人肝癌HepG2(HepG2,含野生型p53;Hep3B,p53缺失)和人大肠癌(Lovo,含野生型p53),人神经胶质瘤细胞(U251,p53突变)细胞株为模型,观察抑制剂FrpHE以及反映Wnt通路功能变化的-βcatenin的表达。以RT-PCR技术检测Wnt通路抑制因子FrpHE表达的调节作用,以流式细胞术检测肿瘤细胞中Wnt通路的关键调节因子-βcatenin的表达。结果加入羟喜树碱24h后FrpHE mRNA表达水平在人肝癌细胞(HepG2,含野生型p53;Hep3B,p53缺失)中与对照组相比表达水平显著增加。在人大肠癌细胞(Lovo,含野生型p53)和人神经胶质瘤细胞(U251,p53突变型)中,未见FrpHE mRNA表达。-βcatenin的阳性细胞百分比强度和平均荧光量强度与对照组相比,表达水平降低。结论羟喜树碱在人肝癌细胞中能明显诱导抑制剂FrpHE mRNA的表达。     

β-catenin在大肠癌中的表达及其意义

目的　探讨 β catenin异常表达在大肠癌发生、发展中的意义及其与临床病理参数之间的关系。方法　应用免疫组织化学SABC法检测 β catenin在大肠癌中的表达情况。结果　 β catenin在大肠癌中异常表达率为 87.8% ,显著高于癌旁组织中的异常表达率 9.8% (P <0 .0 5 ) ,“正常”组织中无异常表达。高、中分化癌的β catenin异常表达率分别为 6 9.2 %和 88.2 % ,明显低于低分化癌 (P <0 .0 5 )。β catenin在淋巴结阳性组的异常表达率为97.7% ,明显高于淋巴结阴性组的异常表达率 76 .3% (P <0 .0 5 )。β catenin在A +B期的异常表达率为 76 .9% ,明显低于其在C +D期的异常表达率 97.7% (P <0 .0 5 ) ;β catenin异常表达与患者的年龄、性别及肿瘤的大小无关 (P >0 .0 5 )。结论　β catenin表达异常在大肠癌的发生发展中起重要作用。检测 β catenin在大肠癌中的表达情况对判断其生物学行为及患者的预后有一定的价值。