糖尿病大鼠视网膜中VEGF、PEDF的表达与血-视网膜屏障损伤

目的 观察糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠视网膜中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和色素上皮源性因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)的表达及早期血-视网膜屏障的改变,探讨二者之间的关系.方法 选取87只健康SD大鼠,应用链-脲佐菌素建立DM大鼠模型,随机分为正常对照组(N)、DM 0.5个月组、DM 1个月组、DM 3个月组及DM 5个月组.分别行RT-PCR及Western blot检测大鼠视网膜VEGF、PEDF的mENA及蛋白表达,应用伊文思蓝法及透射电镜法观察血-视网膜屏障损伤情况.结果 正常大鼠视网膜有VEGF的mRNA及蛋白表达,DMO.5个月组表达开始增高,光密度值分别为0.570 0±0.158 0和0.577 0±0.027 9(均为P＜0.05),随病程延长,表达量逐渐增高,至DM 5个月组VEGF表达量约为正常对照组的2倍,分别为0.956 0±0.0560和0.979 0±0.079 0(均为P＜0.05).PEDF mRNA表达于正常大鼠视网膜,DM 1个月组表达开始减少,光密度值为0.344 0 ±0.043 7,与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),至DM 5个月组视网膜表达量减少至0.236 0±0.045 5,约为正常对照组的1/2(P ＜0.05).PEDF蛋白在各组大鼠视网膜的表达与其mRNA表达趋势一致.伊文思蓝法结果显示DM大鼠视网膜血管渗漏较正常大鼠增强,DM 0.5个月组鼠即有增高,达(2.631 0±0.272 5) μL·g-1·h-1 (P ＜0.05),随病程延长,渗漏逐渐增强,至DM5个月组,伊文思蓝渗漏量达(10.026 0±1.112 1)μL·g-1·h-1,约为正常对照组的6倍(P＜0.05).同时DM 1个月时血-视网膜屏障超微结构发生改变,且呈逐渐加重趋势.结论 早期DM大鼠血-视网膜屏障损伤,VEGF的正性表达增多与PEDF的负性表达减少可能对此病理改变起一定的促进作用.     

链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠视网膜VEGF、PEDF的动态表达

目的观察血管内皮生长因子（VEGF）和色素上皮源性因子（PEDF）在糖尿病大鼠视网膜中的表达，探讨其在早期糖尿病视网膜病变中的作用。方法选取84只健康SD大鼠，尾静脉注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型。根据饲养时间，随机分为正常对照0．5月组（NO．5）、糖尿病0．5月组（DM0．5）、正常对照1月组（N1）、糖尿病1月组（DMl）、     

色素上皮源性因子与糖尿病性视网膜病变

研究表明眼内血管形成刺激凶子与抑制因子的失衡是糖尿病性视网膜病变（DR）发生的主要原岗，而色素上皮源性因子（PEDF）是新近发现的一种重要的新生血管抑制物，可对抗病理性血管形成，同时具有神经营养及神经保护等其他作用。有研究表明糖尿病视网膜病变患者眼内PEDF表达发生改变，在DR的发生、发展过程中起一定的促进作用：就PEDF在DR中的表达及作用进行综述。     

VEGF和PEDF在糖尿病大鼠视网膜脉络膜中的表达

目的:通过免疫组织化学法比较正常大鼠及糖尿病大鼠视网膜、脉络膜组织中VEGF和PEDF的表达情况及相互关系。方法:选取健康雄性Wistar大鼠,随机分成糖尿病组和正常对照组(M0),用链脲佐菌素大剂量一次性腹腔注射诱导1型糖尿病模型。成模后大鼠随机平均分成1mo(M1),2mo(M2),3mo(M3)及5mo(M5)组,免疫组织化学法检测VEGF和PEDF在各组大鼠视网膜及脉络膜的表达。结果:M1大鼠VEGF在视网膜及脉络膜的表达均与M0无明显差别;M2大鼠VEGF在脉络膜有阳性表达(33.3%),在视网膜的表达与M0无明显差别;M3大鼠VEGF在脉络膜有阳性表达(55.6%),在视网膜的表达与M0比较有明显差别(33.3%);M5大鼠VEGF在视网膜及脉络膜阳性表达(88.9%);M1和M2大鼠视网膜PEDF表达与M0比较无明显差别,各组脉络膜均无PEDF表达;M3和M5大鼠视网膜PEDF表达均较M0减弱,且随病程延长表达逐渐减弱(P<0.05),各组脉络膜均无PEDF表达;随着糖尿病病程延长,VEGF/PEDF比值逐渐增大,与M0相比有显著统计学差异(P<0.01)。结论:随着糖尿病病程的延长,VEGF在视网膜及脉络膜的表达均逐渐增强,而PEDF与之相反,在视网膜的表达逐渐减弱,且VEGF/PEDF比值逐渐增大,提示VEGF和PEDF均与糖尿病病程密切相关。     

不同病程糖尿病大鼠视网膜VEGF和PEDF表达的动态变化

目的 检测不同糖尿病(diabetes mellitus,DM)病程大鼠视网膜VEGF mRNA、PEDF mRNA的表达和视网膜VEGF、PEDF表达强度及部位的变化情况,探讨二者间的相互关系及其对糖尿病视网膜痛变(diabetic retinopathy,DR)发生发展的相关意义,并从细胞因子角度进一步评价STZ诱导的DM大鼠作为早期DR动物模型的应用价值.方法 取64只体质量水平(180±20)g雄性SD大鼠随机分为对照组(CON组)和DM组各32只.于DM成模后2周、4周、6周、8周和10周随机抽样行实时定量PcR检测视网膜VEGF mRNA、PEDF mRNA表达强度;DM 10周时各组随机抽样,免疫组织化学染色检测视网膜VEGF及PEDF的表达强度及部位.结果 经检测,CON组视网膜有VEGF mRNA表达,表达量随时间无明显变化;DM组VEGF mRNA的表达,2周时较CON组有所增高,至6周表达量约为CON组的3倍(P<0.05),10周表达量增高到CON组的6倍(P<0.001).PEDF mRNA也表达于CON组视网膜,DM组2周时的表达量较CON组有所减少,至4周其表达量约为CON组的1/2(P<0.001),10周表达量降至CON组的1/3(P<0.001).视网膜免疫组织化学染色观察,CON组:VEGF主要分布于内核层和节细胞层,PEDF主要分布于内核层和节细胞层,其余各层也可见阳性表达;DM组VEGF表达较CON组明显增强,视网膜各层神经细胞均有强阳性表达;PEDF表达较CON组明显减弱,其分布主要位于节细胞层及内丛状层.DM组VEGF阳性表达MOD=0.545±0.083较CON组0.223±0.072增强,DM组PEDF阳性表达MOD=0.260±0.074较CON组0.329±0.056减弱,结论与正常大鼠相比,DM大鼠视网膜VEGF表达增多、PEDF减少,这可能导致视网膜出现血管渗漏和新生血管等.     

色素上皮衍生因子的表达与早期糖尿病大鼠视网膜血管形态学的改变

目的探讨色素上皮衍生因子(pigment epithelium derived factor,PEDF)mRNA在不同病程糖尿病大鼠模型视网膜中的表达水平及其与早期糖尿病大鼠视网膜血管病变之间的关系。方法 48只健康Wistar大鼠随机分成糖尿病1个月组(DM1)、3个月组(DM3)和6个月组(DM6)与正常对照1个月组(CON1)、3个月组(CON3)、6个月组(CON6),每组各8只。链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠动物模型,分别于造模后1个月、3个月、6个月行视网膜血管铺片和PEDFmRNA的原位杂交,观察大鼠视网膜微血管的改变和PEDFmRNA表达情况。结果 (1)DM3和DM6组可见毛细血管迂曲,走形不规则,管腔粗细不均,以DM6组病变最重,可见无细胞毛细血管。(2)周细胞数量:DM1组与CON1组相比差异无统计学意义(CON1组6.45±0.64,DM1组6.52±0.75,P>0.05),DM3及DM6组均较CON3组、CON6组明显减少(CON3组6.51±0.70、DM3组6.06±0.65,CON6组6.47±0.60、DM6组5.45±0.80),差异均有统计学意义(均为P<0.05)。(3)CON1和DM1组PEDFmRNA在节细胞层、内核层及RPE层均有阳性细胞表达,CON1组64±10、DM1组53±8,差异无统计学意义(P>0.05);CON3组和DM3组PDEFmRNA在节细胞层、内核层、RPE层阳性反应细胞表达减少,CON3组68±11、DM3组49±12,差异有统计学意义(P<0.05);CON6组和DM6组PEDFmRNA仅在内核层和节细胞层表达,RPE层只见极少阳性细胞,CON6组58±8、DM6组34±14,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论糖尿病视网膜病变的发生、发展与周细胞数量减少、PEDFmRNA表达降低密切相关,两者的表达同糖尿病视网膜病变的发生、发展存在时效和空间关系。     

VEGF和PEDF在增殖性糖尿病视网膜病变中的研究进展

增殖性糖尿病视网膜病变( proliferative diabetic retinopathy,PDR)是一种以眼内新生血管形成为特征的糖尿病并发症。眼内新生血管的形成是当今世界主要致盲原因之一。血管内皮生长因子( vascular endothelial growth factor,VEGF)与色素上皮衍生因子( pigment epithelium-derived factor,PEDF)作为眼内新生血管形成最主要的细胞因子,近年来成为研究热点。本文就VEGF和PEDF在PDR中的研究进展进行综述。     

臭氧对STZ诱导的糖尿病大鼠视网膜表达VEGF, HIF-1α与PEDF的影响

目的：通过测定经臭氧灌肠治疗后的糖尿病大鼠视网膜及血清中血管内皮生长因子（ VEGF ）、缺氧诱导因子－1α（ HIF－1α）与色素上皮衍生因子（ PEDF）的表达差异,了解臭氧在早期糖尿病视网膜病变治疗的作用。方法：选取70只雄性SD大鼠中的10只做为正常对照组,予以正常饮食;余大鼠经适应性喂养后通过腹腔一次性注射链脲佐菌素（50mg／ml）制作糖尿病模型。将造模成功的大鼠模型随机分成模型对照组（B组）、氧气治疗组（C组）及臭氧治疗组（D组）,其中臭氧治疗组给予臭氧灌肠治疗（2次／wk,共计1mo）,氧气治疗组给予同等剂量及频次的氧气进行灌肠治疗,治疗1mo 后取视网膜及血清,使用免疫组化法检测视网膜中 VEGF 的表达,使用ELISA及RT－PCR的方法检测视网膜及血清中 VEGF、HIF－1α与PEDF的含量。结果：免疫组化结果显示VEGF主要在内层视网膜表达,而臭氧治疗组VEGF表达接近于空白对照组;血清与视网膜中VEGFmRNA 表达在四组间均有统计学差异（F ＝23．923;P＝0．000）,其中臭氧治疗组VEGF的表达接近于空白对照组,但差异仍有统计学意义（P＜0．05）;而模型对照组同氧气治疗组的 VEGF 表达亦无统计学差异（ P＞0．05）;相对于空白对照组,臭氧治疗组HIF－1α表达下降（P＜0．05）,而在模型对照组与氧气治疗组间无统计学差异（ P＞0．05）。 PEDFmRNA在四组间的表达均有差异,但差异均无统计学意义（P＞0．05）。结论：臭氧灌肠治疗可以有效的降低血清及视网膜中VEGF和HIF－1α的表达,可以一定程度的抑制早期糖尿病视网膜病变的发展。     

rAAV载体介导基因对糖尿病大鼠视网膜转染的实验研究

目的以重组腺相关病毒载体(recombinant adeno-associated virus,rAAV)携带色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因转染入糖尿病大鼠视网膜,观察其定位及表达情况。方法Wistar大鼠分为正常组(CON)及实验组。实验组以链脲佐菌素诱导形成糖尿病模型后,随机分为1个月组(DM1)、3个月组(DM3)和6个月组(DM6)。右眼玻璃体腔内注射2μLrAAV2-CMV-hPEDF,左眼注射等量rAAV2-CMV-GFP。CON组右眼注射2μL生理盐水。用荧光显微镜观察GFP表达部位,用RT-PCR测定PEDF的表达情况。结果荧光显微镜显示,DM1组视网膜全层,主要是节细胞层表达强荧光。DM3组全层视网膜和部分巩膜表达强荧光。DM6组视网膜及巩膜全层表达强荧光,荧光强度、范围与DM3组相比明显增加。RT-PCR显示,人PEDF mRNA在CON、GFP注射眼组大鼠视网膜均无表达。在右眼实验组1个月时可见hPEDF mRNA表达,并随时间延长,表达不断增强,持续到6个月。结论AAV载体可将PEDF及GFP基因有效地转染入糖尿病大鼠视网膜内并长期表达超过6个月。     

氩离子激光光凝前后糖尿病大鼠眼内组织中色素上皮衍生因子的表达

目的:观察氩离子激光视网膜光凝后糖尿病大鼠眼玻璃体及视网膜组织内色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)蛋白质表达的变化。方法:选用先天性糖尿病GK大鼠20只,对所有大鼠左眼施行氩离子激光视网膜光凝,右眼不进行光凝,作为自体对照。激光光凝后3d处死动物,取出眼球,WesternBlot和免疫组织化学染色检测玻璃体和视网膜组织中PEDF蛋白质表达的变化。结果:氩离子激光视网膜光凝后糖尿病大鼠玻璃体和视网膜中PEDF蛋白的表达均明显升高(P<0.01);且PEDF蛋白主要存在于RPE细胞层、光感受器细胞层、外核层和神经节细胞层,内核层表达的强度低于上述4层。结论:氩离子激光光凝可以上调糖尿病大鼠玻璃体和视网膜组织PEDF表达,抑制新生血管形成,达到治疗的目的。     

色素上皮细胞衍生因子与脉络膜新生血管性疾病

色素上皮细胞衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)是一种分泌蛋白,相对分子量为50000,属于丝氨酸超家族的一员。近年来大量研究发现PEDF具有多种生物学功效,包括抗新生血管、神经营养及神经保护功能。PEDF是最有效的内源性眼部新生血管抑制物。PEDF对于治疗血管增生性疾病及视网膜变性疾病具有广阔的前景,就近年来关于PEDF的研究进展及其与脉络膜新生血管性疾病的相关研究进展给以综述。     

PDR及孔源性视网膜脱离玻璃体中PEDF的定量分析

目的定量测定色素上皮细胞衍生因子（PEDF）在增生型糖尿病视网膜病变（PDR）及孔源性视网膜脱离（RRD）患者玻璃体中的质量浓度，探讨其在PDR及RRD发病机制中的作用。方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法定量检测56例PDR、11例RRD及9例对照组患者玻璃体中PEDF的质量浓度。结果PDR组、RRD组、对照组玻璃体中PEDF质量浓度分别为1．071、1.83、1.53μg／mL，PDR组玻璃体中PEDF质量浓度小于对照组（P〈0．05）及RRD组（P〈0．05）。RRD组玻璃体中PEDF质量浓度大于正常对照组（P〈0.05）。PDR组中Ⅳ期、Ⅴ期、Ⅵ期玻璃体中PEDF质量浓度分别为1．21、1．14、0．81μg／mL。Ⅵ期患者玻璃体中PEDF质量浓度小于Ⅳ期（P〈0.05）及Ⅴ期（P〈0．05）。结论PDR患者玻璃体中PEDF降低，随PDR患者眼底病变的加重，PEDF逐渐降低，PEDF降低与视网膜新生血管的形成有关，其在PDR中起着重要作用。RRD患者PEDF升高，PEDF可能在视网膜脱离的病变过程中起着神经营养作用。     

色素上皮源性因子在眼科研究中的进展

色素上皮源性因子（PEDF）最初是在胎儿视网膜色素上皮（RPE）细胞条件培养基中发现的一种神经营养因子。PEDF属于丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族，是具有神经保护与抑制新生血管的神经营养因子，也是维持角膜、玻璃体无血管状态的主要细胞因子。PEDF的改变与多种眼病相关，尤其是视网膜脉络膜血管性、退行性疾病，也是治疗这类疾病的靶点之一。就PEDF的结构、功能以及在眼科方面的研究作一综述。     

VEGF和PEDF与角膜新生血管形成的相关性

血管内皮生长因子和色素上皮细胞衍生因子是目前发现的作用最强的角膜新生血管形成促进因子和抑制因子。而新生血管和眼前段炎症反应是角膜植片发生免疫排斥反应的2个主要诱发因素。本文就角膜新生血管形成过程中,血管内皮生长因子和色素上皮细胞衍生因子的表达与炎症反应的相关性作一综述。     

Expression of pigment epithelium-derived factor (PEDF) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in sickle cell retina and choroid

Pigment epithelium-derived factor (PEDF) has been shown to be an inhibitor of angiogenesis as well as a multipotent neurotrophic factor in the mammalian eye. Changes in PEDF levels have been correlated with development of retinal neovascularization in oxygen-induced retinopathy. The purpose of this study was to determine the localization and relative level of PEDF in human retinas and choroids using immunohistochemistry and evaluate the changes in PEDF and vascular endothelial growth factor (VEGF) localization and their relation to the progression of proliferative sickle cell retinopathy.Cryopreserved tissues from eyes of normal subjects and subjects with non-proliferative or proliferative sickle cell retinopathy were used with streptavidin peroxidase immunohistochemistry. A rabbit polyclonal antibody was made against recombinant human PEDF. Binding of the antibody was blocked by preincubation of the antibody with excess human recombinant PEDF. Relative levels of immunoreactivity were scored with a seven-point grading system and by microdensitometric analysis.The most prominent sites of PEDF localization in the normal eye were the vitreous condensed at the internal limiting membrane and RPE-Bruch's membrane-choriocapillaris complex. PEDF was also prominent in choroidal stroma. There was limited immunoreactivity in some cells of the neural retinas, in blood vessels and in the interphotoreceptor matrix (IPM). There was no difference in ratio (1.47 vs. 1.44) of PEDF/VEGF or the relative levels of either growth factor in the retinal vasculatures of the control subjects and perfused area of non-proliferative sickle cell retinas. The ratio was increased in the non-perfused area of the non-proliferative sickle cell retinas (2.24). In eyes with proliferative sickle cell retinopathy, elevated PEDF and VEGF immunostaining was present in viable vessels of sea fan neovascular formations as well as feeder vessels of sea fans. The PEDF/VEGF ratio in sea fans was 1.0. Immunoreactivity for PEDF was prominent in retinal vessels in non-perfused regions and in atrophic sea fans, while VEGF immunoreactivity was weak or absent in these structures.In conclusion, PEDF and VEGF were both significantly elevated in viable sea fan formations in sickle cell disease (p<0.05) but only PEDF was present in non-viable sea fans. The highest levels of PEDF in all eyes were associated with extracellular matrices (vitreous, choroidal stroma, IPM, and walls of blood vessels). PEDF might play an important role in inhibiting angiogenesis and inducing the regression of sea fans. Progression of angiogenesis may be dependent on the ratio of PEDF/VEGF.     

JNK2在早期糖尿病小鼠视网膜中的表达及作用

目的探讨JNK2在早期糖尿病(diabetes mellitus,DM)小鼠视网膜的表达和作用,为进一步深入探讨糖尿病视网膜病变的发病机制及早期治疗研究提供理论依据。方法 C57BL/6雄性小鼠60只随机分为DM组42只及正常组18只,DM组一次性腹腔注射5g·L-1STZ(150mg·kg-1体质量)诱发DM模型,正常组腹腔注射同体积的0.1mol·L-1柠檬酸钠缓冲液,于造模成功后2周、4周、8周分别处死正常组小鼠各6只,DM组小鼠各14只,取双眼眼球用于实验。其中,左眼提取视网膜用于实时定量RT-PCR,检测JNK2基因的表达变化,右眼行HE染色和TUNEL染色,分别观察视网膜在各时间点的形态学改变及视网膜神经节细胞的凋亡情况。结果正常组2周、4周、8周时JNK2基因表达水平分别为(2.31±0.53)g·L-1、(2.54±0.42)g·L-1、(2.26±0.67)g·L-1,各时间点表达无明显差异(P>0.05);DM组各时间点JNK2基因表达水平分别为(2.34±0.56)g·L-1、(4.51±0.64)g·L-1、(11.43±0.37)g·L-1,表达量随病程的延长而增加(P<0.05)。各时间点神经节细胞凋亡率在正常组分别为(0.77±0.73)%、(0.72±0.38)%、(0.87±0.76)%,差异无统计学意义(P>0.05);在DM组分别为(0.22±0.47)%、(6.87±1.17)%、(21.65±2.95)%,随DM病程延长神经节细胞凋亡率增加(P<0.05)。各时间点每高倍视野视网膜神经节细胞数在正常组小鼠分别为(47.83±3.76)个、(48.17±3.81)个、(47.74±4.16)个,各期表达无明显差异(P>0.05);在DM组分别为(45.96±4.20)个、(34.20±2.25)个、(30.19±3.54)个,神经节细胞的数量随DM病程的延长逐渐减少(P<0.05),且视网膜形态出现组织学改变。结论 JNK2参与了小鼠早期视网膜神经节细胞的凋亡过程,且有促进视网膜神经节细胞凋亡的作用。